Pada fraktur calli, jumlah dan permukaan osteoklas meningkat secara signifikan, sedangkan

parameter osteoblas
tidak terpengaruh secara signifikan pada kelompok yang kekurangan (Gambar 3d-h). Penutup, data
ini menunjukkan bahwa dalam keadaan kurang
Tikus kandungan tulang sedikit berkurang, namun sifat biomekanik kalus tidak terpengaruh,
menunjukkan bahwa penyembuhan tulang hanya sedikit terganggu pada tikus dengan defisiensi Ca /
VitD kronis.
Kami juga menyelidiki apakah efek negatif defisiensi Ca / VitD pada perbaikan tulang dihapuskan
Bila pemberian Ca / VitD diberikan pada saat fraktur. Suplementasi Ca / VitD diprovokasi tidak
efek signifikan 10 hari setelah fraktur (Gambar 3a, h). Sebaliknya, pada hari ke 23, suplementasi Ca /
VitD sedikit
peningkatan BMD pada fraktur calli, namun tidak signifikan (Tabel 2). Namun, analisis
histomorfometrik, yang,
Tidak seperti μCT, juga menangkap tulang yang belum menghasilkan, kurang mineral, menunjukkan
fraksi tulang yang meningkat secara signifikan dan a
fraksi jaringan fibrosa yang berkurang pada kalus fraktur tikus tambahan dibandingkan tikus defisien
(Gambar 3b, h).
Akibatnya, tikus yang diperlengkapi menunjukkan kekakuan lentur yang meningkat secara signifikan
(Gambar 3c) dan yang tertinggi
persentase patah tulang sembuh (Tabel 2), yang secara statistik tidak berbeda dibandingkan dengan
kelompok lain sejak
Kekuatan penelitian ini tidak cukup untuk mendeteksi perbedaan yang signifikan dengan uji chi-
kuadrat. Tulang yang lebih tinggi
fraksi dalam kalus tikus yang diberi suplemen dihasilkan dari berkurangnya osteoklas dan
peningkatan aktivitas osteoblas
(Gambar 3d-h). Hal ini diperkuat oleh ekspresi mRNA yang meningkat secara signifikan dari penanda
osteoblas
ALP pada kalus fraktur tikus yang diberi suplemen dibandingkan tikus defisien (Gambar 4a) dan
serum serum berkurang
tingkat penanda penyerapan tulang CTX dibandingkan dengan tikus kontrol (Gambar 4b), namun
kadar serumnya
penanda pembentukan tulang PINP tidak terpengaruh (Gambar 4c). Ekspresi VDR meningkat secara
signifikan pada kalus
tikus tambahan dibandingkan tikus defisien (Gambar 4d), menyiratkan peningkatan pemberian
vitamin D karena Ca /
Suplementasi vitD pasca fraktur. Penutup, hasil ini menunjukkan bahwa suplementasi Ca / VitD
dimulai
pada saat fraktur dihapuskan dan bahkan overcompensated efek negatif dari kekurangan Ca / VitD
kronis.
Kami juga menentukan serum FGF23, pengatur utama metabolisme fosfat dan vitamin D. Serum
tingkat FGF23 utuh (iFGF23) dan fragmen C-terminal yang tidak aktif (cFGF23) meningkat secara
signifikan.
pada tikus yang diberi tambahan 23 hari pasca fraktur dibandingkan dengan tikus kontrol dan
defisien (Gambar 4e, f), menunjukkan
Omset FGF23 sistemik meningkat. Namun, rasio kadar serum iFGF23: cFGF23, mewakili biologis
fraksi FGF23 aktif, tidak berbeda antara kelompok (Gambar 4g). Mengkonfirmasi ini, ekspresi protein
dari
FGF23 dan reseptor utamanya FGFR1 pada kalus fraktur tidak terpengaruh secara signifikan oleh
makanan (Gambar 4i). Kedua
FGF23 dan FGFR1 diekspresikan oleh osteoblas yang terletak di permukaan trabekula tulang yang
baru terbentuk di
kalus dan oleh beberapa osteosit tersemat (Gambar 4i). Fraktur calli analisis qPCR selanjutnya
mengkonfirmasi FGFR1 serupa
dan tingkat ekspresi FGF23 mRNA di semua kelompok (data tidak ditunjukkan). Ekspresi mRNA Phex,
sebuah endopeptidase
yang terlibat dalam metabolisme FGF2330, secara signifikan lebih tinggi pada tikus yang diberi
suplemen dibandingkan dengan defisiensi
tikus (Gambar 4h), menguatkan omset FGF23 yang disempurnakan.
Efek kalsium dan vitamin D pada posttraumatic bone turnover. Kami selanjutnya dialamatkan
pertanyaan apakah kalsium dan vitamin D mempengaruhi pergantian tulang posttraumatic secara
ovariektomi
tikus. Pada tikus yang kekurangan, konsentrasi serum PTH terus meningkat selama penyembuhan
fraktur

Gambar 3.

Analisis histomorfometrik dan biomekanik femur retak pada tikus ovariektomi yang diberi a
kontrol (C), makanan Ca / VitD-deficiency (D) atau Ca / VitD-supplemented (S). Persentase tulang,
tulang rawan dan berserat
jaringan pada fraktur kalus (a) pada hari ke 10 (n = 6-8 / kelompok) dan (b) pada hari ke 23 (n = 8 /
kelompok). (c) Kekakuan lentur
dari femur retak pada hari ke 23 (n = 8-10 / kelompok). (d) Jumlah osteoklas per perimeter tulang
(N.Oc / B.Pm),
(e) permukaan osteoklas per permukaan tulang (Oc.S / BS), (f) jumlah osteoblas per perimeter tulang
(N.Ob / B.Pm)
dan (g) permukaan osteoblas per permukaan tulang (Ob.S / BS) pada kalus fraktur pada hari ke 23 (n
= 7-9 / kelompok). (h)
Citra representatif kalus fraktur diwarnai dengan Safranin O dan asam fosfatase tahan asam
(PERANGKAP). Data disajikan sebagai mean ± SD. Perbedaan signifikan antara C, D dan S yang
dievaluasi oleh ANOVA /
Fisher LSD post-hoc: * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001.

secara signifikan lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok kontrol C pada hari ke 23 (Gambar 5a).
Selain itu, tingkat serum PTH retak
tikus dengan defisiensi meningkat dibandingkan tikus non-retak (PTH dalam pg / ml: 446 ± 283 Fx vs.
284 ± 173 Non-Fx) pada hari ke 23 (Gambar 2c dan 5a). Sesuai dengan data ini, mencoreng tikus dari
kekurangan diet
kelompok menunjukkan osteoklas secara signifikan lebih banyak pada vertebra lumbar dibandingkan
dengan kelompok kontrol retak
Gambar 4

Analisis serum dan ekspresi gen dan analisis imunohistokimia pada fraktur kalus
Tikus retak ovariektomi diberi makan makanan kontrol (C), makanan Ca / VitD-deficiency (D) atau Ca
/ VitD-supplemented (S)
pada hari ke 23. (a) Ekspresi gen alkalin fosfatase relatif (ALP) pada callus fraktur (n = 4-5 /
kelompok).
(b) Serium terminal telopeptida tipe I kolagen tipe I (CTX), dan (c) terminal n-terminal propeptida
tipe I
tingkat prokolagen (PINP) (n = 6-7 / kelompok). (d) ekspresi gen reseptor vitamin D-reseptor relatif
(VDR)
Fraktur calli (n = 4-5 / kelompok). (e) Faktor pertumbuhan serabut fibrokblast serum 23 (iFGF23) dan
(f) terminal C
Tingkat FGF23 (cFGF23) (n = 5-7 / kelompok). (g) Rasio serum iFGF23 terhadap kadar serum cFGF23
(n = 5 / kelompok).
(h) Relatif fosfat-mengatur netral endopeptidase netral, X-linked (Phex) ekspresi gen dalam kalus
fraktur
(n = 4-5 / kelompok). (i) Citra representatif FGF23, reseptor faktor pertumbuhan fibroblas 1 (FGFR1)
dan spesi fi k spesifik
kontrol isotipe (tikus dan kelinci IgG) bagian imunitas dari kalus fraktur. Untuk ekspresi gen
Analisis, β-2-mikroglobulin digunakan sebagai gen pemelihara rumah. Data disajikan sebagai mean ±
SD. Penting
perbedaan antara C, D dan S yang dievaluasi oleh ANOVA / Fishers LSD post-hoc: * p <0,05, ** p
<0,01.

Gambar 5.

Analisis serum dan evaluasi histomorfometrik pergantian tulang posttraumatic pada ovariektomi
tikus diberi makanan kontrol (C), makanan Ca / VitD-deficiency (D) atau Ca / VitD-supplemented (S).
(a) paratiroid serum
hormon (PTH) pada tikus retak pada hari ke 10 dan 23 pasca patah tulang (n = 6-8 / kelompok). (b)
nomor
dari osteoklas per perimeter tulang (N.Oc / B.Pm), (c) permukaan osteoklas per permukaan tulang
(Oc.S / BS), (d) jumlah
dari osteoblas per perimeter tulang (N.Ob / B.Pm), (e) permukaan osteoblas per permukaan tulang
(Ob.S / BS), (f) tulang
tingkat formasi per permukaan tulang (BFR / BS), (g) tingkat apposition mineral (MAR) dan (h)
permukaan mineral per
permukaan tulang (MS / BS) tikus retak relatif terhadap tikus non-retak dari kelompok diet yang
sama (garis putus-putus)
dalam persen diperiksa pada vertebra lumbal (L2) pada hari ke 23 (n = 7-9 / kelompok). (i) Citra
representatif lumbar
vertebra yang diwarnai dengan asam fosfatase tahan asam (TRAP) tikus yang retak dan tidak retak.
Data
disajikan sebagai mean ± SD. Perbedaan yang signifikan antara C, D dan S: * p <0,05, ** p <0,01, ***
p <0,001
dievaluasi oleh ANOVA / Fishers LDS post-hoc. #Significantly berbeda (p <0,05) dari tikus non-retak
dari
Kelompok diet yang sama (garis putus-putus) dievaluasi dengan tes t Student.

dan tikus tanpa retak dengan defisiensi Ca / VitD (garis putus-putus) (Gambar 5b, i). Permukaan
osteoklas tidak signifikan
berbeda antara tikus retak dengan diet kurang dan standar, namun meningkat secara signifikan
dibandingkan dengan tikus non-retak yang sesuai (garis putus-putus) (Gambar 5c). Jumlah dan
permukaan osteoblas
meningkat pada tikus yang mengalami defisit pada kelompok yang kekurangan dan suplementasi
dibandingkan tikus non-retak
(garis putus-putus) (Gambar 5d, e). Analisis histomorfometrik dinamis menunjukkan peningkatan
relatif BFR / BS dan MS /
BS pada tikus yang kekurangan dengan fraktur dibandingkan dengan tikus yang diberi suplemen
dengan fraktur (Gambar 5f, h). Namun, ada

Gambar 6.

μCT dan analisis pencitraan backscattered imaging kuantitatif (qBEI) dari posttraumatic bone
turnover
pada tikus ovariektomi diberi makan makanan kontrol (C), Ca / VitD-deficiency (D) atau Ca / VitD-
supplemented (S). (Sebuah)
Rekonstruksi tiga dimensi representatif (diameter 0,8 mm) tulang trabekular pada vertebra lumbalis
(L2)
dianalisis dengan μCT. (b) kepadatan mineral tulang (BMD), (c) volume tulang ke volume jaringan (BV
/ TV), (d) trabekular
ketebalan (Tb.Th), (e) nomor trabekuler (Tb.N), dan (f) pemisahan trabekular (Tb.Sp) tikus retak
relatif terhadap tikus non-retak dari kelompok diet yang sama (garis putus-putus) dalam persen yang
diperiksa pada vertebra lumbal
(L2) pada hari ke 23 (n = 7-9 / kelompok). (g) Ca mean, (h) Lebar Ca, (i) Ca rendah dan (j) Ca tinggi
tikus retak relatif
untuk tikus yang tidak mengalami retak pada kelompok diet yang sama (garis putus-putus) pada
persen yang diperiksa pada vertebra lumbal (L2) pada
hari ke 23 (n = 5 / kelompok). Data disajikan sebagai mean ± SD. Perbedaan signifikan antara C, D
dan S: * p <0,05,
** p <0,01, *** p <0,001 dievaluasi oleh ANOVA / Fishers LDS post-hoc. #Significantly berbeda (p
<0,05) dari
Tikus yang tidak mengalami retak pada kelompok makanan yang sama (garis putus-putus) yang
dievaluasi dengan tes t Student.

Tidak ada perbedaan yang signifikan dalam parameter histomorfometrik dinamis tikus retak yang
relatif terhadap non-retak
tikus (garis putus-putus) (Gambar 5f-h).
Analisis μCT vertebra lumbar mengidentifikasi BV / TV yang berkurang secara signifikan dan Tb.N
defisiensi retak
tikus relatif terhadap tikus non-retak dengan defisiensi (garis putus-putus) dan dibandingkan dengan
tikus kontrol retak
(Gambar 6a, c, e), yang mengindikasikan peningkatan kehilangan tulang posttraumatic pada kondisi
kekurangan Ca / VitD. Sebagai tambahan,
Analisis qBEI vertebra lumbalis menunjukkan penurunan Ca secara signifikan dan heterogenitas yang
lebih tinggi (lebar Ca)
pada tikus defisien yang retak relatif terhadap tikus yang kekurangan tanpa fraktur (Gambar 6h, i),
menunjukkan fraksi yang lebih tinggi dari
tulang termineralisasi sangat rendah setelah patah tulang. Parameter qBEI lebih jauh tidak berbeda
antara kelompok diet
dan antara tikus yang retak dan tidak retak (Gambar 6g-j). Secara bersamaan, data ini menunjukkan
sebuah pengumuman resorpsi tulang posttraumatic di bawah defisiensi Ca / VitD yang disebabkan
oleh peningkatan kadar serum PTH yang mengarah ke a
pengurangan posttraumatic dalam massa tulang dan mineral.
Suplementasi Ca / VitD menghilangkan kenaikan PTH posttraumatic (Gambar 5a). Sesuai dengan
temuan ini,
Aktivitas osteoklas di tubuh vertebra lumbal pada tikus retak dengan suplementasi secara signifikan
berkurang dibandingkan dengan tikus retak dengan diet kurang (Gambar 5b, c, i). Selain itu, BMD
pun meningkat
dengan kecenderungan (p = 0,057) dan BV / TV dan Tb.N meningkat secara signifikan setelah
suplementasi Ca / VitD dibandingkan
untuk tikus kurang (Gambar 6a-c, e). Selanjutnya, Ca rendah dan lebar Ca tidak berbeda antara retak
ditambah
tikus dan tikus tambahan tanpa fraktur (Gambar 6h, i). Selain itu, suplementasi Ca / VitD sedikit tapi
tidak
secara signifikan mengurangi lebar Ca dan Ca rendah, serta peningkatan Ca tinggi dibandingkan
dengan tikus defisien yang retak (Gbr.
6h-j). Data ini menunjukkan bahwa suplementasi Ca / VitD setelah patah tulang memperbaiki
resorpsi tulang posttraumatic
dan keropos tulang.