Universidad de la Amazonia

Facultad de Ciencias Básicas

Programa de Química
Laboratorio de

PRÁCTICA No. 1

1. OBJETIVO

 Determinar la composición cualitativa en mono y disacáridos de una muestra

desconocida mediante el empleo de las reacciones propias de los carbohidratos.

2. FUNDAMENTO TEÓRICO

Los carbohidratos, glúcidos o azúcares constituyen una de las más importantes clases de
moléculas constituyentes de los organismos. Los carbohidratos son los compuestos
orgánicos más abundantes de la biosfera y a su vez los más diversos. Normalmente se los
encuentra en las partes estructurales de los vegetales y también en los tejidos animales,
como glucosa o glucógeno. Estos sirven como fuente de energía para todas las actividades
celulares vitales. Son complejos terciarios en los cuales el hidrógeno y el oxígeno están en
igual proporción que el agua. Los más comunes son los sacáridos, los cuales se dividen
también en monosacáridos o azúcares simples, disacáridos y polisacáridos.

Los carbohidratos son derivados aldehídicos o cetónicos de alcoholes polioxidrilados y por

lo tanto tienen las propiedades características de esos grupos como son la formación de
oxina e hidrazonas. Existen diferentes tipos de reacciones químicas que sirven para
determinar cualitativamente la presencia de carbohidratos (monosacáridos, disacáridos y
polisacáridos).

Desde el punto de vista clínico y nutricional es importante identificar y cuantificar algunos

carbohidratos importantes, tanto en raciones alimenticias como en productos elaborados y
materiales biológicos.

Los monosacáridos, como aldehídos o cetonas polihidroxilados, presentarán todas las

propiedades químicas propias de los grupos carbonilos primarios o secundarios así como de
los alcoholes. En la presente práctica tendremos en cuenta las reacciones de reducción y las
furfurálicas.

2.1 REACCIONES DE REDUCCIÓN.

 Reacción de Benedict.
Uno de los reactivos más utilizados para detección de carbohidratos reductores, es el
reactivo de Benedict, que está compuesto por sulfato cúprico, citrato y carbonato de sodio,
que le confieren a la solución un pH alcalino y evitan que los iones cúpricos se reduzcan
espontáneamente en presencia del oxígeno ambiental y por lo tanto aquellas sustancias que
posean poder reductor darán positivo con este reactivo.

La reacción que se presenta es la siguiente:

Rojo ladrillo

En la reacción anterior se aprecia que los iones cúpricos son reducidos a óxido cuproso que
es una sustancia insoluble de color rojo ladrillo.

 Reacción de Barfoed.

Está reacción se utiliza para diferenciar los monosacáridos de los disacáridos, el acetato
cúprico en medio ácido oxida las sustancias reductoras más potentes, los monosacáridos;
pero aquellas que poseen un débil poder reductor como los disacáridos no lograrán reducir
al cobre. Al tener la solución un pH ácido resulta necesario controlar rigurosamente el
tiempo de la reacción, ya que si éste se prolongará se produciría la hidrólisis ácida en el
disacárido y se falsearían los resultados.
2.2 REACCIONES FURFURÁLICAS.

Los ácidos fuertes tienen la propiedad de deshidratar las moléculas de los monosacáridos de
manera que se obtiene un aldehído cíclico denominado furfural, el cual a su vez es capaz de
condensarse con algunos compuestos aromáticos y producir complejos coloreados.

La reacción de deshidratación se muestra a continuación:

H H

HO OH 3H2O
C C
O
H
C C C
H O
O
O O C
H H
H
H
H FURFURAL

PENTOSA

H H

HO OH 3H2O
C C O

H HOH 2 C C
O
C C
H
O H
O O C
HOH 2C HIDROXIMETILFURFURAL
H
H
H

HEXOSA

Para que se produzca el furfural se requiere que las aldosas posean al menos 5 átomos de
carbono en tanto que las cetosas solo reaccionaran aquellas que tengan seis o más átomos
de carbono. De acuerdo al ácido que se utilice como deshidratante y del compuesto
aromático que se emplee para la reacción de condensación se describen las diferentes
reacciones furfurálicas:

 Reacción de Molisch.

Se utiliza el ácido sulfúrico como agente deshidratante y el α–naftol como agente

condensante que posibilita la aparición del color. El color que se observa es violeta y darán
la prueba los monosacáridos con suficientes átomos de carbono para formar el furfural, así
como los polisacáridos que son hidrolizados por el ácido súlfurico.

La reacción se presenta a continuación:

 OH
OH

2H2SO4
H
O C H
O H
C
O
H
FURFURAL
HO 3S SO 3H

OH
OH

COMPLEJO COLOR VIOLETA

-NAFTOL

Resultado negativo Resultado positivo

 Reacción de Seliwanoff

El ácido deshidratante es el ácido clorhídrico, mejor agente deshidratante de las cetosas

que de las aldosas. Controlando rigurosamente el tiempo el furfural se obtendrán de los
monosacáridos que presenten grupos carbonilos secundarios en su estructura. El agente
condensante empleado es el resorcinol y la reacción es la siguiente:
OH
OH

OH OH
HCl
+ H2O
H C H
O O
C O
H OH
H
FURFURAL
OH

OH
HO

COMPLEJO COLOR NARANJA

RESORCINOL
Nota: la concentración de los monosacáridos no debe ser superior al 2 %, si la
concentración es mayor también se tendrá resultado positivo.
Si la prueba es positiva el medio pasa de incoloro a rojo, para las cetohexosas y
aldohexosas

El hidroximetilfurfural (producto de la deshidratación) se forma más rápidamente a partir

de cetohexosas y más lentamente a partir de aldohexosas. El tratamiento prolongado de
más de quince minutos de duración, provoca la isomerización de la glucosa (aldohexosa)
en fructosa (cetohexosa), por lo que también la glucosa puede dar la prueba positiva.

 Reacción de Bial.

El agente deshidratante es el ácido clorhídrico en presencia de cloruro férrico, en estas

condiciones se deshidratan primero las pentosas y luego las hexosas, por lo tanto es una
prueba de identificación de las pentosas. El agente condensante es el orcinol, el complejo
formado es de color verde y la reacción se presenta a continuación:
OH
OH

H3C OH H3C OH
HCl
+ H2O
H C H
O O
C H OH FeCl3
HOO CH3
H
FURFURAL H3C

OH OH

ORCINOL COMPLEJO COLOR VERDE

3. TRABAJO PREVIO
  Represente la estructura abierta, proyección de Fisher y la estructura cíclica de la
glucosa y la fructosa.
 Indique cuál es el carbono anomérico en la estructura cíclica de la glucosa y la fructuosa.
 Represente la estructura de la maltosa, la lactosa, la sacarosa y la celobiosa, indicando
que tipo de enlace glicosídico se establece entre sus unidades monoméricas?

4. ELEMENTOS NECESARIOS PARA LA PRÁCTICA

4.1. Materiales y equipos

Cantidad Descripción
20 20 tubos de ensayo
1 gradilla para tubos
2 pinza para tubo
1 agitador de vidrio
1 vaso de precipitados de 500 mL
1 gradilla
1 gotero
1 pipeteador

4.2. Reactivos

Ácido sulfúrico concentrado

Soluciones al 2 % de glucosa, sacarosa, fructuosa, maltosa,
lactosa, galactosa, ribosa, arabinosa, almidón y albúmina de
huevo.
Reactivo de Benedict.
Reactivo de Barfoed.
Reactivo de Molisch.
Reactivo de Seliwanoff
Reactivo de Bial
 5. Desarrollo experimental:

5.1 Reacciones de reducción

Reacción de Benedict

 Ponga un vaso de precipitado con a gua a calentar hasta ebullición.

 Marque y prepare siete tubos de ensayo mezclando los volúmenes de cada solución
de acuerdo a la siguiente tabla.

Reactivo Tubo # 1 2 3 4 5 6 7 Resultado

(Rojo Ladrillo Si/No)
Agua destilada 1 mL ------- ------- ------- ------- ------- -------
(Blanco)
Glucosa -------- 1 mL -------- ------- ------- ------- -------

Fructosa -------- -------- 1 mL ------- ------- ------- -------

Sacarosa -------- -------- -------- 1 mL ------- ------- -------

Maltosa -------- -------- -------- ------- 1 mL ------- -------

Lactosa -------- -------- ------- ------- ------- 1 mL -------

Solución desconocida -------- -------- ------- ------- ------- ------- 1 mL

Reactivo Benedict 2 ml 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 m
L

 Mantenga los tubos de ensayo durante 5 minutos en un baño de agua hirviendo y

luego proceda a ver y Registrar los resultados.

Reacción de Barfoed

 Marque y prepare siete tubos de ensayo mezclando los volúmenes de cada solución
de acuerdo a la siguiente tabla
Reactivo Tubo # 1 2 3 4 5 6 7 Resultado
Precipitado
Si/No
Agua destilada 1 mL ------- ------- ------- ------- ------- -------
(Blanco)
Glucosa ------ 1 mL ------- ------ ------ ------ ------
Fructosa ------ ------- 1 mL ------ ------ ------ ------
 Sacarosa ------ ------- ------- 1 mL ------ ------ ------
Maltosa ------ ------- ------- ------ 1 mL ------ ------
Lactosa ------ ------- ------- ------ ------ 1 mL ------
Solución ------ ------- ------- ------ ------ ------ 1 mL
desconocida

Barfoed 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL

 Mantenga los tubos de ensayo durante 5 minutos en el baño de agua hirviendo,

recuerde ser riguroso con el tiempo de reacción. Procede a observar y registrar los
resultados.
5.2 Reacciones furfurálicas.
Reacción de Molisch

 Marque y prepare siete tubos de ensayo mezclando los volúmenes de cada solución
de acuerdo a la siguiente tabla
Reactivo Tubo 1 2 3 4 5 6 7 Resultado
# Coloración
violeta Si/No
Agua destilada 1 mL ------- ------- ------- ------- ------- -------
(Blanco)
Glucosa ------ 2 mL -------- ------- ------- ------- -------

Sacarosa ------ -------- 2 mL ------- ------- ------- -------

Ribosa ------ -------- -------- 2 mL ------- ------- -------

Almidón ------ -------- -------- ------- 2 mL ------- -------

Albúmina de ------ -------- ------- ------- ------- 2 mL -------

huevo

Sol. desconocida ------ -------- ------- ------- ------- ------- 2 mL

Molisch ------ 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas

Ácido sulfúrico 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL
Nota: tome la siguiente precaución adicionar todos los reactivos al tubo, excepto el ácido
sulfúrico. Una vez que haya vertido todos los reactivos en el tubo de ensayo, proceda a
agitarlo y entonces añada el ácido sulfúrico lentamente por las paredes del tubo y no lo
vuelva a agitar. Si el resultado es positivo usted observará un anillo color violeta en la
interface formada.

Recuerde que el ácido sulfúrico produce quemaduras, y la reacción de deshidratación

es altamente exotérmica, si se añade el ácido rápidamente se producirá explosión.
¡Tenga mucho cuidado!. Deje reposar los tubos cinco minutos y luego observe los
resultados.

Reacción de Seliwanoff

 Marque y prepare seis tubos de ensayo mezclando los volúmenes de cada solución
de acuerdo a la siguiente tabla:
Reactivo Tubo # 1 2 3 4 5 6 Resultado
Color rojo
Si/No
Agua destilada 1 mL ------- ------- ------- ------- -------
(Blanco)
Glucosa 1 mL -------- ------- ------- -------

Fructuosa -------- -------- 1 mL ------- ------- -------

Galactosa -------- -------- -------- 1 mL ------- -------

Sacarosa -------- -------- -------- ------- 1 mL -------

Sol. desconocida -------- -------- ------- ------- ------- 1 mL

Seliwanoff 5 mL 5 mL 5 mL 5 mL 5 mL 5 mL

Lleve los tubos de ensayo durante 10 minutos exactos en el baño de agua hirviendo,
luego retire los tubos y enfriemos bajo un flujo de agua corriente. Procede a observar
y dibujar los resultados.
Reacción de Bial

Prepare cuatro tubos de ensayo de acuerdo con lo descrito en el cuadro siguiente:

Reactivo Tubo # 1 2 3 4 Resultado
Coloración verde
Si/No
Agua destilada 1 mL ------- ------- ------- -------
(Blanco)
Glucosa ------- 1 mL -------- ------- -------
 Ribosa -------- -------- 1 mL ------- -------

Arabinosa -------- -------- -------- 1 mL -------

Sol. desconocida -------- -------- ------- ------- 1 mL

Bial 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL

Mantenga los tubos en baño de ebullición durante 15 minutos y proceda a leer los
resultados y a dibujarlos.

6. Resultados:

Representar la fórmula de cada uno de los azúcares ensayados en una tabla.

7. Preguntas:
 Represente la estructura abierta, proyección de Fisher y la estructura cíclica de la
glucosa y la fructosa.
 Indique cuál es el carbono anomérico en la estructura cíclica de la glucosa y la
fructuosa.
 Represente la estructura de la maltosa, la lactosa, la sacarosa y la celobiosa,
indicando que tipo de enlace glicosídico se establece entre sus unidades
monoméricas?
 Por qué la sacarosa dio negativa la prueba de Benedict?
 Qué diferencia observó entre los resultados de los monosacáridos y los
disacáridos?
 Por qué la albúmina de huevo, que es una proteína, dio positiva la prueba de
Molisch?
 Por qué la sacarosa dio positiva la prueba de Seliwanoff?
 A qué conclusión puede usted llegar con respecto a la arabinosa?
 Qué puede concluir de su solución desconocida

8. Referencias

MIYARES, M. CUADERNO DE TRABAJOS PRACTICOS DE BIOQUIMICA I.

Fundación Universitaria de Boyacá, Centro de Investigaciones para el desarrollo,
CIPADE. Tunja-Boyacá. 2000.

MARTINEZ, J. C. ANALISIS ORGANICO CUALITATIVO. Universidad Nacional de

Colombia, Facultad de Ciencias, Departamento de Química, Sede Bogotá. Agosto
de 1972.

CAREY F. QUIMICA ORGÁNICA. Tercera Edición. Mc Graw Hill. Madrid –España.

1999.