KARYNE MOURTHÉ

OBTENÇÃO DE BIOMASSA DE Arthrospira platensis

(SPIRULINA) UTILIZANDO DO SORO DE LEITE

Tese apresentada á Escola de Veterinária da

Universidade Federal de Minas Gerais como
requisito parcial para obtenção do grau de
doutor em ciência Animal.
Área de concentração: Medicina Veterinária
Preventiva.
Orientador: Prof. Dr. Leorges Moraes da
Fonseca

Belo Horizonte
Escola de Veterinária – UFMG
2010
2
Tese defendida e aprovada em 20/12/2010, pela comissão examinadora constituída por:

Prof. Dr. Leorges Moraes da Fonseca

Prof. Dra. Christiane Contigli

Prof. Dr.Marcelo Rezende de Souza

Profa. Dra. Mônica Leite

Dra. Sylvia Therese Meyer Ribeiro

3
4
Á minha filha Carolina e ao meu amigo Hans

5
6
 Agradecimentos

Ao Prof. Dr. Leorges Moraes da Fonseca pela orientação e ao mesmo tempo a liberdade
de caminhar.

Ao Prof. Dr. Renaldo Travassos Martins pela confiança e apoio para o começo deste
trabalho.

A amiga Carla Martins Pittella pelo incentivo na realização desta tese.

Aos colegas do Setor de Biotecnologia e Tecnologia Química do Cetec Paulo Gilberto,

Analí, Iolanda, Maria Emília e Ilton pela colaboração nas atividades no Cetec.

Ao Dr. Lincoln Cambraia Teixeira pelo incentivo inicial ao trabalho.

À minha mãe, Luzia Inês Mourthé, pelo carinho e pelo apoio para que eu pudesse
conciliar todas as minhas tarefas.

À minha filha Carolina Mourthé Miranda pelo amor e pela paciência de suportar meus
momentos de ausência.

Ao meu amigo Hans pelo apoio e orientação na vida.

À todas as pessoas que, direta ou indiretamente, contribuíram para a execução dessa

tese de doutorado.

À Fundação Centro Tecnológico de Minas Gerais/CETEC pelo apoio para a execução

de grande parte dos trabalhos experimentais.

À Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais – FAPEMIG, pelo apoio

financeiro.

7
8
"Quando achamos que sabemos as respostas, a vida muda as
perguntas e recomeçamos o aprendizado..."

9
10
 SUMÁRIO

1 INTRODUÇÃO .................................................................................... 23
2 BIBLIOGRAFIA CONSULTADA ..................................................... 24
2.1 Arthrospira platensis .............................................................................. 24
2.1.1 Classificação ........................................................................................... 24
2.1.2 Histórico ................................................................................................. 26
2.1.3 Ciclo de vida ........................................................................................... 29
2.1.4 Condições de crescimento ...................................................................... 30
2.1.5 Teor de Proteína...................................................................................... 31
2.1.6 Ácidos nucléicos ..................................................................................... 32
2.1.7 Lipídios ................................................................................................... 32
2.1.8 Vitaminas ................................................................................................ 33
2.1.9 Carboidratos............................................................................................ 33
2.1.10 Minerais .................................................................................................. 33
2.1.11 Pigmentos ............................................................................................... 33
2.1.12 Microbiota associada a meios de cultivo e às preparações de Arthrospira
platensis .................................................................................................. 34
2.1.13 Propriedades farmacológicas/nutracêuticas ............................................ 34
2.1.14 Toxicologia ............................................................................................. 35
2.1.15 Produtividade .......................................................................................... 35
2.1.16 Outros meios de cultivo .......................................................................... 35
2.1.17 Utilizações da Arthrospira platensis ...................................................... 37
2.2 SORO DE LEITE ................................................................................... 37
2.3 ASSOCIAÇÃO Arthrospira platensis E SORO DE LEITE .................. 41
3 MATERIAL E MÉTODOS ................................................................. 42
3.1 OBTENÇÃO DA CEPA ........................................................................ 42
3.2 MANUTENÇÃO DA A. platensis ......................................................... 42
3.3 INÓCULO .............................................................................................. 42
3.4 CULTIVO ............................................................................................... 43
3.5 ACOMPANHAMENTO DO CULTIVO ............................................... 43
3.6 TESTE COMPLEMENTAR .................................................................. 44
3.7 CURVA DE CALIBRAÇÃO PARA DETERMINAÇÃO DA
CONCENTRAÇÃO CELULAR ............................................................ 44
3.8 AVALIAÇÃO PRELIMINAR DA BIOMASSA OBTIDA .................. 44
3.9 ANÁLISE FÍSICO-QUÍMICA............................................................... 45
3.9.1 Proteínas ................................................................................................. 45
3.9.2 Lipídeos .................................................................................................. 45
3.9.3 Carboidratos............................................................................................ 45
3.9.4 Lactose .................................................................................................... 45

11
3.9.5 DBO ........................................................................................................ 45
3.9.6 pH ........................................................................................................... 45
3.10 ANÁLISE MICROSCÓPICA ................................................................ 45
3.11 ANÁLISE MICROBIOLÓGICA ........................................................... 45
3.12 PRODUTIVIDADE CELULAR ............................................................ 45
3.13 ANÁLISE ESTATÍSTICA ..................................................................... 45
3.14 DELINEAMENTO EXPERIMENTAL ................................................. 46
4 RESULTADOS E DISCUSSÃO.......................................................... 46
4.1 CURVAS PADRÃO............................................................................... 46
4.2 CRESCIMENTO DE Arthrospira platensis EM SORO DE LEITE NÃO
CLARIFICADO ..................................................................................... 47
4.2.1 Análise microbiológica em soro de leite não clarificado ....................... 47
4.2.2 Análise microscópica em soro de leite não clarificado .......................... 48
4.2.3 Análises físico-químicas em soro de leite não clarificado ..................... 48
4.3 CRESCIMENTO DE Arthrospira platensis EM SORO DE LEITE
CLARIFICADO ..................................................................................... 49
4.3.1 Produtividade celular em soro de leite clarificado ................................. 55
4.3.2 Análise microbiológica em soro de leite clarificado .............................. 55
4.3.3 Análise físico-química em soro de leite clarificado ............................... 56
4.3.4 Análise microscópica em soro de leite clarificado ................................. 60
5 CONCLUSÕES ...................................................................................... 61
6 REFERÊNCIAS BIBLIOGRAFICAS ............................................... 62
APÊNDICES...........................................................................................81

12
 LISTA DE FIGURAS

Figura 1 - Micrografia eletrônica de tricoma de Arthrospira platensis ......................... 25

Figura 2 - Arthrospira platensis ...................................................................................... 26
Figura 3 - Preparação e venda do Dihé.......................................................................... 28
Figura 4 - Ciclo de vida da Arthrospira platensis ........................................................... 29
Figura 5 - Proporção de bicarbonato e carbonato em função dos valores de pH ........... 30
Figura 6 - Concentração de amônia e amônio em relação ao pH. .................................. 31
Figura 7 - Pré-cultivo e cultivo de Arthrospira platensis.............................................. 42
Figura 8 - Tanque de cultivo de Arthrospira platensis .................................................. 43
Figura 9 - Biomassa seca de Arthrospira platensis ........................................................ 44
Figura 10 - Curva padrão de concentração de biomassa de Arthrospira platensis em soro
de queijo ..................................................................................................... 46
Figura 11 - Curva padrão de concentração de biomassa de Arthrospira platensis em água
.................................................................................................................... 47
Figura 12 - Média da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em meio Zarrouk
em relação ao tempo de cultivo de Arthrospira platensis com inóculo de
0,1g/L. ......................................................................................................... 49
Figura 13 - Média da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em meio Zarrouk
em relação ao tempo de cultivo de Arthrospira platensis com inóculo de
0,2g/L. ......................................................................................................... 50
Figura 14 - Média da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em soro 3% em
relação ao tempo de cultivo de Arthrospira platensis com inóculo de 0,1g/L
.................................................................................................................... 50
Figura 15 - Média da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em soro 3% em
relação ao tempo de cultivo de Arthrospira platensis com inóculo de 0,2g/L
.................................................................................................................... 51
Figura 16 - Média da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em soro 6% em
relação ao tempo de cultivo de Arthrospira platensis com inóculo de 0,1g/L
.................................................................................................................... 51

13
Figura 17 - Média da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em soro 6% em
relação ao tempo de cultivo de Arthrospira platensis com inóculo de 0,2g/L
.................................................................................................................... 52
Figura 18 - Concentração celular média (gL-1) em relação ao tempo de crescimento de
Arthrospira platensis em soro 3%, soro 6% e meio Zarrouk com inoculo de
0,1gL-1......................................................................................................... 54

14
 LISTA DE TABELAS

Tabela 1- Classificação da Produção Anual de Leite por Estado no Brasil, 2007 ........ 38
Tabela 2 - Produção brasileira de queijo (toneladas) .................................................... 39
Tabela 3: Produção mundial de queijos - 2000 / 2008* ................................................. 40
Tabela 4 - Teor médio de proteína (%) para soro 3% e 6% sem clarificação antes e após
cultivo de Arthrospira platensis .................................................................. 48
Tabela 5 - Teor médio de lactose (%) para soro 3% e 6% sem clarificação antes e após
cultivo de Arthrospira platensis .................................................................. 48
Tabela 6- Demanda Bioquímica de Oxigênio (DBO5) mg/L para soro 3% e 6% sem
clarificação antes e após cultivo de Arthrospira platensis .......................... 48
Tabela 7- Concentração média em gL-1 de biomassa de Arthrospira platensis em soro de
leite 3% e 6% e meio padrão Zarrouk, com inóculo de 0,1gL-1 e 0,2 gL-1
após 10 dias de cultivo................................................................................ 53
Tabela 8 - Resultados das análises microbiológica de Arthrospira platensis em pó ..... 56
Tabela 9 - Teor médio de proteína (%) para soro 3% e 6% clarificados, meio Zarrouk
antes e após cultivo de Arthrospira platensis.............................................. 57
Tabela 10 - Teor médio de lactose (%) para soro 3% e 6% clarificado antes e após
cultivo de Arthrospira platensis .................................................................. 59
Tabela 11 - Demanda Bioquímica de Oxigênio (DBO5) mg/L para soro 3% e 6%
clarificado antes e após cultivo de Arthrospira platensis ........................... 60
Tabela 12 -Resultados das análises Microscópicas de Arthrospira platensis em pó ...... 61

15
 LISTA DE APÊNDICES

Apêndice 1 - Tabela de valores da evolução da Concentração celular (g/L) e valor de pH

em meio padrão Zarrouk da amostra 1 em relação ao tempo de cultivo da
Arthrospira platensis com inoculo de 0,1g/L. ............................................ 71
Apêndice 2 - Tabela de valores da evolução da Concentração celular (g/L) e valor de pH
em meio padrão Zarrouk da amostra 2 em relação ao tempo de cultivo da
Arthrospira platensis com inoculo de 0,1g/L. ............................................ 71
Apêndice 3 - Tabela de valores da evolução da Concentração celular (g/L) e valor de pH
em meio padrão Zarrouk da amostra 3 em relação ao tempo de cultivo da
Arthrospira platensis com inoculo de 0,1g/L. ............................................ 72
Apêndice 4 - Tabela de valores da evolução da Concentração celular (g/L) e valor de pH
em meio padrão Zarrouk da amostra 4 em relação ao tempo de cultivo da
Arthrospira platensis com inoculo de 0,1g/L. ............................................ 72
Apêndice 5 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e valor de pH
em meio padrão Zarrouk da amostra 5 em relação ao tempo de cultivo da
Arthrospira platensis com inoculo de 0,1g/L. ............................................ 73
Apêndice 6 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
meio Zarrouk em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis com
inoculo de 0,2g/L na amostra 1. ................................................................. 73
Apêndice 7 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
meio Zarrouk em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis com
inoculo de 0,2g/L na amostra 2. ................................................................. 74
Apêndice 8 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
meio Zarrouk em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis com
inoculo de 0,2g/L na amostra 3. ................................................................. 74
Apêndice 9 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
meio Zarrouk em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis com
inoculo de 0,2g/L na amostra 4. ................................................................. 75
Apêndice 10 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
meio Zarrouk em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis com
inoculo de 0,2g/L na amostra 5. ................................................................. 75
Apêndice 11 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
soro de leite 3% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,1g/L na amostra 1. ......................................................... 76
Apêndice 12 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
soro de leite 3% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,1g/L na amostra 2. ......................................................... 76
Apêndice 13 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
soro de leite 3% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,1g/L na amostra 3. ......................................................... 77
Apêndice 14 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
soro de leite 3% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,1g/L na amostra 4. ......................................................... 77

16
Apêndice 15- Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
soro de leite 3% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,1g/L na amostra 5. ......................................................... 78
Apêndice 16- Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
soro de leite 3% em relação ao tempo de cultivo da arthrospira paltensis
com inoculo de 0,2 g/L na amostra 1. ........................................................ 78
Apêndice 17 – Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
soro de leite 3% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inoculo de 0,2 g/L na amostra 2. ........................................................ 79
Apêndice 18 – Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
soro de leite 3% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inoculo de 0,2g/L na amostra 3. ......................................................... 79
Apêndice 19 – Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
soro de leite 3% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inoculo de 0,2 g/L na amostra 4. ........................................................ 80
Apêndice 20 – Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
soro de leite 3% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inoculo de 0,2 g/L na amostra 5. ........................................................ 80
Apêndice 21 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
soro de leite 6% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,1g/L na amostra 1. ......................................................... 81
Apêndice 22 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
soro de leite 6% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,1g/L na amostra 2. ......................................................... 81
Apêndice 23 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
soro de leite 6% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,1g/L na amostra 3 .......................................................... 82
Apêndice 24 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
soro de leite 6% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,1g/L na amostra 4. ......................................................... 82
Apêndice 25 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
soro de leite 6% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,1g/L na amostra 5. ......................................................... 83
Apêndice 26 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
soro de leite 6% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,2g/L na amostra 1. ......................................................... 83
Apêndice 27 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
soro de leite 6% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,2g/L na amostra 2. ......................................................... 84
Apêndice 28 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
soro de leite 6% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,2g/L na amostra 3. ......................................................... 84
Apêndice 29 – Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
soro de leite 6% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,2g/L na amostra 4. ......................................................... 85

17
Apêndice 30 – Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em
soro de leite 6% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,2g/L na amostra 5. ......................................................... 85

18
 Resumo

A cianobactéria Arthrospira platensis (Spirulina) é utilizada mundialmente na

alimentação humana e animal e como fonte de aditivos para a indústria farmacêutica e
alimentícia. Tem sido bastante estudada a utilização de meios de crescimento
alternativos para A. platensis, que possam reduzir o custo de seu processo produtivo.
Concomitantemente, têm sido pesquisadas novas utilizações para o soro de leite,
subproduto das indústrias de laticínios com alto poder poluente. Este trabalho teve como
objetivo, portanto, desenvolver um procedimento sustentável de cultivo de A. platensis
em soro de leite, visando reduzir o custo de produção da cianobactéria, aproveitar
parcialmente resíduos da produção de laticínios e criar uma nova fonte de renda para os
produtores. Foram realizados cultivos da cianobactéria em meio padrão Zarrouk; em
soro em pó reconstituído a 3% e 6%, e em soro em pó reconstituído a 3% e 6% e
clarificado. As culturas, com concentração inicial do inóculo de 0,1 gL-1 e 0,2 gL-1,
foram submetidas a agitação 4 vezes ao dia e mantidas sob iluminância de 3,0 Klux,
fotoperíodo de 12 horas claro/escuro, temperatura de 25°C, com pH ajustado em 9,3.
Em soro reconstituído a 3% e 6% sem clarificação, não houve crescimento, mas o
microrganismo foi cultivado com sucesso em soro a 3% e 6% clarificado. No 10º dia de
cultivo foi alcançada a maior concentração de biomassa em soro clarificado, sendo
obtidas concentrações de 1,71 ± 0,12 gL-1 em soro a 3% clarificado, 1,22 ± 0,23 gL-1 em
soro a 6% clarificado e 1,01 ± 0,03 gL-1 em meio Zarrouk (controle). A DBO foi
reduzida em 80,2% em soro a 3% clarificado e 77,43% em soro a 6% clarificado. Os
valores encontrados para lactose no soro clarificado antes e após cultivo da A. platensis
tiveram significativa redução (P<0,05). Obteve-se teor de proteína de 36,26 ± 0,45,
36,52 ± 0,49 e 54,44 ± 0,11 para Spirulina em soro a 3%, 6% clarificado e em meio
Zarrouk, respectivamente. Os teores de lipídeos encontrados na biomassa foram em
média de 6,5% ± 0,50 em soro 3% clarificado, 6,6% ± 0,45 em soro 6% clarificado e
7,08% ± 0,78 em meio Zarrouk. Os percentuais de carboidratos encontrados em soro
3% e 6% clarificado foram, respectivamente, 24,3% ± 1,66 e 25,38% ± 2,25. As
amostras não revelaram presença de matéria macroscópica ou microscópica prejudicial
à saúde humana e todos os resultados microbiológicos estavam dentro dos padrões
estabelecidos por diversos países do mundo. Concluiu-se que o emprego de soro de leite
clarificado como meio de cultura é uma alternativa viável para o cultivo de A. platensis.

Palavras chave: Arthrospira platensis, Spirulina, biomassa, soro de leite.

19
20
 Abstract

The cyanobacterium Arthrospira platensis (Spirulina) is used worldwide as human and

animal food and as a source of additives for the pharmaceutical and food industries. It
has been extensively studied the use of alternative growth medium for A. platensis,
which can reduce the cost of its production process. Concomitantly, it has been
researched new uses for milk whey, a byproduct of the dairy industry with high
pollutant power. This study aimed, therefore, to develop a procedure for sustainable
cultivation of A. platensis in milk whey, in order to reduce cost production of this
cyanobacteria, to partially utilize dairy production waste and to create a new source of
income for producers. The cyanobacterium was grown in standard medium Zarrouk,
whey powder reconstituted to 3% and 6%, and whey powder reconstituted to 3% and
6% and clarified. Cultures, with initial concentration of inoculum of 0.1 gL-1 and 0.2 gL-
1
, were subjected to shaking four times a day and kept under 3.0 Klux illuminance,
photoperiod of 12 hours light / dark, 25 °C temperature, pH adjusted to 9.3. In milk
whey reconstituted to 3% and 6% without clarification, there was no growth, but the
organism was successfully cultivated in clarified 3% and 6% milk whey. On the 10th
day of culture, the highest concentration of biomass was obtained in clarified milk
whey, being 1.71 ± 0.12 gL-1 in clarified 3% milk whey, 1.22 ± 0.23 gL-1 in clarified
6% milk whey and 1.01 ± 0.03 gL-1 in Zarrouk medium (control). The BOD was
reduced by 80.2% in clarified 3% milk whey and 77.43% in clarified 6% milk whey.
The values found for lactose in clarified milk whey before and after cultivation of A.
platensis had a significant reduction (P <0.05). Protein content of 36.26 ± 0.45, 36.52 ±
0.49 and 54.44 ± 0.11 were obtained for Spirulina in clarified 3% and 6% milk whey
and Zarrouk medium, respectively. The levels of lipids found in the biomass were on
average 6.5% ± 0.50 in clarified 3% milk whey, 6.6% ± 0.45 in clarified 6% milk whey
and 7.08% ± 0.78 Zarrouk medium. The percentages of carbohydrates found in clarified
3% and 6% milk whey were, respectively, 24.3% ± 1.66 and 25.38 ± 2.25%. The
samples did not reveal the presence of microscopic or macroscopic matter harmful to
human health and microbiological results were all within the standards established by
various countries around the world. It was concluded that the use of clarified milk whey
as culture medium is a viable alternative for cultivation of A. platensis.

Keywords: Arthrospira platensis, Spirulina, biomass, milk whey.

21
22
1 INTRODUÇÃO
As algas azuis, microalgas ou
cianobactérias, organismos do reino Monera,
são unicelulares, procariontes e autótrofos;
habitam vários ambientes, desde que haja
umidade, e atuam como ―espécies pioneiras‖
por sua pequena exigência nutricional,
capacidade de realizar fotossíntese e de
aproveitar o nitrogênio atmosférico (Vidotti
e Rollemberg, 2004).
Biotecnologicamente, as mais
importantes cianobactérias são Arthrospira
platensis, Nostoc commune e alto valor de (re)utilização. Inúmeros
Aphanizomenon flos-aquae (Pulz e Gross,
2004).
A Arthrospira platensis é realizados com objetivo de aproveitamento
considerada uma microalga pelos botânicos
devido à presença de clorofila, entretanto
segundo os bacteriologistas, é uma bactéria
devido a sua estrutura procarionte (Coxey e
Jesus, 2004), e uma unidade simples deste
microrganismo possui filamentos duplos,
fortemente espiralados (Macedo e Alegre,
2001; Dalay, 2002).
Esta cianobactéria tem sido usada
como alimento há séculos, por diferentes
populações e foi redescoberta somente há
poucos anos (Falquet, 1996). O conteúdo de
proteína da Arthrospira platensis varia entre
50% e 70% de seu peso seco, considerado
excepcional entre os microrganismos. Nas
melhores fontes vegetais encontra-se
somente metade destes níveis (Falquet,
1996). O consumo de proteína é uma
constante necessidade na alimentação
humana e animal. Desequilíbrios
alimentares, como a desnutrição e a má
alimentação, são um problema atual em todo
o mundo. Há a necessidade da produção de
alimentos que possuam perfis
nutricionalmente balanceados. Além disso,
devido ao crescimento populacional, as
demandas alimentícias são cada vez mais
elevadas. Desta forma, a produção de
alimentos e compostos de interesse por meio
de microalgas torna-se importante, pois
podem ser cultivadas em locais impróprios
para a agricultura e pecuária tradicionais.
Além de produzirem grande quantidade de
biomassa em um curto período de tempo,
também há a possibilidade de seleção de
estirpes e condições de cultivo apropriadas à
produção do composto desejado. (Volkman,
2006).
A preocupação com o meio
ambiente induz à viabilização de projetos
que levam à sustentabilidade do sistema de
produção industrial. A indústria de
alimentos produz uma série de resíduos com
estudos utilizando resíduos industriais do
processamento de alimentos têm sido
destes. Com isso, minimiza-se o impacto
ambiental destes tipos de indústrias na
região onde estão situadas e ainda agrega-se
valor aos produtos do mercado (Pelizer et
al., 2007).
Os microrganismos podem ser
cultivados a partir de produtos, como soro
de leite, mosto, celulose, entre outros. Nos
últimos anos, têm-se utilizado muitos
microrganismos destinados à obtenção de
biomoléculas de alto valor agregado. Assim,
várias microalgas e seus derivados estão
sendo produzidos comercialmente em todo o
mundo. A microalga A. platensis, por
exemplo, apresenta os maiores índices de
produção de biomassa comparada a outras
espécies conhecidas. Dentre os compostos
por ela produzidos destacam-se:
ficocianinas, clorofila α, β-carotenos e ácido
γ-linolênico, entre outros ácidos graxos,
além de possuir níveis excepcionalmente
elevados de proteínas.
São diversos os estudos encontrados
na literatura visando ao estabelecimento do
efeito das condições de cultivo, crescimento
em meios alternativos e a composição
bioquímica das microalgas, entretanto,
nenhuma referência foi encontrada em
relação a espécie de microalga nas
23
condições de cultivo (soro de leite)
empregadas no presente trabalho.
O objetivo geral deste trabalho foi a
produção de A. platensis utilizando o soro de
leite, um derivado da agroindústria com
grande capacidade poluente, chegando a um
método simples e seguro para a obtenção
deste microrganismo. Os objetivos
específicos foram avaliar a A. platensis
produzida quanto a aspectos físico-químicos,
microbiológicos e microscópicos.
2 BIBLIOGRAFIA
CONSULTADA
2.1 Arthrospira platensis
2.1.1 Classificação
O gênero Arthrospira, ordem
Oscillatoriales, família Cyanophyceae,
contém o grupo de cianobactérias
fotossintetizantes, filamentosas,
caracterizadas por uma cadeia de células
na forma de espiral (tricoma), envolvidas
por uma bainha fina (Fig. 1 e 2). A
dimensão das células, o grau de
espiralamento e o comprimento dos
filamentos variam com a espécie. Sob o
microscópio óptico, a A. platensis
aparece como filamento verde-azulado,
composto por células cilíndricas não
ramificadas e em forma helicoidal. A
forma helicoidal do tricoma é
característica do gênero, mas o
comprimento e dimensão da hélice
variam com a espécie. A forma de hélice
é mantida apenas em meio líquido
(Ciferri, 1983; Cruchot, 2008).
Devido ao fato de a Arthrospira
platensis originalmente ter pertencido ao
gênero Spirulina, ela pode ser
encontrada sob a designação de
Spirulina platensis. Isto ocorre mais por
motivos tradicionais, práticos e
tecnológicos do que taxonômicos, pois
este microrganismo é conhecido
comercialmente há muito tempo. Assim
sendo, pode-se esperar que o nome S.
platensis continue a ser utilizado. Porém,
cabe ressaltar que estes gêneros são
diferentes e filogeneticamente distantes,
apesar de compartilharem a mesma
morfologia helicoidal (Vonshak, 1997).
Em 1827, P.J. Turpin isolou
Arthrospira platensis a partir de uma
amostra de água doce (Ciferri, 1983).
Em 1844, perto da cidade de
Montevidéu, Wittrock e Nordstedt
relataram a presença de uma microalga
helicoidal, septada, verde azulada
chamada Spirulina. Mas, só em 1852,
apareceu o primeiro relatório
taxonômico escrito por Stizenberger. Ele
deu o nome ao novo gênero de
Arthrospira baseado na presença de
septos, forma helicoidal e estrutura
multicelular. Gomont confirmou os
estudos de Stizenberger em 1892. Este
autor atribuiu a forma asseptada ao
gênero Spirulina e a forma septada ao
gênero Arthrospira. Geitler, em 1932,
devido à morfologia helicoidal
reagrupou os membros dos dois gêneros
sob a designação Spirulina sem
considerar a presença de septo, mas
apenas a semelhança morfológica. Em
1989, esses microrganismos foram
classificados em dois gêneros, de acordo
com uma sugestão de Gomont em 1892,
e esta classificação é atualmente aceita
(Sanchez et al., 2003).
24
Figura 1 - Micrografia eletrônica de tricoma de Arthrospira platensis
Fonte: Ciferri e Tiboni, 1985 ( fotos de R. Locci).

25
Figura 2 - Arthrospira platensis
Fonte: UTEX Culture Collection of Algae, LB 2340.
2.1.2 Histórico
A Arthrospira platensis foi uma
fonte de alimentos para muitas culturas
durante toda a história. Os Astecas e os
Maias usaram A. platensis como parte
central de sua dieta. Na África, os povos de
Kanembu, na República do Chade,
alimentam-se destas algas até hoje (Ciferri,
1983; Silva, 2008).
Bernal Díaz del Castillo, um
membro das tropas de Hernán Cortez,
relatou em 1521, que a Arthrospira maxima
foi colhida do Lago Texcoco, seca e vendida
para consumo humano em um mercado de
Tenochtitlán (hoje Cidade do México),
densamente povoada na época da
colonização espanhola. Este autor faz
referência a "... pequenos bolos feitos de um
lodo parecido com algas que têm sabor de
queijo e que nativos tiram do lago para fazer
pão,...". Alguns anos depois, o frade
franciscano Bernardino de Sahagún escreveu
"... em certos períodos do ano, são reunidas
coisas muito macias dos lagos mexicanos.
Eles parecem com coalho e tem uma cor
azul clara e são usados para fazer pão que
então são comidos cozidos..." Os nativos
deram para esta comida o nome de Tecuitlalt
que no idioma deles significa literalmente
"excrementos de pedras" (Ciferri, 1983;
Lacaz-Ruiz, 2003).
Em 1940, o ficologista francês
Dangeard mencionou que um bolo, chamado
dihé (A. platensis), era consumido pelas
pessoas da tribo de Kanembu, perto do lago
africano Chade, na área de sub-deserto de
Kanem. ―Dihé é um bolo endurecido de
algas verde azuladas, coletadas de pequenos
reservatórios que cercam o lago e sãos secas
ao sol‖. Dangeard estudou amostras do dihé
e concluiu que era um purê de uma alga azul
filamentosa e em forma de espiral,
componente principal do fitoplancto em um
número grande de lagos africanos (Ciferri,
1983).
Entre 1964 e 1965, o botânico Jean
Leonard que participou da expedição belga
26
Trans-saariana observou "uma substância
verde azulada curiosa, semelhante a
biscoitos‖ chamado dihé era feito de A.
platensis, obtido de lagos alcalinos no
deserto de Kanem, nordeste do lago Chade.
Este pesquisador e o colega Cómpere
confirmaram o relatório prévio de Dangeard,
quando começaram as análises químicas de
A .platensis. Naquele momento, um grupo
de pesquisadores franceses estudou algumas
amostras de Spirulina (Arthrospira maxima)
que crescia abundantemente no lago
Texcoco, perto de Cidade do México
(Ciferri, 1983).
A partir de 1970, cresceram os
estudos nutricionais e medicinais em
Arthrospira platensis e a República Federal
Alemã começou a apoiar investigações em
consumo humano de A. platensis na Índia,
Tailândia e Peru. Nos países asiáticos, a
produção foi focalizada como suporte
nutricional para a população desnutrida
(Ciferri e Tiboni, 1985; Chamorro et al.,
2002; Araújo et al., 2003; Resta, 2004;
Torres-Duran et al., 2007).
Apesar de ter sido utilizada como
alimento pela população da África e Ásia há
muito tempo, cientistas constataram os
benefícios desta microalga somente no final
do século passado, quando começou a ser
usada como suplemento nutricional por
conter diversas substâncias benéficas para o
ser humano (Bezzerra, 2006).
Há muito a A. platensis (Spirulina) é
comercializada (Fig. 3) e consumida,
inclusive como alimento humano, e tem sido
aprovada como alimento para consumo
humano por muitos governos, agências de
saúde e associações como Japan Health
Food Association, United States Food and
Drug Administration, USA -The Natural
Products Quality Assurance Alliance
(NPQAA), The Natural Nutritional Foods
Association (NNFA), Superior Public
Hygience of France, Ministry of health-
Sweden e outros. Existem relatos de
comercialização da Arthrospira spp. em
diversos locais como, África do Sul,
Alemanha, Arábia Saudita, Argentina,
Austrália, Áustria, Barein, Bahamas,
Bangladesh, Belarus, Bélgica, Brasil,
Bulgária, Canadá, Chade, Chile, China,
Cingapura, Colômbia, Coréia, Costa Rica,
Croácia, , Dinamarca, Equador, Egito,
Eslovênia, Espanha, Estados Unidos,
Etiópia, Finlândia, Filipinas, França, ,
Grécia, Guam, Haiti, Hong Kong, Hungria,
Índia, Islândia, Indonésia, Irlanda, Israel,
Itália, Jamaica, Japão, Quênia,
Liechtenstein, Luxemburgo, Macedônia,
Malásia, México, Myanmar, Mônaco, Nova
Zelândia, Nigéria, Noruega, Peru, Polônia,
Portugal, República Tcheca, Rússia,
Romênia, Suécia, Suíça, Taiwan, Tailândia,
Togo, Turquia, Ucrânia, Reino Unido, ,
Venezuela, Vietnã, Zaire e Zimbábue (Lacaz
e Nascimento, 1990; Henrikson, 2009).
Algumas companhias produtoras de
Arthrospira platensis mais conhecidas
mundialmente são: Earthrise Farms (EUA),
Cyanotech (EUA), Hainan DIC Microalgae
Co.Ltd (China), Marugappa Chettir
Research Center (India), Genix (Cuba) e
Solarium Biotechnology (Chile) (Belay,
1997; Borowitzka, 1999).
27
Figura 3 - Preparação e venda do Dihé
(A) Secagem ao sol de Spirulina platensis. Rombou (Republica do Chad), 1967.(B) Dihe sendo
vendido no mercado de Massakory (Republica do Chad), 1967. Fonte: Ciferri, 1983 ( fotos de
A. Iltis).

28

2.1.3 Ciclo de vida
Um aspecto fundamental da biologia da
Arthrospira platensis é seu ciclo de vida
(Fig. 4) devido a implicações taxonômicas,
fisiológicas e de cultivo (Ciferri, 1983).
Este ciclo é resumido em três fases
fundamentais: fragmentação dos tricomas,
amplificação das células de hormogonia e
processos de maturação e alongamento do
tricoma. Os tricomas maduros são divididos
Figura 4 - Ciclo de vida da Arthrospira platensis
Fonte: Ciferri, 1983
em vários filamentos pequenos ou
hormogonia por formação prévia de células
especializadas que perdem seu citoplasma e
se convertem em células de necridium nas
quais o material celular que permite
fragmentação é reabsorvido. O número de
células nas hormogonias é aumentado
através de fissão binária. Para este processo,
o tricoma cresce longitudinalmente e leva a
A. platensis a forma helicoidal (Ciferri e
Tiboni, 1985).

2.1.4 Condições de crescimento
A temperatura do cultivo afeta a
concentração celular, a natureza do
metabolismo, as necessidades nutricionais e
a composição da biomassa. O gênero
Arthrospira compreende algas mesofílicas
tendo uma temperatura ótima de crescimento
próxima dos 30°C; porém, crescem em uma
grande extensão de temperatura. Em
cultivos em tanques abertos, devido ao efeito
do aquecimento solar, a temperatura pode
chegar a 40°C por poucas horas, no entanto,
não tem efeito prejudicial (Sànchez-Luna et
al., 2004). A temperatura mínima indicada
para crescimento de Arthrospira spp. é
18°C (Jiménez et al., 2003).
A agitação é outro fator chave no
cultivo. Ela é utilizada para manter, em meio
líquido, as células em suspensão, prevenir a
sedimentação e homogeneizar minerais,
temperatura e luz (Lacaz-Ruiz, 2003). O
processo de respiração celular se dá na
presença de oxigênio (aerobiose).
O pH é outra variável que interfere
no crescimento microbiano. O pH de cultivo
da A. platensis situa-se entre 8,0 e 11,0. As
reações bioquímicas estão relacionadas com
100
80
60
%
40
20
CO2
0
5 6 7 8 9 10 11 12 13
pH
Figura 5 - Proporção de bicarbonato e carbonato em função dos valores de pH
Fonte: Sassano (2004)
a concentração de íons hidrogênio no meio
de cultura. O pH interfere na estrutura e
atividade das proteínas, em particular de
proteínas enzimáticas (Bezerra, 2006).
Em cultivos de Arthrospira, a forma como a
fonte de carbono se apresenta é determinada
por esta variável. Na Figura 5, observa-se
que em valores de pH abaixo de 6,0
predomina a forma CO2; em valores de pH
entre aproximadamente 6 e 10, predomina a
forma HCO3-,e, acima de pH 10, é
predominante a forma CO3-2, segundo Miller
e Colman (1980) as cianobactérias
assimilam preferencialmente a forma
bicarbonato, portanto, o pH ideal de cultivo
é aquele em que haja deslocamento químico
no sentido da formação do bicarbonato. A
disponibilidade de nitrogênio para a célula
também é influenciada pelo pH, visto que
em pH abaixo de 8,0 há predominância do
íon amônio. Em pH acima de 11,0, o
nitrogênio encontra-se na forma não
protonada de amônia, que é a forma que tem
passagem livre pela membrana celular
(Boussiba, 1989). Entre esses valores de pH,
há as duas formas no meio de cultivo (Fig.
6). O equilíbrio entre a amônia e os íons
amônio é dependente do pH da solução.
Bicarbonato
carbonato
 120

100

80
%

60 Amônio
Amônia
40

20

0
6 7 8 9 10 11 12
pH

Figura 6 - Concentração de amônia e amônio em relação ao pH.

Fonte: Matsudo (2006)

Microalgas são microrganismos energia (Lacaz-Ruiz, 2003). A intensidade e

fotossintéticos com requerimentos
nutricionais relativamente simples. Há
necessidade de micro e macro nutrientes (C,
N, P, K, S, Mg, Na, Cl, Ca , Fe, Zn, Cu, Ni e
Co) (Ciferri, 1983); porém, a A. platensis é
capaz de crescer sem a maioria deles e há
uma enorme variedade de meios de cultura
sendo utilizados para o cultivo deste
microrganismo (Antenna Technologies 2,
2000). A fonte de carbono no meio padrão
de crescimento de A. platensis (Zarrouk,
1966) é o bicarbonato de sódio, que fornece
CO2 para a fotossíntese, o nitrato de sódio é
utilizado como fonte de nitrogênio; porém,
diversos autores vêm formulando meios
alternativos para cultivo (Phang et al., 2000;
Salles et al., 2003; Kornfeld et al., 2003;
Nery e Lacaz-Ruiz, 2003; Andrade et al.,
2008; Brennam e Owende, 2010).
A produção de biomassa de algas,
microalgas ou cianobactérias apresenta uma
diferença sensível, quando comparada com
os demais microrganismos, uma vez que a
luz atua como fator importante no
crescimento, sendo a principal fonte de
duração dos feixes luminosos são
importantes fatores ambientais no
crescimento dos microrganismos
fotossintetizantes e são importante fonte de
energia de A. platensis. Alta quantidade de
energia radiante é absorvida para garantir o
crescimento da microalga, mas com o
aumento da concentração de biomassa, há a
diminuição da profundidade de penetração
da luz no cultivo, resultando no processo de
sombreamento. A dispersão da luz no
cultivo de microalgas depende do tamanho e
da concentração de células em suspensão no
meio e a absorção luminosa depende da
concentração de ficocianina e clorofila
presentes nas células (Cornet et al., 1992a).
2.1.5 Teor de Proteína
A A. platensis tem alto nível
protéico, sendo também rica em vitamina B,
ácidos graxos insaturados e ainda em beta

31
caroteno que é convertido em vitamina A
durante a digestão. Assim, a utilização desta
alga como complemento protéico em
populações com carências alimentares
mostra-se viável (Coxey e Jesus, 2004).
Do ponto de vista qualitativo, as
proteínas da A. platensis são consideradas
completas, pois contém todos os
aminoácidos indispensáveis ao ser humano,
que representam 47% do peso total da
mesma (Bujard et al., 1970). Entre estes, os
que estão em concentrações menores são os
sulfurados (metionina e cisteína) que estão
presentes em torno de 80% do valor ideal
recomendados pela FAO, baseado na
albumina do ovo e na caseína (Vermorel et
al., 1975).
Seu elevado conteúdo protéico, além
da velocidade de crescimento em meios
completamente minerais, são alguns dos
fatores que chamaram a atenção de
pesquisadores e da indústria (Falquet, 1996).
O interesse na biotecnologia e na produção
comercial de Arthrospira spp. aumentam
devido a algumas propriedades particulares
como alta digestibilidade (90%), baixa
concentração de ácidos nucléicos (4%), e
uma importância quantitativa de
aminoácidos essenciais (Bezerra, 2006).
Enquanto o interesse por outros
microrganismos tem diminuído devido a
problemas de digestibilidade ou por seu
conteúdo ácido, a A. platensis se mostra uma
boa solução por sua fácil digestão e simples
produção como suplemento alimentar de alta
qualidade. Diferentemente de outros
microrganismos propostos como fonte de
proteína (ex. Chlorella scenedesmus), as
células da Arthrospira não têm parede
celular com celulose, sendo constituída por
mucopolissacarídeos. Isto explica a alta
digestibilidade de suas proteínas (Falquet,
1996; Coxey e Jesus, 2004).
Assim, a Arthrospira não requer
cocção ou tratamento especial para aumentar
a disponibilidade de sua proteína. Esta é
uma substancial vantagem considerando a
simplicidade de produção e a preservação
dos altos valores de seus constituintes como
as vitaminas e ácidos graxos polinsaturados
(Falquet, 1996).
2.1.6 Ácidos nucléicos
Em geral, biomassas microbianas
apresentam altos teores de ácidos nucléicos.
Devido à falta de habilidade do organismo
humano para metabolizar o ácido úrico,
proveniente do metabolismo das purinas, o
aumento do consumo dos ácidos nucléicos
pode levar a altos níveis de ácido úrico no
soro sanguíneo. Desta forma, poderia
culminar no desenvolvimento de moléstias
como a gota. Neste contexto, as microalgas e
cianobactérias são os microrganismos que
apresentam os menores teores de ácidos
nucléicos (cerca de 4-6%), contra 8-12%
para leveduras e 20% para bactérias (Araújo
et al., 2003), fazendo das microalgas e
cianobactérias, em relação a ácidos
nucléicos, os microrganismos com maior
tolerância de consumo diário no caso de
indivíduos acometidos de gota (Bezerra,
2006).
2.1.7 Lipídios
As publicações, em geral, informam
uma concentração de 5,6% a 14% de lipídios
do peso seco de A. platensis e A. maxima,
obtido por meio de um procedimento de
extração aprimorado e em condições padrão
de cultivo (Cohen, 1997; Ciferri, 1983;
Falquet, 1996).
Trabalhos vêm sendo desenvolvidos
para produção de lipídios visando aplicação
na indústria farmacêutica, alimentícia, além
de outros seguimentos industriais (Nichols e
Wood, 1968; Hudson e Karis, 1974,
Brennan, 2010).
Podem ser citadas pesquisas com o
objetivo de produzir ácido graxo γ-
linolênico que pode representar entre 10 a
20% dos ácidos graxos de A. maxima, ou
seja, 1-2% do peso seco (Nichols e Wood,
1968; Hudson e Karis, 1974), enquanto que
32
A. platensis, pode chegar a 40% de seu peso,
4% do peso seco destes ácidos graxos. Deste
modo, a Arthrospira pode ser considerada
como uma das melhores fontes deste ácido
graxo, depois do leite humano e de alguns
óleos vegetais (Hudson e Karis, 1974).
Existem atualmente, pesquisas
focalizando a produção de lipídios derivados
destas cianobactérias para a produção de
biocombustíveis com preços competitivos
(Brennan, 2010).
2.1.8 Vitaminas
Entre os alimentos, a A. platensis
tem uma concentração relativamente alta de
próvitamina A (beta caroteno). Uma dose
excessiva de β-caroteno pode ser tóxica, mas
quando este é ingerido da Arthrospira ou de
outro vegetal é normalmente inofensivo,
pois o organismo humano somente converte
em vitamina A a quantidade necessária ao
corpo. Esta cianobactéria é uma rica fonte de
vitamina B-12 que outros microrganismos
como Chlorella ou fontes vegetais marinhas
(Henrikson, 2009).
2.1.9 Carboidratos
A. platensis contém entre 7% e 13%
de carboidratos. Entre eles estão a glicose,
ramnose, manose, xilose e galactose. A
imulina, um polissacarídeo de alto peso
molecular com atividade
imunoestimulatória, está presente na A.
platensis e representa entre 0,5% e 2,0% do
peso seco desta microalga (Sanchez et al.,
2003; Henrikson, 2009).
2.1.10 Minerais
O conteúdo de minerais varia de
acordo com o local de crescimento da
cianoabactéria ou dos minerais presentes na
água utilizada para cultivo. A A. platensis
absorve muitos elementos traços enquanto
cresce e estes minerais são bem assimilados
pelo corpo humano. Esta microalga é rica
em ferro, além de fonte de cálcio, magnésio,
zinco, manganês, cromo, selênio e outros
minerais traços. A ficocianina, um pigmento
fotossintético da A. platensis, forma
complexos solúveis com o ferro e outros
minerais durante a digestão, tornando estes
elementos mais biodisponíveis ao homem e
animais (Sanchez et al., 2003;Henrikson,
2009).
2.1.11 Pigmentos
Entre os pigmentos mais
importantes da A. platensis está a
ficocianina, à qual é atribuída a função de
estimulante do sistema imune. Além deste
pigmento, este microrganismo possui
clorofila e carotenóides como xantofilas
(zeaxantina, criptoxantina, fucoxantina,
violaxantina e astaxantina) que tem ação
antioxidante em diferentes locais do corpo
(Henrikson, 2009).
Em tempos recentes, maior atenção
vem sendo dada à Arthrospira spp. pelo
potencial de coloração de seus pigmentos
de interesse às industrias farmacêuticas,
de cosméticos e de alimentos (Matsudo,
2006; Danesi et al., 2004). Segundo Danesi
et al. (2002), há uma tendência na
substituição de corantes artificiais por
produtos naturais, o que sugere a
possibilidade de maior exploração de
Arthrospira spp., pois essa microalga é
uma das principais fontes de clorofila na
natureza. No Brasil, a clorofila usada em
corantes verdes naturais, é obtida a partir
do espinafre, que contém aproximadamente
0,6 mg/g (Gross, 1991), ao passo que a
biomassa de Arthrospira sp. contém 11,5
mg/g (Henrikson, 2009). Atualmente, a
maior parte da clorofila produzida e
comercializada é obtida por fontes
vegetais. Há, no entanto, um crescimento
no interesse na área biotecnológica para
obtenção de corantes de outras fontes
33
(Silva, 2008). Nesse contexto, o emprego
de processos de cultivo microbiano
apresenta algumas vantagens em relação
às fontes vegetais, como por exemplo, a
possibilidade de um cultivo contínuo e
com rápida multiplicação dos
microrganismos (Rangel-Yagui et al., 2004).
A possibilidade de incorporar toda a
biomassa de Arthrospira sp. em alimentos
é particularmente interessante, pois além
de promover a coloração esverdeada,
colabora com o enriquecimento do valor
nutricional do alimento (Danesi et al.,
2002).
2.1.12 Microbiota associada a meios
de cultivo e às preparações de
Arthrospira platensis
A microbiota presente em cultivos
de A. platensis é geralmente rara e não
patogênica. Na realidade, a alcalinidade do
meio (Harun et al., 2010), pH entre 8,5 e
11,0, constitui uma excelente barreira contra
a maioria das contaminações, como
bactérias, leveduras, bolores e algas,
assegurando um ―cultivo higiênico‖ desta
cianobactéria (Jourdan, 2003).
A maior vantagem do cultivo de
biomassa em condições mais extremas de
pH é a minimização do risco de
contaminação, grande problema
principalmente em culturas ao ar livre
(Gimmler e Degenhardt, 2001).
Adicionalmente, algumas
substâncias secretadas ou contidas na A.
platensis possuem uma atividade bactericida
ou bacteriostática (Falquet, 1996). Em meio
sintético, em tanques abertos, se encontra
normalmente 3x104 a 6x105
microorganismos por mililitro de meio de
cultivo. Depois de coletada e seca, a A.
platensis não contém mais de 103
organismos vivos por grama (Wu e Pond,
1981). Este número diminui gradualmente
com o tempo de armazenamento. Mesmo em
preparações que vêm de fontes naturais,
muito mais contaminadas que os produtos de
cultivo, sobretudo na secagem tradicional e
mesmo ao sol, depois de um mês não se
encontram coliformes nem Streptococcus
(Jacquet, 1975; Falquet, 1996).
As análises microbiológicas de
Arthrospira produzida industrialmente no
México e nos Estados Unidos confirmam a
ausência total de patógenos como
Salmonella, Shigella ou Staphylococcus
(Jacquet, 1975).
Jacquet (1975), em um estudo
utilizando microscopia direta e cultivos,
mostrou que a microbiota acompanhante nas
preparações de Arthrospira varia com a
origem, a qualidade e a tecnologia
empregadas no cultivo. As principais
espécies contaminantes são os bacilos,
seguidos dos streptococos fecais e,
expecionalmente, as enterobactérias,
leveduras e esporos de fungos. Produtos
secos diminuem muito em contaminação,
em relação a todas as espécies, apresentando
persistência apenas os anaeróbios, quando
presentes. Nenhuma contaminação por
amebas desentéricas foi encontrada, nem em
fontes naturais (lago Chade, no Chade), nem
em lagoas experimentais. A conservação da
A. platensis seca não parece causar qualquer
problema, já que o produto aparenta ser
completamente resistente ao mofo.
2.1.13 Propriedades
farmacológicas/nutracêuticas
A propriedade nutracêutica é a
qualidade de um alimento, ou de um
ingrediente extraído de um alimento, que
proporciona benefícios médicos e de saúde,
compreendendo a prevenção e/ou o
tratamento de doenças. Tais produtos podem
abranger desde os nutrientes isolados,
suplementos dietéticos na forma de cápsulas
e dietas, até os produtos beneficamente
projetados, produtos herbais e alimentos
processados, tais como cereais, sopas,
bebidas, etc (Kwak e Jukes, 2001).
34
 Nos últimos anos, interesse tem
surgido, em relação às propriedades
farmacológicas de substâncias presentes na
biomassa de A. platensis, como o ácido
γ-linolênico e polissacarídeos. Vários
estudos indicam um grande potencial para o
uso farmacológico desta cianobactéria. São
citados efeitos na estimulação do sistema
imunológico (Resta, 2004), da microbiota
intestinal, contra hiperlipidemia,
hipercolesterolemia (Chamorro et al., 2002;
Torres-Duran et al., 2007, Ponce-
Canchihuamán et al., 2010), tumor bucal,
hipertensão, efeitos tóxicos de radiações,
obesidade, diabetes, anemias, doenças virais
e outros, atribuindo a esta cianobactéria um
conjunto de propriedades que dificilmente
podem ser encontradas concomitantemente
em um único produto natural (Chamorro et
al., 2002; Araújo et al., 2003).
2.1.14 Toxicologia
De um modo geral, as cianobactérias
produzem toxinas, porém, o gênero
Arthrospira não possui os genes que
asseguram a síntese destas toxinas (Cruchot,
2008). Poucos produtos alimentícios têm
sido tão avaliados sob o ponto de vista
toxicológico. Os exaustivos estudos
toxicológicos, assim como os estudos
nutricionais no homem, unidos ao fato do
consumo tradicional da Arthrospira no
Chade e no México, comprovam que este
alimento é bastante seguro
toxicologicamente. Além disto, diferentes
estudos têm demonstrado a grande
homogeneidade genética das diversas
populações de A. platensis cultivadas ou
coletadas ao redor do mundo. Deve-se
assinalar, ainda, a total ausência, ao longo de
trinta anos de produção industrial ou
artesanal de A. platensis, de acidentes
alimentícios atribuídos direta ou
indiretamente a produção ou ao consumo
desta cianobactéria (Antenna Technologies
1, 2000). O Food and Drug Administration
(FDA), nos Estados Unidos, classificou a A.
platensis como GRAS (geralmente
reconhecido como seguro).
2.1.15 Produtividade
Considerando-se que A. platensis
tem uma alta taxa de crescimento, existem
muitas empresas produzindo este
microrganismo fotossintético em diferentes
países. Em 2004 a produção mundial
excedeu 3000 toneladas de A. platensis na
base seca (Shimamatsu, 2004).
Os métodos de cultivo de A.
platensis já são bem conhecidos, no entanto,
com a utilização de meios de cultura
minerais, torna-se alto o custo da produção
desta cianobactéria. Diversos trabalhos têm
sido desenvolvidos com o objetivo de
cultivar a A. platensis em meios de cultivo
alternativos, tais como resíduos industriais
diversos, águas residuais, materiais que
contenham amido ou açúcares (de beterraba
ou cana de açúcar) (Pedraza,1989).
Vários países estão produzindo A.
platensis. No Brasil, tem-se boa perspectiva
técnica de produção, devido a alta
intensidade de energia solar, o que levaria a
uma alta produtividade (Pannir-Selvan et al.,
1999).
Segundo Rodrigues et al. (2010),
entre as cianobactérias, A. platensis é a
preferida para a produção de biomassa
devido à sua elevada taxa de crescimento
celular, fácil controle do processo e
recuperação de biomassa, capacidade de
crescer em meio alcalino com elevado teor
de sal, redução dos riscos de contaminação e
flexibilidade e resistência à condições
adversas ou abaixo do ideal. Por estas
razões, há um interesse crescente sobre o
cultivo de A. platensis e sua produção em
larga escala em todo o mundo está sob
estudo.
2.1.16 Outros meios de cultivo
35
 Diversos trabalhos foram realizados
para estudar meios de cultivo alternativos
para Arthrospira spp. Mudanças nas
condições ou mesmo novas formas de
cultivo melhoram os níveis de
produtividade, aumentam o grau de controle
do processo e diminuem os custos, tornando
estas culturas viáveis comercialmente
(Volkmann, 2006).
Phang et al. (2000), utilizando água
residual de fábrica de goma de sagu e quatro
variedades de A. platensis conseguiram
crescimento de 0,68 a 0,88 g.L-1desta
cianobactéria.
Olguín et al. (2001), avaliaram a
produção de Arthrospira spp. (variedade de
filamentos curtos) em água do mar
suplementada com efluente anaeróbico e
constataram que o crescimento foi similar
(P< 0,05) ao meio Zarrouk utilizado como
padrão.
Costa et al. (2003), utilizando água
da Lagoa da Mangueira, localizada no Rio
Grande do Sul, suplementada com 2.88gL-
1
de bicarbonato de sódio ou 0.35 g L -1de
uréia ou com ambos, conseguiram
concentrações máximas de 0,55 a 0,61g L-1
de A. platensis.
Kornfeld et al (2003) produziram
biomassa de A. platensis em meio a base de
solução alcalina (NaOH) e efluente da
indústria cítrica (laranja), complementado
com fontes de nitrogênio, fósforo e potássio.
O crescimento de A. platensis no meio
proposto apresentou um crescimento
máximo de 5,1gL-1. O meio de cultura
promoveu um crescimento com baixa
contaminação de algas verdes e a biomassa
produzida de A. platensis obteve um
percentual de 51,8% de proteína.
Utilizando uma solução alcalina
preparada com resíduos da indústria
alcooleira (cinza de bagaço de cana)
misturada em diferentes proporções de meio
Paoletti, Salles et al. (2003) cultivaram A.
platensis. Os resultados mostraram um
melhor crescimento desta cianobactéria nos
meios em que a proporção de solução
alcalina é inferior ou igual à do meio
Paoletti, e o meio em que havia apenas
solução alcalina também obteve um
crescimento satisfatório.
Substituindo 25% do meio padrão
Paoletti por efluente de biodigestor contendo
fezes de suínos, combinado com uma
solução alcalina de cinzas de madeira, Nery
e Lacaz-Ruiz (2003) conseguiram
crescimento de A. platensis semelhante ao
meio 100% Paoletti, com teor protéico de
45,34% na matéria seca.
Putty-Reddy et al. (2005) estudaram
o crescimento de A. platensis em altas
concentrações de sal, pela suplementação do
meio Zarrouk com NaCl 0,8M e concluíram
que o stress ao sal inibe o crescimento da A.
platensis.
Volkmann (2006), utilizando meio
Paoletti suplementado com 1,0 g.L-1 de NaCl
(água salinizada) e rejeito de dessalinizador
adicionado de 50% dos sais do meio Paoletti
para o preparo dos meios de cultura para o
cultivo de A. platensis, conseguiu os maiores
valores de biomassa (4,954 g.L-1) e
produtividade em células (0,225 g.L-1) no
rejeito de dessalinizador.
Pelizer et al. (2007) realizaram a
produção da A. platensis pelo processo de
cultivo com substrato em estado sólido,
utilizando-se como matriz para o
crescimento microbiano, o bagaço de cana-
de-açúcar e soluções de sais inorgânicos
como fonte de nutrientes. O processo
considerando o teor protéico do material
cultivado, mostrou-se satisfatório.
Morais et al. (2009) avaliaram a
viabilidade da produção em escala piloto de
A. platensis cepa LEB-18 no sul do Brasil,
utilizando água da lagoa da Mangueira. A
concentração de biomassa média máxima foi
de 1,24 g L-1 e a produtividade média foi
21,59 g m-2 d-1. A biomassa apresentou
84,0% de digestibilidade, 86,0% de
proteínas e 3,3% de lipídios. As análises
mostraram que a concentração de metais
pesados e da carga microbiana foram
inferiores a padrões aceitos
internacionalmente.
36
2.1.17 Utilizações da Arthrospira
platensis
Por meio de análises sensoriais de
textura e gordura de polpas de tilápia
Oreochromis niloticus alimentados
exclusivamente com A. platensis, Lu et al.,
(2003) demonstraram a alta qualidade de sua
carne para o uso como sashimi.
Grandes indústrias como a Dainippon
Tintas & Produtos químicos (Sakura)
desenvolveram um produto chamado Linha
azul que é usado em: gomas, sorvetes,
doces, bebidas, etc e também vendem outra
forma deste pigmento em cosméticos
naturais como batons e sombras de olho. As
ficobiliproteínas são extensamente usadas na
indústria e laboratórios imunológicos,
devido às suas propriedades: altos
coeficientes de absorbância, alta produção
de fluorescência, fotoestabilidade, etc
(Spolaore et al., 2006). No Japão, a
ficocianina, um pigmento azul, é extraído da
A. platensis e utilizado como um agente
corante (O’Callagan, 1996). Segundo
Henrikson (2009), existem diversos usos da
A. platensis ao redor do mundo: os
comprimidos desta microalga são ingeridos
em diversos países para tratamento de uma
variedade de enfermidades. Em mais de 40
países, pessoas já estão familiarizadas com
.
as pílulas, o pó e as cápsulas de Arthrospira
SP. Ela é utilizada na fabricação de sabonete
na Corea, produtos dermatológicos são
fabricados na Alemanha com A. platensis
em sua composição, o extrato líquido é
consumido por pessoas no Japão. O pó desta
cianobactéria é usado como suplemento para
coloração de peixes e pássaros e diversos
outros usos pelo mundo. De acordo com
Morais et al. (2010), utiliza-se A. platensis,
em escala piloto, para enriquecimento de
alimentos no sul do Brasil, que são
distribuídos como petiscos a crianças da
região.
2.2 SORO DE LEITE
Minas Gerais é o estado brasileiro que
mais produz leite, ou seja, dos 26 milhões de
litros produzidos em 2007 no Brasil, cerca
de 27% foram produzidos em Minas (Tab.
1). O Estado também se destaca na produção
de derivados lácteos, incluindo-se o produto
mais apreciado e de maior destaque, quando
se fala em Minas Gerais - o queijo. A
produção de queijo no Brasil é representada
não só pelo tipos em que são empregadas
tecnologias cada vez mais avançadas, como
os artesanais, tão tradicionais e
representantes típicos das propriedades
mineiras (Tab. 2) (EMBRAPA, 2008)
37
Tabela 1- Classificação da Produção Anual de Leite por Estado no Brasil, 2007
Produção de Leite
Classificação Estados
(milhões de litros)
1 Minas Gerais 7.275
2 Rio Grande do Sul 2.944
3 Paraná 2.701
4 Goiás 2.639
5 Santa Catarina 1.866
6 São Paulo 1.627
7 Bahia 966
8 Rondônia 708
9 Pernambuco 662
10 Mato Grosso 644
11 Pará 643
12 Mato Grosso do Sul 490
13 Rio de Janeiro 463
14 Espírito Santo 438
15 Ceará 416
16 Maranhão 336
17 Sergipe 252
18 Alagoas 243
19 Rio Grande do Norte 214
20 Tocantins 214
21 Paraíba 170
22 Acre 80
23 Piauí 76
24 Distrito Federal 36
25 Amazonas 20
26 Amapá 6
27 Roraima 6
Brasil 26.134
Fonte: IBGE – Pesquisa da Pecuária Municipal
Embrapa Gado de Leite – Tabela 02.40 -Atualizado em dezembro/2008

38
Tabela 2 - Produção brasileira de queijo (toneladas)
Dif. %
1991 1995 2000 2004
Tipo queijo 2004/00
COMMODITIES
Mussarela 60.000 84.180 125.000 144.690 15,6%
Prato 44.200 59.400 88.500 102.480 15,8%
Requeijão culinário 6.970 41.000 70.200 90.720 29,2%
SUB TOTAL 111.170 184.580 283.700 337.890 19,1%
FUNDIDOS
Fatias 1.500 1.900 3.500 4.400 25,7%
Porções 1.480 1.700 2.400 3.045 26,9%
Tablete 63 78 102 114 11,8%
Cremosos 485 570 800 820 2,5%
SUB TOTAL 3.528 4.248 6.802 8.379 23,2%
PROCESSADOS
Cream cheese 485 570 1.417 1.815 28,1%
Requeijão cremoso 9.350 19.000 26.700 30.907 15,8%
Petit suisse 14.314 14.427 20.800 22.932 10,2%
SUB TOTAL 24.149 33.997 48.917 55.654 13,8%
Frescos (massa crua)
Minas frescal 14.900 19.086 25.900 28.875 11,5%
M. F. ultrafiltrado 350 1.350 2.900 4.515 55,7%
Cottage 80 175 350 578 65,1%
Ricota 4.125 5.582 7.523 8.610 14,4%
TOTAL ESPECIAIS 7.337 8.266 12.363 - -
SUB TOTAL 19.455 26.193 36.673 42.578 16,1%
TOTAL 158.302 249.018 376.092 444.501 -
Fonte: SIPA/ABIQ/DATAMARK/DESK RESEARCH
Embrapa Gado de Leite – Tabela 04.24

A produção de queijo é 5,0% de lactose e 0,2% de ácido lático).

acompanhada de grande produção de soro.
No entanto, o soro de leite ainda é
considerado um subproduto com baixo valor
agregado e de alto risco ambiental devido à
elevada demanda biológica de oxigênio
(DBO) para sua degradação no ambiente, em
virtude de seu nível alto em lactose.
O soro representa de 85 a 90% do
volume de leite utilizado na fabricação de
queijos, retendo ao redor de 55% dos
componentes sólidos do leite (Almeida et al,
2001). Contém ainda 6,9% de sólidos totais:
0,6% de cinzas e 6,3% de sólidos orgânicos
(0,3% de gordura, 0,9% de compostos
nitrogenados – calculados como proteína,
Entre os principais elementos que compõem
as cinzas do queijo, incluem-se: cálcio,
ferro, magnésio, fósforo, potássio, sódio,
zinco, cobre, manganês e selênio (USDA,
2010; Torres, 1998).
Segundo Torres (1998), os
procedimentos utilizados ou sugeridos pela
indústria de queijo para eliminação do soro
têm sido a descarga em esgotos, rios, minas
abandonadas, escavações, lagoas especiais,
produção de material combustível pela
fermentação anaeróbica, emprego na
alimentação animal, evaporação ou secagem
para alimento humano, como matéria prima
na fabricação de outros produtos (proteína

39
de soro, queijo, lactose, ácido lático, álcool,
vinagre, bebidas, etc).
O potencial de poluição do soro de
leite é elevado. Tendo em vista a relação
com o meio ambiente e as perdas
econômicas advindas do descarte do soro,
torna-se necessário o seu emprego em novos
produtos. O soro de leite é produzido em
grandes quantidades pelas indústrias de
laticínios e pode ser transformado de um
resíduo poluente em um sub-produto de
valor comercial. No país e no mundo, a
produção de queijo vem aumentando (Tab.
3) e muitos produtores estão preocupados
com a aplicação do soro de queijo, pois o
emprego convencional do soro não tem se

Tabela 3: Produção mundial de queijos - 2000 / 2008*

Milhares de Toneladas
Países 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008*
AMÉRICA DO
4.208 4.216 4.372 4.350 4.504 4.645 4.761 4.833 4.911
NORTE
Canadá 328 329 350 342 345 352 291 297 300
Estados Unidos 3.746 3.747 3.877 3.882 4.025 4.150 4.325 4.389 4.461
México 134 140 145 126 134 143 145 147 150
AMÉRICA DO
890 900 840 785 840 895 1.008 1.055 1.155
SUL
Argentina 445 440 370 325 370 400 480 475 515
Brasil 445 460 470 460 470 495 528 580 640
UNIÃO
5.861 5.865 5.993 6.205 6.481 6.625 6.801 6.870 6.975
EUROPÉIA**
EX – URSS 287 365 469 504 574 649 622 663 690
Rússia 220 260 340 335 350 375 405 420 430
Ucrânia 67 105 129 169 224 274 217 243 260
ÁFRICA 380 395 414 463 468 473 475 n.d. n.d.
Argélia n.d. n.d. 4 13 13 13 13 n.d. n.d.
Egito 380 395 410 450 455 460 462 n.d. n.d.
ÁSIA 49 54 57 78 82 84 92 98 106
Coréia do Sul 15 20 20 23 24 24 28 30 32
Filipinas n.d. n.d. 1 6 6 5 6 7 7
Taiwan n.d. n.d. n.d 14 17 16 18 20 20
Japão 34 34 36 35 35 39 40 41 47
OCEANIA 670 655 725 669 694 672 654 668 664
Austrália 373 374 413 368 389 375 362 360 335
Nova Zelândia 297 281 312 301 305 297 292 308 329
TOTAL 12.345 12.450 12.870 13.054 13.643 14.043 14.413 14.187 14.501

* Previsão ** União Européia é composta por 27 países

Fonte: USDA - Departamento de Agricultura dos Estados Unidos./Embrapa Gado de Leite – Tabela 04.23
Atualizado em abril/ 2008

40
expandido, enquanto que sua aplicação em
produtos mais nobres requer tecnologia mais
sofisticada e de custos mais elevados
(Torres, 1998). A industrialização do soro é
uma área incipiente no Brasil, com pouca
tecnologia desenvolvida para agregação de
valor ao mesmo. O desenvolvimento de um
processo adequado e economicamente viável
para geração de um sub-produto valorizado
pode permitir ao setor de laticínios
diversificar seu portfólio de negócios e
aumentar a sua receita (Révillion et al.,
2000).
Vários trabalhos de pesquisa foram
desenvolvidos em diversos países visando
criar opções para utilização do soro de leite,
evitando assim que atue como agente de
poluição ambiental (Siso, 1996; Almeida et
al., 2001). A redução da DBO tem sido
alcançada por meio da produção de biogás,
etanol e outros produtos, fazendo com que
mais da metade do soro produzido não seja
um poluente e sim um novo recurso. No
entanto, a produção anual mundial de soro
de queijo está aumentando e novas
bioproduções estão sendo pesquisadas para
garantir o uso de todo soro produzido (Siso,
1996). Neste aspecto a utilização de
microrganismos para geração de produtos de
interesse comercial tem recebido crescente
atenção por parte da indústria de alimentos
(Révillion et al. 2000).
Sabe-se que as propriedades físicas,
químicas e funcionais do soro conferem-lhe
características próprias e diferentes
possibilidades de utilização. A utilização do
soro de leite, por meio do desenvolvimento
de novos produtos alimentícios poderá
contribuir positivamente para o estado
nutricional de um setor importante da
população, ao mesmo tempo em que
aportarão no mercado consumidor produtos
com custo reduzido em relação aos seus
similares (Severo, 1995).
Considerando a necessidade de
estimular a minimização da geração de
resíduos, promovendo a substituição de
subprodutos através de processos
alternativos indicados inclusive para
pequenos produtores, uma boa solução para
o problema das indústrias de laticínios seria
o aproveitamento do soro para o cultivo de
A. platensis, sem a necessidade de grandes
investimentos em aparelhagem e meios para
o cultivo desta cianobactéria.
2.3 ASSOCIAÇÃO Arthrospira
platensis E SORO DE LEITE
A utilização de alimentos alternativos
na dieta tem como principal objetivo reduzir
os custos e incrementar a produtividade da
atividade agropecuária. Deste modo, os mais
diversos tipos de resíduos ou subprodutos
agroindustriais, quando empregados de
forma racional, podem contribuir neste
sentido, como é o caso do soro de leite.
O reaproveitamento de subprodutos
do setor produtivo para o cultivo de A.
platensis solucionaria pelo menos dois
problemas. Primeiro, diminuiria o custo de
produção desta cianobactéria, já que o meio
de cultivo mineral tem alto custo, e segundo,
daria um destino mais nobre a rejeitos da
agroindústria.
Há necessidade de modernização de
setores da agroindústria, que muitas vezes
envolvem procedimentos complexos e
demorados, especialmente no que se refere
ao aproveitamento de subprodutos. A
utilização deste cultivo pode ser facilmente
adaptável às condições de campo e, nas
condições técnicas atuais, visto a não
necessidade de cultivo e isolamento dos
espécimes em condições de esterilidade e
em tempos prolongados. Adicionalmente, é
possível um ganho considerável na
qualidade, especialmente devido a rapidez
com que os subprodutos serão processados,
além da economia de espaço com
aparelhagem e diversos reagentes. As
amostras de soro poderão ser processadas
diretamente em seu local de produção, sem a
necessidade de transporte para outros locais
de beneficiamento, evitando inconvenientes
como tempo, custo e principalmente a
possibilidade de deterioração dos produtos.
Este último aspecto torna-se especialmente solução A5 (g.L-1):
relevante em vista do atendimento a H3BO3........................................................ 2,86
pequenos produtores. MnCl2 4H2O......................... 1,81
ZnSO4 7H2O......................... 0,222
CuCO4 5H2O........................ 0,079
3 MATERIAL E MÉTODOS MnO3........................................................ 0,015
3.1 OBTENÇÃO DA CEPA solução B6 (mg.L-1):
NH4VO3.................................................. 22,86
A cepa do microrganismo Arthrospira KCr(SO4)2 12H2O................ 192
platensis foi obtida da coleção de cultura da NiSO4 6H2O......................... 44,8
Universidade do Texas, Número UTEX LB Na2WO4.2H2O...................... 17,94
2340, Classe Cyanophyceae originária do TiOSO4. H2SO4. 8H2O.......... 61,1
lago Natron no Chade. CO(NO3)2 6H2O................... 43,98

3.2 MANUTENÇÃO DA A. platensis

3.3 INÓCULO
A cepa foi mantida em meio mineral padrão
líquido conforme Zarrouk (1966) O inóculo foi obtido através de
cultivo em meio mineral padrão líquido
conforme Zarrouk (1966). Foram feitos pré-
Meio padrão líquido Zarrouk
cultivos (Fig.7) em pequenos volumes (150
NaHCO3............................................. 16,8gL-1
mL), pois se muito diluída a estrutura celular
K2HPO4.............................................. 0,5 gL-1
da cianobactéria torna-se frágil. Os pré-
NaNO3................................................. 2,5 gL-1
cultivos foram adicionados aos cultivos.
K2SO4................................................... 1,0 gL-1
NaCl,...................................................... 1,0 gL-1
CaCl2..................................................... 0,2 gL-1
MgSO4.7H2O.................................. 0,04 gL-1
EDTA.................................................... 0,08 gL-1
Solução A5........................................ 1,0 ml.L-1
Solução B6........................................ 1,0 ml.L-1

Figura 7 - Pré-cultivo e cultivo de Arthrospira platensis

42
3.4 CULTIVO
O cultivo foi realizado em meio
padrão Zarrouk e em soro de leite em pó
reconstituído a 3% e 6%, com e sem
clarificação. A clarificação foi feita através
de aquecimento do soro a 88°C, seguido por
repouso por 10 minutos, período em que
ocorreu a precipitação das proteínas
desnaturadas, que foram coletadas em
recipientes com escorredor. Os meios de
cultivo foram colocados em frascos
Erlenmeyer de 1000 mL, com 500 mL de
meio de cultura, com agitação quatro vezes
ao dia, sob iluminância de 3,0 Klux medidos
com fotômetro LI-COR modelo LI-189,
fotoperíodo de 12 horas claro/escuro,
Figura 8 - Tanque de cultivo de Arthrospira platensis
3.5 ACOMPANHAMENTO DO
CULTIVO
temperatura de 25ºC, pH ajustado para 9,3
com NaOH à 40%, com concentração inicial
do inóculo de 0,1gL-1 e 0,2gL-1 obtidos de
cultivos em fase exponencial de
crescimento, o tempo de processo foi de 11
dias, com tempo final determinado pela
diminuição da concentração da A. platensis.
Foram realizados cinco repetições do
cultivo.
Para maior produção e posterior
análises físico-química, microbiológica e
microscópica a A. platensis foi cultivada em
tanque de vidro com capacidade de 100
litros, com 50 litros de meio de cultura (soro
de leite clarificado) e inóculo de 0,1g/L nas
mesmas condições de cultivo em menor
volume (Fig. 8).
Os cultivos foram acompanhados por
meio da determinação da concentração
celular, diariamente, por turbidimetria a 560
nm (Leduy e Therien, 1977). Os valores de
43
absorbância obtidos no espectrofotômetro
foram convertidos em concentração celular
através de uma curva de calibração.
3.6 TESTE COMPLEMENTAR
Devido ao fato do não crescimento de
A. platensis em meio elaborado com soro de
leite sem clarificação, foi testado no cultivo
desta cianobactéria em meio de soro não
clarificado adicionado de 50% do meio
padrão Zarrouk para verificar se o
crescimento em meio de soro de leite estava
sendo inibido pela falta de algum nutriente.
3.7 CURVA DE CALIBRAÇÃO
PARA DETERMINAÇÃO DA
CONCENTRAÇÃO CELULAR
Foram feitas duas curvas de
calibração, uma para crescimento em meio
Zarrouk outra para crescimento em soro de
leite. As curvas de calibração foram feitas
filtrando-se células em fase de crescimento
exponencial, que foram lavadas com água
Figura 9 - Biomassa seca de Arthrospira platensis
destilada. A amostra foi levada à estufa a
100-105°C por um período de 5 h, suficiente
para que mantivesse uma massa constante. A
partir desta massa de células, foram
preparadas diferentes diluições, que foram
levadas ao espectrofotômetro para leitura da
absorbância a 560 nm de comprimento de
onda e caminho óptico de 1 cm, com água
destilada como branco para o meio Zarrouk
e soro como branco para o soro de leite.
Obteve-se, dessa forma uma curva que
relaciona concentração celular com a
absorbância.
3.8 AVALIAÇÃO PRELIMINAR DA
BIOMASSA OBTIDA
Ao final do cultivo o meio com
crescimento da cianobactéria foi filtrado em
filtro de poliéster de malha entre 30 e 60
microns, lavado com água destilada e seco
em estufa com circulação de ar à
temperatura de 50°C por 8 horas quando foi
avaliado o teor de proteína da biomassa.
(Fig. 9),
44
3.9 ANÁLISE FÍSICO-QUÍMICA
3.9.1 Proteínas
O teor protéico total da biomassa
seca foi determinado pelo método de
Kjeldhal (Brasil, 2005), utilizando-se o fator
6,25 para conversão de nitrogênio total para
proteína no crescimento emo meio Zarrouk.
Para as amostras de soro de leite o fator de
conversão utilizado foi 6,38.
3.9.2 Lipídeos
Os lipídeos totais foram determinados pelo
método de Soxhlet segundo Association...
(2000).
3.9.3 Carboidratos
O índice de carboidratos foi determinado
pelo método de Luff Schoorl, de acordo
com o método proposto por Matissek et al.,
1998.
3.9.4 Lactose
O teor de lactose antes e após o cultivo da
A. platensis foi determinado pelo método
de Luff Schoorl, conforme Matissek et al.,
1998.
3.9.5 DBO
Foi realizada análise da demanda
bioquímica de oxigênio segundo Standard
Methods... (2005) método 5210B, antes e
após o cultivo da A. platensis.
3.9.6 pH
Os valores de pH dos cultivos foram
medidos diariamente por potenciômetria,
com um aparelho Digimed, modelo DM- 20.
3.10 ANÁLISE MICROSCÓPICA
Na análise microscópica pesquisou-se
a presença de elementos macroscópicos e
microscópicos prejudiciais à saúde humana,
conforme Brasil (2003).
3.11 ANÁLISE MICROBIOLÓGICA
Foram realizadas análises
microbiológicas segundo American...
(2001), para os seguintes microrganismos:
coliformes totais, coliformes fecais,
estafilococos coagulase positiva, Salmonella
spp, contagem de bactérias heterotróficas
mesófilas, contagem de bolores e leveduras,
contagem de clostrídio sulfito redutor e
Bacillus cereus.
3.12 PRODUTIVIDADE CELULAR
A produtividade celular (P) foi
calculada fazendo-se a razão entre a
diferença da concentração celular final e
inicial (concentração celular do inóculo) e o
tempo (t) em dias correspondente à
concentração final. O tempo de cultivo foi
definido como o tempo onde a maior
produtividade foi obtida.
P = (Xm –Xi) / Tc
Sendo:
P = Produtividade em células (g.L-1.d-1)
Xm = concentração celular máxima obtida
(g.L-1)
Xi = concentação celular inicial (gL-1)
Tc = tempo de cultivo de maior
concentração celular (dias)
3.13 ANÁLISE ESTATÍSTICA
Os resultados das análises foram
submetidos à Análise de Variância
(ANOVA) com um nível de significância de
95% (p < 0,05) para verificar a existência de
diferenças significativas entre os resultados.
As médias significativamente diferentes
45
foram comparadas pelo teste de Duncan. O tempo de cultivo a sub-subparcela. Foram
nível de significância utilizado foi de realizadas 5 repetições dos cultivos.
p<0,05.

3.14 DELINEAMENTO 4 RESULTADOS E DISCUSSÃO

EXPERIMENTAL
Foram estabelecidos cinco tratamentos
(meio padrão, soro 3% clarificado, soro 6%
clarificado, soro 3% sem clarificação e soro
6% sem clarificação), cada tratamento com
duas concentrações de inóculo (0,1gL-1 e
0,2gL-1), e tempo de 10 dias de cultivo. O
delineamento estabelecido foi o blocos ao
acaso, sendo o tratamento o bloco, a
concentração do inóculo a subparcela e o
4.1 CURVAS PADRÃO
As curvas padrão obtidas, relacionando a
concentração celular da biomassa de A.
platensis com a absorbância, em soro de
leite para as amostras cultivadas em soro e
em água para as amostras cultivadas em
meio Zarrouk são especificadas nas fig. 10
e11.

1,4

1,2 y = 0,6061x + 0,0341

R2 = 0,9973
1
Absorbância

0,8

0,6

0,4

0,2

0
0 0,5 1 1,5 2 2,5
Concentração spirulina

Figura 10 - Curva padrão de concentração de biomassa de Arthrospira platensis em soro de queijo

46
 2,5
y = 1,1941x - 0,0324
2
R2 = 0,998
Absorbância
1,5
0,5
0
0 0,5
Concentração spirulina g/L
Figura 11 - Curva padrão de concentração de biomassa de Arthrospira platensis em água
4.2 CRESCIMENTO DE Arthrospira
platensis EM SORO DE LEITE
NÃO CLARIFICADO
O microrganismo A. platensis não
apresentou crescimento em soro de leite
reconstituído a 3% e 6% sem clarificação.
A opacidade do meio de cultura utilizado
(soro de leite) provavelmente não permitiu a
penetração e dispersão de luz suficiente para
o crescimento da cianobactéria, um
microrganismo fotossintetizante. Após o
não crescimento da A. platensis, os testes
complementares realizados, com adição dos
macronutrientes constituintes do meio
padrão Zarrouk, evidenciaram que a falta de
nutrientes não foi o fator determinante do
não crescimento da A. platensis em soro. O
cultivo em soro de leite não clarificado com
adição de 50% de meio padrão Zarrouk seria
suficiente para suprir a falta de nutrientes
para o crescimento desta cianobactéria.
Salles et al. (2003) cultivaram A. platensis
utilizando uma solução alcalina preparada
com resíduos da indústria alcooleira
1 1,5 2
misturada em diferentes proporções de meio
padrão e conseguiram crescimento do
microrganismo.
4.2.1 Análise microbiológica em soro
de leite não clarificado
Não foram detectadas contaminações
relativas aos microrganismos pesquisados,
(coliformes totais, coliformes fecais,
estafilococos coagulase positiva, Salmonella
spp, contagem de bactérias heterotróficas
mesófilas, contagem de bolores e leveduras,
contagem de clostrídio sulfito redutor e
Bacillus cereus). Este fato evidencia que o
não crescimento da A. platensis em soro de
leite sem clarificação não foi proveniente de
uma possível contaminação microbiana,
onde os microrganismos poderiam competir
com A. platensis inibindo o crescimento
desta. Os membros de uma população
podem competir por nutrientes, excretar
metabólitos nocivos afetando o crescimento
ou taxa de mortalidade de outra população.
47
4.2.2 Análise microscópica em soro clarificado a 3% e a 6% são especificados na
de leite não clarificado tabela 5.

As amostras não revelaram presença Tabela 5 - Teor médio de lactose (%) para soro
de matéria macroscópica ou microscópica 3% e 6% sem clarificação antes e após cultivo de
Arthrospira platensis
prejudicial à saúde humana ou evidência de
Cultivo Soro 3% Soro 6%
microrganismos contaminantes. Não
evidenciaram também vestígios de A. Sem Sem
platensis. Sob o microscópio óptico, a clarificação clarificação
Arthrospira aparece como filamento verde- Antes 1,98a±0,01 4,20b±0,14
azulado, composto por células cilíndricas cultivo
não ramificadas e em forma helicoidal Após o 1,96a±0,007 4,17b±0,02
(Ciferri, 1983; Cruchot, 2008), porém, cultivo
a,b- letras minúsculas idênticass na mesma
nenhuma forma semelhante foi observada
coluna indicam valores estatisticamente iguais
nas análises realizadas.
(p>0,05) para os tratamentos.

4.2.3 Análises físico-químicas em

soro de leite não clarificado Estes resultados evidenciam que a
lactose não foi utilizada pelo microrganismo
As amostras de cultivo de A. em seu metabolismo, pois seus teores são
platensis em soro de leite não clarificado a estatisticamente semelhantes antes e após o
3% e a 6% apresentaram teor protéico médio cultivo da A. platensis. Devido ao não
semelhante (p>0,05) ao soro de leite não crescimento da Arthrospira, não havia
clarificado sem cultivo nas concentrações microrganismos para a metabolização da
3% e 6%, respectivamente (Tab. 4). lactose presente no soro não clarificado
A tabela 6 lista os valores de DBO
Tabela 4 - Teor médio de proteína (%) para soro encontrados nas amostras de soro de queijo
3% e 6% sem clarificação antes e após cultivo de antes e após cultivo da A. platensis.
Arthrospira platensis A demanda bioquímica de oxigênio
Cultivo Soro 3% Soro 6% no soro antes e após cultivo com A. platensis
Sem Sem manteve-se no mesmo patamar,
clarificação clarificação evidenciando que não houve qualquer
Antes 0,35a±0,02 0,52b±0,01 processo metabólico que reduzisse a DBO.
cultivo
Após 0,34a±0,03 0,54b±0,03
cultivo Tabela 6- Demanda Bioquímica de Oxigênio
a,b- letras minúsculas idênticass na mesma (DBO5) mg/L para soro 3% e 6% sem
coluna indicam valores estatisticamente iguais clarificação antes e após cultivo de Arthrospira
(p>0,05) para os tratamentos. platensis
Cultivo Soro 3% Soro 6%
Sem Sem
Estes resultados comprovam que o clarificação clarificação
meio de cultivo não clarificado não deu Antes 27.603a±45,96 51.205b±39,59
suporte ao crescimento da cianobactéria, que cultivo
em sua constituição tem um alto percentual Após o 27,281a±96,17 51.100b±22,63
de proteína. cultivo
A lactose no soro antes e após a,b- letras minúsculas idênticass na mesma
cultivo da A. platensis em soro de queijo não coluna indicam valores estatisticamente iguais
(p>0,05) para os tratamentos.

48
 Os principais fatores que influenciam consequentemente, ocorre pequena produção
o crescimento de microrganismos ou não acontece o crescimento de biomassa.
fotoautotróficos são luz e temperatura.
Observa-se muito intensamente a
dependência do crescimento celular em 4.3 CRESCIMENTO DE Arthrospira
função da intensidade luminosa (Matsudo, platensis EM SORO DE LEITE
2006), pois espécies fotoautotróficas como a CLARIFICADO
A. platensis, através da fotossíntese obtêm
energia para fixar carbono, elemento As concentrações médias de biomassa
necessário ao crescimento da biomassa. O gL-1 em meio padrão Zarrouk, soro 3%
cultivo de cianobactérias está intimamente clarificado, soro 6% clarificado nos 11 dias
associado à luz, devido a fotossíntese. de cultivo com inóculo de 0,1gL-1 e 0,2gL-1
Segundo Balloni et al (1980) ao ser e seus respectivos pH são mostrados nas
submetido a baixas intensidades luminosas, Figuras 12 a 17. As concentrações
a velocidade de crescimento é diminuída, e individuais de cada amostra são
especificados nos apêndices 1 a 30.

Média Zarrouk inoc. 0,1

1,2 9,7

1 9,6
Concentração g/L

0,8 9,5
Concentração g/l
pH

0,6 9,4
pH
0,4 9,3

0,2 9,2

0 9,1
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
tempo (dias)

Figura 12 - Média da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em meio Zarrouk em relação ao

tempo de cultivo de Arthrospira platensis com inóculo de 0,1g/L.

49
 Média zarrouk inoc. 0,2

1,4 9,7

1,2 9,6
Concentração g/L

1
9,5
0,8 Concentração g/L

pH
9,4
0,6 pH
9,3
0,4

0,2 9,2

0 9,1
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Tempo (dias)

Figura 13 - Média da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em meio Zarrouk em relação ao

tempo de cultivo de Arthrospira platensis com inóculo de 0,2g/L.

Média soro 3% inoc. 0,1

2 9,4
1,8 9,2
1,6
9
Concentração g/L

1,4
1,2 8,8
Concentração g/L
pH

1 8,6
pH
0,8 8,4
0,6
8,2
0,4
0,2 8
0 7,8
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Tempo (dias)

Figura 14 - Média da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em soro 3% em relação ao tempo de

cultivo de Arthrospira platensis com inóculo de 0,1g/L

50
 média soro3% inoc.0,2

2 9,4
1,8 9,2
1,6
9
Concentração g/L

1,4
1,2 8,8
Concentração g/L

pH
1 8,6
pH
0,8 8,4
0,6
8,2
0,4
0,2 8
0 7,8
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Tempo (dias)

Figura 15 - Média da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em soro 3% em relação ao tempo

de cultivo de Arthrospira platensis com inóculo de 0,2g/L

Média soro 6% inoc. 0,1

1,4 9,4

1,2 9,2
Concentração g/L

1 9

0,8 8,8 Concentração g/L

pH

0,6 8,6 pH

0,4 8,4

0,2 8,2

0 8
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Tempo (dias)

Figura 16 - Média da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em soro 6% em relação ao tempo

de cultivo de Arthrospira platensis com inóculo de 0,1g/L

51
 Média soro 6% inoc. 0,2
1,4
1,2
Concentração g/L
1 9
0,8
0,6
0,4
0,2
0 8
1 2 3 4 5 6 7 8
tempo (dias)
Figura 17 - Média da evolução da concentração celular (g/L) e do pH em soro 6% em relação ao tempo
de cultivo de Arthrospira platensis com inóculo de 0,2g/L
Pelo fato de o microrganismo ser
mantido em meio padrão na fase de pré-
inóculo, esperava-se uma fase de
adaptação (fase lag) no início do cultivo
em soro de queijo, o que ocorreu durante as
primeiras 24 horas de cultivo de A. platensis,
como mostram os gráficos de
acompanhamento do crescimento celular
(Figuras 14 a 17 e apêndices 1 a 30),
mostrando uma rápida adaptação do
microrganismo ao novo meio de cultivo.
Observa-se que no meio padrão
(Figuras 12 e 13 e apêndices 1 a 10), quanto
maior o tempo de cultivo, maior o valor de
pH, pois à medida que o microrganismo se
desenvolve, seu metabolismo torna o meio
mais alcalino. No final do tempo de cultivo,
nota-se uma tendência à estabilização do pH,
provavelmente, devido a redução do
crescimento da cianobactéria. Segundo
Rodrigues (2008), o aumento do pH com o
crescimento celular pode ser explicado pelo
consumo da fonte de carbono durante o
cultivo. Os íons bicarbonato do meio de
cultura são transportados ativamente para o
9,4
9,2
8,8 Concentração g/L
pH
8,6 pH
8,4
8,2
9 10 11 12
interior celular, convertidos a íons carbonato
e gás carbônico, e este último é utilizado na
fotossíntese. Para cada molécula de dióxido
de carbono utilizada pela célula, há a
formação de um íon carbonato (Miller e
Colman, 1980), que é liberado para o meio
de cultura (Rangel, 2000), com consequente
aumento do pH.
Nos cultivos em soro 3% e 6%, à
medida que o tempo de cultivo aumenta o
pH do meio torna-se mais ácido,
provavelmente devido a metabolização da
lactose com formação de ácido lático e
outros compostos. Apesar da acidificação
do meio de cultivo, este se mantém dentro
do patamar de pH de crescimento de A.
platensis (pH 8,0 a 11,0) durante 24 horas,
pois o metabolismo durante o crescimento
deste microrganismo que leva a um aumento
do pH, deve compensar a acidificação do
meio causada pela metabolização da lactose.
Porém, após 24 horas de cultivo, foi
necessário o controle do pH durante o
processo, este foi acertado novamente para o
pH ideal ao cultivo de A. platensis pela
52
adição de uma base. O equilíbrio entre a
alcalinização pela adição de uma base e a
acidificação através da metabolização do
soro é imprescindível para o crescimento de
A. platensis.
Observa-se portanto, que a das células (Becker, 1995; Karam e Soccol,
estabilidade do processo normalmente
depende da existência do controle de pH,
pois a rápida conversão da lactose em ácidos
faz com que a alcalinidade presente no
sistema seja rapidamente consumida
(Backus et al. 1988).
Assim, os problemas de estabilidade
encontrados são normalmente associados à
inadequada capacidade tampão e/ou à
deficiência de micronutrientes (Yan et al.,
1988; Zimmer, 2006). O pH do meio de
cultivo é um dos fatores mais importantes no
cultivo de algas. O pH determina a
solubilidade do dióxido de carbono e
minerais no meio e influencia direta ou
indiretamente o metabolismo das algas. O
Tabela 7- Concentração média em gL-1 de biomassa de Arthrospira platensis em
soro de leite 3% e 6% e meio padrão Zarrouk, com inóculo de 0,1gL-1 e 0,2 gL-1 após
10 dias de cultivo
Condição de cultivo
1
Soro 3% e inóculo 0,1 gL-
1
Soro 3% e inóculo 0,2 gL-
1
Soro 6% e inóculo 0,1 gL-
-1
Soro 6% e inóculo 0,2 gL
Meio padrão Zarrouk e inóculo de 0,1 gL-
Meio padrão Zarrouk e inóculo de 0,2 gL-
a,b- letras minúsculas distintas na mesma coluna indicam valores estatisticamente
diferentes (p<0,05) para os tratamentos.
pH depende de vários fatores, como
composição e capacidade tamponante do
meio, quantidade de dióxido de carbono
dissolvido, temperatura (que determina a
solubilidade do CO2) e atividade metabólica
2007). Caso haja no meio de cultivo
oscilações do pH, é necessário interferência
com ajuste do mesmo para a faixa de
crescimento da cianobactéria, o que ocorreu
nas amostras cultivadas em soro de queijo,
que tiveram seu pH ajustado de 24 em 24
horas. Para A. platensis, a alta alcalinidade é
um requisito essencial para um ótimo
crescimento (Ogbonda et al., 2006).
As concentrações máximas finais de
biomassa (gL-1) nos cultivos em soro de
queijo foram obtidas no tempo de 10 dias
(Figuras 14 a 17 e apêndices 11 a 30). O teor
médio de crescimento para A. platensis em
soro 3% e 6% e meio Zarrouk com inóculo
de 0,1gL-1 e 0,2gL-1 são dados na tabela 7 .
-1
Concentração média gL
1,71a±0,12
1,75a±0,12
1,23b± 0,23
1,24b±0,25
1
1,01b ± 0,03
1
1,11b ± 0,13
53
 Constatou-se que o crescimento de
A. platensis foi maior em soro de queijo a
3% que em soro a 6%, sugerindo que pode
haver algum fator de inibição para esta
cianobactéria presente no soro, levando a um
maior crescimento no meio mais diluído.
Considerando-se que a única diferença dos
meios de cultura clarificados formulados
com soro de queijo é sua concentração,
provavelmente o menor crescimento em soro
6% deve-se a menor transmitância de luz
através do meio de cultura ou devido a ação
tóxica de algum componente do soro para a
cianobactéria. Apesar de a diferença de
crescimento de Arthrospira em soro 3% e
6%, ambos evidenciaram que o soro de
queijo é um bom meio de cultivo para a A.
platensis. O meio a 3% demonstrou maior
concentração (p<0,05) e o meio a 6% teor
semelhante (p>0,05) de A. platensis que o
meio padrão Zarrouk
As duas concentrações do inóculo
testadas (0,1gL-1 e 0,2gL-1) não mostraram
diferenças significativas entre elas, quando
A. platensis foi cultivada em soro de queijo
1,8
1,6
1,4
Concentração g/L
1,2
1 soro 6%
0,8
0,6
0,4
0,2
0
0 2 4 6
Tempo (dias)
Figura 18 - Concentração celular média (gL-1) em relação ao tempo de crescimento de Arthrospira
platensis em soro 3%, soro 6% e meio Zarrouk com inoculo de 0,1gL-1.
3% clarificado, em soro de queijo 6%
clarificado ou em meio Zarrouk (tab. 7).
Estes resultados evidenciam que a
concentração de 0,1gL-1 é a mais apropriada
para o cultivo de A. platensis, pois, nos
testes realizados, o teor de crescimento no
inóculo mais concentrado não mostrou
diferença suficiente que justifique sua
utilização.
Estes resultados são semelhantes aos
encontrados por Pelizer (2003), que testou
concentrações de inóculo de 0,5 gL-1, 1,0 gL-
1
, 1,5 gL-1 e 2,0 gL-1 para o cultivo de A.
platensis, encontrando maior valor numérico
no inóculo de 1,5 gL-1, porém, sem diferença
estatística entre todas as concentrações
testadas, e chegou a conclusão que o inóculo
menos concentrado seria o mais adequado
para o cultivo deste microrganismo.
As curvas de crescimento (valores
médios) de A. platensis e as concentrações
médias em 11 dias de cultivo em soro de
queijo e em meio Zarrouk são apresentadas
na Figura 18.
Meio Zarrouk
soro 3%
8 10 12
 O tempo de cultivo é um parâmetro
de avaliação do crescimento considerado
muito importante em se tratando de cultivos
em grande escala. O tempo transcorrido
desde o início do cultivo até ser alcançada a
densidade celular máxima é decisivo para a
escolha de uma determinada espécie, do seu
processo de produção e da infra-estrutura
necessária ao cultivo.
A biomassa de A. platensis em soro
de queijo teve grande aumento até entre o 7º
e 8º dia de cultivo, começando a partir do 8º
dia a desacelerar seu crescimento, chegando
ao seu pico máximo no 10º dia e decaindo
sua concentração a partir do 11º dia. Em
relação ao meio padrão Zarrouk, o
crescimento foi contínuo e não diminuiu
após o 10º dia. Estes resultados demonstram
que o soro de queijo reconstituído em
concentrações semelhantes ao soro de queijo
líquido (6%) e diluído (3%), tem nutrientes
suficientes para o crescimento da biomassa
de A. platensis por 10 dias sem qualquer
suplementação, caracterizando um cultivo
em processo descontínuo, no qual todo o
substrato é adicionado no início do cultivo.
Porém, o processo descontínuo alimentado,
onde o substrato é adicionado em
determinados intervalos de tempo durante
todo o processo, é uma técnica já utilizada
em processos microbianos, que poderá levar
o cultivo de A. platensis a períodos de tempo
superiores a 10 dias com conseqüente
aumento na produção de biomassa.
Os experimentos apresentaram
resultados de concentração média de
biomassa de aproximadamente 1,23 gL-1
para o soro 6% e 1,71 gL-1 para o soro 3%,
crescimento com concentração superior aos
experimentos realizados por Muliterno et al
(2005), que observaram crescimento de 1,0
gL-1 em meio padrão com diluição a 50% e
adição de glicose 0,5 gL-1 e iluminância de 3
Klux. Por outro lado, Volkmann (2006)
conseguiu crescimento de 4,954 g.L-1 em
rejeito de dessalinizador, porém, em 24 dias
de cultivo.
O mais baixo índice, no décimo dia
de crescimento, 1,02 g.L-1 (apêndice 21) foi
obtido na amostra 1, em soro 6% e inóculo
0,1 g.L-1. Estes valores são superiores aos
obtidos por Costa et al. (2003) que,
utilizando água da lagoa da Mangueira-RS,
suplementada com 2.88 g.L-1 de bicarbonato
de sódio ou 0.35 g.L-1 de uréia ou com
ambos, conseguiram concentrações máximas
de 0,55 a 0,61 g.L-1 de A. platensis, sendo
este teor de biomassa considerado viável
pelos autores.
Os valores encontrados para a
concentração celular em soro 3% e 6% estão
próximos aos relatados por Pelizer et al
(2002) em meio padrão Zarrouk, que foi de
1,3 g.L-1.
4.3.1 Produtividade celular em soro
de leite clarificado
A produtividade diária celular
máxima dos cultivos com soro a 3%, soro a
6% e meio padrão Zarrouk foram de
0,161gL-1d-1, 0,112 gL-1d-1 e 0,091 gL-1d-1
respectivamente, revelando que a
produtividade de A. platensis foi 76,92%
superior em soro 3% e 23,07% maior em
soro 6% comparado ao meio padrão
Zarrouk. Estes resultados revelam que o soro
de leite reconstituído, até o décimo dia de
cultivo, possui nutrientes para suportar o
crescimento de A. platensis em patamares
superiores ao meio considerado padrão para
o cultivo deste microrganismo.
4.3.2 Análise microbiológica em soro
de leite clarificado
As amostras de A. platensis em pó
foram analisadas para parâmetros
microbiológicos, conforme tabela 8. Todos
os resultados microbiológicos estavam
dentro dos padrões estabelecidos por
diversos países do mundo, fato que concorda
com Jourdan (2003), que afirma que a
microbiota presente em cultivos de A.
platensis é geralmente rara e não patogênica
e Jaquet (1975) que cita as análises
microbiológicas de Arthrospira spp,
produzidas industrialmente no México e nos
Estados Unidos, confirmando a ausência de
patógenos como Salmonella ou
Staphylococcus. A alcalinidade do meio (pH
entre 8,5 e 11,0) constitui uma excelente
barreira contra a maioria das contaminações
e, adicionalmente, algumas substâncias
secretadas ou contidas na Arthrospira
possuem uma atividade bactericida ou
bacteriostática, o que pode ter contribuído
para todos os resultados analíticos estarem
abaixo dos limites de detecção dos métodos
microbiológicos aprovados
internacionalmente e utilizados para estas
análises.

Tabela 8 - Resultados das análises microbiológica de Arthrospira platensis em pó

Parâmetro analisado Resultado Padrão*
Coliformes totais NMP/g < 3,0 <100/g a nega,b,c,d
Escherichia coli NMP/g < 3,0 -
Estafilococos coagulase positiva <3,0 <100/g a Negativoa,b,c,d
NMP/g
Salmonella spp Ausência Negativoa,c,d,e
Contagem de bactérias <1 <50.000/g a 1.000000/ga,b,c,d
heterotróficas mesófilas UFC/g
Contagem de bolores UFC/g <10 <100/g a <1000/ga,b,d
Contagem de leveduras UFC/g <10 <40/gb
Contagem de clostrídio sulfito <10 -
redutor UFC/g
Bacillus cereus UFC/g <10 -
NMP- número mais provável
UFC – unidade formadora de colônias
*a-Japan Health Food Association, b-USA -The Natural Products Quality Assurance Alliance (NPQAA)
and The Natural Nutritional Foods Association (NNFA), c-Superior Public Hygience of France,
d-Ministry of health- Sweden.
Todos os resultados expressos como < estão abaixo do limite de detecção dos métodos.
Os padrões foram retirados de fontes diversas (Belay,1997; Henrikson, 2009; Jimenez et al., 2003).

4.3.3 Análise físico-química em soro níveis encontrados no cultivo em meio

de leite clarificado padrão que foi de 54,44 ± 0,11 e pode ser
devido à deficiência de nitrogênio durante o
4.3.3.1 Proteína período de crescimento, indicando que no
cultivo de A. platensis em soro de leite não
houve disponibilidade de nitrogênio
Os percentuais de proteína nas
suficiente para o crescimento da biomassa,
amostras de soro de leite estão abaixo dos
simultaneamente com a produção de

56
nitrogênio orgânico, na forma de proteínas. mostrados na tabela 9.
Os teores de proteína das amostras são

Tabela 9 - Teor médio de proteína (%) para soro 3% e 6% clarificados,

meio Zarrouk antes e após cultivo de Arthrospira platensis
Cultivo Soro 3% clarificado Soro 6% clarificado
Antes cultivo 0,17a,B±0,01 0,35c,C±0,02 -
Após cultivo 36,26b,A±0,45 36,52d,A±0,49 54,44D±0,11
a,b, ,B,C,D- letras minúsculas distintas na mesma coluna e letras maiúsculas na mesma linha indicam
valores estatisticamente diferentes (p<0,05) para os tratamentos. A- letras maiúsculas iguais na mesma
linha indicam valores estatisticamente semelhantes (p>0,05).

Segundo Morris (1974), o nitrogênio
assimilado pelo microrganismo é utilizado
primeiro para o crescimento celular e,
posteriormente, para formação de nitrogênio
orgânico e como material de reserva.
Sassano (2004) observou que os teores de
proteínas nas biomassas decaíram
significativamente a valores que chegaram a
16,5% em cultivos realizados sob limitação
de nitrogênio. Os meios de cultura
convencionais utilizam, como fonte de
nitrogênio para a obtenção da biomassa, sais
de nitrato, como nitrato de sódio, segundo
Zarrouk (1966), e nitrato de potássio,
conforme Paoletti et al. (1975). Ambos, os
tipos e a quantidade da fonte de nitrogênio
no meio de cultura influenciam no
crescimento e composição da biomassa.
Grande parte das proteínas que
poderiam ser utilizadas como fonte de
nitrogênio para síntese de proteína por A.
platensis, no soro de leite utilizado como
meio de cultivo neste experimento, foram
precipitadas através do procedimento de
clarificação das amostras, antes do início da
cultura. Com isso as fontes de nitrogênio
disponíveis ao crescimento de A. platensis
ficaram diminuídas, resumindo-se em
pequeno percentual de proteínas (tabela 9)
existentes no soro clarificado 3% e 6% antes
do cultivo e em compostos nitrogenados não
protéicos (uréia e ácido úrico) presentes nos
soros em geral.
Segundo Funteu et al. (1997), em A.
platensis, a deficiência de nitrogênio durante
o período de crescimento leva a um
decréscimo na produção de ficocianina e
clorofila. Ficocianinas são cromoproteínas
que constituem o principal pigmento na
captação de luz em cianobactérias e
representam metade das proteínas celulares.
Na falta de nitrogênio e enxofre, essas
cromoproteínas são consumidas, reduzindo a
eficiência fotossintética (Cornet et al.,
1992b), fato que poderia explicar o menor
teor de proteínas da biomassa cultivada em
soro de queijo clarificado, comparado a
biomassa obtida em cultivo em meio padrão.
Apesar de mais baixo que no meio padrão os
percentuais de 36,26% e 36,52% para os
soros de queijo clarificados 3% e 6%,
respectivamente, representam excelente
fonte de proteína comparados a vários
alimentos naturais como diversos tipos de
carne (15-25%), leite em pó (35%),
amendoim (25%), ovos (12%) ou leite
integral (3%) (Henrikson, 2000).
4.3.3.2 Lipídeos
Os teores de lipídeos encontrados na
biomassa foram em média de 6,5%±0,50,
6,6%±0,45 e 7,08%±0,78 para o soro 3%,

57
soro 6% e meio Zarrouk, respectivamente.
Estes percentuais são similares aos
encontrados em crescimento desta
cianobactéria em meio padrão, que vai de
5,6% a 14% (Ciferri, 1983; Falquet, 1996;
Cohen, 1997). Os valores encontrados são
similares aos obtidos por Oliveira et al.
(1999), em cultivos de Arthrospira spp a
30º C, correspondentes a 6,96% e 6,20%
para biomassas de A. platensis e A.
maxima, respectivamente. Segundo Colla et
al. (2007), concentrações mais altas de
nitrato de sódio (fonte de nitrogênio)
resultaram em um aumento de lipídeos,
semelhante ao obtido por Manabe et al.
(1992), que demonstraram maiores
concentrações de lipídeos em meio com
grande disponibilidade de nitrogênio. Em
contrapartida, Piorreck et al. (1984),
demonstraram que para cianobactérias em
várias concentrações de nitrogênio testadas
(de 0,001% a 0,1%), o conteúdo de lipídeos
permaneceu constante, acontecendo um leve
aumento apenas na maior concentração de
nitrogênio testada.
Por outro lado, o valor encontrado
neste trabalho está bastante abaixo de
valores encontrados por Mahajan e
Kamat (1995), utilizando baixas
quantidades de nitrogênio. Nestas
condições, obtiveram biomassa com alta
concentração de lipídeos (45% da
biomassa seca). Ainda constataram que
com altas quantidades de nitrogênio, o
teor de lipídeos na biomassa caiu para 20%
da massa seca, e com isto a quantidade
de proteína pôde subir de 8% para até
54%.
As pesquisas citadas acima indicam
que a variabilidade do teor de lipídeos em
cultivos de A. platensis é bastante complexa
e mesmo grandes modificações no meio de
cultivo podem não influenciar os teores de
lipídeos, o que poderia explicar os
percentuais encontrados nos cultivos em
soro de queijo semelhantes ao meio padrão.
A temperatura do cultivo afeta a
concentração celular, a natureza do
metabolismo, as necessidades nutricionais e
a composição da biomassa. A agitação é
outro fator chave no cultivo, pois, além de
outros fatores, homogeneiza minerais,
temperatura e luz. O pH é outra variável que
interfere no crescimento microbiano,
regulando reações bioquímicas que estão
relacionadas com a concentração de íons H+
no meio de cultura, interferindo também na
estrutura e atividade das proteínas, em
particular de proteínas enzimáticas. Porém,
o soro de queijo reconstituído, apresentou
um teor de nutrientes e foi mantido em
condições ambientais que permitiram a
cianobactéria manter seus padrões normais
de lipídeos.
4.3.3.3 Carboidrato
As análises revelaram teores de
carboidratos de 24,3%±1,66 para soro 3% e
25,38%±2,25 para soro 6%. Estes teores
podem ser considerados altos, quando
confrontados a cultivos em condições
padrões, que podem variar de 7% a 13%
segundo a literatura, porém, podem ser
consideradom similares ao meio padrão
Zarrouk neste experimento, que foi de
24,71%±1,84, pois não há diferença
estatística entre os resultados (p>0,05). O
alto percentual de carboidrato no cultivo em
soro pode ser explicado pela falta de algum
nutriente no metabolismo da cianobactéria,
concordando com Walach et al. (1987), que
afirmam que quantidades mais altas de
carboidrato são sintetizadas quando a
disponibilidade de nitrogênio é diminuída,
mas a disponibilidade de carbono é
constante. Outra explicação seria a
deficiência na intensidade luminosa que,
como uma de suas conseqüências, levaria A.
platensis a aumentar a produção de
carboidratos de reserva.
4.3.3.4 Lactose
Os valores encontrados para lactose
no soro clarificado antes e após cultivo da A.
platensis são apresentados na tabela 10.
58
Estes resultados indicam que esta
cianobactéria foi capaz de utilizar a lactose
em seu metabolismo. Ainda que a principal
fonte de carbono empregada nos cultivos
tradicionais seja o dióxido de carbono,
diversos estudos têm comprovado que as
microalgas podem crescer empregando
diferentes rotas nutricionais e, especialmente
utilizando compostos orgânicos como
glicose, acetato, lactato, aminoácidos ou
outros substratos (Derner, 2006).
Tabela 10 - Teor médio de lactose (%) para soro
3% e 6% clarificado antes e após cultivo de
Arthrospira platensis
Soro 3% Soro 6%
Cultivo
clarificado clarificado
Antes 2,005a±0,007 4,15c±0,007
cultivo
Após 0,14b±0,03 0,29d±0,02
cultivo
a,b,c,d- letras minúsculas diferentes na mesma
coluna indicam valores estatisticamente
diferentes (p<0,05) para os tratamentos.
Os cultivos podem ser classificados
conforme a fonte de carbono empregada e a
utilização ou não de fonte luminosa. As
cianobactérias de um modo geral são
consideradas autotróficas ou
fotoautotróficas, onde há emprego de luz
como exclusiva fonte energética, para a
redução (fixação) do CO2 (considerado de
fonte inorgânica) pela oxidação de
substratos, com liberação de O2. Porém
muitos cultivos têm sido feitos utilizando o
modo mixótrófico (utilização simultânea de
uma fonte luminosa e substrato orgânico
como fonte de energia, bem como CO2 e
substrato orgânico como fontes de carbono)
e o modo fotoheterotrófico (utilização da luz
como fonte de energia para assimilação do
carbono orgânico). A taxa de crescimento, a
produtividade e a composição química da
biomassa sofrem alterações dependendo do
tipo de cultivo utilizado, o que ocorreu com
A. platensis cultivada em soro de queijo,
pois a fonte de carbono utilizada, a lactose,
parece ter potencializado a taxa de
crescimento, com a geração de maior teor de
biomassa. Como fonte orgânica de carbono,
a lactose foi utilizada fotoheterotrófica e/ou
mixotroficamente por A. platensis,
concordando com o relatado por Cid et al.
(1992), que em cultivos de Tertraselmis
suecica, o emprego de fontes orgânicas de
carbono (extrato de levedura, glicose e
peptona) melhorou significativamente o
crescimento, chegando a obter densidades
celulares três vezes superiores àquelas
obtidas em cultivos fotoautotróficos. Becker
e Venkatarama (1984), atestaram que em
cultivos de Scenedesmus sp. empregando
como substrato de carbono orgânico glicose,
manose, sucrose, frutose ou galactose, o
crescimento foi favorecido com todas as
fontes avaliadas.
A utilização de diversas fontes de
carbono orgânico por A. platensis foi
testado por Ciferri (1984). Dentre elas, a
glicose foi fornecida à culturas de A.
platensis com carbonos marcados (C14). Em
menos de quatro dias de cultura, toda a
glicose marcada desapareceu do meio e
quase 50% desta foi recuperada com a
biomassa da cianobactéria, o restante do
carbono marcado foi liberado sob a forma de
CO2 (34%) ou como subprodutos orgânicos
excretados no meio de cultivo (19%),
demonstrando que A. platensis consegue
utilizar fontes orgânicas de carbono, porém
pouco se conhece sobre este mecanismo.
No cultivo mixótrófico, o CO2 e o
carbono orgânico são simultaneamente
assimilados, este tipo de cultivo pode ser o
processo mais eficiente para a produção de
biomassa microalgal, visto que implica em
uma economia na energia gasta para a
síntese de todo o aparato fotossintético e
para a fixação de carbono (Lee, 2004),
explicando o maior teor de biomassa em
soro de queijo reconstituído que no meio
padrão utilizado.
A. platensis é capaz de utilizar
carbono orgânico como substrato para
crescimento heterotrófico e mixótofico.
Porém, o crescimento heterotrófico não é
59
adequado para produção de certos dos microrganismos que se alimentam da
constituintes desta cianobactéria, como a matéria orgânica. Conforme Freire et al.
ficocianiona, dado que este é um pigmento (2000), embora a sua importância seja
fotossintético acessório. Testes realizados indiscutível, a atividade industrial costuma
demonstraram que esta microalga cresce ser responsabilizada, e muitas vezes com
muito mais em meio suplementado com justa razão, pelo fenômeno de contaminação
glicose do que sob condições ambiental. Processos industriais que utilizam
fotoautotróficas. Em uma cultura grandes volumes de água contribuem
fotoheterotrófica, a fonte de carbono e a significativamente com a contaminação dos
intensidade luminosa são os fatores mais corpos d'água, principalmente pela ausência
importantes que influenciam o crescimento e de sistemas de tratamento para os grandes
a composição celular da microalga (Rangel, volumes de efluentes líquidos produzidos. O
2000). estudo de novas alternativas para o
tratamento dos inúmeros efluentes
4.3.3.5 DBO industriais atualmente produzidos, continua
sendo uma das principais armas de combate
A DBO é o parâmetro fundamental ao fenômeno de contaminação
para o controle da poluição das águas por antropogênica.
matéria orgânica, uma ferramenta O percentual da DBO no soro de
imprescindível nos estudos de auto- queijo clarificado 6% diminuiu 77,43% em
depuração dos cursos d’água, além de relação ao soro na mesma concentração após
constituir-se em importante parâmetro na o cultivo. Em relação ao soro 3%, houve
composição dos índices de qualidade das diminuição de 80,2% da demanda
águas. bioquímica de oxigênio, considerando-se
A demanda bioquímica de oxigênio antes e após cultivo de A. platensis,
(DBO5) no soro antes do cultivo e após 10 revelando grande redução no potencial de
dias de cultivo com a Arthrospira platensis é poluição do soro. Em razão da elevada
especificada na tabela 11. concentração de DBO no dejeto bruto, o
efluente final ainda necessita da continuação
do tratamento para remoção da DBO
Tabela 11 - Demanda Bioquímica de Oxigênio remanescente, porém pode-se considerar que
(DBO5) mg/L para soro 3% e 6% clarificado o cultivo de A. platensis em soro de queijo
antes e após cultivo de Arthrospira platensis abre mais um caminho para redução do
Cultivo Soro 3% Soro 6% potencial poluidor do soro.
clarificado clarificado
Antes 26.703a ±73,54 49.368,5c±200,11
cultivo 4.3.4 Análise microscópica em soro
Após de leite clarificado
5.294,5b±64,35 11.142,5d±194,45
cultivo
a,b,c,d- letras minúsculas distintas na mesma A microscopia é uma área do controle
coluna indicam valores estatisticamente de qualidade que visa, além da questão das
diferentes (p<0,05) para os tratamentos. condições higiênico-sanitárias, analisar a
pureza dos produtos/alimentos. É uma
técnica microanalítica utilizada na
Segundo Sperling (2005), o principal efeito identificação e avaliação da contaminação e
ecológico da poluição orgânica em um curso de fraudes em alimentos, constituindo-se um
d’água é o decréscimo dos teores de ponto relevante no controle de qualidade,
oxigênio dissolvido causado pela respiração fornecendo subsídios para análise de pontos

60
críticos no processamento, estocagem e saúde humana ou evidência de
distribuição dos alimentos. Os resultados microrganismos contaminantes,
encontrados enfatizam que é difícil a demonstrando uma boa condição higiênica
contaminação da A. platensis ao nível do produto.
laboratorial. A tabela 12 evidencia que as
amostras não revelaram presença de matéria
macroscópica ou microscópica prejudicial à

Tabela 12 -Resultados das análises Microscópicas de Arthrospira platensis em pó

Parâmetro analisado Resultado Padrão*
Elementos microscópicos e Fragmentos de insetos<3,0/10g
macroscópicos prejudiciais à Ausentes Pelo de roedor <1,5/150g
saúde humana
*United States Food and Drug Administration

5 CONCLUSÕES

O soro de leite não clarificado não é um

bom meio de cultivo para crescimento da
cianobatéria Arthrorpira platensis.
O emprego de soro de leite clarificado
como meio de cultura é uma alternativa
viável para o cultivo de Arthrospira
platensis.
A cianobatéria Arthrorpira platensis
consegue utilizar a lactose como fonte de
carbono para síntese de biomassa.
O cultivo em soro em pó reconstituído
a 3% levou a maior concentração celular de
biomassa.
O teor de proteína obtido na biomassa
foi influenciado pelo meio utilizado para
cultivo, sendo mais baixo em soro de leite
que em meio padrão.
O cultivo de Arthrospira platensis em
soro de leite reduz significativamente a
DBO do soro.
A Arthrospira platensis produzida em
soro de leite em laboratorio é
microbiologicamente segura.

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desempenho do reator anaeróbio em Universidade de São Paulo, São Carlos.
batelada seqüencial com biomassa

69
APÊNDICES

70
Apêndice 1 - Tabela de valores da evolução da Concentração celular (g/L) e valor
de pH em meio padrão Zarrouk da amostra 1 em relação ao tempo de cultivo da
Arthrospira platensis com inoculo de 0,1g/L.
Dias Concentração celular em pH do cultivo
meio padrão Zarrouk g/L

0 0,1 9,3
1 0,214718 9,3
2 0,391099 9,3
3 0,43281 9,3
4 0,519615 9,3
5 0,597495 9,3
6 0,67962 9,3
7 0,766288 9,4
8 0,992046 9,5
9 1,068107 9,55
10 1,069925 9,6
11 1,11156 9,65

Apêndice 2 - Tabela de valores da evolução da Concentração celular (g/L) e valor

de pH em meio padrão Zarrouk da amostra 2 em relação ao tempo de cultivo da
Arthrospira platensis com inoculo de 0,1g/L.
Dias Crescimento em meio pH do cultivo
padrão Zarrouk g/L

0 0,1 9,3
1 0,15725 9,3
2 0,21003 9,3
3 0,29597 9,3
4 0,32919 9,3
5 0,460123 9,3
6 0,4865 9,4
7 0,51936 9,45
8 0,68003 9,5
9 0,999 9,6
10 1,02197 9,6
11 1,033299 9,7

71
Apêndice 3 - Tabela de valores da evolução da Concentração celular (g/L) e valor
de pH em meio padrão Zarrouk da amostra 3 em relação ao tempo de cultivo da
Arthrospira platensis com inoculo de 0,1g/L.
Dias Crescimento em meio pH do cultivo
padrão Zarrouk g/L

0 0,1 9,3
1 0,13723 9,3
2 0,20322 9,3
3 0,29998 9,3
4 0,33172 9,3
5 0,4629 9,35
6 0,47891 9,35
7 0,52679 9,4
8 0,67597 9,5
9 0,98746 9,6
10 0,98978 9,6
11 1,0031 9,6

Apêndice 4 - Tabela de valores da evolução da Concentração celular (g/L) e valor

de pH em meio padrão Zarrouk da amostra 4 em relação ao tempo de cultivo da
Arthrospira platensis com inoculo de 0,1g/L.
Dias Crescimento em meio pH do cultivo
padrão Zarrouk g/L

0 0,1 9,3
1 0,14216 9,3
2 0,20653 9,3
3 0,28551 9,3
4 0,33316 9,3
5 0,44823 9,3
6 0,47819 9,35
7 0,50919 9,4
8 0,68832 9,5
9 0,99013 9,6
10 1,0005 9,6
11 1,01368 9,6

72
Apêndice 5 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e valor
de pH em meio padrão Zarrouk da amostra 5 em relação ao tempo de cultivo da
Arthrospira platensis com inoculo de 0,1g/L.
Dias Crescimento em meio pH do cultivo
padrão Zarrouk g/L

0 0,1 9,3
1 0,15022 9,3
2 0,2059 9,3
3 0,292895 9,3
4 0,328352 9,3
5 0,45747 9,3
6 0,48543 9,3
7 0,550414 9,4
8 0,687145 9,5
9 1,011064 9,6
10 1,02348 9,6
11 1,034569 9,7

Apêndice 6 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH

em meio Zarrouk em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis com
inoculo de 0,2g/L na amostra 1.
Dias Crescimento em meio pH do cultivo
padrão Zarrouk g/L

0 0,2 9,3
1 0,220821 9,3
2 0,401715 9,3
3 0,451121 9,3
4 0,525426 9,3
5 0,580905 9,3
6 0,718316 9,4
7 0,791942 9,45
8 0,970084 9,5
9 1,049598 9,6
10 1,21129 9,6
11 1,233357 9,7

73
Apêndice 7 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH
em meio Zarrouk em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis com
inoculo de 0,2g/L na amostra 2.
Dias Crescimento em meio pH do cultivo
padrão Zarrouk g/L

0 0,2 9,3
1 0,186689 9,3
2 0,311174 9,3
3 0,316515 9,3
4 0,415547 9,3
5 0,498844 9,35
6 0,524808 9,35
7 0,665658 9,4
8 0,768 9,5
9 1,017984 9,55
10 1,048141 9,6
11 1,089195 9,6

Apêndice 8 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH

em meio Zarrouk em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis com
inoculo de 0,2g/L na amostra 3.
Dias Crescimento em meio pH do cultivo
padrão Zarrouk g/L

0 0,2 9,3
1 0,144568 9,3
2 0,218954 9,3
3 0,270247 9,3
4 0,349202 9,3
5 0,480773 9,3
6 0,500676 9,35
7 0,628737 9,4
8 0,762226 9,5
9 1,037493 9,6
10 1,048074 9,6
11 1,055174 9,6

74
Apêndice 9 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do pH
em meio Zarrouk em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis com
inoculo de 0,2g/L na amostra 4.
Dias Crescimento em meio pH do cultivo
padrão Zarrouk g/L

0 0,2 9,3
1 0,149443 9,3
2 0,212354 9,3
3 0,30072 9,3
4 0,353661 9,3
5 0,467967 9,3
6 0,496733 9,3
7 0,554427 9,4
8 0,747286 9,5
9 1,0279 9,6
10 0,948077 9,6
11 1,078279 9,6

Apêndice 10 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do

pH em meio Zarrouk em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inoculo de 0,2g/L na amostra 5.
Dias Crescimento em meio pH do cultivo
padrão Zarrouk g/L

0 0,2 9,3
1 0,176205 9,3
2 0,269667 9,3
3 0,328775 9,3
4 0,410516 9,3
5 0,510542 9,3
6 0,579163 9,3
7 0,667316 9,4
8 0,810228 9,5
9 1,059763 9,6
10 1,291942 9,6
11 1,320589 9,7

75
Apêndice 11 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do
pH em soro de leite 3% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,1g/L na amostra 1.
Dias Crescimento em soro 3% pH do cultivo
g/L

0 0,1 9,3
1 0,330807 8,7
2 0,496637 9,3
3 0,649798 8,3
4 0,785686 9,3
5 1,065522 8,5
6 1,366664 9,3
7 1,455911 8,2
8 1,487005 9,3
9 1,526158 8,6
10 1,56416 9,3
11 1,346509 8,7

Apêndice 12 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do

pH em soro de leite 3% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,1g/L na amostra 2.
Dias Crescimento em soro 3% pH do cultivo
g/L

0 0,1 9,3
1 0,474757 8,6
2 0,587611 9,3
3 0,747682 8,5
4 0,961879 9,3
5 1,303902 8,6
6 1,316569 9,3
7 1,789872 8,4
8 1,793326 9,3
9 1,829026 8,6
10 1,826723 9,3
11 1,528461 8,4

76
Apêndice 13 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do
pH em soro de leite 3% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,1g/L na amostra 3.
Dias Crescimento em soro 3% pH do cultivo
g/L

0 0,1 9,3
1 0,444815 8,6
2 0,511607 9,3
3 0,622159 8,4
4 0,845568 9,3
5 1,067825 8,4
6 1,425969 9,3
7 1,598708 8,5
8 1,61368 9,3
9 1,779508 8,6
10 1,80254 9,3
11 1,489307 8,5

Apêndice 14 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do

pH em soro de leite 3% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,1g/L na amostra 4.
Dias Crescimento em soro 3% pH do cultivo
g/L

0 0,1 9,3
1 0,460936 8,6
2 0,579551 9,3
3 0,714286 8,5
4 1,063219 9,3
5 1,359176 8,6
6 1,686229 9,3
7 1,772597 8,4
8 1,816358 9,3
9 1,825571 8,5
10 1,592951 9,3
11 1,489307 8,5

77
Apêndice 15- Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do
pH em soro de leite 3% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,1g/L na amostra 5.
Dias Crescimento em soro 3% pH do cultivo
g/L

0 0,1 9,3
1 0,495484 8,4
2 0,688951 9,3
3 0,854782 8,6
4 1,268203 9,3
5 1,482397 8,4
6 1,753022 9,3
7 1,76684 8,5
8 1,770295 9,3
9 1,779508 8,4
10 1,785265 9,3
11 1,520399 8,4

Apêndice 16- Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do

pH em soro de leite 3% em relação ao tempo de cultivo da arthrospira paltensis
com inoculo de 0,2 g/L na amostra 1.
Dias Crescimento em soro 3% pH do cultivo
g/L

0 0,2 9,3
1 0,194562 8,6
2 0,562277 9,3
3 0,685497 8,4
4 0,866297 9,3
5 1,013699 8,6
6 1,161103 9,3
7 1,398332 8,3
8 1,434031 9,3
9 1,486435 8,4
10 1,696007 9,3
11 1,41215 8,6

78
Apêndice 17 – Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do
pH em soro de leite 3% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inoculo de 0,2 g/L na amostra 2.
Dias Crescimento em soro 3% pH do cultivo
g/L

0 0,2 9,3
1 0,199987 8,5
2 0,515075 9,3
3 0,594546 8,7
4 0,709468 9,3
5 0,98267 8,4
6 1,265479 9,3
7 1,51318 8,5
8 1,689472 9,3
9 1,69875 8,6
10 1,72359 9,3
11 1,498521 8,5

Apêndice 18 – Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do

pH em soro de leite 3% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inoculo de 0,2g/L na amostra 3.
Dias Crescimento em soro 3% pH do cultivo
g/L

0 0,2 9,3
1 0,195897 8,6
2 0,637131 9,3
3 0,652101 8,5
4 0,817929 9,3
5 1,174922 8,6
6 1,344206 9,3
7 1,548038 8,4
8 1,769143 9,3
9 1,81751 8,5
10 1,82571 9,3
11 1,443244 8,6

79
Apêndice 19 – Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do
pH em soro de leite 3% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inoculo de 0,2 g/L na amostra 4.
Dias Crescimento em soro 3% pH do cultivo
g/L

0 0,2 9,3
1 0,204892 8,5
2 0,49568 9,3
3 0,563479 8,4
4 0,79873 9,3
5 1,005689 8,6
6 1,27891 9,3
7 1,648901 8,4
8 1,73159 9,3
9 1,89327 8,5
10 1,91375 9,3
11 1,51236 8,5

Apêndice 20 – Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do

pH em soro de leite 3% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inoculo de 0,2 g/L na amostra 5.
Dias Crescimento em soro 3% pH do cultivo
g/L

0 0,2 9,3
1 0,198733 8,4
2 0,4897 9,3
3 0,52193 8,6
4 0,73419 9,3
5 1,1492 8,5
6 1,31567 9,3
7 1,597348 8,4
8 1,74238 9,3
9 1,90368 8,5
10 1,59767 9,3
11 1,68359 8,5

80
Apêndice 21 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do
pH em soro de leite 6% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,1g/L na amostra 1.
Dias Crescimento em soro 6% pH
g/L

0 0,1 9,3
1 0,163828 8,7
2 0,205284 9,3
3 0,304321 8,5
4 0,536942 9,3
5 0,739623 8,6
6 0,823688 9,3
7 0,918118 8,4
8 0,965333 9,3
9 0,987213 8,5
10 1,026369 9,3
11 0,944604 8,4

Apêndice 22 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do

pH em soro de leite 6% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,1g/L na amostra 2.
Dias Crescimento em soro 6% pH
g/L

0 0,1 9,3
1 0,293957 8,6
2 0,313534 9,3
3 0,454028 8,6
4 0,610643 9,3
5 0,844417 8,5
6 1,10698 9,3
7 1,265898 8,6
8 1,36839 9,3
9 1,485851 8,5
10 1,495642 9,3
11 1,218683 8,6

81
Apêndice 23 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do
pH em soro de leite 6% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,1g/L na amostra 3
Dias Crescimento em soro 6% pH
g/L

0 0,1 9,3
1 0,30317 8,7
2 0,493181 9,3
3 0,65786 8,5
4 0,89854 9,3
5 1,109283 8,7
6 1,367238 9,3
7 1,424818 8,6
8 1,437485 9,3
9 1,459365 8,8
10 1,477792 9,3
11 1,306204 8,7

Apêndice 24 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do

pH em soro de leite 6% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,1g/L na amostra 4.
Dias Crescimento em soro 6% pH
g/L

0 0,1 9,3
1 0,167442 8,6
2 0,512313 9,3
3 0,890519 8,6
4 0,947493 9,3
5 0,990526 8,6
6 1,02871 9,3
7 1,06447 8,7
8 1,06144 9,3
9 1,068713 8,6
10 1,071743 9,3
11 1,00032 8,7

82
Apêndice 25 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do
pH em soro de leite 6% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,1g/L na amostra 5.
Dias Crescimento em soro 6% pH
g/L

0 0,1 9,3
1 0,15229 8,6
2 0,487463 9,3
3 0,899005 8,5
4 0,960221 9,3
5 0,977798 8,7
6 1,029316 9,3
7 1,055379 8,6
8 1,055379 9,3
9 1,072955 8,5
10 1,072349 9,3
11 0,99543 8,7

Apêndice 26 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do

pH em soro de leite 6% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,2g/L na amostra 1.
Dias Crescimento em soro 6% pH
g/L

0 0,2 9,3
1 0,192458 8,7
2 0,253651 9,3
3 0,264015 8,6
4 0,336566 9,3
5 0,534639 8,5
6 0,705095 9,3
7 0,717742 8,5
8 0,842114 9,3
9 0,899694 8,6
10 1,001032 9,3
11 0,986062 8,6

83
Apêndice 27 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do
pH em soro de leite 6% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,2g/L na amostra 2.
Dias Crescimento em soro 6% pH
g/L

0 0,2 9,3
1 0,188948 8,6
2 0,339058 9,3
3 0,485121 8,6
4 0,485254 9,3
5 0,914664 8,6
6 1,224253 9,3
7 1,316569 8,7
8 1,520399 9,3
9 1,554947 8,6
10 1,591799 9,3
11 1,417909 8,5

Apêndice 28 - Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do

pH em soro de leite 6% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,2g/L na amostra 3.
Dias Crescimento em soro 6% pH
g/L

0 0,2 9,3
1 0,19005 8,6
2 0,342323 9,3
3 0,395297 8,5
4 0,535791 9,3
5 0,6878 8,7
6 1,12459 9,3
7 1,15634 8,7
8 1,189736 9,3
9 1,20137 8,5
10 1,333842 9,3
11 1,10007 8,6

84
Apêndice 29 – Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do
pH em soro de leite 6% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,2g/L na amostra 4.
Dias Crescimento em soro 6% pH
g/L

0 0,2 9,3
1 0,19568 8,5
2 0,24601 9,3
3 0,381546 8,5
4 0,425001 9,3
5 0,709874 8,6
6 1,171678 9,3
7 1,006478 8,5
8 1,19991 9,3
9 1,210068 8,6
10 1,309473 9,3
11 1,168924 8,7

Apêndice 30 – Tabela de valores da evolução da concentração celular (g/L) e do

pH em soro de leite 6% em relação ao tempo de cultivo da Arthrospira platensis
com inóculo de 0,2g/L na amostra 5.
Dias Crescimento em soro 6% pH
g/L

0 0,2 9,3
1 0,187895 8,5
2 0,204789 9,3
3 0,48791 8,6
4 0,68791 9,3
5 0,856892 8,4
6 1,14673 9,3
7 1,153481 8,6
8 1,16789 9,3
9 1,13467 8,4
10 1,005789 9,3
11 1,012357 8,6

85