Prosiding Semirata FMIPA Universitas Lampung, 2013

Isolasi Dan Karakterisasi Flavonoid Pada Fraksi Aktif

Antioksidan Dari Daging Buah Mahkota Dewa (Phaleria
macrocarpa (Scheff) Boerl)
Hasnirwan1, Sanusi Ibrahim2, dan Melida Yanti3
1,2 Dosen Kimia FMIPA, Mahasiswa Jurusan Kimia
Universitas Andalas Padang

Abstrak. Isolasi flavonoid dari fraksi etil asetat ekstrak buah mahkota dewa (Phaleria
macrocarpa (Scheff) Boerl) dan uji antioksidan awal dari ekstrak methanol, fraksi methanol-
air, fraksi etilasetat dan fraksi n-heksana dengan metode penangkapan radikal beabas DPPH
telah dilakukan. Hasil isolasi berupa padatan putih kekuningan yang memberikan noda
tunggal terhadap beberapa eluen dengan beberapa perbandingan. Hasil spektroskopi UV
memberikan serapan pada λmaks 222 nm dan 305 nm. Spektrum IR memberikan pita serapan
penting pada bilangan gelombang 33369 cm-1, 2926 cm-1 , 1660 cm-1, 1449 cm-1, 1085 cm-1,
1273 cm-1 , dan 923 cm-1. Dari analisis spektrum IR, dan spektroskopi UV menggunakan
pereaksi geser, kromatografi kertas dua arah (KKt2A) dapat disimpulkan bahwa senyawa
hasil isolasi diperkirakan adalah golongan flavon glikosida yang memiliki gugus fungsi : -
OH , C=C , -C-H dan -C=O serta memilioki substituent gugus hidroksil pada atom C5 dan
C4‘.

Kata kunci : Mahkota dewa (Phaleria macrocarpa (Scheff) Boerl), flavonoid, antioksidan.

PENDAHULUAN Tumbuhan mahkota dewa (Phaleria

Indonesia memiliki kekayaan alam yang
melumpah pada sumber daya alam hayati.
Kekayaaan alam ini telah dimanfaatkan
oleh masyarakat untuk berbagai keperluan
antara lain sebagai bahan baku industry,
pangan dan sebagai obat. Banyak jenis
tumbuhan yang sudah dimanfaatkan sejak
lama sebagai obat-obatan tradisional tapi
masih banyak senyawa yang terkandung di
dalamnya belum diketahui(1).
Kandungan kimia yang ada pada
suatu tumbuhan tersebut sering
memberikan efek fifsiologis dan
farmakologi sehingga lebih dikenal dengan
senyawa aktif. Senyawa akatif ini
merupakan senyawa metabolisme sekunder
dari tumbuhan itu sendiri dimanajumlah
dan penyebarannya tiap bagian tidak sama.
Hal ini mendorong para ahli untuk
melakukan penelitian tentang isolasi, uji
bioaktifitas dan pemanfaatannya lebih
lanjut.
macrocarpa (Scheff) Boerl) di Indonesia
ditemukan sebagai tanaman hias dan telah
dimanfaatkan sebagai obat tradisional.
Bagian yang dimanfaatkan adalah bagian
daging buahnya sedangkan bijinya bersifat
racun sehingga tidak dapat digunakan
sebagai obat. Tumbuhan ini dalam
pengobatan digunakan sebagai obat
disentri, asam urat, diabetes, antihistamin,
anti alergi dan penyakit kulit (3).
Buah mahkota dewa diketahui
mengandung berbagai senyawa metabolit
sekunder seperti : alkaloid, terpenoid,
saponin, polifenol, tannin, sterol, dan
kumarin. Selain itru dari literature lain
diketahui tumbuhan ini kuga mengandung
senyawa lignin dari golongan polifenol dan
senyawa syringaresinol serta asam lemak.
Metabolit sekunder yang ada di dalamnya
berkhasiat dalam penyembuhan berbagai
penyakit degenerative seperti penyakit
kanker rahim dan diabetes, dan bersifat
antioksidan.

Semirata 2013 FMIPA Unila |167

 Hanisrma dkk: Isolasi Dan Karakterisasi Flavonoid Pada Fraksi Aktif Antioksidan Dari
Daging Buah Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa (Scheff) Boerl )
METODOLOGI PENELITIAN
Alat dan Bahan
Alat : seperangkat alat distilasi, rotary
evaporator Heidolph WB 2000,
Spektrofotometer UV dan IR,
spektrofotometer UV-Vis, oven, lampu UV,
melting point, kolom kromatografi, kertas
saring dan alatgelas lainnya.
Bahan : daging buah mahkotadewa
(Phaleria macrocarpa (Scheff) Boerl) ,
pelarut organic methanol, etilasetat, dan n-
heksana, anhidrida asetat, asam sulfat,
kloroform, asam klorida, ammonia,
pereaksi sianidin test, sitroborat, pereaksi
geser, diklorometana, akuades, 2,2-DPPH,
dan silica gel
Isolasi dan fraksinasi
Sebanyak 3,4 kg buah mahkotadewa
yang kering angin dimaserasi dengan
methanol sebanyak 1,5 L selama tiga hari .
Lalu disaring dan dilakukan berulang-ulang
sampai terekstrak dengan sempurna. Hasil
diekstrak digabung dan selanjutnya
dipekatkan dengan alat rotary evaporator
pada suhu 40oC sehingga diperoleh ekstrak
kental methanol..Ekstrak methanol ini
difraksinasi beberapa kali dalam corong
pisah dengan mengunakan pelarut n-
heksana dan dipekatkan sehingga diperoleh
ekstrak n-heksana sebanyak 3,78 g.
Untuk sisa fraksi methanol dari fraksi di
atas difraksi lagi dengan pelarut etilasetat
berulang-ulang dan hasil ekstrak dipekatkan
dengan rotary evaporator dan diperoleh
ekstrak etilasetat sebanyak 25,71 g.
Pemurnian senyawa hasil isolasi
Pemisahan komponen senyawa yang
terdapat dalam fraksi dilakukan dengan
metode kromatografi kolom vacum cair.
Sebelum dilakukan fraksinasi dengan
kromatografi kolom terlebih dahulu
dilakukan KLT (Kromatografi Lapisan
Tipis) baik untuk ekstrak pekat fraksi n-
heksana dan fraksi etilasetat. Pemisahan
senyawa-senyawa yang terdapat pada
168|Semirata 2013 FMIPA Unila
ekstrak etilasetat dilakukan dengan dengan
kromatografi kolom vacuum cair dan fasa
diamnya dipakai silika gel dan sampel
dipreabsorbsi terlebih dahulu dengan cara
mencampurkan sampel sebanyak 6 gram
dengan silica gel 6 gram (1:1) hingga
homogen.
Kolom silica gel dibuat dengan cara
mensuspensikan 60 gram silica gel dengn
pelarut n-heksana dan setelah kolom selesai
dibuat baru di masukkan sampel yang telah
dipreabsorbsi ke dalam kolom/ Selanjutnya
proses elusi dilakukan dengan sisitem SGP
dimulai dari pelarut n-heksana, n-heksana :
etilasetat (9:1) dan seterusnya sampai eluen
methanol. Tiap-tiap fraksi yang dapat
dimonitor dengan menggunakan KLT dan
fraksi pola noda yang sama digabung. Hasil
fraksi diuji memakai uji sianidin untuk
mengetahui fraksi yang positif mengandung
flavonoid dan didapatkan enam fraksi yang
lebih besar.
Fraksi yang positif mengandung
flavoinoid dimurnikan dengan cara
rekristalisasi berulang-ulang dengan
memakai dua pelarut yaitu etilasetat dan n-
heksana sehingga didapatkan kristal yang
bebas dari pengotor . Hasil yang didapat
dimonitor kembali dengan KLT dengan
menggunakan berbagai pelarut dan berbagai
perbandingan pelarut.
Karekterisasi senyawa hasil isolasi
Karakterisasi senyawa hasil isolasi
meliputi pemeriksaan kimia dan fisika yaitu
pengujian uiji sianidin, titik leleh,
kromatografi dua arah, pemeriksaan UV
dengan menggunakan pereaksi geser dan
pemeriksaan spektrofotometer inframerah.
Metode Pengujian Aktivitas Antioksidan
Ditimbang ekstrak sampel sebanyak 25
mg kemudian dilarutkan dengan 25 mL
methanol dalam labu ukur 25 mL dan
didapatkan konsentrasi larutan sampel 1
mg/mL. Kemudian untuk penentuan
aktivitas antioksidan dipipet sebanyak 0,2
mL larutan sampel dengan pipet mikro dan
 Prosiding Semirata FMIPA Universitas Lampung, 2013
di masukkan ke dalam vial dan
ditambahkan 3,8 mL larutan 2,2-difenil-1-
pikrilhidrazil 50 µM. Campuran
dihomogenkan dan dibiarkan selama 30
menit ditempat yang gelap dan selanjutnya
diukur serapannya dengan spektrofotometer
UV-Vis pada panjang gelombang 515 nm.
Pengolahan Data
Aktivitas antioksidan dari sampel
ditentukan oleh besarnya hambatan serapan
radikal bebas melalui perhitungan
persentase inhibisi serapan 2,2-difenil-1-
pikrilhidrazil dengan menggunakan rumus
: Selanjutnya dari fraksi etrilaetat ini
Persentase inhibitor = Abs kontrol - Abs sampel
Abs kontrol
HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada pemeriksaan pendahuluan profil
fitokimia pada buah tumbuhan
mahkotadewa (Phaleria macrocarpa
(Scheff) Boerl) didapatkan hasil bahwa
buah mahkotadewa mengandung banyak
senyawa metabolit sekunder yaitu : jumlahnya banyak dan mengandung
flavonoid, fenolik, alkaloid, triterpenoid,
saponin dan kumarin sementara steroid
memberikan hasil uji yang negative.
Hasil ekstrak dengan menggunakan
pelarut methanol didapatkan sebanyak 966
gram yang berwarna coklat. Selanjutnya
ekstrak pekat ini difraksinasi dengan pelarut
n-heksana didapatkan ekstrak pekatnya 3,78
gram berwarna hijau dan dengan pelarut
etilasetat didapatkan pula ektrak pekatnya
sebanyak 25,71 gram yang berwarna coklat
.Uji antioksidan terhadap ekstrak dari fraksi
metanol, n-heksana, dan etilasetat dapat
dilihat pada tabel 1.
Dari tabel 1 dapat diketahui bahwa fraksi
methanol dan etilasetat memberikan respon
positif terhadap antioksidan dan memiliki
inhibisi yang besar. Selanjutnya fraksi
etilasetat dilanjutkan karena mengandung
flavonoid dan memiliki jumlah ekstrak
yang cukup banyak.
Tabel 1 : Hasil Uji antioksidan pada fraksi
methanol, n-heksana, dan etilasetat dengan
metode penangkapan radikal DPPH
No. Fraksi Inhibisi (%)
1. Ekstrak 20,00
methanol
2. Ekstrak n- 3,68
heksana
3. Ekstrak 18,42
etilaetat
X 100 %
dilakukan pemisahan dengan kromatografi
kolom secara SGP dan didapatkan enam (6)
fraksi. Fraksi III, IV, V, dan VI
mengandung senyawa flavonoid. Untuk
fraksi IV diteruskan pengerjaannya karena
pada fraksi ini ditemukan terbentuk
endapan dan filtrate. Pada pemisahan
endapan dengan filtrate hasilnya dimonitor
dengan KLT untuk mengetahui adanya
flavonoid. Ternyata untuk endapan
flavonoid dan dipisahkan dengan
kromatografi kolom. Pada pemisahan ini
didapatkan senyawa flavonoid murni dalam
bentuk kristal setelah diuji dengan KLT
dengan berbagai palarut seperti : n-heksana
: etil asetat (2:8), etil asetat, etilasetat :
methanol (8:2), etilasetat : methanol (6:4)
dan etilasetat : methanol (4:6).
Karakterisasi senyawa flavonoid yang
didapat dilakukan penentuan titik lelehnya
dan didapatkan titik lelehnya : 207,8 -208,2
oC. Pengukuran dengan spektrofotometer
UV didapatkan puncak pada panjang
gelombang 307 nm. Selanjutkan untuk
menentukan posisi gugus hidroksil pada
cincin aromatis dilakukan dengan memakai
pereaksi geser dan dilihat pergeseran
spektrum yang terjadi. Data pergeseran
χmaks dari spektrum UV dengan pereaksi
geser dapat dilihat pada table 2.
Semirata 2013 FMIPA Unila |169
 Hanisrma dkk: Isolasi Dan Karakterisasi Flavonoid Pada Fraksi Aktif Antioksidan Dari
Daging Buah Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa (Scheff) Boerl )

Tabel 2 Panjang gelombang maksimum senyawa hasil pemurnian dengan pereaksi geser
No. Pereaksi Pita I Pergeseran Pita II Pergeseran Posisi
χmaks(nm) pita I χmaks(nm) pita II χmaks gugus OH
χmaks(nm) (nm)
1. Metanol 305,00 - 222,60 - -
2. Metanol +Na
metoksida 331,00 + 26 240,00 + 18 4‘-OH
3. Metanol + 305,00 0 222,60 0 -
Na asetat
4. Metanol +
Na asetat + 305,00 0 222,60 0 -
as. borat
5. Metanol + 362,2 + 57,2 310,00 + 87,4 5-OH
AlCl3
6. Metanol +
AlCl3 + HCl 362,20 + 57, 2 310,00 +87,4 -

Untuk interpretasi data spectrum Dachriyanus, 2 3 ― Kimia Bahan lam 1

inframerah memberikan beberapa informasi
serapan penting tentang gugus fungsi yang
terdapat pada senyawa murni. Spektrum
inframerah menunjukkan adanya serapan
pada daerah 3369 cm-1 mengindikasikan
vibrasi –OH dan didukung dengan adanya
serapan C-O muncul pada angka
gelombang 1244-1039 cm-1. Gugus fungsi
C=O muincul pada serapan 1660 cm-1 yang
diperkuat dengan adanya sedrapan pada
angka gelombang 923 cm-1. Serapan C-H
alifatis ditunjukkan pada angka gelombang
2926 cm-1. Pada angka gelombang 1449
cm-1 menunjukkan adanya serapan C=C
aromatis dan mengindikasikan adanya
kromofor yang khas dari senyawa flavonoid
untuk system ikatan rangkap berkonyugasi.
Selain itu serapan pada angka gelombang
1085 cm-1 dan 1139 cm-1 menandakan
adanya peregangan C-O-C molekul eter.
Dari data di atas dapat disimpulkan atau
gambaran bahwa senyawa hasil permurnian
merupakan senyawa golongan flavon
glikosida.
DAFTAR PUSTAKA
rbain,D, 1997 ― Hutan Sumatera : dari
sumber alam tradisional ke sumber Daya
lam Ilmu Pengetahuan dan Ekonomi ―
FMIPA Unanfd Padang
― Univesitas ndalas Padang
Saufi, hmad, 2 7 ― Lignan in Phaleria
macrocarpa (Scheff) Boerl and in Linum
flavum far compactum L ― Universitas
Dusseldorf, Heinrich-Heine.
Markham, K.R, 1988 ― Techniques of
Flavonoid Identifacation ( Cara-cara
mengidentifikasi Flavonoid )., Kosasih
Padmawinata, Penerbit ITB, Bandung.
Brown, D.W, 1988 ― Organic Spectroscopy
― John Willey and Sons, hal. 3-30, 135-
179.
Harbone, J.B,1984 ― Metode fitokimia,
penentuan cara modern menganalisis
tumbuhan, Padmawinata, ITB, Bandung,
hal. 3-9, 47-65, 123-158.
Molyneux, P, 2 4, ― The Use of the Stable
Free Radical Diphenyl Picrylhydrazyl
(DPPH) for Estimating Antioxidant
Activity ― J, Sci. Technol, 26 2 , 211-
219.
Trilaksani, W, 2 3, ― Antioksidan : Jenis,
Sumber, Mekanisme Kerja dan Peran
Terhadap Kesehatan ―, Institut Pertanian
Bogor, Bogor, hal. 1-12.
Okawa, M, Kinjo. J, Nohara. T and Ono,
M, 2 1, ― Modification Method DPPH
2-2-Diphenyl-1-pycrylhydrazyl Radical

170|Semirata 2013 FMIPA Unila

 Prosiding Semirata FMIPA Universitas Lampung, 2013
Scavenging Activity of Falvonoids
Obtained from some Medical Plants ―,
Biol. Pharm. Bull, 24(10), 1202.
Brand-Williams, W. M.E, Cuveliuer, and C.
Berset, 1995, ― Use of a Free Radical
Method to Evaluate Antioxydant Activity
―, Lebensmittel-Wissenchaft and
Technologie, 25-30.
Miller, L.P, 1973 ― Phytochemistry of
Organic Metabolite ―, Vol. II, Van
Norstrand Reinhold, Co, New York.
Murray, R.D.H, and Brown J. Mendez,
1982, ― The Natural Coumarine ―, Jhon
Willey and Son Ltd, New York.
Semirata 2013 FMIPA Unila |171