MICROBIOLOGÍA CRECIMIENTO MICROBIANO

CRECIMIENTO MICROBIANO ES EL CRECIMIENTO DE UNA POBLACIÓN.

ES EL INCREMENTO DEL NÚMERO DE CÉLULAS DE

LA POBLACIÓN.

BLGA. ESTHER LAZCANO CARREÑO

TIEMPO DE DUPLICACIÓN O
TIEMPO DE GENERACIÓN

PERIODO EN EL QUE LAS CÉLULAS CRECEN, SE

DIVIDEN Y DAN CADA UNA 2 CÉLULAS HIJAS.

20 MINUTOS

•APROX. ES EL MISMO PARA TODAS LAS CÉLULAS.

•VARÍA DEPENDIENDO DE LA ESPECIE.
•VARÍA POR LAS CONDICIONES DE CRECIMIENTO.
 TASA DE CRECIMIENTO CRECIMIENTO EXPONENCIAL

LA POBLACIÓN SE DUPLICA DURANTE CADA

TIEMPO DE DUPLICACIÓN.
ES EL TIEMPO DE DUPLICACIÓN POR HORA.

TIEMPO MINUTOS NÚMERO NOT. CIENT.

SI E. coli SE DUPLICA CADA 18 MINUTOS: DE DUPLI.
35000

30000
0 0 1000 10 3 25000
TASA DE CREC. = 60/ 18 = 3,3 GENERACIONES POR HORA 1 20 2000 2 x 10 3 20000

2 40 4000 4 x 10 3 15000

TASA ALTA  CRECIMIENTO ALTO 3 60 8000 8 x 10 3

10000

5000
4 80 16000 1,6 x 10 4 0

TASA BAJA  CRECIMIENTO BAJO 5 100 32000 3,2 x 10 4 1 2 3 4 5 6

VELOCIDAD DE CRECIMIENTO DE UN FASES DEL CRECIMIENTO BACTERIANO

CULTIVO MICROBIANO EL CRECIMIENTO BACTERIANO DESCRIBE UNA CURVA DE CRECIMIENTO
CON 4 FASES DISTINTAS Y SECUENCIALES

FASE LAG O FASE LOG, FASE FASE DE

DE LATENCIA LOGARÍTMICA ESTACIONARIA MUERTE
250 O EXPONENCIAL

200

150

Número de Células
100

(a) (b) 50

 (a) Datos de una población que se duplica cada 30 minutos, 0

 (b) Datos representados en escala aritmética (ordenada 0 5 10 15 20 25

Tiempo ( horas)
izquierda) o en escala logarítmica (ordenada derecha). EL DESARROLLO DE LA CURVA DEPENDE DEL CULTIVO, CONDICIÓN PREVIA, MEDIO PREVIO,
MEDIO NUEVO, NUTRIENTES, CONDICIONES DE CULTIVO, ETC
 FASES DEL CRECIMIENTO BACTERIANO FASES DEL CRECIMIENTO BACTERIANO
 FASE DE LATENCIA  FASE EXPONENCIAL
 ADAPTACIÓN DEL INÓCULO AL MEDIO FRESCO.  FASE DE CRECIMIENTO ACELERADO O DUPLICACIÓN.

 SÍNTESIS DE ENZIMAS Y DE METABOLITOS  MÁXIMO CRECIMIENTO.

 NO HAY DUPLICACIÓN AL INICO Y LUEGO AL FINAL ES MUY LENTA  ACTIVIDAD METABÓLICA ALTA


250 250

200 200

150 150
Número de Células

Número de Células
100 100

50 50

0 0
0 5 10 15 20 25 0 5 10 15 20 25

Tiempo ( horas) Tiempo ( horas)

FASES DEL CRECIMIENTO BACTERIANO FASES DEL CRECIMIENTO BACTERIANO

 FASE ESTACIONARIA  FASE DE MUERTE

 AGOTAMIENTO DE NUTRIENTES O CONCENTRACIÓN DE  ACUMULACIÓN DE METABOLITOS INHIBIDORES
SUSTANCIAS TÓXICAS  AUSENCIA DE NUTRIENTES
 PRESENCIA DE METABOLITOS SECUNDARIOS  MUERTE CELULAR ACOMPAÑADA DE LISIS, POCAS CÉLULA VIABLES.
 NO HAY INCREMENTO NETO DE CÉLULAS.  MÁS LENTA QUE EL CRECIMIENTO EXPONENCIAL.
 CRECIMIENTO LENTO Y CRÍPTICO.

250
250

200
200

Número de Células
Número de Células

150
150

100 100

50 50

0 0
0 5 10 15 20 25 0 5 10 15 20 25
Tiempo ( horas) Tiempo ( horas)
 CULTIVO CONTINUO
NECESIDADES DE LOS MICROORGANISMOS PARA
CRECER

Es un sistema de flujo de
volumen constante al que se CADA ESPECIE MICROBIANA REQUIERE PARA CRECER
le agrega continuamente CONDICIONES PARTICULARES.
medio y del cual sale un
dispositivo que permite la
eliminación constante del
medio excedente.
El sistema se encuentra en
un estado estable en NUTRICIÓN
equilibrio, el número de
células y su estado nutritivo
permanecen también
constantes.
El dispositivo más frecuente
AMBIENTE NO NUTRITIVO
para cultivo continuo es el
llamado quimiostato

NUTRICIÓN CARBONO
BASE ESTRUCTURAL DE LOS COMPUESTOS
BIOQUÍMICOS
• CARBONO
• OXÍGENO
• NITRÓGENO
REQUERIMIENTO • FÓSFORO EN M.O AUTÓTROFOS SU
FUENTE ES EL CO2.
EN M.O. HETERÓTROFOS SU
FUENTE ES COMPUESTO
DE MOLÉCULAS • AZUFRE
ORGÁNICO:

DE • ELEMENTOS
CONSTRUCCIÓN TRAZAS
• FACTORES DE GLUCOSA POLISACÁRIDOS ALCOHOLES

CRECIMIENTO
ORGÁNICOS
OTROS ÁCIDOS
AMINOÁCIDOS
AZÚCARES ORGÁNICOS
CRECIMIENTO Y CONCENTRACIÓN DE OXÍGENO OXÍGENO
 (a-e) Aerobios, anaerobios, facultativos,
microaerófilos y anaerobios Aerotolerantes. PRESENCIA DE

RESPUESTA AL OXÍGENO CATALASA SUPERÓXIDO

 (a) El oxígeno penetra solo una corta distancia DISMUTASA
en el tubo, los aerobios obligados crecen sólo AEROBIO ESTRICTO REQUIEREN OXÍGENO PRESENTE PRESENTE
en la superficie,
 (b) Los anaerobios, son sensibles al oxígeno, ANAEROBIO PUEDEN CRECER CON O SIN PRESENTE PRESENTE
crecen sólo lejos de la superficie, FACULTATIVO OXÍGENO
 (c) Los aerobios facultativos crecen tanto en MICROAERÓFILO CRECEN MEJOR CON BAJA PRESENTE PRESENTE
presencia como en ausencia de oxígeno y TENSIÓN DE OXÍGENO
crecen por todo el tubo. El crecimiento es
ANAEROBIO CRECEN SIN OXÍGENO, PERO AUSENTE PRESENTE
mejor cerca de la superficie porque estos SU PRESENCIAA NO LOS MATA
AEROTOLERANTE
organismos pueden respirar,
ANAEROBIO CRECEN SIN OXÍGENO, PERO AUSENTE AUSENTE
 (d) Los microaerófilos crecen lejos de la zona
ESTRICTO SU PRESENCIA LOS MATA
más óxica.
 (e) Los anaerobios aerotolerantes crecen por CATALASA
todo el tubo. El crecimiento no es mejor cerca 2 H2O2  2 H2O + O2
de la superficie porque pueden fermentar.
SUPERÓXIDO DISMUTASA
2 O2- + 2 H+  H2O2 + O2

ENZIMAS DESTRUCTORAS DEL RELACIONES MICROBIANAS CON EL OXÍGENO

OXÍGENO
 NITRÓGENO
FÓSFORO
CONSTITUYE CERCA DEL 3% DEL PESO SECO DE LOS M.O..
CONSTITUYE
CERCA DEL 14%
DEL PESO SECO DE
LOS M.O.. SE ENCUENTRA EN LAS CÉLULAS EN FORMA DE IÓN FOSFATO.

INGRESA A LA CÉLULA EN FORMA DE IÓN FOSFATO.

• AMONIACO.
FUENTE: • AMINOÁCIDOS CONSTITUYENTE DE:
• NITRATO ÁCIDOS NUCLEICOS FOSFOLÍPIDOS.
OTROS METABOLITOS
• NITRÓGENO ATMOSFÉRICO ESENCIALES.
GASEOSO.

AZUFRE ELEMENTOS TRAZAS

COMPUESTOS ESENCIALES REQUERIDOS EN PEQUEÑA CANTIDAD.
CONSTITUYE CERCA DEL 1 % DEL PESO SECO DE LOS ALGUNOS SON COFACTORES O FORMAN PARTE DE COENZIMAS.
M.O..
EJEMPLO:
POTASIO
MAGNESIO
SU FUENTE MÁS COMÚN ES EL IÓN SULFATo CALCIO
HIERRO
MANGANESO
CONSTITUYENTE DE: MOLIBDENO
ALGUNOS ARN DE OTROS METABOLITOS
2 AMINOÁCIDOS COBALTO
TRANSFERENCIA ESENCIALES.

COBRE
ZINC
 FACTORES DE CRECIMIENTO ORGÁNICOS AMBIENTE NO NUTRITIVO
BLOQUES QUE NO PUEDEN SER SINTETIZADOS POR
LOS MICROOGANISMOS Y DEBEN SER SUMINSTRADOS
TEMPERATURA
POR EL AMBIENTE.

TIPOS: AMINOÁCIDOS
PRESIÓN
HIDROSTÁTICA
FACTORES FÍSICOS Y QUÍMICOS
QUE INFLUYEN EN EL
PURINAS CRECIMIENTO MICROBIANO.
ÁCIDOS (ADENINA,
GRASOS GUANINA) pH

PIRIMIDINAS
(CITOSINA, TIMINA, PRESIÓN OSMÓTICA
URACILO)

TEMPERATURA TEMPERATURA
CLASE PROPIEDADES

PSICRÓFILOS O CRECEN DEBAJO DE LOS 5 O C

PSICRÓTROFOS
P. ESTRICTOS NO CRECEN A O SOBRE LOS 20 O C

P. FACULTATIVOS PUEDEN CRECER SOBRE LOS 20 O C

MESÓFILOS CRECEN MEJOR A TEMPERATURAS MODERADAS COMO 37 O C

TERMÓFILOS CRECEN SOBRE LOS 50 O C

T. FACULTATIVOS PUEDEN CRECER POR DEBAJO DE LOS 37 O C

ESTENOTERMÓFILOS NO PUEDEN CRECER POR DEBAJO DE LOS 37 O C

T. EXTREMOS PUEDEN CRECER SOBRE LOS 80 - 100 O C

 TEMPERATURAS CARDINALES: MÍNIMA,
ÓPTIMA Y MÁXIMA

1 2 3
1. Una muestra de agua de mar permanentemente helada de McMurdo Sound,
Antártida.
2. Banco de nieve en Sierra Nevada, California, con coloración roja debida a la
presencia de algas.
3. Boulder Spring, un pequeño arroyo de agua hirviendo en el parque nacional
LOS VALORES REALES VARÍAN PARA CADA ORGANISMO de Yellowstone

pH
DETERMINA LA CONCENTRACIÓN DE IONES DE HIDRÓGENO E
HIDROXILO EN UNA SOLUCIÓN.
GENERALMENTE LAS BACTERIAS CRECEN A pH LIGERAMENTE
ALCALINO.

M.O. ACIDÓFILOS
M.O. NEUTRÓFILOS
M.O. ALCALÓFILOS
EFECTO DE LA ONCENTRAIÓN DE CLORURO DE SODIO SOBRE
EL CRECIMIENTO DE MICROORGANISMOS CON DIFETENTES PRESIÓN HIDROSTÁTICA
TOLERANCIAS
ES LA PRESIÓN QUE SE APLICA A UN LÍQUIDO.

UNA PRESIÓN ELEVADA PUEDE DETERNER EL CRECIMIENTO, NO

MATA LA CÉLULA.

TIPOS:

BARÓFILAS
 CRECEN MÁS RÁPIDO A PRESIONES SUPERIORES A 1
ATMÓSFERA.

BARÓFILAS OBLIGADAS
 CRECEN SÓLO A PRESIONES SUPERIORES DE 1
ATMÓSFERA.

PRESIÓN OSMÓTICA

IMPORTANTE POR LA NECESIDAD DE LOS

MICROORGANISMOS POR SU NECESIDAD DE AGUA.

LOS M.O. HALÓFILOS PUEDEN VIVIR A CONCENTRACIONES

ELEVADAS DE SAL.
 MEDIDA DEL NÚMERO DE
ACTIVIDAD DE AGUA
MICROORGANISMOS

EL NÚMERO DE
MICROORGANISMOS PUEDE SER
MEDIDO EN EL LABORATORIO
MEDIANTE TÉCNICAS DIRECTAS
E INDIRECTAS.

MÉTODOS DE MEDIDA TURBIDEZ

EL CRECIMIENTO EN MEDIO
LÍQUIDO SE MIDE DE ACUERDO
A SU CAPACIDAD DE
TRANSMITIR LA LUZ A TRAVÉS
DE ELLA. A MAYOR TURBIDEZ
MAYOR NÚMERO DE M.O.
ACTIVIDAD RECUENTO
TURBIDEZ FILTRACIÓN
METABÓLICA EN PLACA
SE MIDE EN UN
ESPECTROFOTÓMETRO.

ES NECESARIO
NÚMERO
PESO SECO
RECUENTO
MÁS PREPARAR UNA
DIRECTO
PROBABLE CURVA DE
CALIBRACIÓN
Y ESTIMAR EL
NÚMERO DE M.O.
 PESO SECO
EL NÚMERO DE CÉLULAS DE UN CULTIVO SE PUEDE MEDIR
DIVIDIENDO EL PESO SECO DEL CULTIVO POR EL PESO
SECO DE UNA CÉLULA INDIVIDUAL.
SE REQIERE:
ALREDEDOR DE 25 ML DE CULTIVO DENSO.
ACTIVIDAD METABÓLICA
SE MIDE LA CANTIDAD DE CÉLULAS DE ACUERDO A:
TASA DE FORMACIÓN DE PRODUCTOS METABÓLICOS
TASA DE UTILIZACIÓN DE SUSTRATO.
TASA DE REDUCCIÓN DE COLORANTES.

CENTRIFUGAR LAS CÉLULAS.

LAVAR LAS CÉLULAS.
RESUSPENDER LAS CÉLULAS.
CENTRIFUGAR O FILTRAR.
DESECAR EN HORNO A 105 OC POR 24 HORAS.
ENFRIAR EN DESECADOR .
PESAR

RECUENTO DIRECTO
RECUENTO DIRECTO AL MICROSCOPIO UTILIZANDO:
 UNA CÁMARA DE RECUENTO: PETROFF-HAUSER O NEW BAUER
PROCEDIMIENTO DE CONTAJE M ICROSCÓPICO RECUENTO DIRECTO
DIRECTO UTILIZANDO UNA CÁMARA PETROFF- CONTADOR ELECTRÓNICO COULTER.
HAUSSER

RECUENTO EN PLACA RECUENTO EN PLACA

DE LA O LAS DILUCIONES SELECCIONADAS, SE SIEMBRA POR EL MÉTODO DE:

SE REQUIERE DE DILUCIONES SERIADAS

SE RECOMIENDAN DILUCIONES EN FRASCOS DE 90 ml,

CADA DILUCIÓN SE REALIZA PASANDO 10 ml PARA
COMPLETAR UN VOLUMEN DE 100 ml.
 NÚMERO MÁS PROBABLE
BASADO EN EL PRINCIPIO QUE UNA SÓLA CÉLULA PUEDE SER CAPAZ
DE PRODUCIR UN CULTIVO TURBIO EN CALDOS APROPIADOS.

0.1 ml inóculo por placa

10-1 10-2 10-3

> 500 70 20 CÁLCULO:

FACTOR DE DILUCIÓN
(PRIMERO) X NMP TABLA:
70 x 10 x 10 2 = 7 x 10 4 ufc / ml 1000 X 11,0 = 11 000 cel./ml

FILTRACIÓN