Aceite Esencial de Romero

Extracción y análisis de las propiedades antioxidantes del aceite de romero
1. ANTECENDENTES Y OBJETIVOS
1.1 ANTECEDENTES
1.1.1 ANTIOXIDANTES
Un antioxidante es una molécula capaz de retardar o prevenir la oxidación de otras

moléculas. La oxidación es una reacción química de transferencia de electrones de una
sustancia a un agente oxidante. Las reacciones de oxidación pueden producir radicales
libres que comienzan reacciones en cadena que dañan las células. Los antioxidantes
terminan estas reacciones quitando intermedios del radical libre e inhiben otras
reacciones de oxidación oxidándose ellos mismos. En la figura 1.1 Se puede observar la
acción del radical libre cuando no existe presencia de un antioxidante y el comportamiento
del radical en presencia del antioxidante. Debido a esto es que los antioxidantes son a
menudo agentes reductores tales como tioles o polifenoles. Los antioxidantes se
encuentran contenidos en ajo, arroz integral, café, coliflor, brócoli, jengibre, perejil,
cebolla, cítricos, semolina, tomates, aceite de semilla de la vid, té, romero, entre otros
muchas sustancias. También son parte importante constituyente de la leche materna.
Existen dos grupos de antioxidantes:
Naturales: tienen menor actividad química y se necesitan dosis más elevadas, además, por
la dificultad de su extracción presentan un costo mayor y menor estabilidad.
Sintéticos: su actividad química es elevada, tienen gran eficacia a bajas dosis, presentan alta
estabilidad y bajo costo, pero pueden formarse productos secundarios en el proceso de
fabricación del alimento.
23
Figura 1.1 Acción del radical libre sin antioxidante y acción del antioxidante frente al
radical libre.
1.1.2 LOS ANTIOXIDANTES EN LA ALIMENTACION HUMANA
Las frutas y vegetales proporcionan una gran variedad de vitaminas, minerales y

fitoquímicos, tales como los carotenoides y flavonoides. En la figura 2 se observa los
alimentos que contienen
antioxidantes, los cuales deben
ser incluidos en la dieta
alimentaria.
Varios de estos fitoquímicos están
relacionados con los pigmentos
que otorgan a las plantas sus
brillantes colores (amarillo,
naranja, rojo, verde y violeta) y
actúan como antioxidantes
dietéticos, los cuales
potencialmente promueven una
óptima salud, protege las células
del cuerpo y reducen el riesgo de
figura 1.2: alimentos que contienen antioxidantes enfermedades crónicas, como el
cáncer, y las enfermedades
23
cardiovasculares. Estos componentes naturales protegen a las moléculas biológicas

del daño (estrés) oxidativo iniciado por los radicales libres (RL).
Los RL pueden dañar moléculas biológicas como proteínas, lípidos, y DNA. Los RL
causan inflamación en las células conduciendo a una variedad de problemas de salud y
enfermedades cardiovasculares.
Investigaciones epidemiológicas han reportado que el estrés oxidativo inicia una serie de
condiciones patológicas (hipertensión y arterioesclerosis) que afectan directamente las
paredes de las células vasculares.
El organismo humano combate los RL

por medio de antioxidantes biológicos
como las enzimas, superoxido
dismutasa, catalasa y dietéticos como la
vitamina E, vitamina C, carotenoides y
flavonoides. Ya que el cuerpo no es
totalmente (100%) efectivo en combatir
los RL y sus efectos devastadores en las
células, es imperativo consumir una
variedad de antioxidantes, los cuales
trabajan en diferentes partes del
organismo, para reducir el efecto de los
radicales libres. En la figura 3 se aprecia
las frutas y vegetales que contienen
Figura 1.3: frutas y vegetales que contienen antioxidantes naturales.
antioxidantes naturales.
1.1.2.1 ¿QUÉ ES EL ESTRÉS OXIDATIVO?
El problema viene
cuando la cantidad
de radicales libres en
nuestro organismo
es mayor de lo que
nuestras enzimas
antioxidantes
pueden neutralizar,
con la edad la
concentración de
estas enzimas
desaparece.
En la figura 1.4: acción del antioxidante frente a un radical libre.
Si a esto le sumamos
agentes externos que incrementan las reacciones oxidativas en nuestro organismo, tales
como: la contaminación química, humos de combustión, radiaciones solares, estrés, el
23
volumen de radicales libres de nuestro organismo se dispara. Y además debemos

recordar que nuestra dieta ha evolucionado a una dieta pobre en sustancias
antioxidantes de origen vegetal.
En la figura 4 observamos la acción del antioxidante frente a un radical libre.
1.1.2.2 ¿POR QUÉ SON PERJUDICIALES PARA NUESTRAS CÉLULAS LOS RADICALES LIBRES?
Nuestras membranas celulares son estructuras flexibles gracias a su composición en ácidos
grasos poliinsaturados, del tipo omega-3 y omega-6, sustancias muy inestables que se
oxidan fácilmente por los radicales libres. Una vez alterada la membrana celular pueden
atacar a cualquier parte interna del citoplasma, e incluso el ADN.
1.1.2.3 ¿LOS RADICALES LIBRES ATACAN CUALQUIER ÓRGANO POR IGUAL?
El poder oxidativo de los radicales libres les hace poder atacar indistintamente cualquier
órgano, aunque tenemos algunos más sensibles como el sistema nervioso, cardiovascular,
articulaciones, piel y vista.
En el caso del cerebro, una parte importante de su estructura está basada en ácidos grasos
poliinsaturados de cadena larga. Los radicales libres pueden oxidar estos ácidos grasos, y
se pueden desarrollar enfermedades como el Alzheimer y la Demencia Senil. Esto mismo
ocurre con la retina, compuesta por gran cantidad de ácidos grasos omega-3.
En el caso de nuestro sistema cardiovascular, el riesgo de los radicales libres, es la acción
negativa que ejercen en la creación del ateroma. El ateroma se deposita sobre las paredes
arteriales cuando existe una lesión en ellas, y estas lesiones se producen por la oxidación
del colesterol LDL (de baja densidad).
Los procesos oxidativos en el colágeno y la elastina hace que nuestras articulaciones sufran
desgastes, artrosis. Así mismo este colágeno es el responsable de la tersura de la piel, en
caso de su oxidación aparecen los signos del envejecimiento
1.1.3 ANTIOXIDANTES EN LA INDUSTRIA ALIMENTARIA
Los aditivos antioxidantes cumplen un papel importante dentro de la industria alimentaria

ya que protegen a los alimentos de la auto-oxidación de las grasas, fenómeno que origina
productos potencialmente tóxicos (peróxidos, radicales libres). Los antioxidantes se unen a
los radicales libres que puedan formarse, convirtiéndolos en inactivos.
Los antioxidantes prolongan la vida útil de los alimentos y previenen la degradación
oxidativa de las grasas, fenómeno químico complejo que conduce al “enranciamiento” y
que afecta a la calidad del producto desde varios puntos de vista:
- Organoléptico: cambios de color así como olores y sabores desagradables.

- Nutricional: pérdida de ciertas vitaminas (A, E) y de ácidos grasos esenciales.
- Sanitario: formación de sustancias tóxicas debido a la oxidación.
23
La prevención de la oxidación se basa en suprimir en lo posible los factores que la

favorecen:
Hidrogenación de grasas, almacenamiento a oscuras, a baja temperatura, a vacío o
en atmósfera inerte.
La adición de los aditivos antioxidantes retarda la formación de radicales libres inhibiendo
la reacción de oxidación.
1.1.4 CARACTERISTICAS DEL ROMERO
El romero es un arbusto leñoso de hojas

figura 1.5: planta de romero
perennes muy ramificado, puede llegar a
medir 2 metros de altura. Lo encontramos
de color verde todo el año, con tallos
jóvenes borrosos y tallos añosos de color
rojizo y con la corteza resquebrajada. En
la figura 5 observamos la planta de
romero en etapa de floración.
Las hojas, pequeñas y muy abundantes, presentan

forma linear. Son opuestas, sésiles, enteras, con
los bordes hacia abajo y de un color verde oscuro, Figura 1.6: detalle de las hojas de
mientras que por el envés presentan un color romero.
blanquecino y están cubiertas de vellosidad. En la
zona de unión de la hoja con el tallo nacen los
ramilletes floríferos. En la figura 6 apreciamos el
detalle de las hojas de romero.
Las flores son de unos 5 mm de largo. Tienen la corola bilabiada de una sola pieza. El color
es azul violeta pálido, rosa o blanco, con cáliz verde o algo rojizo, también bilabiado y
acampanado. Son flores axilares, muy aromáticas y
melíferas (contienen miel), se localizan en la cima de las
ramas, tienen dos estambres encorvados soldados a la
figura 1.7: planta de romero corola y con un pequeño diente. En la figura 7
con su característica flor observamos la planta de romero con su característica
flor. En la figura 8 apreciamos la planta de romero
cultivada en el campo, donde se aprecia que la altura que esta planta alcanza no
sobrepasa los 2 m de alto.
23
Figura 1.8: el romero cultivada en el campo
1.1.4.1 ORIGEN – FAMILIA
Nombre científico o latino: Rosmarinus officinalis
- Nombre común o vulgar: Romero.
- Familia: Lamiaceae.
- Origen: el romero es una planta originaria de

la región mediterránea, sobre todo de las áreas
donde el suelo es especialmente seco, arenoso
y rocoso.
- Etimología: el nombre científico "Rosmarinus"

parece ser que deriva, bien de las palabras
latinas "Ros": Rocío y "Marinus": Marino, por
ser especie que no suele alejarse en demasía de
las zonas costeras; o bien de los vocablos
griegos "Rhops": Arbusto y "Myrinos":
Aromático. figura 1.9: características del
romero
- El epíteto "officinalis" se aplica a muchas
especies que desde muy antiguo han sido consideradas medicinales.
23
- En la figura 9 podemos apreciar las características de la planta de romero:

detalle de las hojas y flores.
1.1.4.2 PROPIEDADES DEL ROMERO
Las hojas del romero contienen alrededor de 1% y 2.5% de aceite esencial, aunque estos
valores pueden variar de acuerdo a la región donde se cultiva la planta y la época en la que
se cosecha.
Entre sus componentes característicos se encuentran:
 Ácidos fenólicos (cafeico, clorogénico, rosmarínico)

 Flavonoides (derivados del luteol y del epigenol)
 Aceite esencial (pineno, canfeno, borneol, cineol, alcanfor, limoneno) 1,2 a 2%
 Diterpenos (carnosol, rosmanol, rosmadial)
 Ácidos triterpénicos (ácido ursólico) 2 a 4%
 Alcoholes triterpénicos (alfa y beta-amirina, betulósido)
Físicamente la estructura epidérmica del romero se compone de diversos tricomas,

algunos de ellos glandulares y otros no glandulares; dentro el primer grupo se encuentran
los llamados peltados, estos se localizan al revés de las hojas, son una especie de bolsas y
son las responsables de la generación y almacenamiento del aceite esencial. En la figura 10
podemos observar una fotografía tomada por SEM (Scanning Electron Microscope) donde
se puede apreciar un tricoma glandular peltado antes de ser sometido al proceso de
extracción de aceite.
Figura 1.10: tricoma glandular antes del proceso de extracción de aceite esencial.
Los tricomas son variables en cuanto al tamaño (aproximadamente 75 micrómetros),

además de encontrarse ocultos entre tricomas no glandulares, los cuales cumplen la
función de proteger la epidermis de las plantas contra agresiones mecánicas.
23
En la figura 11 observamos una fotografía también tomada por el SEM, una hoja de
romero después de haber sido sometida al proceso de extracción de aceite
esencial, los tricomas peltados disminuyeron de tamaño después de liberar el
aceite esencial debido al paso de vapor.
Figura1.11: tricoma glandular después del proceso de extracción de aceite esencial.
1.1.4.3 USOS Y APLICACIONES DEL ACEITE DE ROMERO
Del romero se utilizan sobre todo las hojas y a veces, las flores. Es una planta rica en
principios activos.
Con el aceite esencial que se extrae directamente de las hojas, se prepara alcohol de
romero, que se utiliza para prevenir las úlceras.
También se emplea para tratar dolores reumáticos y lumbalgias.

Se utiliza en fricciones como estimulante del cuero cabelludo (alopecia).
La infusión de hojas de romero alivia la tos y es buena para el hígado y para atajar los
espasmos intestinales. Debe tomarse antes o después de las comidas.
El humo de romero sirve como tratamiento para el asma.
El alcanfor de romero tiene efecto hipertensor (sube la tensión) y tonifica la circulación
sanguínea.
Por sus propiedades antisépticas, se puede aplicar por decocción sobre llagas y heridas
como cicatrizante.
Además es una excelente planta de interior debido al agradable aroma que desprende.
Su principal aplicación es como antioxidante en la industria alimentaria
El extracto de romero carece de toxicidad, es estable hasta los 240ºC, su actividad

antioxidante se debe principalmente a la presencia de ácido carnosico y al carnosol en lo
que concierne a las bases grasas y al ácido rosmarínico y rosmanol entre los acuosos.
23
Todos ellos mejoran su actividad cuando se combinan con tocoferoles, ácido

ascórbico y ácido cítrico.
1.1.5 METODOS PARA LA DETERMINACION DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE

DEL ROMERO
Los ácidos fenólicos y flavonoides actúan de diversos modos como antioxidantes, el más
significativo de estos es la neutralización y arrastre de radicales con lo que rompe la
reacción en cadena pro oxidante de los radicales.
1.1.5.1 DETERMINACION DE FENOLES TOTALES
La actividad antioxidante de granos, vegetales y otros materiales botánicos se debe en

gran medida al grupo formado por los compuestos fenólicos. Se utiliza el reactivo de Folin-
Ciocalteu para librar al extracto de proteínas y residuos fenil sustituidas, a pesar de que
este método es muy utilizado presenta ciertas limitaciones, en las que podemos
mencionar la sobreestimación del contenido fenólico total, así como el comportamiento
diverso que se podría dar de algunos compuestos fenólicos frente a este reactivo.
1.1.5.2 DEPURACION DE RADICALES LIBRES
Con esta prueba se pretende determinar y comparar la capacidad de remoción de los

radicales libres provenientes del 2,2-difenil-picrahidrazil (DPPH). Los antioxidantes actúan
contra los radicales libres, reduciendo el daño que estos podrían causar en el organismo
biológico.
El DPPH es capaz de generar radicales libres estables en soluciones etanolicas o acuosas.

En cualquiera de estas soluciones se pretende reducir la cantidad de radicales libres en
presencia de los antioxidantes donadores de hidrogeno (A-H), formando estructuras no
radicales de DPPH (DPPH-H), como se muestra en la siguiente reacción:
DPPH - + AH DPPH-H + A-
El radical A contribuye de este modo a la formación de moléculas estables a través de las

interacciones radical-radical. El remanente de DPPH que se mide después del tiempo
establecido de reacción, corresponde a manera inversamente proporcional a la cantidad
depuradora de la muestra.
23
1.2 INTRODUCCION
La búsqueda de productos que mejoren la salud y tenga un efecto positivo en las personas
una vez consumidos, se ha convertido en una necesidad en nuestros días y es en este afán
que se ha visto la necesidad de impulsar a la investigación científica para encontrar dichos
productos.
Es conocido que el punto de partida para dichas investigaciones se encuentra en el reino

vegetal, esto se debe en gran medida a la efectividad que nos proporcionan en el bienestar
de la salud en la humanidad.
Uno de los requerimientos para preservar la salud de las personas radica en proporcionar
la cantidad suficiente de antioxidantes al organismo para combatir el exceso de radicales
libres que daña el organismo biológico.
Los antioxidantes son sustancias capaces de prevenir o retardar la oxidación de las

moléculas.
Existe una gran variedad de antioxidantes, naturales y sintéticos. Los naturales se

encuentran en frutas y verduras, de ahí radica la importancia de incluirlos en la dieta
diaria; y los antioxidantes sintéticos que contienen alta actividad química.
De todos los antioxidantes, el romero ha sido muy bien aceptado como una de las especies
con el mayor número de actividad antioxidante, debido a la gran variedad de compuestos
que lo integran. Muchos estudios sobre antioxidantes que conforman al romero indican
que los componentes más activos son los diterpenos fenólicos como el: carnosol,
rosmanol, isorosmasol, rosmadial, ácido carnosico, ácido rosmarínico y el ácido cafeico.
Las sustancias antioxidantes del romero se encuentran en el aceite esencial, presente

principalmente en las hojas. La extracción del aceite esencial se lleva a cabo por diversos
métodos, entre los cuales destacan: extracción por arrastre con vapor, extracción con
solvente, la hidrodestilacion, extracción con fluidos supercríticos, enfloración, prensado.
El presente trabajo se ha enfocado en la extracción del aceite esencial de romero a través

de la técnica de arrastre con vapor y la determinación de la capacidad antioxidante del
aceite de romero.
23
1.3 OBJETIVOS
1.3.1 OBJETIVO GENERAL
 Determinar y caracterizar las propiedades antioxidantes del aceite esencial que

puede extraerse del romero.
1.3.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS
 Extraer el aceite esencial de romero a través de la técnica de extracción por

arrastre con vapor.
 Evaluar el rendimiento del aceite esencial de romero en los tres meses de trabajo.
 Analizar la capacidad de fijación de los antioxidantes presentes en el aceite de

romero al radical 2,2-difenil-1-picrahidrazil (DPPH).
 Determinar el contenido de fenoles totales en el aceite de romero.
 Evaluar el factor tiempo sobre las características antioxidantes del aceite de

romero.
2. MATERIALES Y METODOS
23
2.1 DESCRIPCION DEL TRABAJO

2.1.1 DESTILACION POR ARRASTRE CON VAPOR
Para la destilación por el método de arrastre con vapor, el romero se recolecto, se

separó manualmente las hojas de los tallos, únicamente se guardaron las hojas del romero
ya que en estas se encuentra el aceite a extraer, se guardó en bolsas y se conservó en una
heladera a -5ºC.
Para la extracción con arrastre de vapor se utilizó agua potable previamente tratada en dos
filtros, uno de arena y el otro de carbón activado.
En la figura 2.1 se puede apreciar el romero recolectado.
Figura 2.1 romero recolectado
2.1.2 DETERMINACION DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE
Para la determinación de la capacidad depuradora del radical 2,2-difenil-picrahidrazil

(DPPH), se utilizó etanol al 96% y una solución de 0,001 M, que se preparó diariamente
pesando 0.08 g de DPPH y se aforo a 200 ml, la solución preparada se cubrió con papel
aluminio y se guardó en un lugar obscuro, esto para evitar la degradación de la solución
por acción de la luz.
En la figura 2.2 se observan la solución preparada junto a su estructura molecular

23
Figura 2.2 solución de DPPH junto a su estructura
2.1.3 DETERMINACION DEL CONTENIDO DE FENOLES TOTALES
Para esta prueba se preparó una solución de catecol 0.01, que se preparó disolviendo 2.20
g de catecol (C6H6O2) en 200 ml de agua destilada, se preparó una solución 1.4 M de
carbonato de sodio, se utilizó el reactivo de Folin-Ciocalteu y ácido tricloroacetico al 10%
(p/v), que se preparó disolviendo 20 g del ácido en 200 ml de agua destilada.
2.1.4 PREPARACION DEL ACEITE
Se prepararon 3 soluciones del aceite de romero a diferentes concentraciones, la primera

se preparó al aforar 10µl del aceite puro con agua destilada a 50 ml, para la segunda
solución se tomó 350µl de aceite y se aforo a 25 ml, para la tercera se tomó 900µl de
aceite y se llevó a un volumen de 25 ml, las tres soluciones se utilizaron para la
determinación de la actividad antioxidante así como para la determinación de contenido
de fenoles totales.
Los tres matraces se cubrieron con papel aluminio y se mantuvo refrigerado.
En la figura 2.3 se puede apreciar los matraces con las tres soluciones de aceite que se
utilizaran para las determinaciones a realizar.
23
Figura 2.3 tres soluciones de aceite
2.2 METODOS UTILIZADOS

2.2.1 EXTRACCION DEL ACEITE ESENCIAL DE ROMERO.
Como ya se había mencionado anteriormente, el método por el cual se extrajo el aceite de

romero es la extracción por arrastre con vapor, para dicha acción se utilizó un equipo de
destilación, el cual se puede apreciar en la figura 2.4.
Figura 2.4 equipo de destilación
El equipo consta de las siguientes partes: en la parte inferior consta de 2 resistencias que
son las encargadas de generar el vapor, el mismo que ascenderá a través del romero,
23
consta de tres recipientes cilíndricos de acero inoxidable, dispuestos en paralelo

ubicados en forma vertical sobre las resistencias que generan vapor, un sistema de
refrigeración de agua a flujo constante, en donde se condensa el vapor generado
junto al aceite arrastrado, un colector de aceite previamente llenado con agua para evitar
las pérdidas de aceite, en el que se observa la formación de dos fases: la acuosa en la
parte inferior y el aceite en la parte superior.
En la figura 2.5 se aprecia la formación de las dos fases.
Figura 2.5 formación de dos fases
El flujo de agua a las resistencias es continuo, con esto se garantiza la generación de vapor
en forma continua durante todo el proceso de destilación.
Para la extracción del aceite, cada uno de los recipientes cilíndricos se cargaron con
romero, el tiempo de destilación oscila entre 1.5 horas y 2 horas, esto dependiendo de la
densidad de empaque del romero en los recipientes.
Se realizaron 3 pruebas de destilación con diferentes cantidades de romero, la primera de

1Kg de romero por recipiente, haciendo un total de 3 Kg, la segunda con 1.5 Kg de romero
en cada recipiente, con un total de 4.5 Kg y la última con 0.75 Kg de romero por recipiente
con un total de 2.25 Kg.
En la figura 2.6 se puede ver los recipientes con el romero.

23
Figura 2.6 recipientes con el romero
2.2.2 PROPIEDADES FISICAS DEL ACEITE

2.2.2.1 DETERMINACION DE LA DENSIDAD DEL ACEITE
La densidad del aceite se determinó por el método de diferencia de masa, para la cual se
tomó una probeta se pesó, se agregó 10 ml de aceite puro, se pesó nuevamente y por
diferencia se obtiene la masa de aceite y con el volumen conocido se aplica la fórmula:
2.2.2.2 DETERMINACION DEL INDICE DE REFRACCION
El índice de refracción se midió con un refractómetro.
Para realizar la medición el instrumento fue calibrado a 0 con agua destilada, se secó con
papel, a continuación dos gotas de aceite puro y el resultado se obtiene girando la perilla
hasta que la marca queda centrada en la pantalla.
2.2.3 DETERMINACION DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE
Para la determinación de la capacidad antioxidante se siguió el método que consiste en la

neutralización de los radicales libres del DPPH por el antioxidantes presente en el aceite de
romero, para este propósito se colocaron alícuotas de 0.1 ml, 0.2 ml, 0.3 ml, 0.4 ml, 0.5 ml
de la solución de aceite de romero (estas alícuotas son de las tres soluciones de 10, 350 y
900 µl ya preparadas) en tubos de ensayo, a cada tubo se añadió 300 µl de solución de
0.001 M de DPPH, luego se añadió etanol hasta llegar a un volumen de 3 ml en cada tubo.
También se preparó un blanco de DPPH con 300 µl de DPPH y 2.7 ml de etanol. Todas las
muestras se dejaron reaccionar durante 15 minutos manteniéndolas a temperatura
ambiente y en la oscuridad.
23
Una vez que el tiempo de reacción ha transcurrido se determinó la absorbancia a

517 nm usando etanol con blanco en un espectrómetro. Para determinar el % de
inhibición se usó la siguiente formula:
Donde A DPPH es la absorbancia de la muestra blanco de DPPH y A alícuota es la absorbancia de

las alícuotas preparadas.
2.2.4 DETERMINACION DEL CONTENIDO DE FENOLES TOTALES
Los fenoles totales fueron evaluados por el método de Folin-Ciocalteu. Para ello se realizó
una curva estándar tomando 2,4,6,8 y 10 ml de una solución de catecol 0.01 M y aforando
cada una a 100 ml con agua destilada.
En cinco tubos de ensayo se mezclaron 1 ml de las soluciones preparadas con 1 ml de

ácido tricloroacetico al 10%, obteniendo así cinco nuevas soluciones; de cada una se toma
0.75 ml y se pusieron en otros tubos para agregarles 1.5 ml de carbonato de sodio 1.4 M,
se agito y se añadió 0.45 ml de reactivo de Folin-Ciocalteu.
La reacción se completó después de dos horas a temperatura ambiente y se midió la

absorbancia a 650 nm en el espectrómetro, con agua destilada como blanco.
2.3 MATERIALES Y EQUIPOS

2.3.1 MATERIALES
Para la realización del trabajo se empleó los siguientes materiales:
 Probetas de 25 ml  Probetas de 100 ml
23
 Matraces Erlenmeyer de 25 ml  Matraces Erlenmeyer de 100

ml
 Vasos de precipitado de 100 ml  Vasos de precipitado de 250 ml
 Pipetas pasteur  Vidrio de reloj
 Recipientes para almacenamiento  Pizeta de 500 ml

del aceite
23
 Tubos de ensayo  Gradilla para tubos de ensayo
 Pipetas de 1, 10 ml  Jeringas de 10 µl
2.3.2 REACTIVOS
Los reactivos utilizados en la práctica se mencionan a continuación:

23
 Sulfato de sodio (Na2SO4)  2,2-difenil-picrahidrazil

(DPPH)
 Etanol Al 96% (C2H5OH)  Catecol 0.01 M (C6H6O2)
 Agua destilada  Carbonato de sodio (Na2CO3)
 Reactivo de Folin-Ciocalteu  Ácido tricloacetico al 10%
 Aceite de romero 
2.3.3 EQUIPOS
Para la realización del trabajo se utilizaron los siguientes equipos:
 Equipo de destilacioó n de arrastre  Refractoó metro

con vapor
 Espectroó metro  Heladera de almacenamiento de
materia prima
 Vortex  Balanza (0.01 g)
3. RESULTADOS OBTENIDOS
3.1 En la extracción de arrastre con vapor
 la extracción de arrastre con vapor resulto efectiva, ya que al pasar el tiempo de

extracción se pudo apreciar que el vapor efectivamente si arrastraba consigo
residuos de aceite, esto se aprecia en la figura 3.1 donde se ve claramente la
formación de dos fases: una de aceite y la otra de vapor condensado.
 Durante la extracción se pudo estandarizar el tiempo de extracción, las primeras
gotas de aceite comenzaron a observarse 30 minutos después de que la extracción
comenzara, el 85% del volumen total de aceite se extrae en la primera hora de
extracción, el restante se extrae durante las siguientes horas, de este modo el
tiempo de extracción optima se mantuvo en dos horas.
 Para determinar la cantidad optima de materia prima para la extracción, se
realizaron tres pruebas con cantidades de romero diferentes, la primera con 3 Kg,
la segunda con 4.5 Kg y la tercera con 2.55 Kg de romero, cada una de las pruebas
se repitieron 5 veces, los rendimientos obtenidos se muestran en la tabla 3.1.
Muestra Cantidad de romero Rendimiento (v/m)

(Kg)
23
1 2.25 0.834
2 3.00 0.738
3 4.50 0.508
Tabla 3.1 Rendimientos promedios de las muestras
 La variación del rendimiento del aceite se muestran en las figuras 3.1, 3.2 y 3.3 y el
detalle de los rendimientos obtenidos para cada uno se detalla en las tablas 3.2,
3.3 y 3.4
MUESTRA 1 (2.25 Kg)
corrida porcentaje %
1 0,88
2 0,83
3 0,84
4 0,80
5 0,82
Tabla 3.2 variación del porcentaje para la muestra 1
Figura 3.1 variación del porcentaje para la muestra 1
MUESTRA 2 (3 Kg)
23
1 0,70
2 0,75
3 0,74
4 0,76
5 0,74
MUESTRA 3 (4.5 Kg)
1 0,50
2 0,52
3 0,48
4 0,52
5 0,52
23
3.2 Propiedades físicas del aceite
 Inicialmente el aceite tenía una coloración transparente, transcurrida las dos horas
de extracción, el aceite resultante tomo una coloración ligeramente amarilla,
además de un aroma fresco-alcanforado.
 Se determinó la densidad del aceite proveniente de 5 muestras y arrojaron una
densidad promedio de 0.8 g/ml.
 El índice de refracción es una propiedad que se utiliza para determinar la pureza y
calidad de los aceites, el aceite de romero tiene un índice de refracción de 1.467.
3.3 En la determinación de la capacidad antioxidante
 En la tabla 3.5 podemos observar el porcentaje de la capacidad antioxidante que

presentaron las soluciones del aceite de romero para combatir a los radicales libres
DPPH.
23
Fecha de Concentración concentración de la solución [%]

extracción del aceite [µl] 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
3 meses 900 7,98 22,45 22,23 30,78
46,65
350 11,34 16,87 16,56 28,45 30,89
10 4,69 8,97 12,82 24,67 6,29
1 mes 900 10,18 8,14 13,22 17,57 26,9
350 15,27 7,5 20,55 18,48 18,58
10 6,66 8,78 14,48 25,54 20,51
fresco 900 35,78 39,51 45,00 48,94 60,44
350 28,05 31,16 31,36 36,54 46,18
10 27,95 26,88 28,67 36,82 39,16
Tabla 3.5 porcentaje de inhibición a diferente tiempo y concentración
 Con los datos obtenidos se realizaron tres graficas que muestran el

comportamiento de la capacidad antioxidante, claramente en las figuras 3.4, 3.5,
3.6. Podemos observar que este porcentaje es directamente afectado por el
tiempo.
Figura 3.4 capacidad antioxidante del aceite de romero extraído hace tres meses
23
Figura 3.5 capacidad antioxidante del aceite de romero extraído hace 1 mes
Figura 3.6 capacidad antioxidante del aceite de romero recién extraído
3.4 En la determinación de fenoles totales
 El contenido total de fenoles en el aceite de romero se expresa como los

miligramos equivalentes de catecol por kilogramo de muestra, para lo cual se hizo
23
una curva de calibración con catecol y se obtuvo la ecuación de la regresión

lineal. En la figura 3.7 se observa esta la calibración para obtener la curva.
Figura 3.7 curva de calibración
 A partir de la ecuación encontrada se obtuvo la concentración de fenoles totales

presente en el aceite de romero después de la reacción, en la tabla 3.6 se
muestra la concentración total de fenoles para concentraciones diferentes.
fecha de extracción Concentración del aceite experimento experimento experimento

[µl] 1 2 3
3 meses 900 456 368 428
350 1167 987 1209
1 mes 900 1634 1159 1389
350 704 682 439
fresco 900 2134 2219 2108
350 1768 1590 1627
Tabla 3.6 concentración de fenoles totales
 Con los datos obtenidos se realizaron graficas que nos muestran el

comportamiento de la concentración de fenoles totales, en las figura 3.8, 3.9 y 3.10
se observa dicha tendencia.
23
Figura 3.8 comportamiento de la concentración de fenoles totales
Figura 3.9 comportamiento de la concentración de fenoles totales 23

Figura 3.10 comportamiento de la concentración de fenoles totales
4. CONCLUSIONES
4.1 En la destilación de arrastre con vapor
 En base a los rendimientos obtenidos, concluimos diciendo que la técnica de

extracción de arrastre con vapor es una técnica que nos proporciona rendimientos
aceptables para obtener aceites esenciales y en un tiempo aceptable de dos horas.
 Se trabajó con tres cantidades de romero para la extracción y así ver el
comportamiento del rendimiento, en base a los resultados obtenidos podemos
concluir que a mayor cantidad de materia prima el rendimiento disminuye, esto se
debe a que cuando se compacta la materia prima en los recipientes, se forman
canales preferenciales por donde circula el vapor sin penetrar en el total de la
materia prima, es por eso que los mejores rendimientos se obtuvieron al tratar con
cantidades que oscilen entre 2.25 a 3 Kg, mientras que a mayores cantidades el
rendimiento disminuye.
 El rendimiento obtenido oscila entre 0.50 y 0.834%, este porcentaje concuerda con
los valores teóricos para rendimiento de aceites que oscila en un rango de 0.5 a
2%.
4.2 En las propiedades físicas del aceite de romero
 El aceite de romero obtenido es un líquido de color amarillo pálido, con un aroma

característico alcanforado.
23
 El índice de refracción obtenido es de 1.467, este valor concuerda con el de

la bibliografía que dice que el índice de refracción para el aceite de romero
oscila en un rango de 1.466 – 1.472.
 La densidad obtenida no concuerda con los valores teóricos que van en un rango
de 0.89 a 0.92 g/ml el resultado obtenido es de 0.80 g/ml, esto debido al origen del
romero utilizado, los valores corresponden para un romero de origen europeo y el
utilizado corresponde a un romero de origen boliviano.
4.3 En la determinación de la capacidad antioxidante
 Para la determinación del porcentaje de inhibición de los radicales libres del DPPH,
se encontró que el factor tiempo representa un factor determinante, en base a los
valores mostrados en la tabla 2.5 concluimos que cuando más tiempo es guardado
el aceite la capacidad antioxidante disminuye debido a la degradación del aceite.
 Analizando la muestra con 3 meses de antigüedad vemos que el porcentaje de
inhibición es mayor para una menor concentración, esto se debe a la mala mescla
entre el aceite y agua, por lo que la muestra analizada en el espectrómetro no fue
homogénea.
 Los porcentajes de la muestra con un mes de antigüedad muestran valores más
elevados que su antecesor, pero también se observa valores disparados por la mala
homogenización de la muestra.
 Y como era de esperarse el aceite fresco tiene una capacidad antioxidante mayor,
observándose el valor más alto para una concentración mayor como es de
esperarse.
4.4 En la determinación de fenoles totales.
 al igual que en la anterior prueba, en la determinación de fenoles totales, el factor

tiempo juega un rol determinante, como podemos observar en la tabla 2,6 la
cantidad de fenoles totales es mayor para un aceite recién extraído y analizado.
 Para el aceite con tres meses de antigüedad se observa un comportamiento
inverso, pero como ya explicamos antes esto se debe a la mala homogenización del
aceite en la solución a leer en el espectrómetro.
 La cantidad de fenoles totales más alta se dio para el aceite recién extraído.
5. BIBLIOGRAFIA
23
http://es.wikipedia.org/wiki/Antioxidante
http://www.nuestrosninos.com/PDFs/57-antioxidantes.pdf
http://www.alliumherbal.com/es/articulos/30-antienvejecimiento/178-los-antioxidantes-
y-la-salud.html
http://www.alimentariaonline.com/media/MA034_adit.pdf
http://herbarivirtual.uib.es/cas-med/especie/4485.html
http://fichas.infojardin.com/arbustos/rosmarinus-officinalis-romero.htm
http://es.wikipedia.org/wiki/Rosmarinus_officinalis
http://www.hierbitas.com/nombrecomun/Romero.htm
http://www.industriaalimenticia.com/Archives_Davinci?article=1196
23

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Extracción y análisis de las propiedades antioxidantes del aceite de romero

Un antioxidante es una molécula capaz de retardar o prevenir la oxidación de otras

Existen dos grupos de antioxidantes:

1.1.2 LOS ANTIOXIDANTES EN LA ALIMENTACION HUMANA

Las frutas y vegetales proporcionan una gran variedad de vitaminas, minerales y

cardiovasculares. Estos componentes naturales protegen a las moléculas biológicas

El organismo humano combate los RL

volumen de radicales libres de nuestro organismo se dispara. Y además debemos

1.1.2.3 ¿LOS RADICALES LIBRES ATACAN CUALQUIER ÓRGANO POR IGUAL?

1.1.3 ANTIOXIDANTES EN LA INDUSTRIA ALIMENTARIA

Los aditivos antioxidantes cumplen un papel importante dentro de la industria alimentaria

- Organoléptico: cambios de color así como olores y sabores desagradables.

La prevención de la oxidación se basa en suprimir en lo posible los factores que la

El romero es un arbusto leñoso de hojas

Las hojas, pequeñas y muy abundantes, presentan

Figura 1.8: el romero cultivada en el campo

1.1.4.1 ORIGEN – FAMILIA

Nombre científico o latino: Rosmarinus officinalis

- Nombre común o vulgar: Romero.

- Origen: el romero es una planta originaria de

- Etimología: el nombre científico "Rosmarinus"

- En la figura 9 podemos apreciar las características de la planta de romero:

1.1.4.2 PROPIEDADES DEL ROMERO

Entre sus componentes característicos se encuentran:

 Ácidos fenólicos (cafeico, clorogénico, rosmarínico)

 Aceite esencial (pineno, canfeno, borneol, cineol, alcanfor, limoneno) 1,2 a 2%

 Diterpenos (carnosol, rosmanol, rosmadial)

 Ácidos triterpénicos (ácido ursólico) 2 a 4%

 Alcoholes triterpénicos (alfa y beta-amirina, betulósido)

Físicamente la estructura epidérmica del romero se compone de diversos tricomas,

Los tricomas son variables en cuanto al tamaño (aproximadamente 75 micrómetros),

Figura1.11: tricoma glandular después del proceso de extracción de aceite esencial.

1.1.4.3 USOS Y APLICACIONES DEL ACEITE DE ROMERO

También se emplea para tratar dolores reumáticos y lumbalgias.

Su principal aplicación es como antioxidante en la industria alimentaria

El extracto de romero carece de toxicidad, es estable hasta los 240ºC, su actividad

Todos ellos mejoran su actividad cuando se combinan con tocoferoles, ácido

1.1.5 METODOS PARA LA DETERMINACION DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE

1.1.5.1 DETERMINACION DE FENOLES TOTALES

La actividad antioxidante de granos, vegetales y otros materiales botánicos se debe en

1.1.5.2 DEPURACION DE RADICALES LIBRES

Con esta prueba se pretende determinar y comparar la capacidad de remoción de los

El DPPH es capaz de generar radicales libres estables en soluciones etanolicas o acuosas.

El radical A contribuye de este modo a la formación de moléculas estables a través de las

Es conocido que el punto de partida para dichas investigaciones se encuentra en el reino

Los antioxidantes son sustancias capaces de prevenir o retardar la oxidación de las

Existe una gran variedad de antioxidantes, naturales y sintéticos. Los naturales se

Las sustancias antioxidantes del romero se encuentran en el aceite esencial, presente

El presente trabajo se ha enfocado en la extracción del aceite esencial de romero a través

1.3.1 OBJETIVO GENERAL

 Determinar y caracterizar las propiedades antioxidantes del aceite esencial que

1.3.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS

 Extraer el aceite esencial de romero a través de la técnica de extracción por

 Analizar la capacidad de fijación de los antioxidantes presentes en el aceite de

 Determinar el contenido de fenoles totales en el aceite de romero.

 Evaluar el factor tiempo sobre las características antioxidantes del aceite de

2.1 DESCRIPCION DEL TRABAJO

Para la destilación por el método de arrastre con vapor, el romero se recolecto, se

En la figura 2.1 se puede apreciar el romero recolectado.

Figura 2.1 romero recolectado

2.1.2 DETERMINACION DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE

Para la determinación de la capacidad depuradora del radical 2,2-difenil-picrahidrazil

En la figura 2.2 se observan la solución preparada junto a su estructura molecular

Figura 2.2 solución de DPPH junto a su estructura