Ingeniería de Enzimas

Enzimas

• Tiene un alto grado de especificidad

• Actúan en habitualmente en soluciones acuosas bajo

condiciones de temperatura y pH definidos

• La acción catalizadora de las enzimas es

cuantificada por su actividad enzimática
Clasificación de las Enzimas
Enzimas
Cinética Enzimática
Cinética Enzimática

• La cinética de una enzima se ha explicado en base a las

hipótesis de Michaelis
Michaelis--Menten (equilibrio rápido) y de
Briggs--Haldane (estado estacionario)
Briggs
Cinética Enzimática
Cinética Enzimática
Aplicaciones de las Enzimas
Aplicaciones de las Enzimas

‰ Industrial

‰ Analíticas
10% 5%
‰ Terapéuticas

‰ Investigación

85%
Aplicaciones de las Enzimas

Aplicación Industrial

9 Reducen viscosidad
9 Limpieza
9 Eficiencia
9 Productividad
9 Mejoran extracciones
9 Nuevos productos
Aplicaciones de las Enzimas

Aplicación analítica
Sensibilidad

Especificidad

Aplicación terapéutica
Especificidad
Eficiencia catalítica
Aplicaciones de las Enzimas

Tipos de industrias con aplicaciones enzimáticas

2 2 1 33 detergentes
11
textil
cuero
papelera
otros
Aplicaciones de las Enzimas
Ejemplos de Enzimas y sus aplicaciones:

α-amilasas panadería, cervecería

β-glucanasas cervecería, jugos frutas, alimentación animal
lactasa lácteos
xilanasa alimentación animal, pulpa y papel
invertasa confitería
pectinasas vino, jugos de frutas
celulasas jugos de fruta, textil
Aplicaciones de las Enzimas
Ejemplos de Enzimas y sus aplicaciones:

Proteasas ácidas lácteos, panadería

Proteasas neutras cárneos, cervecería
Proteasa alcalina cárneos, detergentes, curtiembre
Lipasa lácteos, detergentes
Glucosa oxidasa huevos, mayonesa
Penicilina acilasa farmacéutica
Renina lácteos
Enzimas Inmovilizadas
Enzimas Inmovilizadas
• Es aquella enzima física o químicamente ligada o contenida
en una matriz o soporte, usualmente sólido, no esencial para
la expresión de su actividad.

• La inmovilización de enzimas ofrece una serie de ventajas

desde el punto de vista de estabilidad operacional y
flexibilidad de aplicación en distintas configuraciones y
modalidades de proceso.

• Sistemas de inmovilización: enzimas unidas a soporte por

enlace químico o enzimas encapsuladas, confinadas a un
espacio determinado por atrapamiento molecular.
Enzimas Inmovilizadas
Enzimas Inmovilizadas
ESTABILIDAD OPERACIONAL
Enzimas Inmovilizadas
• El éxito de la inmovilización se basa en la capacidad del
soporte de unir la enzima y de expresar eficientemente la
actividad de la enzima unida.
• Al unirse la enzima a un soporte sólido se genera un sistema
heterogéneo, ya que reactantes y catalizador se encuentran
en fases distintas.
Enzimas Inmovilizadas
conformacionales:: relacionados con la alteración de la
Efectos conformacionales
estructura de la molécula enzimática

microambientales:: resultan como consecuencia de que

Efectos microambientales
el catalizador enzimático se encuentra en un ambiente cuyas
propiedades difieren de aquellas donde los efectos de la acción
enzimática se miden.

Efectos de partición
Restricciones difusionales (internas y externas)
Enzimas Inmovilizadas
• Cinética intrínseca
intrínseca:: aquella que se observaría en ausencia de
efectos microambientales.

• Cinética inherente
inherente:: aquella que se observaría en ausencia de
restricciones difusionales.

• Cinética efectiva (aparente)

(aparente):: aquella que no corresponde a la
propia de la enzima, es la que se mide experimentalmente.
Enzimas Inmovilizadas
ESTABILIDAD OPERACIONAL
Enzimas Inmovilizadas
Restricciones difusionales externas (RDE):

- Resultan como consecuencia de la existencia (en la vecindad de la

partícula catalítica) de una zona de líquido estanco donde hay sólo
difusión molecular y no transporte convectivo
convectivo..

- Si la limitación es muy fuerte, la velocidad de la reacción es la

velocidad de difusión.

- Estas restricciones disminuyen aumentando la agitación para mejorar

el mezclado.

- En una situación ideal de mezcla sin limitación de la difusión, la

reacción tendrá los parámetros cinéticos idénticos a los de la enzima
libre.
Enzimas Inmovilizadas
Módulo de Damköhler:
Es un número adimensional que expresa la relación entre la
velocidad máxima de una reacción enzimática y la velocidad máxima de
transferencia de sustrato en las proximidades de una enzima
inmovilizada.
Vmax
α=
hK m
Incidencia del fenómeno de transporte de sustrato en la expresión del
potencial catalítico de la enzima
enzima..

Si α es pequeño Æ baja incidencia de RDE

Si α es grande Æ alta incidencia de RDE
Reactores Enzimáticos
Reactores Enzimáticos
- Operación por Lote: enzima soluble o inmovilizada

Tiempo de operación (t) → grado de conversión (x)

- Operación Continua: enzima inmovilizada

Tiempo de residencia (τ) → grado de conversión (x)

Flujo (F) → condiciones de operación

Volumen de reacción (V R) → F y τ

VR = F· τ

Tiempo de operación (t) → actividad enzimática

Reactores Enzimáticos
Reactores en continuo

A) Lecho empacado

B) Agitado con retención

Reactores Ideales

A) Modelo de flujo: Flujo Pistón ó Mezcla perfecta

B) Para enzimas inmovilizadas: no hay RD, inactivación, efectos

de partición.
Reactores Enzimáticos
Parámetros de Diseño

•Tiempo de residencia τ = VR/F

para lecho empacado VR = VE·ε

•Carga enzimática (E, en UI)

•Grado de conversión x = (S0 – S)/S0 ;

Si la reacción es equimolar:

P = S0· x

•Productividad QP ó π = S0·x/τ
Reactor por Lotes

(kcat·E)·t= S0·x - ln(1 – x)

Km·VR Km
Reactor Continuo Flujo Pistón

z z+Δz
F F
s0 s0(1-x)
x x+Δx
L

(k·E) = S0·x - ln(1 – x)

Km·F Km
Reactor Continuo Tanque Agitado

F, so

s F, s

τ·(k·e) S0·x x
= +
Km Km (1 – x)

k·E S0·x x
= +
Km·F Km (1 – x)
Reactores Enzimáticos

• Cinéticas simples Michaelis-Menten y cinéticas de

inhibición por producto: El reactor continuo de lecho fijo en
régimen de flujo pistón (y el agitado por lotes) es más
eficiente que el reactor continuo de tanque agitado.
• Cinéticas de inhibición por sustrato: lo opuesto