29.

25 Apoptosis adalah milik banyak atau semua sel

Konsep kunci

• Semua sel memiliki jalur yang dapat menyebabkan kematian oleh apoptosis, yang memerlukan sintesis RNA dan
protein oleh sel yang sekarat, namun jalurnya hanya diaktifkan oleh rangsangan yang sesuai.

Selama pengembangan organisme eukariotik multiselular, beberapa sel harus mati. Sel yang tidak diinginkan
dihilangkan selama embriogenesis, metamorfosis, dan omset jaringan. Proses ini disebut terprogram kematian sel
atau apoptosis. Ini memberikan kontrol penting atas jumlah sel total. Pada cacing C. elegans (di mana garis-garis sel
somatik telah sepenuhnya didefinisikan), 131 dari 1090 sel somatik dewasa menjalani sel sel mati terprogram mati
diperkirakan pada waktu dan tempat yang ditentukan pada masing-masing hewan. Serupa, walaupun kurang tepat
didefinisikan, kematian sel terjadi selama pengembangan vertebrata, paling menonjol dalam sistem kekebalan
tubuh dan sistem saraf. Kontrol apoptosis yang tepat sangat penting dalam kemungkinan semua eukariota yang
lebih tinggi.

Apoptosis melibatkan aktivasi jalur yang menyebabkan bunuh diri sel oleh proses karakteristik dimana sel menjadi
lebih kompak, blebbing terjadi pada membran, kromatin menjadi kental, dan DNA terfragmentasi (lihat Gambar
29.44). Jalur adalah proses aktif yang bergantung pada sintesis RNA dan protein oleh sel yang sekarat. Ciri khas sel
karena menjadi heteropycnotic (dikondensasikan dengan nukleus kecil terfragmentasi) ditunjukkan pada Gambar
29.45, dan rangkaian fragmentasi DNA ditunjukkan pada Gambar 29.46.

Akhirnya sel-sel mati menjadi terfragmentasi menjadi potongan-potongan yang terikat membran, dan dapat diliputi
oleh sel-sel sekitarnya.

Apoptosis dapat dipicu oleh berbagai rangsangan, termasuk penarikan faktor pertumbuhan esensial, pengobatan
dengan glukokortikoid, 7 iradiasi, dan aktivasi reseptor tertentu, seperti yang dirangkum dalam Gambar 29.47.
Semua ini melibatkan penghinaan molekuler terhadap sel. Cara lain untuk memulai apoptosis digunakan pada
sistem kekebalan tubuh, di mana limfosit T sitotoksik menyerang sel target. Apoptosis juga merupakan mekanisme
penting untuk menghilangkan sel tumorigenik; Kemampuan supresor tumor p53 untuk memicu apoptosis adalah
kunci pertahanan melawan kanker (lihat 30.20 Penekan tumor p53 menekan pertumbuhan atau pemicu apoptosis).

Apoptosis penting, oleh karena itu, tidak hanya dalam pengembangan jaringan, namun juga dalam pertahanan
kekebalan tubuh dan dalam penghapusan sel-sel kanker. Selain itu, aktivasi apoptosis yang tidak tepat terlibat dalam
penyakit neurodegeneratif.

29.26 Reseptor Fas merupakan pemicu utama apoptosis

Konsep kunci

* Reseptor Fas pada sel target diaktifkan oleh interaksi dengan protein FasL pada membran plasma sel pengaktif.

* Fas berhubungan dengan reseptor TNF, dan FasL berhubungan dengan TNF.

* Fas adalah trimer yang digabungkan pada interaksi dengan FasL.

Fas memiliki domain sitoplasma yang disebut "domain kematian" yang terlibat dalam interaksi protein-protein.

Reseptor Fas (disebut Fas atau FasR) dan Fas ligand (FasL) adalah sepasang protein membran plasma yang
interaksinya memicu salah satu jalur utama untuk apoptosis. Gambar 29.48 menunjukkan bahwa sel yang membawa
apoptosis reseptor Fas saat berinteraksi dengan sel yang membawa ligan Fas.

Aktivasi Fas menyerupai reseptor lain yang melibatkan langkah agregasi. Namun, Gambar 29.49 menunjukkan
bahwa ada beberapa perbedaan yang menarik dari model reseptor pertumbuhan. Pertama, Fas membentuk trim
homomer. Kedua, trimer merakit sebelum berinteraksi dengan ligan.

Efek dari ligan bisa menyebabkan trimer mengelompok menjadi agregat besar. Pada semua acara, ketika FasL
berinteraksi dengan Fas, ada acara agregasi yang memungkinkan Fas untuk mengaktifkan tahap berikutnya di jalur.
 Nama dua protein (reseptor Fas dan ligan Fas) mencerminkan cara
sistem ditemukan. Antibodi yang diarahkan melawan protein Fas
membunuh sel yang mengekspresikan Fas di permukaannya.
Alasannya adalah reaksi antibodi-Fas mengaktifkan Fas, yang memicu
jalur apoptosis. Ini mendefinisikan Fas sebagai reseptor yang
mengaktifkan jalur seluler.

Fas adalah reseptor permukaan sel yang terkait dengan reseptor TNF
(tumor necrosis factor). Ligan FasL adalah protein transmembran yang
terkait dengan TNF. Keluarga reseptor terkait mencakup dua reseptor
TNF, Fas, dan beberapa reseptor yang ditemukan pada limfosit T.
Keluarga ligan yang sesuai terdiri dari serangkaian protein
transmembran. Ini menunjukkan bahwa ada beberapa jalur, yang
masing-masing dapat dipicu oleh interaksi sel-sel, di mana "ligan"
pada satu permukaan sel berinteraksi dengan reseptor pada
permukaan sel lainnya. Baik reseptor Fas dan TNF dapat mengaktifkan
apoptosis.

Kedua ligan Fas dan TNF pada awalnya diproduksi sebagai bentuk
membran, tetapi juga dapat dibelah untuk menghasilkan protein
terlarut, yang berfungsi sebagai faktor yang mudah tersebarnya.
Bentuk TNF yang larut sebagian besar dihasilkan oleh makrofag, dan
merupakan faktor pleiotropik yang menandakan banyak respons
seluler, termasuk sitotoksisitas.

Sebagian besar tanggapannya dipicu oleh interaksi dengan salah satu

reseptor TNF, TNF-R1. FasL dibelah untuk menghasilkan bentuk yang
mudah larut, namun bentuk yang terlarut jauh lebih tidak aktif
daripada bentuk membran-bound, jadi reaksinya mungkin digunakan
untuk mengurangi aktivitas sel yang membawa ligan.

Sebuah assay untuk kapasitas interaksi ligan-reseptor untuk memicu

apoptosis adalah dengan mengenalkan reseptor ke sel-sel yang
dikultur yang biasanya tidak mengekspresikannya. Pada pengobatan
dengan ligan, sel yang ditransfusikan mati oleh apoptosis, namun sel
induknya tidak. Dengan menggunakan uji ini, hasil yang serupa
diperoleh dengan reseptor FasL / Fas dan dengan TNF / TNF-R1. Versi
mutant dari reseptor menunjukkan bahwa respons apoptosis dipicu
oleh ~ 80 domain intraseluler asam amino di dekat ujung-C. Wilayah
ini dilestarikan secara longgar (-28%) antara Fas dan TNF-R1, dan
disebut domain kematian.

Tes untuk komponen jalur apoptosis di dalam sel adalah untuk melihat
apakah overexpression mereka menyebabkan apoptosis. Hal ini
dilakukan dengan transfecting gen untuk protein ke dalam sel (yang
menghasilkan overexpression protein). Pengujian ini mengidentifikasi
beberapa protein yang berinteraksi secara khusus dengan reseptor Fas
dan / atau TNF. Semua protein ini sendiri memiliki domain kematian,
dan ada kemungkinan bahwa interaksi homomer antara dua domain
kematian menyediakan sarana dimana sinyal dilewatkan dari reseptor ke komponen berikutnya dari jalur.
Validitas jalur in vivo ini ditunjukkan dengan ditemukannya mutasi mouse Ipr. Ini adalah mutasi resesif pada gen
untuk Fas.

Ini menyebabkan proliferasi limfosit, mengakibatkan gangguan kekebalan kompleks yang mempengaruhi sel B dan
sel T. Mutasi lain dengan efek serupa adalah gld (penyakit limfoproliferatif umum). Ini ternyata terletak pada gen
yang mengkode ligan FasL. Sifat terkait kedua lokus ini menunjukkan bahwa jalur apoptosis ini dipicu oleh interaksi
antara produk ligan (FGL) FASL dan produk Fas (Ipr). Jalur ini diperlukan untuk membatasi jumlah limfosit matang.

29.27 Jalur umum untuk fungsi apoptosis melalui caspases

Konsep kunci

• Caspases adalah protease yang terlibat dalam beberapa tahap jalur apoptosis.

Caspase disintesis sebagai procaspase aktif yang diaktifkan oleh autocleavage untuk membentuk dimer aktif.

• Bentuk kompleks pada reseptor Fas atau TNF yang mengaktifkan caspase-8 untuk memulai jalur intraselular.

Jalur "klasik" untuk apoptosis dirangkum dalam Gambar 29.50. Interaksi ligan-reseptor memicu aktivasi protease.
Hal ini menyebabkan pelepasan sitokrom c dari mitokondria.

Hal ini pada gilirannya mengaktifkan serangkaian protease, yang tindakannya berujung pada penghancuran struktur
sel.

Kompleks yang mengandung beberapa komponen terbentuk pada reseptor.

Komponen yang tepat dari kompleks tergantung pada reseptor. Reseptor TNF mengikat protein yang disebut
TRADD, yang pada gilirannya mengikat protein yang disebut FADD. Reseptor Fas mengikat FADD secara langsung.
Gambar 29.51 menunjukkan bahwa, dalam kasus ini, FADD mengikat protein caspase-8 (juga dikenal sebagai FLICE),
yang memiliki domain kematian serta aktivitas kasein protease.

Aktivasi caspase-8 mengaktifkan jalur umum untuk apoptosis. Pemicu untuk kejadian aktivasi adalah oligomerisasi
reseptor. Dalam kasus sistem Fas, interaksi FasL dengan Fas menyebabkan trimer Fas berinteraksi, mengaktifkan
jalur.

Anggota keluarga caspase (protease aspartat sistein) adalah komponen hilir penting jalur. Caspase memiliki sistein
katalitik, dan membelah target mereka pada aspartat. Enzim individu memiliki target yang terkait namun tidak
identik. Sebagai contoh, caspase-3 dan ICE keduanya membelah pada urutan tetrapeptida di substratnya, namun
caspase-3 mengenali YVAD dan ICE mengenali DEVD. Ada ~ 14 anggota mamalia keluarga caspase.

Caspases terbagi menjadi dua kelompok. Subfamili caspase-1 terlibat dalam respons terhadap peradangan.
Subfamili caspase-3 (terdiri dari caspase 3 dan caspases 6-10) terlibat dalam apoptosis. Semua caspases disintesis
dalam bentuk procaspases yang tidak aktif, yang memiliki urutan tambahan pada N-terminus. Gambar 29.52
menunjukkan bahwa reaksi aktivasi melibatkan pembelahan prodomain diikuti oleh pembelahan urutan caspase itu
sendiri menjadi subunit kecil dan subunit besar. Semua procaspases kecuali procaspase-9 mungkin ada sebagai
dimer.

Caspases dengan prodomains besar terlibat dalam memulai apoptosis.

Dimerisasi menyebabkan pembelahan autocatalytic yang mengaktifkan caspase.

Prodomain caspase-8 memiliki dua motif death domain yang bertanggung jawab untuk hubungannya dengan
kompleks reseptor. Pembelahan ke bentuk aktif terjadi segera setelah procaspase-8 direkrut ke kompleks reseptor.

Caspases dengan fungsi prodomains kecil kemudian di jalur. Yang pertama di seri diaktifkan oleh autocleavage saat
membentuk oligomer.

Orang lain kemudian di jalur biasanya diaktifkan saat caspase lain memotong mereka.
Caspase pertama yang ditemukan (ICE = caspase-1) adalah enzim
pengubah IL- β, yang membelah prekursor pro-IL- ^ ke dalam bentuk
aktifnya. Meskipun caspase ini biasanya terlibat dengan respon
inflamasi, transfeksi ICE ke sel kultur menyebabkan apoptosis.
Prosesnya dihambat oleh CrmA (produk virus cacar air). Semua caspases
dihambat oleh CrmA, walaupun masing-masing caspase memiliki
sensitivitas karakteristik.

CrmA menghambat apoptosis yang dipicu dengan beberapa cara

berbeda, yang menunjukkan bahwa caspases memainkan peran penting
dalam jalur ini, terlepas dari bagaimana hal itu dimulai. Namun, ternyata
ICE bukan protease yang biasa terlibat dalam apoptosis, karena
inaktivasi gen untuk ICE tidak menghalangi apoptosis umum pada tikus.
(Kemampuan ICE untuk menyebabkan apoptosis menunjukkan bahaya
uji transfeksi: terlalu banyak mengekspresikannya untuk memicu
apoptosis, walaupun biasanya

itu tidak melakukannya Tapi ICE mungkin diperlukan khusus untuk

apoptosis satu jalur dalam limfosit.)

29.28 Apoptosis melibatkan perubahan pada amplop mitokondria

Konsep kunci

• Caspase-8 membelah Tawaran untuk melepaskan domain C-terminal

yang mentranslokasi mitokondria.

• Tawaran adalah anggota keluarga Bcl2 dan bertindak bersama dengan

anggota keluarga lainnya untuk menyebabkan mitokondria melepaskan
sitokrom c.

• Beberapa anggota keluarga, termasuk Bcl2, menghambat pelepasan

sitokrom c.

Perubahan mitokondria terjadi selama apoptosis (dan juga selama

bentuk kematian sel lainnya). Ini biasanya dideteksi oleh perubahan
permeabilitas. Terobosan dalam memahami peran mitokondria adalah
penemuan bahwa sitokrom c dilepaskan ke dalam sitosol. Gambar 29.53
merangkum peran sentral mitokondria.

Selain melepaskan sitokrom c, ia juga melepaskan protein lain dari

ruang intermembrane yang dapat meningkatkan atau menghambat
apoptosis.

Jalur bergerak dari membran plasma ke mitokondria saat caspase-8

memotong protein yang disebut Bid. Pembelahan melepaskan domain
terminal C, yang kemudian mentransmisikan ke membran mitokondria.
Tindakan penawaran menyebabkan sitokrom c dilepaskan.

Tawaran adalah anggota keluarga Bcl2 yang penting. Beberapa anggota

keluarga ini diperlukan untuk apoptosis, sementara yang lain melawan
apoptosis.

Bcl2 yang eponymous menghambat apoptosis di banyak sel. Ini memiliki

jangkar membran terminal-C, dan ditemukan di membran mitokondria,
nuklir, dan ER luar. Ini mencegah pelepasan sitokrom c, yang
menunjukkan bahwa dengan cara tertentu tindakan tersebut dapat
melawan tindakan Penawaran. bcl2 pada awalnya ditemukan
sebagai proto-onkogene yang diaktifkan pada limfoma oleh
translokasi yang menghasilkan ekpresi berlebihan. (Sebagaimana
dibahas lebih rinci pada 30 Onkogen dan kanker, ini berarti bahwa
Bcl2 adalah anggota kelas protein yang menyebabkan proliferasi
atau tumorigenesis bila tidak tepat diekspresikan.) Perannya sebagai
penghambat apoptosis ditemukan saat ditunjukkan bahwa
penambahannya melindungi sel limfoid dan myeloid yang dikultur
dari kematian saat faktor penting 1L-3 ditarik.

Sel mamalia yang dipicu menjadi apoptosis oleh berbagai

rangsangan, termasuk pengaktifan jalur Fas / TNF-Rl, dapat
diselamatkan dengan ekspresi Bcl2. Ini menunjukkan bahwa jalur ini
bertemu pada satu mekanisme pembunuhan sel, dan fungsi Bcl2
pada tahap kematian sel yang terlambat dan umum. Ada beberapa
sistem di mana Bcl2 tidak dapat memblokir apoptosis, jadi jalur yang
dilalui bloknya mungkin biasa terjadi, tapi bukan satu-satunya.

Bcl2 termasuk dalam keluarga yang anggotanya dapat melakukan

homodimerisasi dan heterodimerisasi.

Dua anggota lainnya adalah bcl-x (dicirikan pada ayam) dan Bax
(ditandai dengan manusia), bcl-x diproduksi dengan bentuk alternatif
yang memiliki sifat yang berbeda. Saat transfected ke sel penerima,
bcl-xL meniru Bcl2, dan menghambat apoptosis. Tapi bcl-xs melawan
kemampuan Bcl2 untuk melindungi dari apoptosis. Bax berperilaku
sama seperti bcl-xs. Ini menunjukkan bahwa pembentukan
homodimers Bcl2 mungkin diperlukan untuk menyediakan bentuk
pelindung, dan heterodimer Bcl2 / Bax atau Bcl2 / bclxs mungkin
gagal untuk melindungi. Apakah Bax atau bcl-xs homodimers secara
aktif membantu apoptosis, atau hanya permisif, masih harus dilihat.

Kesimpulan umum yang disarankan oleh hasil ini adalah bahwa

hubungan kombinatorial antara anggota keluarga dapat
menghasilkan dimer dengan efek yang berbeda pada apoptosis, dan
proporsi relatif anggota keluarga yang dinyatakan mungkin penting.
Kerentanan sel untuk menjalani apoptosis mungkin sebanding
dengan rasio Bax terhadap Bcl2. Mitokondria adalah titik kontrol
penting dalam induksi apoptosis. Pelepasan sitokrom c didahului
oleh perubahan permeabilitas membran mitokondria.

Anggota keluarga Bcl2 bertindak pada membran mitokondria, dan

walaupun cara kerjanya tidak diketahui, satu kemungkinan adalah
bahwa mereka membentuk saluran di membran.

Apoptosis melibatkan lokalisasi (atau mungkin peningkatan

konsentrasi) anggota keluarga Bcl2 pada membran mitokondria,
termasuk Tawaran (diperlukan untuk melepaskan sitokrom c) dan
Bax (mungkin terlibat dalam perubahan permeabilitas membran).

29.29 Sitokrom c mengaktifkan tahap apoptosis berikutnya

Konsep kunci
* Cytochrome c menyebabkan Apaf-1 digabungkan dengan
procaspase-9 untuk membentuk autosom, yang kemudian
mengaktifkan caspase-9 dengan autocleavage.

Caspase-9 membelah caspase-3 dan caspases lainnya untuk

memicu fase efektor apoptosis, ketika struktur seluler hancur.

Pelepasan sitokrom c adalah titik kontrol penting dalam jalur ini.

Peran dasar cytochrome c adalah memicu aktivasi caspase-9.

Gambar 29.54 menunjukkan tahapan antara pelepasan sitokrom c c
dan aktivasi caspase-9. Cytochrome c memicu interaksi protein
sitosolik Apaf-1 dengan caspase-9 di kompleks yang disebut
apoptosome.

Reaksi berlangsung dalam beberapa tahap. Cytochrome c berikatan

dengan Apaf-1.

Ini memungkinkan Apaf-1 untuk mengikat ATP. Hal ini pada

gilirannya memungkinkannya untuk melakukan oligomerisasi, yang
menyebabkan perubahan konformasi yang mengekspos domain
pengikat caspase; maka Apaf-1 mengikat procapase-9.
Penggabungan procaspase-9 ke dalam apoptosom memicu belahan
auto-activating.

Sifat tikus yang kekurangan Apaf-1 atau caspase-9 memberi sedikit

cahaya pada generalitas jalur apoptosis. Kekurangan caspase-9
adalah mematikan, karena tikus memiliki otak yang cacat akibat
kegagalan apoptosis. Apoptosis juga berkurang pada thymocytes
(immune precursors to lymphocytes). Tikus defisien Apaf-1 memiliki
defek perkembangan otak yang kurang parah, menyiratkan bahwa
ada cara alternatif untuk mengaktifkan caspase-9. Kedua jenis tikus
yang kekurangan terus menunjukkan apoptosis yang dimediasi Fas,
menyiratkan bahwa Fas memiliki cara alternatif untuk memicu
apoptosis.

Caspase-9 pada gilirannya membelah procaspase-3 untuk

menghasilkan caspase-3 (yang sebenarnya merupakan komponen karakteristik terbaik dari jalur hilir. Caspase-3
adalah homolog dari protein C. elegans ced-3; lihat di bawah). Caspase-9 juga mengaktifkan caspase-6 dan 7.

Caspase-3 bertindak sesuai dengan apa yang bisa disebut tahap efektor jalur.

Kami belum mengidentifikasi semua target aktivitas protease yang penting untuk apoptosis. Salah satu sasaran yang
diketahui adalah enzim PARP (poly [ADP-ribose] polymerase). Degradasinya tidak penting, namun merupakan
diagnostik yang berguna untuk apoptosis.

Satu jalur yang mengarah ke fragmentasi DNA telah diidentifikasi.

Caspase-3 membelah satu subunit dimer yang disebut DFF (faktor fragmentasi DNA). Subunit lain kemudian
mengaktifkan sebuah nuklease yang mendegradasi DNA. Namun, degradasi DNA oleh jalur ini tampaknya tidak
diperlukan untuk kematian sel, yang berlanjut pada tikus yang kekurangan enzim.

Jalur lain untuk degradasi DNA dipicu secara langsung dengan melepaskan enzim dari mitokondria. Fungsi normal
endonuclease G dalam mitokondria berkaitan dengan replikasi DNA. Namun, pada sel apoptosis dilepaskan dari
mitokondria, dan kemudian menurunkan DNA nuklir. Interferensi dengan fungsi gen yang sesuai pada C. elegans
mengurangi degradasi DNA dan menunda munculnya mayat sel. Oleh karena itu enzim ini tampaknya paling tidak
penting untuk masa apoptosis, walaupun tidak perlu untuk kematian sel.
Kontrol apoptosis melibatkan komponen yang menghambat jalur dan juga mengaktifkannya. Ini pertama menjadi
jelas dari analisis genetik kematian sel di C. elegans, ketika mutan ditemukan yang mengaktifkan atau
menonaktifkan kematian sel. Mutasi pada ced-3 dan ced-4 menyebabkan kelangsungan hidup sel-sel yang biasanya
mati, menunjukkan bahwa gen ini penting untuk kematian sel, kode ced-3 untuk aktivitas protease (dan sebenarnya
adalah sarana dimana caspases pertama kali terlibat dalam apoptosis). Ini adalah satu-satunya protease tipe ini pada
C. elegans. kode ced-4 untuk homolog ke Apaf-1. ced-9 menghambat apoptosis. Ini kode untuk rekan kerja Bcl2.
SEBUAH

mutasi yang menginaktivasi ced-9 adalah mematikan, karena

menyebabkan kematian sel yang seharusnya bertahan. Proses ini
membutuhkan ced-3 dan ced-4, dan ini adalah dasar asli untuk
gagasan bahwa ced-9 memblokir jalur apoptosis dimana ced-3 dan
ced-4 berpartisipasi. Hubungan ini menjadi penting: ced-3 dan ced-
4 tidak diekspresikan semata-mata pada sel-sel yang ditakdirkan
mati, namun juga diekspresikan di sel lain, di mana biasanya
tindakan mereka dicegah dengan ced-9. Kontrol apoptosis yang
tepat dapat melibatkan keseimbangan antara aktivasi dan
penghambatan jalur ini. Jalur apoptosis juga dapat dihambat pada
tahap yang dikatalisis oleh caspases kemudian. Protein yang
disebut IAP (penghambat apoptosis) dapat mengikat procaspase
dan caspases aktif untuk memblokir aktivitas mereka (lihat Fi

Aktivitas pemblokiran AIP perlu dimusuhi agar apoptosis dapat

dilanjutkan. Sel-sel vertebrata mengandung protein yang disebut
Diablo / Smac, yang dilepaskan dari mitokondria bersamaan
dengan sitokrom c, dan bertindak dengan mengikat IAP.

Adanya mekanisme untuk menghambat sekaligus mengaktifkan

apoptosis menunjukkan bahwa banyak (bahkan mungkin semua)
sel memiliki kapasitas intrinsik untuk apoptosis. Jika komponen
jalur berada di mana-mana, determinan kritis apakah sel hidup
atau mati mungkin bergantung pada mekanisme peraturan yang
menentukan apakah jalur diaktifkan atau ditekan.

29.30 Ada beberapa jalur apoptosis

Konsep kunci

Fas mengaktifkan apoptosis melalui jalur caspase dan juga melalui

aktivasi kinase JNK.

Jalur yang ditunjukkan pada Gambar 29.50 adalah jalur prototipikal

untuk aktivasi apoptosis melalui protease cascade. Namun, Fas juga dapat mengaktifkan apoptosis oleh jalur yang
melibatkan JNK kinase, yang substratnya yang paling menonjol adalah faktor transkripsi c-Jun (lihat Gambar 28.43).

Hal ini menyebabkan cara yang tidak terdefinisi untuk mengaktifkan protease. Gambar 29.55 menunjukkan bahwa
jalur ini dimediasi oleh protein Daxx (yang tidak memiliki domain kematian). Pengikatan FADD dan Daxx ke Fas
adalah independen: setiap adaptor mengenali situs yang berbeda pada Fas. Dua jalur berfungsi secara independen
setelah Fas telah memasang adaptor. Reseptor TNF juga dapat mengaktifkan JNK dengan menggunakan protein
adaptor yang berbeda.

Dalam kejadian normal, aktivasi Fas mungkin mengaktifkan kedua jalur. Eksperimen yang terlalu banyak
menunjukkan bahwa jalur dapat menyebabkan apoptosis. Kepentingan relatif dari dua jalur dapat berbeda dengan
tipe sel individual, sebagai respons terhadap sinyal lain yang mempengaruhi setiap jalur. Sebagai contoh, JNK
diaktifkan oleh beberapa bentuk tegangan secara independen dari jalur yang diaktifkan Fas. Jalur ini tidak dihambat
oleh Bcl2, yang dapat menjelaskan kemampuan variabel sel untuk melawan apoptosis sebagai respons terhadap
Bcl2.

Jalur apoptosis lain dipicu oleh limfosit T sitotoksik, yang membunuh sel target dengan suatu proses yang
melibatkan pelepasan butiran yang mengandung protease serin dan komponen litik lainnya. Salah satu komponen
tersebut adalah perforin, yang bisa membuat lubang di membran sel target, dan dalam beberapa kondisi bisa
membunuh sel target. Protein serin dalam butiran disebut granzim. Dengan adanya perforin, granzyme B dapat
menginduksi banyak ciri apoptosis, termasuk fragmentasi DNA. Ini mengaktifkan caspase yang disebut Ich-3, yang
diperlukan untuk apoptosis di jalur ini.

29.31 Ringkasan

Siklus sel terdiri dari transisi dari satu peraturan ke negara lain. Perubahan keadaan peraturan dipisahkan oleh
periode lag dari perubahan fenotipe sel berikutnya. Transisi tersebut berupa pengaktifan atau pengaktifan kinase
(s), yang memodifikasi substrat yang menentukan keadaan fisik sel.

Pos pemeriksaan dapat menghambat transisi sampai beberapa kondisi intrinsik atau ekstrinsik telah terpenuhi.

Dua titik kontrol utama dalam siklus sel ada di G1 dan pada akhir G2. Selama G1, sebuah komitmen dibuat untuk
memasuki siklus replikasi; Keputusan tersebut diidentifikasi oleh titik restriksi pada sel hewan, dan oleh START pada
sel ragi. Setelah keputusan ini diambil, sel berkomitmen untuk memulai fase S, walaupun ada periode lag sebelum
replikasi DNA dimulai. Akhir G2 ditandai dengan keputusan yang segera dieksekusi untuk masuk mitosis. Fitur
pemersatu dalam siklus sel ragi dan hewan adalah adanya fase M kinase, terdiri dari dua subunit: Cdc2, dengan
aktivitas katalitik kinase serin / treonin; dan siklin mitosis dari kelas A atau B. Subunit homolog ada di semua sel
eukariotik. Gen yang mengkode subunit katalitik pada ragi adalah cdc2 di S. pombe dan CDC28 di S. cerevisiae. Sel
hewan biasanya mengandung beberapa mitosis siklik (A, B1, B2); di S. pombe, hanya ada satu siklin pada fase M,
kelas B yang dikodekan oleh cdc13, meskipun S. pombe memiliki beberapa protein CLB.

Aktivitas fase M kinase dikendalikan oleh keadaan fosforilasi subunit katalitik. Bentuk aktif memerlukan defosforilasi
pada Tyr-15 (dalam ragi) atau Thr-14 / Tyr-15 (pada sel hewan) dan fosforilasi pada Thr-161. Siklus juga terfosforilasi,
namun signifikansi modifikasi ini tidak diketahui. Pada sel hewan, kinase dilemahkan oleh degradasi komponen
siklin, yang terjadi secara tiba-tiba selama mitosis. Cyclins dari tipe A biasanya terdegradasi sebelum siklon tipe B.
Pemusnahan setidaknya siklon B, dan mungkin dari kedua kelas siklin, diperlukan bagi sel untuk keluar dari mitosis.

Analisis gen yang komprehensif yang mempengaruhi siklus sel telah mengidentifikasi mutan cdc di S. pombe dan S.
cerevisiae. Mutasi yang ditandai terbaik adalah yang mempengaruhi komponen atau aktivitas fase M kinase. Mutasi
cdc25 dan wee! di S. pombe memiliki efek yang berlawanan dalam mengatur M fase kinase sebagai respons
terhadap ukuran sel (dan sinyal lainnya). Wee1 adalah kinase yang bekerja pada Tyr-15 dan mempertahankan Cdc2
dalam keadaan tidak aktif; Cdc25 adalah fosfatase yang bekerja pada Tyr-15 dan mengaktifkan Cdc2. Keberadaan
wee! dan homolog cdc25 pada eukariota yang lebih tinggi menunjukkan bahwa peralatan untuk pengendalian siklus
sel dilestarikan secara luas dalam evolusi.

Dengan memfosforilasi substrat yang sesuai, kinase menyediakan aktivitas MPF, yang merangsang mitosis atau
meiosis (seperti yang didefinisikan dalam Xenopus oocytes). Substrat yang menonjol adalah histone H1, dan aktivitas
H1 kinase sekarang digunakan sebagai uji rutin untuk fase M kinase. Fosforilasi H1 dapat dikaitkan dengan
kebutuhan untuk memadatkan kromatin pada mitosis. Kelas lain dari substrat terdiri dari lamin, yang fosforilasi
menyebabkan pembubaran lamina nuklir. Prinsip umum yang mengatur peristiwa ini (dan yang mungkin lain) adalah
bahwa keadaan substrat dikendalikan secara reversibel dalam menanggapi fosforilasi, sehingga bentuk protein
terfosforilasi diperlukan untuk organisasi mitosis, sedangkan bentuk yang termosforilasi diperlukan untuk organisasi
interphase. Fosfat diperlukan untuk membalikkan modifikasi yang diperkenalkan oleh M phase kinase.

Transisi dari fase G1 ke S memerlukan kinase yang terkait dengan Mphase kinase. Pada ragi, subunit katalitik identik
dengan fase M kinase, tetapi siklonnya berbeda (kombinasinya adalah CDC28-cig1,2 pada S. pombe, Cdc2-CLN 1,2,3
pada S. cerevisiae).
Aktivitas fase kinase G1 / S dan tidak aktifnya fase M kinase keduanya diperlukan untuk melanjutkan melalui G1.
Inisiasi fase S di S. pombe memerlukan rum1 untuk menonaktifkan cdc2 / cdc13 agar memungkinkan aktivasi Cdc18,
yang mungkin merupakan aktivator fase S.

Dalam sel mamalia, keluarga subunit katalitik disediakan oleh gen ccMr, dinamai karena mereka mengkodekan
subunit katalitik kinase yang bergantung pada siklin. Ada ~ 10 gen cdk dalam genom hewan. Selain Cdc2 klasik,
produk yang dicirikan terbaik adalah cdk2 (yang terkait dengan Cdc2). Dalam siklus sel normal, cdk2 dipasangkan
dengan siklin E selama transisi G1 / S dan oleh siklin A selama fase fase S. cdk2, cdk4, dan cdk5 semua mitra D
Cyclins untuk membentuk kinase yang terlibat dengan transisi dari GO ke G1. Kompleks cdk-cyclin ini menghasilkan
fosforilasi RB, yang menyebabkannya melepaskan faktor transkripsi E2F, yang kemudian mengaktifkan gen yang
produknya dibutuhkan untuk fase S. Sekelompok protein CKI (inhibitor) yang diaktifkan oleh pengobatan yang
menghambat pertumbuhan dapat mengikat kompleks cdk-cyclin, dan mempertahankannya dalam bentuk yang tidak
aktif.

Checkpoints mengendalikan perkembangan siklus sel. Satu pos pemeriksaan menanggapi adanya DNA yang tidak
direplikasi atau rusak dengan menghalangi mitosis. Yang lain mengendalikan kemajuan melalui mitosis, misalnya,
mendeteksi kinetochores yang tidak berpasangan.

Apoptosis dicapai dengan jalur aktif yang mengeksekusi sebuah program untuk kematian sel. Komponen jalur dapat
hadir pada banyak atau semua sel eukariotik yang lebih tinggi. Apoptosis dapat dipicu oleh berbagai rangsangan.
Jalur yang umum melibatkan aktivasi caspase-8 oleh oligomerisasi pada reseptor permukaan yang teraktivasi.
Caspase-8 membelah Bid, yang memicu pelepasan mitokondria sitokrom cfrom. sitokrom c menyebabkan Apaf-1
menjadi oligomerisasi dengan caspase-9. Caspase aktif-9 membelah procaspase-3, yang dua subunitnya membentuk
protease aktif. Ini membelah berbagai target yang menyebabkan kematian sel.

Jalur tersebut dihambat oleh Bcl2 pada tahap pelepasan sitokrom c. Jalur alternatif untuk memicu apoptosis yang
tidak melewati Apaf-1 dan caspase-9, dan yang tidak dihambat oleh Bcl2, melibatkan pengaktifan JNK. Sel yang
berbeda menggunakan jalur ini untuk perluasan yang berbeda. Apoptosis pertama kali terbukti penting untuk
perkembangan normal pada C. elegans, dan mutasi knockout pada tikus menunjukkan bahwa ini juga berlaku untuk
vertebrata. Setiap sel mungkin berisi komponen jalur apoptosis dan tunduk pada pengaturan keseimbangan antara
aktivasi dan represi kematian sel.