Anda di halaman 1dari 3

PENDAHULUAN

Dalam kegiatan ini kami akan menyelidiki hidrolisis pati menjadi maltosa dengan amilase
saliva, enzim yang dihasilkan oleh kelenjar ludah dan disekresikan ke dalam mulut. Agar kita dapat
mendeteksi apakah ada aktivitas enzimatik atau tidak ada, kita perlu mengidentifikasi keberadaan
substrat dan produk untuk mengetahui sampai sejauh mana hidrolisis telah terjadi. Dengan
demikian, kontrol harus disiapkan untuk memberikan standar yang diketahui mengenai
perbandingan yang dapat dilakukan. Dengan kontrol positif, semua zat yang dibutuhkan disertakan
dan hasilnya positif diharapkan. Terkadang kontrol negatif disertakan. Dengan kontrol negatif,
diharapkan hasil negatif. Negatif hasil dengan kontrol negatif memvalidasi percobaan. Kontrol
negatif digunakan untuk menentukan apakah ada zat yang terkontaminasi di reagen. Jadi, bila hasil
positif dihasilkan tapi hasil negatif diharapkan, satu atau lebih zat pencemar hadir menyebabkan
perubahan.
Dengan aktivitas amilase, penurunan pati dan gula meningkat seiring hasil pencernaan sesuai
dengan persamaan berikut
Pati+air ----(amilase) maltosa
Karena perubahan kimiawi yang terjadi karena pati yang dicerna hingga maltosa tidak bisa
dilihat dengan mata telanjang, kita perlu melakukan enzyme assay, metode kimia untuk
mendeteksi adanya zat yang dicerna. Anda akan melakukan dua uji enzim pada setiap sampel. Uji
IKI mendeteksi adanya pati dan menjadi tes uji Benedict untuk mengurangi gula, seperti glukosa
atau maltosa, yang merupakan produk pencernaan dari pati. Biasanya larutan berwarna karamel,
IKI berubah menjadi biru-hitam dalam produk pencernaan pati. Pereaksi Benedikt adalah solusi
biru cerah yang berubah menjadi hijau menjadi oranye menjadi coklat kemerahan dan dengan
meningkatkan jumlah maltosa. Penting untuk dipahami bahwa enzim hanya menunjukkan adanya
tidak adanya zat.
Alat dan bahan
1. Amilase – enzim yang mencerna pati
2. Pati – substrat karbohidrat kompleks
3. Maltosa – substrat disakarida
4. pH buffer – larutan yang digunakan untuk menyesuaikan pH larutan
5. Air terdeionisasi – digunakan untuk menyesuaikan supaya setiap reaksi memiliki
volume yangsama
6. Tabung tes – digunakan sebagai wadah reaksi
7. Inkubator – digunakan untuk penyesuai suhu (mendidih, membeku, normal)
8. IKI – mendeteksi keberadaan pati
9. Reagen Benedict – mendeteksi produk dari pencernaan pati ( maltosa dan glukosa)
Review sheet
1. List the substrate and the subunit product of amylase
Amilase adalah enzim yang menhidrolisis pati, dan digunakan untuk produksi gula yang
berasal dari pati, seperti glukosa, maltosa, dan oligosakarida lainnya
Sehingga substratnya adalah Pati / Amilum dan substratnya adalah glukosa dan maltosa

Sumber : Saxena, Rajshree, and Rajni Singh. “Amylase Production by Solid-State


Fermentation of Agro-Industrial Wastes Using Bacillus Sp.” Brazilian Journal of
Microbiology 42.4 (2011): 1334–1342. PMC. Web. 18 Mar. 2018.

2. What effect did boiling have on enzyme activity? Why? How well did the results this
compare with your prediction?

Pada suhu yang sangat dingin, molekul bergerak lebih lambat, mengurangi frekuensi
tumbukan substrat enzim dan oleh karena itu menurunkan aktivitas enzim. Pada titik
pembekuan, gerak molekul menurun drastis saat terjadi pembentukan padat dan molekul
dikunci ke dalam formasi kristal yang kaku. Dalam kristal padat ini, molekul memiliki
kebebasan gerak yang jauh lebih sedikit dibandingkan dengan molekul yang sama dalam
pengaturan cairan. Akibatnya, tumbukan enzim-substrat sangat jarang terjadi saat
pembekuan terjadi dan aktivitas enzim hampir nol di bawah titik beku.

Pada suhu sekitar mendidih, ikatan kimia yang menahan struktur enzim mulai rusak.
Hilangnya struktur tiga dimensi menyebabkan enzim tidak lagi sesuai dengan molekul
substrat targetnya, dan enzim sepenuhnya berhenti berfungsi. Hilangnya struktur ini, yang
dikenal sebagai denaturasi, tidak dapat diubah - sekali enzim dipanaskan sedemikian rupa
sehingga ikatan kimia yang menyertainya saling mendobrak, tidak akan terbentuk lagi
secara spontan jika suhu turun. Ini tidak seperti pembekuan, yang tidak mempengaruhi
struktur enzim - jika suhu meningkat setelah pembekuan, aktivitas enzim akan dipulihkan.

Source : Jan, Farhath, Santosh Kumar, and Richa Jha. “Effect of Boiling on the
Antidiabetic Property of Enzyme Treated Sheep Milk Casein.” Veterinary World 9.10
(2016): 1152–1156. PMC. Web. 18 Mar. 2018.

3. At what pH was the amylase activity the most active? Describe the significance of this
result

pH optimum amilase saliva dari mulut menyesuikan dengan pH mulut kita yang berkisar
pada pH 7

Sumber: Jan, Farhath, Santosh Kumar, and Richa Jha. “Effect of Boiling on the
Antidiabetic Property of Enzyme Treated Sheep Milk Casein.” Veterinary World 9.10
(2016): 1152–1156. PMC. Web. 18 Mar. 2018.

4. Briefly describe the needs for controls and give an example used in this activity
Kontrol harus disiapkan untuk memberikan standar yang diketahui mengenai perbandingan
yang dapat dilakukan. Dengan kontrol positif, semua zat yang dibutuhkan disertakan dan
hasilnya positif diharapkan. Terkadang kontrol negatif disertakan. Dengan kontrol negatif,
diharapkan hasil negatif. Negatif hasil dengan kontrol negatif memvalidasi percobaan
Contoh yang digunakan di percobaan ini, kontrol positif yaitu pati ditambah amilase pada
suhu normal berpH 7

Sumber: Introduction dan Experiment Physio Ex Digestion System Part 1

5. Describe the significance of using a 37Celcius incubation temperature to test amylase


activity

Banyak enzim dalam tubuh kita bekerja paling baik pada suhu tubuh. Pada suhu yang jauh
lebih rendah, molekul substrat tidak memiliki cukup energi kinetik untuk reaksi yang
terjadi bahkan di hadapan enzim. Pada suhu tubuh secara signifikan lebih tinggi dari
biasanya, enzim tidak akan bekerja dengan baik karena energi kinetik dari molekul dalam
larutan yang mengandung enzim sangat tinggi, sehingga bentuk enzim ditarik terpisah
sampai pada titik dimana enzim tidak dapat berfungsi dengan baik. Suhu mempengaruhi
suhu hingga rentang optimumnya dan kisaran suhu optimum manusia adalah 37 derajat
celcius.

Sumber :Peterson, Michelle E. et al. “The Dependence of Enzyme Activity on


Temperature: Determination and Validation of Parameters.” Biochemical Journal 402.Pt 2
(2007): 331–337. PMC. Web. 18 Mar. 2018.