0290: Firdayani dkk.

KO-35

PENGEMBANGAN KANDIDAT SENYAWA OBAT TURUNAN

NAFTOKUINON SEBAGAI INHIBITOR VIRUS HEPATITIS B

Firdayani1∗ , Rilianawati1 , Susi Kusumaningrum1 , Mutia Hardhiyuna1 , Siska Andrina Kusumastuti1 ,

Asep Saepudin1 , Pertamawati1 , Hasan1 , Kara Fabiola1 , Harry Noviardi1 , Didin Mujahidin2 ,
Rukman Hertadi2 , dan Muhammad Ali Zulfikar2
1
Pusat Teknologi Farmasi dan Medika, Dep.Bid TAB - BPPT
Gedung II BPPT Lantai 15 Jl. MH. Thamrin 8, Jakarta Pusat 10340
2
Departemen Kimia Institut teknologi Bandung
Jl. Ganeca 10 Bandung

∗
e-Mail: firdayani@bppt.go.id, telp: (021) 3169505

Disajikan 29-30 Nop 2012

ABSTRAK
Usaha penemuan dan pengembangan obat baru pada umumnya bersifat coba-coba (trial and error) sehingga dibutuhkan
biaya yang besar dan waktu yang lama. Untuk itu perlu terobosan dan inovasi agar pengembangan dan penemuan obat tetap
layak secara ekonomi antara lain dengan melakukan penelitian sejumlah kecil senyawa yang terpilih sebagai penuntun dan mer-
ancangnya dengan lebih baik. Cara rasional yang dapat dilakukan antara lain melakukan pendekatan pengembangansenyawa
yang telah ada, yang sudah diketahui struktur molekul dan aktivitas biologisnya, kemudian dilakukan modifikasi molekul atau
mensintesis sejumlah turunannya. Dengan berkembangnya teknologi komputer, rancangan obat rasional mempunyai prospek
yang cerah dalam pencarian obat baru. Dalam penelitian ini senyawa yang digunakan sebagai senyawa penuntun adalah
turunan naftokuinon yang dari beberapa publikasi diketahui mempunyai aktivitas menghambat virus hepatitis B. Penelitian
diawali dengan melakukan simulasi docking dan dinamika molekul senyawa-senyawa turunan naftokuinon menggunakan pe-
modelan molekuler untuk memprediksi interaksinya dengan reseptor yang bertanggungjawab dalam pertumbuhan dan replikasi
VHB. Berdasarkan hasil simulasi, dipilih derivat yang potensial untuk selanjutkan dilakukan semisintesis guna mendapatkan
senyawa tersebut. Setelah dilakukan pemurnian dan konfirmasi struktur hasil sintesis, derivat-derivat tersebut diujikan aktivi-
tasnya membunuh atau menghambat replikasi VHB secara in vitro. Data-data yang diperoleh selanjutnya dianalisa hubungan
kuantitatif struktur aktivitasnya (HKSA) untuk memperoleh kepastian struktur senyawa terbaik sebagai kandidat senyawa
inhibitor virus hepatitis B baru dari derivat naftokuinon.

Kata Kunci: Kandidat obat, turunan naftokuinon, virus hepatitis B

I. PENDAHULUAN berkembang orang dewasa sangat berisiko tinggi untuk

Hepatitis B merupakan masalah kesehatan global,
diperkirakan sekitar 2 miliar penduduk dunia pernah
terpapar virus hepatitis B (VHB). Angka prevalensi in-
feksi VHB di Asia Pasifik cukup tinggi yaitu melebihi
8% dan penularannya pada umumnya terjadi secara
vertikal (pada periode perinatal) dan horizontal (pada
masa anak-anak) oleh karena itu risiko menjadi kronis
cukup besar. Diperkirakan lebih dari 350 juta di an-
taranya menjadi kronis yang berisiko tinggi meninggal
dunia akibat penyakit hati kronis. Sekitar 75% pengi-
dap hepatitis B kronis karier berada di Asia Pasifik.
Pada saat ini sekitar 1 juta kematian per tahun akibat
penyakit hati berhubungan dengan VHB. Sirosis hati,
gagal hati, atau kanker hati dapat terjadi pada 15 ∼40%
penderita dengan infeksi hepatitisB kronis. Di negara
terkena hepatitis B. Terlebih di negara miskin dengan
endemis tinggi, hepatitis B cukup banyak ditemukan
pada anak-anak. Oleh sebab itu, tingginya morbiditas
dan mortalitas akibat hepatitis B, penyakit ini sangat
mengancam dunia.
Prevalensi infeksi HBV berbeda-beda di seluruh
dunia. Kategori daerah endemis terbagi menjadi ren-
dah, sedang, dan tinggi. Indonesia masuk dalam
kelompok prevalensi sedang sampai tinggi. Data Or-
ganisasi Kesehatan Dunia, WHO, menyatakan virus
hepatitis B 50∼100 kali lebih menular daripada virus
yang menyerang sistem imunitas, HIV. Penularan-
nya terjadi lewat darah dan cairan tubuh.Kelompok
berisiko tinggi adalah anak yang dilahirkan oleh ibu
dengan virus HbsAg, virus penanda adanya hepatitis

Prosiding InSINas 2012

KO-36
positif.[1]
Tujuan utama pengobatan hepatitis B kronis adalah
untuk mengeliminasi atau menekan secara permanen
proses replikasi virus yang akan mengurangi pato-
genitas serta infektivitas dan pada akhirnya dapat
menghentikan atau mengurangi keradangan hati se-
hingga progresivitas menjadi sirosis dan kanker hati da-
pat dicegah.
Obat-obatan yang dipakai untuk hepatitis B kronis
ada dua pilihan.Pilihan pertama yaitu obat yang dapat
menekan replikasi virus sekaligus untuk memodulasi
sistem imun penderita, yang dikenal dengan nama in-
terferon. Yang sekarang dipakai adalah pegylated in-
terferon yang memberikan hasil memuaskan. Keun-
tungan obat ini dapat menekan replikasi virus dalam
jumlah yang besar, lama pemakaian tertentu (6 bu-
lan sampai1 tahun), relatif aman, dan ditoleransi baik
oleh pasien yang sudah mengalami sirosis khususnya
yang masih terkompensasi. Namun harga obat ini
masih cukup mahal. Pilihan kedua adalah dari golon-
gan analog nukleosida yang dapat menekan replikasi
virus. Diantaranya adalah lamivudine, adefovir, ente-
cavir dan masih dalam tahap ujicoba adalah telbivu-
dine dan tenofovir. Pemakaian obat-obat ini relatif lebih
lama (lebih dari 1 tahun) dan dapat terjadi resistensi
virus hepatitis B terhadap obat tersebut, khususnya
lamivudine yang mencapai angka 70% setelah pemaka-
ian 5 tahun.
Angka keberhasilan terapi hepatitis B kronis dengan
menggunakan obat-obatan golongan nukleosida yang
kini beredar masih di bawah 20%. Hingga kini belum
dipasarkan obat dari golongan nonnukleosida. Dengan
demikian, masih diperlukan usaha dan penelitian un-
tuk mencari dan menemukan obat baru untuk men-
gatasi penyakit akibat virus hepatitis B ini.
Usaha penemuan dan pengembangan obat baru
pada umumnya bersifat coba-coba (trial and error)
sehingga dibutuhkan biaya yang besar dan waktu
yang lama. Untuk itu perlu terobosan dan ino-
vasi agar pengembangan dan penemuan obat tetap
layak secara ekonomi. Dalam upaya merancang dan
mengembangkan obat baru untuk penyakit infeksi
VHB ini, langkah awal yang dilakukan antara lain de-
ngan mengembangkan kandidat obat yang telah ada,
yang sudah diketahui struktur molekul dan aktivi-
tas biologisnya, untuk dijadikan sebagai senyawa pe-
nuntun atas dasar penalaran yang sistematik dan ra-
sional dengan mengurangi faktor coba-coba semini-
mal mungkin. Teknik-teknik komputasional yang di-
gunakan dalam desain obat berbasis struktur menjadi
teknik yang efisien untuk pengembangan dan optimasi
senyawa obat agar menghasilkan obat yang lebih poten.
Selain itu teknik ini dapat memberikan gambaran dan
prediksi yang lebih detail tentang mekanisme aksi
suatu obat dalam mengatasi suatu penyakit.
0290: Firdayani dkk.
Telah diketahui bahwa senyawa yang terkandung
dalam produk alami mempunyai potensi untuk dikem-
bangkan sebagai obat. Dengan berkembangnya tek-
nologi komputer, rancangan obat rasional mempunyai
prospek yang cerah dalam pencarian obat baru. Dengan
bantuan program pemodelan dan dinamika molekul,
dan telah diketahui sruktur molekul tiga dimensi enzim
sebagai reseptor target, akan dapat diketahui cara kerja
obat pada tingkat molekul dan peran berbagai keku-
atan sifat fisika dan kimia pada proses interaksi obat-
reseptor.[7]
Dalam riset terapan ini dipilih senyawa 1,4-
nafokuinon sebagai senyawa penuntun untuk dikem-
bangkan sebagai kandidat senyawa obat untuk infeksi
VHB. Berdasarkan literatur diketahui beberapa turunan
senyawa ini mempunyai aktivitas yang luas antara lain
sebagai antikanker, antifungal, antibakteri dan antivi-
ral. Crosby et al.(2011) menemukan bahwa derivat
naftokuinon yang berbentuk trimer mempunyai ak-
tivitas antivirus hepatitis B dengan EC50 sebesar 0,009
µM dan senyawa kecil monomernya juga menghambat
bahkan terhadap virus yang resistant terhadap analog
nukleosida golongan cytidine (3TC).[8]
Berbagai macam kemungkinan turunan naftokuinon
hasil modifikasi digambar dan diprediksi kemungki-
nannya sebagai inhibitor VHB secara in silico. Senyawa
naftokuinon dan turunannya ini kemudian disintesis
dan diuji aktivitas penghambatannya secara in vitro ter-
hadap enzim glikohidrolase dan reverse-transkriptase
serta terhadap kultur sel hati yang telah terinfeksi
virus hepatitis B. Hasil pengujian selanjutnya dianalisa
hubungan kuantitatif struktur dengan aktivitas untuk
melihat sifat kimia fisika yang berperan, substituen atau
gugus yang memberikan aktivitas dan memprediksi
senyawa dengan struktur ”terbaik” sebagai kandidat
senyawa antivirus hepatitis B turunan naftokuinon. De-
ngan demikian kegiatan riset ini merupakan inovasi
dalam penemuan obat dimana dilakukan kombinasi an-
tara kegiatan komputasi dengan laboratorium. Dalam
riset ini dikurangi faktor coba-coba untuk mendap-
atkan obat baru sebagai antivirus hepatitis B sehingga
menghemat biaya dan waktu yang biasa diperlukan un-
tuk pengembangan obat.
TABEL 1: Afinitas ikatan ligan-reseptor hasil simulasi docking
Prosiding InSINas 2012
0290: Firdayani dkk. KO-37

II. METODOLOGI
• Simulasi dengan pemodelan molekular senyawa-
senyawa derivat naftokuinon dalam berinteraksi
dengan reseptor target secara komputasi dilakukan
menggunakan program Autodock vina dan Am-
ber.
• Senyawa terpilih disintesis dalam beberapa tahap,
senyawa hasil sintesis dimurnikan dengan khro-
matografi atau rekristalisasi dan dianalisa sifat
fisikokimianya. Konfirmasi dan identifikasi struk-
tur senyawa hasil sintesis dengan metoda khro-
matografi dan spektrofotometri antara lain dengan
GS-MS, LC-MS, FTIR dan NMR.
• Pengujian aktivitas menghambat enzim gliko-
hidrolase dan reverse transcriptase dari G AMBAR 1: Pola interaksi 2HNDIG dengan protein HBx
naftokuinon dan derivatnya menggunakan
metode spektrometri.
• Analisis hubungan kuantitatif struktur - aktivitas
untuk mengetahui sifat fisikokimia yang berperan
dan mekanisme aksi dalam aktivitas menghambat
replikasi virus hepatitis B serta menentukan struk-
tur ideal turunan naftokuinon sebagai kandidat an-
tivirus.

III. HASIL DAN PEMBAHASAN

Telah dilakukan simulasi docking dengan ligan
naftokuinon dan turunan-turunannya ke dalam
reseptor-reseptor target protein atau enzim yang
berperan dalam proses replikasi virus hepatitis B yaitu:
HBx, glikohidrolase dan reverse transcriptase. Hasil
simulasi docking ke dalam reseptor target antivirus
hepatitis B tertera pada TABEL 1.
Adapun pola interaksi antara senyawa 2HNDIG
dengan reseptor-reseptor tersebut dapat dilihat pada
G AMBAR 1, G AMBAR 2 dan G AMBAR 3.
Simulasi dinamika ligan 2HNDIG dalam enzim re-
verse transcriptase menunjukkan terjadinya pelemahan
ikatan yang diakibatkan respon reseptor.
Dari gambar di atas dapat terlihat bahwa interaksi
ligan-reseptor terdiri dari tiga ikatan hidrogen (de-
ngan Lys350 dan Tyr336) dan interaksi hidrofobik de-
ngan 3 residu asam amino (His96, Trp266, dan Lys353).
Sedangkan pola interaksi setelah simulasi dinamika
molekul ditunjukkan pada G AMBAR 5.
Hasil simulasi dinamika menunjukkan pengurangan
ikatan hidrogen dan penambahan jumlah residu-residu
yang berinteraksi hidrofobik. Pengurangan jumlah
ikatan hidrogen ini berperan dalam pelemahan inter-
aksi ligan-reseptor. Senyawa terpilih selanjutnya disin-
tesis dan dikonfirmasi strukturnya pada tiap-tiap tahap.
Pada tahun pertama ini sintesis yang telah dilakukan
belum sampai pada senyawa diharapkan, melainkan
baru diperoleh senyawa antara/ intermedietnya antara
G AMBAR 2: Pola interaksi 2HNDIG dengan enzim glukohidrolase
lain 2-hidroksi-3-bromo-1,4-naftokuinon yang dihasil-
kan dari reaksi brominasi 2-hidroksi-1,4-naftokuinon.
Untuk mengetahui hubungan kuantitatif struktur-
aktivitas, dilakukan uji aktivitas penghambatan be-
berapa senyawa turunan naftokuinon terhadap en-
zim yang berperan dalam replikasi virus mengguna-
kan metode spektrofotometri UV/visual. Pada peneli-
tian ini, dilakukan uji penghambatan virus hepati-
tis B terhadap enzim α dan β-glukosidase menggu-
nakan senyawa turunan naftokuinon dengan metode
in vitro enzimatis. Uji ini didasarkan pada reaksi
substrat enzim yang akan menghasilkan produk p-
nitrophenyl. Produk ini akan menghasilkan warna
kekuningan yang kemudian diukur dengan spektro-
fotometri dengan panjang gelombang 400nm. Sema-
kin bening suatu larutan maka semakin aktif sam-
pel tersebut menghambat enzim α-glukosidase dan β-
glukosidase.

Prosiding InSINas 2012

KO-38
G AMBAR 3: Pola interaksi 2HNDIG dengan enzim reverse tran-
scriptase
G AMBAR 4: Pola interaksi senyawa 2HNDIG dengan reverse tran-
skriptase sebelum simulasi dinamika
Berdasarkan data di atas, diketahui bahwa turunan
naftokuinon mempunyai potensi sebagai penghambat
enzim yang terlibat dalam replikasi virus antara lain
α-glukosidase dan β-glukosidase. Enzim-enzim ini
merupakan penyusun enzim glikohidrolase, yaitu en-
0290: Firdayani dkk.
G AMBAR 5: Pola interaksi senyawa 2HNDIG dengan reverse tran-
scriptase setelah simulasi dinamik
TABEL 2: Nilai IC50 senyawa turunan naftokuinon terhadap enzim
α- dan β-glukosidase
zim yang berperan dalam pembentukan amplop virus-
dan bertanggung jawab terhadap glikohidrolasi pro-
tein. Virus Hepatitis B merupakan salah satu virus be-
ramplop yang terdiri dari membran lipid yang diben-
tuk dari sel inang yang terinfeksi. Penghambatan en-
zim glikohidrolase dapat menghambat pembentukan
amplop virus hepatitis B sehingga replikasi virus men-
jadi tidak sempurna dan pada akhirnya virus akan mati.
Dari data penghambatan enzim -glukosidase derivat
naftokuinon dilakukan analisis HKSA yang melibatkan
parameter-parameter fisika kimia yang diperoleh dari
perhitungan teoritis. Data-data tersebut diolah dengan
regresi linear dan non linear menggunakan program
Prosiding InSINas 2012
0290: Firdayani dkk. KO-39

SPSS sehingga didapat persamaan HKSA yang akan senyawa ini masih dalam tahap pengerjaan dan telah
mengetahui parameter yang mempunyai hubungan de- dihasilkan beberapa senyawa intermediet Sementara
ngan aktivitas. Beberapa persamaan diperoleh meli- itu, untuk mengetahui hubungan struktur naftokuinon
batkan sifat hidrofobik dan sterik dalam aktivitas an- dengan aktivitas antivirus telah dilakukan uji peng-
tikanker turunan naftokuinon adalah sebagai berikut: hambatan terhadap enzim alfa dan beta glukosidase de-
ngan metode spektrofotometri. Pada tahun berikutnya

1
 disarankan untuk melanjutkan sintesis hingga diper-
Log = 0, 03M R − 2, 61 (1) oleh senyawa yang diinginkan dan dilakukan optimasi
IC50
kondisi-kondisi prosesnya. Senyawa yang dihasilkan
R2 = 0, 497 F = 4, 946 s = 0, 546 selanjutnya diuji aktivitas inhibisi virus secara in vitro
 
1 menggunakan sel yang telah ditransfeksi plasmid DNA
Log = 0, 02M R − 1, 85 (2)
IC50 virus hepatitis B.
R2 = 0, 545 F = 5, 995 s = 0, 519 DAFTAR PUSTAKA
 
1
Log = −0, 58ClogP + 0, 01CM R − [1] World Health Organization, Hep-
IC50 atitis B. World Health Organiza-
2, 91 (3) tion Fact Sheet no. 2004. available at
R2 = 0, 797 F = 7, 830 s = 0, 389 http://who.int/mediacentre/factsheets/fs204/en

1
 [2] Lafanchy D., Hepatitis B Virus epidemiology, dis-
Log = 0, 045logP 2 − 0.048logP − ease burden, treatment,and current and emerging
IC50
prevention and control measures, J. Viral Hepat.
1, 084 (4)
2004;11:97-107.
R2 = 0, 436 F = 1, 548 s = 0, 650 [3] Lok A.S., Chronic Hepatitis B. N. Engl. J. Med.
2002;346:1682-3.Hou J, Liu Z, Gu F. Epidemiology
  and Prevention of Hepatitis B Virus Infection, Int.
1 J. Med. Sci. 2005:2;50-57.
Log = −0, 079logP 2 −
LC50 [4] PPHI, Konsensus Penatalaksanaan Hepatitis B
0, 048logP − 1, 084 (5) Kronik, 2003.
2
R = 0, 436 F = 1, 548 s = 0, 650 − [5] Hernomo K., Perkembangan baru pengobatan
  hepatitis virus B, Simposium Perkembangan Mu-
1
Log = −0, 08ClogP 2 takhir di Bidang Gastro-hepatologi, Surabaya, 23
LC50 Oktober 1999.
0, 373ClogP − 2, 365 (6) [6] Hernomo K, Perkembangan baru dalam penata-
2 laksanaan hepatitis virus B dan C, Pekan ilmiah
R = 0, 677 F = 4, 189 s = 0, 490

1
 dalam Acara Peringatan 12 Tahun RS Pupuk
Log = 0, 031logP 2 + 0, 222logP + Kaltim, Bontang, Kaltim, 10 Agustus 2002. Dalam
LC50
website:http://www.pgh.or.id
0, 032M R − 3, 155 (7)
2
[7] Siswandono, B. Soekardjo, Kimia Medisinal 1, Air-
R = 0, 982 F = 55, 415 s = 0, 132 langga University Press, Surabaya
Berdasarkan hasil analisa hubungan kuantitatif [8] Crosby, et al., Antiviral agents 3. Discovery of a
struktur-aktivitas tersebut terlihat bahwa parameter novel small molecule non-nucleoside inhibitor oh
hidrofobik logP dan sterik M R mempunyai peranan Hepatitis B Virus (HBV), Bioorganic & Medicinal
dalam aktivitas inhibisi enzim α-glukosidase pada tu- Chemistry 21, 2011: 1644-1648
runan naftokuinon. Persamaan tersebut, terutama
P ERS . (7) yang memiliki parameter statistik optimal,
dapat digunakan untuk merancang struktur turunan
naftokuinon yang berpotensi antivirus dengan aktivitas
maksimal.

IV. KESIMPULAN
Desain struktur senyawa hasil simulasi docking
dan dinamika dalam reseptor target memberi me-
nunjukkan bahwa senyawa 2HNDIG memiliki potensi
menjadi kandidat obat turunan naftokuinon sebagai in-
hibitor virus hepatitis B. Hingga saat ini proses sintesis

Prosiding InSINas 2012