Tiga contoh terbaru dari kelompok saya hadirkan sebagai ilustrasi.

gambar 3 (A) menunjukkan Northern

blot di mana berbagai jaringan dari tikus telah memiliki mRNA untuk gen ob, menggunakan 33-
merantisensel oligonukleotida.Sinyal diperoleh secara eksklusif di jaringan adiposa putih, dan tidak
disalah satu jaringan yang diperiksa. Dengan demikian, gen ob diekspresikan di jaringan yang sangat
spesifik, dankode untuk protein yang khusus untuk jaringan adiposa. Ini jelas memberikan petunjuk
padasifat umum dari fungsi protein yang berkode, seperti yang dijelaskan sebelumnya.

Contoh peraturan nutrisi pada ekspresi gen diberikan di Northernblot pada Gambar. 3 (B), di mana
tingkat mRNA ob di lemak putih sangat berkurang saat puasa dan cepat dipulihkan pada makan
berikutnya (Trayhurn et al. 19.956). gambar. 4menunjukkan Northern blot yang spesifisitas dari jaringan
ekspresi gen dan jaringanspesifisitas regulasi. Ekspresi gen kode 1-metallothionein diinduksi di jaringan
adipose coklat dan hati oleh paparan dingin, menjadi lebih besar setelah 24 jam kemudian 6 jam setelah
(Beattie et al. 1996). Zn, inducer utama metallothionein-1, memiliki efek jauh lebih besar pada hati
selama 24 jam dari paparan dingin. Berbeda dengan hati, injeksi Zn tidak menyebabkan induksi utama
ekspresi metallothionein-1 gen dalam jaringan adipose coklat. Tidak seperti lemak coklat, gen
metallothionein-1 tampaknya tidak menunjukkan reaksi pada jaringan adiposa putih, berikut paparan
dingin atau administrasi Zn.
gambar. 3. Northern blot menunjukkan (A) spesifisitas jaringan ekspresi gen ob, dan (B) regulasi nutrisi
ekspresi gen. (A), Jaringan dikeluarkan dari tikus, total RNA diekstraksi, dan 10 pg ditambahkan ke
masing-masing gel agarosa; (B), tikus dipuasakan selama 24 jam, dan beberapa diberimakan selama 6
jam; hewan dikontrol untuk menerima makanan secara berkelanjutan. Porsi (10 Wg) RNA total dari
bantalan lemak epididimis yangdimuat ke jalur masing-masing dari gel. A 33-mer anti-akal
oligonukleotida, akhir-berlabel dengan digoksigenin, digunakansebagai probe, dengan deteksi oleh
chemiluminescence (Trayhurn el di. 199%). BAT, jaringan adipose putih; WAT, jaringan adipose coklat;
subcut, subkutan; sk, skeletal; epi, epididimis.
gambar. 4. Northern blot menunjukkan spesifisitas regulasi jaringan dalam ekspresi gen metallothionein-1.
Tikus baik terkena dingin (4 ") selama 6 atau 24 jam, atau disuntikkan dengan seng (10 mg / kg berat
badan) dan membunuh 6 jamkemudian. RNA total diekstraksi dari hati, jaringan adiposa coklat, dan
bantalan lemak putih epididimis; 10 pg RNA yang dimuat ke jalur masing-masing dari gel. 28-mer anti-
sense oligonukleotida, berlabel akhir dengan digoksigenin, digunakan sebagai probe, dengan dideteksi
oleh chemiluminescence (Beattie et al. 1996). BAT, jaringan adipose coklat; WAT, jaringan adiposa putih.
RINGKASAN

Northern blot adalah metode utama untuk memeriksa ekspresi gen melalui pengukuran mRNA. Jaringan
spesifisitas dan faktor-faktor yang mengatur ekspresi dapat ditentukan oleh Northern blot. Sebuah cDNA
berlabel radioaktif dengan 32P adalah paling sering digunakan hibridisasi penyelidikan. sesuai, deteksi
protokol tidak radioaktif, bagaimanapun, semakin tersedia. Kombinasi oligonukleotida anti-sense
sebagai probe, bersama-sama dengan deteksi berbasis chemiluminescence menyediakan pendekatan
yang cepat dan sederhana untuk Northern blot, Prosedur meningkatkan aksesibilitas ini penting untuk
studi nutrisi.