PRÁCTICA No 1

ESPECTROFOTOMETRIA

1.OBJETIVOS.

> Interactuar con la absorbancia de algunos compuestos.

> Alcanzar el punto máximo de absorbancia según la longitud, de una mezcla estable.

> Adquirir conocimiento de la absorción de luz en algunos compuestos junto al manejo del
espectrofotómetro.

2.MARCOTEORICO.
La espectrofotometría1 es un método científico utilizado para medir cuanta luz absorbe una
sustancia química, midiendo la intensidad de la luz cuando un haz luminoso pasa a través de la
solución muestra, basándose en la Ley de Beer-Lambert. Esta medición también puede usarse
para medir la cantidad de un producto químico conocido en una sustancia.

En la espectrofotometría se aprovecha la absorción de radiación electromagnética en la zona

del ultravioleta y visible del espectro. La muestra absorbe parte de la radiación incidente en
este espectro y promueve la transición del analito hacia un estado excitado, transmitiendo un
haz de menor energía radiante. En esta técnica se mide la cantidad de luz absorbida como
función de la longitud de onda utilizada. La absorción de las radiaciones ultravioletas, visibles e
infrarrojas depende de la estructura de las moléculas, y es característica de cada sustancia
química.

La espectrofotometría ultravioleta-visible utiliza haces de radiación del espectro

electromagnético, en el rango UV de 180 a 380 nm, y en el de la luz visible de 380 a 780 nm,
por lo que es de gran utilidad para caracterizar los materiales en la región ultravioleta y visible
del espectro.
3.DESARROLLO EXPERIMENTAL:
1. Preparar la siguiente batería de tubos:

1 ml 2 ml 3 ml 4 ml
9 ml 8mlml 7 ml 6 ml
ml ml
ml

Solución stock: Bicromato de Potasio 80 mg%. Calcular la concentración en mg% de

bicromato de K en cada uno de los tubos Standard (I-II-II-IV).
Leer las absorbancia de los cuatro tubos a 350 nm de longitud de onda ( ) ‫ג‬ en el
espectrofotómetro contra el H2O destilada (Abs. H2O=0).
2. Con los datos obtenidos construir en un papel milimetrado la gráfica de absorbancia en el eje
de las Ordenadas vs concentración de bicromato de K en el eje de las Abscisas.
3. Una vez obtenida la curva de calibración, medir la absorbancia de la muestra problema
(Problema X).
4. Obtener el factor de calibración (Fc) promedio con las soluciones standard y sus Absorbancia
utilizadas para construir las curvas de calibración ajustadas.
5. Calcular la concentración de la muestra problema por los siguientes métodos:
- A.- Gráficamente extrapolando su absorbancia en la curva de calibración.
- B.- Usando Factor de Calibración, multiplicando su absorbancia por el factor de calibración
del standard.
4.DISCUSIO DE RESULTADOS:.
Los resultados fueron variables debido al parecer a un error humano al momento de preparar
la solución por lo que el espectrómetro dio esos resultados.
5.CONCLUSIONES:

La absorbancia es la capacidad que tiene algunos compuestos para absorber la radiación

electromagnética, pudimos observar cómo, dependiendo de la concentración y la longitud a la
cual se le aplique un rayo, puede alcanzar un punto máximo de absorción.

Según esto la longitud y la absorbancia son proporcionales hasta alcanzar el punto máximo y
de allí empieza a descender.

Según la concentración varia la absorbancia del compuesto. Variando la cantidad de solvente

(Siendo agua destilada) se puede disminuir la absorbancia.

6.CUESTIONARIO:
1.- Explique el mecanismo de funcionamiento de un espectrofotómetro.
El funcionamiento de un espectrofotómetro consiste básicamente en iluminar la muestra con
luz blanca y calcular la cantidad de luz que refleja dicha muestra en una serie de intervalos de
longitudes de onda. Lo más usual es que los datos se recojan en 31 intérvalos de longitudes de
onda (los cortes van de 400 nm, 410 nm, 420 nm… 700 nm). Esto se consigue haciendo pasar la
luz a través de un dispositivo monocromático que fracciona la luz en distintos intérvalos de
longitudes de onda. El instrumento se calibra con una muestra o loseta blanca cuya reflectancia
en cada segmento de longitudes de onda se conoce en comparación con una superficie de
reflexión difusa perfecta.

La reflectancia de una muestra se expresa como una fracción entre 0 y 1, o como un porcentaje
entre 0 y 100. Es importante darse cuenta de que los valores de reflectancia obtenidos son
valores relativos y, para muestras no fluorescentes, son independientes de la calidad y cantidad
de la luz usada para iluminar la muestra. Así, aunque los factores de reflectancia se midan
usando una fuente de luz concreta, es perfectamente correcto calcular los valores colorimétricos
para cualquier iluminante conocido.
2.- ¿Qué diferencias existen entre un fotocolorímetro y un espectrofotómetro?.
Espectrofotómetro: es un instrumento usado en el análisis químico que sirve para medir, en
función de la longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica
relativos a dos haces de radiaciones y la concentración o reacciones químicas que se miden en
una muestra. También es utilizado en los laboratorios de química para la cuantificación de
sustancias y microorganismos.

Fotocolorímetro: es cualquier herramienta que identifica el color y el matiz para una medida
más objetiva del color.

El colorímetro también es un instrumento que permite medir la absorbancia de una solución en

una específica frecuencia de luz camilogena ser determinada. Es por eso, que hacen posible
descubrir la concentración de un soluto conocido que sea proporcional a la absorción.

Diferencias:

Estos son equipos utilizados en el Laboratorio para el análisis de muestras fisiológicas,

basándose en el principio que cada compuesto químico absorbe o emite energía lumínica de
diferente longitud de onda. Esta longitud puede estar en el espectro de luz visible, o en otra
parte del espectro electromagnético.

La diferencia fundamental entre un espectrofotómetro y un fotómetro o fotocolorímetro,

consiste en que el fotocolorímetro trabaja únicamente en el espectro de luz visible y selecciona
una longitud de onda determinada mediante filtros fijos.

En cambio, un Espectrofotómetro es capaz de trabajar, no solo con la luz visible sino que en
otras regiones del espectro electromagnético (ultravioleta e infrarrojo). Además posee un
monocromador para seleccionar la longitud de onda deseada.
3.- Grafique el espectro de luz, tanto en el rango visible como no visible con sus respectivas
longitudes de ondas.

4.- Qué relación matemática existe entre Absorbancia y Transmitancia?

transmitancia se define como la cantidad de energía que atraviesa un cuerpo en determinada
cantidad de tiempo.

Existen varios tipos de transmitancia, dependiendo de qué tipo de energía consideremos.

La transmitancia óptica se refiere a la cantidad de luz que atraviesa un cuerpo, en una

determinada longitud de onda. Cuando un haz de luz incide sobre un cuerpo traslúcido, una
parte de esa luz es absorbida por el mismo, y otra fracción de ese haz de luz atraversará el
cuerpo, según su transmitancia.

Podemos hablar de transmitancia térmica como la cantidad de energía en forma de calor que
atraviesa un cuerpo, en cierta unidad de tiempo. Si tenemos en cuenta un cuerpo con caras
planas y paralelas, y entre sus caras hay una diferencia térmica, esta diferencia constituye la
transmitancia térmica del cuerpo

Absorbancia es Cuando un haz de luz incide sobre un cuerpo traslúcido, una parte de esta luz
es absorbida por el cuerpo, y el haz de luz restante atraviesa dicho cuerpo. A mayor cantidad
de luz absorbida, mayor será la absorbancia del cuerpo, y menor cantidad de luz será
transmitida por dicho cuerpo. Como se ve, la absorbancia y la transmitancia son dos aspectos
del mismo fenómeno.

Las dos observaciones descritas anteriormente (las que se refieren a la relación entre
la absorbancia y la concentración y la absorbancia y la longitud de la trayectoria)
constituyen la Ley de Beer-Lambert
5.-Construya una curva de calibración con los siguientes valores:

7.BIBLIOGRAFIA

> https://deralaja.wordpress.com/2015/07/03/el-espectro-electromagnetico/
> http://www.gusgsm.com/funciona_espectrofotometro_reflectancia

> http://www.equiposylaboratorio.com/sitio/contenidos_mo.php?it=1027

> https://es.scribd.com/document/246168992/Fotocolorimetro-y-Espectrofotometro