Anda di halaman 1dari 18

SIKLUS SEL

A. PENJELASAN TENTANG SIKLUS SEL


Hal yang paling penting tentang fungsi siklus sel adalah membagi DNA kromosom secara cermat
dan memisahkan salinan DNA secara cermat ke dalam sel anakan. Proses ini menggambarkan ke dua
tahapan utama siklus sel, duplikasi DNA terjadi pada fase S, yang membutuhkan waktu 10-12 jam dan
separuh waktu siklus sel di habiskan untuk fase ini pada hewan mamalia. Setelah fase S berakir, terjadinya
pemisahan organel sel dan kromosom, maka akan masuk ke tahap M, yang memerlukan sedikit
waktu(kurang dari 1 jam pada mamalia).
Kebanyakan sel membutuhkan waktu untuk tumbuh dan memperbesar ukuran dari protein dan
organel sel, yang mereka butuhkan untuk penggandaan DNA dan membelah diri. Sebagian membutuhkan
banyak waktu untuk tumbuh. G1 antara fase M dan Fase S, fase G2 antara fase S dan mitosis. Siklus sel
terdiri dari 4 tahapan yaitu G1, S, G2 dan M. G1, S dan G2 disebut dengan interfase, di dalam tubuh
manusia yang selnya berkembang biak dibutuhkan 23 jam untuk interfase dan 1 jam untuk fase M.
Sel membutuhkan waktu untuk memantau keadaan didalam dan diluar sel untuk memastikan
kondisi dan mempersipkan diri untuk fase S dan mitosis. Pentingnya tahapan G1 ditentukan kondisi
eksternal dan sinyal ekstraseluler dar sel lain. Jika kondisi ektraseluler kurang mendukung contohnya
keterlambatan proses G1 dan pada saat itu akan masuk ke fase peristirahatan atau G0, disana mereka bisa
bertahan 1 hari, seminggu, atau bahkan 1 tahun sampai proliferasi dilanjutkan kembali. Banyak sel ketika
berada fase G0 mereka akan mati. Jika kondisi ekstraseluler baik untuk tumbuh dan membelah diri, sel yang
berada di G1 awal atau G0 menuju titik dekat akhir G1 yang dikenal sebagai start (Pada ragi) atau titik
restriction (pada sel mamalia). Setelah titik ini, sel akan melakukan replikasi DNA, meskipun sinyal
ektraseluler dan pertumbuhan sel akan dihilangkan pada fase selanjutnya
Gambar 17-2. Proses mitosis dan
pembagian sel (sitokinesis) secara
bersamaan termasuk kedalam fase M,
fase M membutuhkan waktu yang
singkat dalam siklus sel. Berbeda dengan
Fase M, pada interfase membutuhkan
waktu yang lama. Lima langkah mitosis,
yang terjadi perubahan biokimia sel dan
terjadi peralihan dari metaphase ke
anaphase. Sel dapat berhenti pada
metaphase sebelum titik peralihan, tetapi
ketika telah melewati titik peralihan sel
terus ke akhir proses mitosis dan sampai
ke sitokinesis untuk memasuki interfase.
Replikasi DNA terjadi pada interfase.
Bagian dari interfase yang melakukan replikasi DNA disebut dengan fase S.

Gambar 17-3. Beberapa tahapan siklus sel,


sel akan tumbuh pada fase interfase
yang terdiri dari 3 tahapan: DNA
replikasi terjadi fase S,
G1merupakan gap antara fase M
dengan fase S, sedangkan G2 adalah
gap antara fase S dengan fase M.
Pada fase M nukleus dan sitoplasma
membagi.
Sistem Kendali Siklus Sel Sama di Semua Eukariota
Beberapa hal yang perlu digaris bawahi tentang siklus sel, termasuk membutuhkan waktu untuk
penyelesaian siklus sel, antar satu sel dengan lainnya sangat berbeda bahkan dalam organisme yang sama.
Susunan dasar siklus sel dan system pengendalinya, sama dalam setiap sel eukariotik. Protein merupakan
yang mengontrol siklus sel.
Sistem Pengendali Siklus Sel Bisa Dijelaskan Di Dalam Sel Ragi
Ragi kecil, jamur bersel tunggal yang mekanisme kontrol siklus sel
sangat mirip dengan kita. Dua spesies umumnya digunakan dalam studi
siklus sel. Pembelahan ragi Schizosaccharomyces pombe digunakan untuk memproduksi bir afrika. Sel
berbentuk batang yang tumbuh dengan perpanjangan pada ujung-ujungnya. Pembelahan terjadi dengan
pembentukan septum, atau sel lempeng, di tengah batang (Gambar 17-4A). Tunas ragi Saccharomyces
cerevisiae digunakan oleh pembuat bir, serta oleh tukang roti sekarang. Sel oval yang membagi dengan
membentuk tunas, yang pertama kali muncul selama G1 dan tumbuh terus sampai memisahkan dari sel
induk setelah mitosis (Gambar 17-4B)

Gambar 17-4. Perbandingan


Pembelahan pada siklus sel
ragi dengan tunas ragi. (a)
Pembelahan
Schizosaccharomyces pombe,
melalui tahapan G1, S, G2
dan M. Mikrotubul dari
benag-benang spindel
terbentuk didalam inti (hijau
muda) dan menempel dengan
kutup benang spindel (hijau
tua). Sel membelah membentuk sekat yang membagi (disebut plate sel ) menjadi dua sel.
Kromosom yang sudah membelah (merah) dapat dilihat dengan jelas pada pembelahan ragi,
tetapi kurang jelas pada pembelahan tunas ragi. (B) ragi yang perkembangannya normal pada
fase G1 dan S tetapi pada fase G2 terjadi ketidak stabilan. Sebagai gantinya mikrotubul mulai
membentuk nukleus selama fase S.
Dua jenis ragi juga dimanfaatkan untuk mempelajari genetika. Mereka bereproduksi dengan cepat
seperti bakteri dan ukuran genom 1% lebih kecil dari ukuran mamalia. Ragi ini bisa digunakan untuk
manipulasi gen. dimana gen bisa di hapus, digandakan atau diubah. Yang perlu diperhatikan gen ini tidak
bisa berkembang biak di dalam kondisi haploid, dimana hanya ada satu salinan gen yang hadir didalam sel.
Sel yang haploid, sangat mudah untuk diisolasi dan mempelajari mutasi yang menonaktifkan gen.
Banyak penemuan tentang sistem kendali siklus sel yang dating dari pencarian sistematik untuk
mutasi ragi, menjadikan gen pengkode tidak aktif di dalam siklus sel. Gen yang terkena mutasi disebut
dengan cdcgenes (cell-division-cycle genes). Banyak mutasi menyebabkan sel berhenti pada titik tertentu di
siklus sel, menunjukan bahwa produk dari gen normal diperlukan untuk sel melewati titik ini.

Gambar 17-5. Prilaku Cdc mutan pada kepekaan


terhadap suhu, (A) pada suhu rendah mutan
toleran dan bisa membelah diri secara
normal, ditemukan disetiap tahapan siklus
sel. (B) pada suhu tinggi, merupakan suhu
pembatas, dimana gen mutan berfungsi
dengan tidak normal, sel mutan akan lanjut
berkembang sampai siklus hingga tahapan tertentu dan
sel tidak mampu menyelesaikannya, karena cdc mutan
masih melanjutkan pertumbuhan, sel mutan menjadi
berukuran yang tidak normal. Sebagai pembanding sel
yang tidak mengalami cdc, jika prosesnya tidak
mencukupi perlu sepanjang siklus sel untuk biosintesis
dan pertumbuhan (seperti produksi ATP), berhenti secara
sembarangan pada tahap manapun ketika cadangan
biokimia keluar dari sel.
Pada tunas ragi, siklus sel bisa menangkap jenis ini yang
terditeksi dan dapat dilihat didalam sel, ada atau tidak adanya tunas
dan ukuran tunas, menandakan adanya mutan pada sel.
Gambar 17-6. Morfologi sel ragi yang berkembang
yang

ditangkap oleh cdc mutan, (A) Populasi normal sel ragi yang
berkembang biak, tunas berubah ubah ukuran sesuai dengan
fase yang dilaluinya (B) cdc mutan tumbuh dalam suhu yang
membatasi, cel menyelesaikan fase anafase tetapi tidak
selesai mitosis dan sitokenesis, sebagai hasilnya sel menjadi
membesar

B. KOMPONEN DARI SISTEM KONTROL SIKLUS SEL

Sistem Pengendalian siklus sel pemicu utama terjadinya Proses Siklus sel
Sebuah pusat pengontrol memicu setiap proses dalam satu urutan rangkaian siklus sel (Gambar 17-
13).
Gambar 17-13 proses yang penting di siklus sel seperti DNA Replikasi, mitosis dan sitokinesis dicetuskan
oleh system pengendali siklus sel. System pengendali siklus sel ditunjukan pada gambar ini berada pada
tengah, pengendali ini mengawasi atau mengendalikan berputar searah jarum jam. Memicu proses yang
penting ketika mencapai titik tertentu di luar putaran.

Pada prinsipnya, seseorang dapat membayangkan bahwa sistem kontrol yang paling dasar harus
memiliki fitur berikut:
1. Sebuah jam, atau pengatur waktu yang mengarur setiap peristiwa pada waktu tertentu, sehingga
memberikan ketetapan waktu untuk menyelesaikan setiap peristiwa atau setiap siklus.
2. Sebuah mekanisme untuk memulai peristiwa dalam urutan yang benar, masuk ke dalam mitosis,
misalnya, selalu harus datang setelah replikasi DNA.
3. Sebuah mekanisme untuk memastikan bahwa setiap peristiwa dipicu hanya sekali per siklus.
4. Terdiri dari 2 bagian (on / off) tombol yang memicu peristiwa sampai selesai, model yang permanen.
Ini jelas akan menjadi bencana, misalnya, jika peristiwa seperti pemadatan kromosom telah dimulai
tetapi tidak selesai.
5. Robustness/ketahanan adalah mekanisme cadangan untuk memastikan bahwa siklus dapat bekerja
dengan baik bahkan ketika terjadi kerusakan sistem.
6. Kemampuan beradaptasi, sehingga perilaku sistem dapat dimodifikasi agar sesuai dengan jenis sel
tertentu atau kondisi lingkungan.
Sistem Pengontrol Dapat menghentikan Siklus sel pada pos pemeriksaan
Gambar 17-14. Checkpoint dalam
sistem kontrol siklus sel.
Informasi tentang penyelesaian
peristiwa siklus sel, serta sinyal
dari lingkungan, dapat
menyebabkan sistem kontrol
menangkap siklus tertentu di
pos-pos pemeriksaan. Pos-pos
pemeriksaan yang paling
menonjol terjadi pada lokasi
ditandai dengan kotak kuning.

Dalam kebanyakan sel ada beberapa titik dalam siklus sel, yang disebut pos pemeriksaan, siklus
dapat ditahan jika peristiwa sebelumnya belum selesai (Gambar 17-14). Masuk ke mitosis dicegah,
misalnya, ketika DNA replikasi tidak lengkap, dan kromosom pemisahan mitosis tertunda jika beberapa
kromosom yang tidak benar melekat pada benang spindel.
Kemajuan melalui G1 dan G2 tertunda oleh mekanisme penghentian jika DNA dalam kromosom
rusak oleh radiasi atau bahan kimia. Penundaan tersebut di pos pemeriksaan kerusakan DNA dan
menyediakan waktu untuk DNA yang rusak untuk diperbaiki, setelah sel-siklus dihentikan dan dilepaskan
kembali apabila DNA sudah diperbaiki dan menuju pada fase selanjutnya.
Pos pemeriksaan adalah titik yang sangat penting dalam siklus sel di mana sistem kendali dapat
diatur oleh sinyal ekstraseluler dari sel-sel lain. Sinyal-sinyal yang dapat mendorong atau menghambat
perkembangan sel untuk bertindak mengatur perkembangan melalui sebuah pos pemeriksaan G1.
Pos pemeriksaan Umumnya Dioperasikan Karena Sinyal Intraseluler Negatif

Mekanisme Checkpoint seperti yang baru saja dijelaskan cenderung bertindak karena sinyal
intraseluler negative dalam penangkapan siklus sel, daripada melalui penghapusan sinyal positif yang
biasanya merangsang perkembangan siklus sel.
Misalnya, pos pemeriksaan yang memantau penempelan kromosom ke benang spindel. Jika sel
memasuki anafase dan mulai untuk memisahkan kromosom ke dalam sel anak terpisah sebelum semua
kromosom tepat terpasang, satu sel tidak menerima lengkap bagian kromosom, sedangkan anak lainnya
menerima dalam jumlah yang banyak. Sel mampu mendeteksi pemasangan dari kromosom tidak terikat
untuk mikrotubulus spindel. Dalam sebuah sel dengan kromosom banyak, jika masing-masing kromosom
mengirimkan sinyal positif ke sistem control siklus sel setelah itu terpasang, lampiran dari kromosom
terakhir akan sulit untuk mendeteksi, karena akan ditandai dengan bagian perubahan pecahan kecil dalam
intensitas total sinyal “GO”. Di sisi lain, jika setiap kromosom terikat mengirimkan negatif sinyal untuk
menghambat kemajuan melalui siklus sel, lampiran dari kromosom terakhir akan mudah terdeteksi karena
akan menyebabkan perubahan dari sinyal “stop” ke tidak ada sinyal . Argumen yang sama akan berarti
bahwa tidak terjadinya replikasi DNA menghambat inisiasi mitosis, menciptakan sinyal berhenti untuk
bertahan sampai selesainya replikasi DNA.
Bukti paling meyakinkan bahwa pos pemeriksaan beroperasi melalui negative sinyal berasal dari
penelitian sel di mana pos pemeriksaan tidak aktif oleh mutasi atau pengobatan kimia. Dalam sel, siklus sel
terus berkembang bahkan jika replikasi DNA atau perakitan spindel tidak lengkap, menunjukkan bahwa pos
pemeriksaan umumnya tidak penting untuk perkembangan siklus sel. Pos pemeriksaan dilihat sebagai sistem
pemberhentian, yang telah ditambahkan ke sistem pengendalian siklus sel untuk memberikan bentuk aturan
yang lebih canggih.
Meskipun sebagian besar pos pemeriksaan tidak penting perkembangan normal sel-siklus, pada pos
pemeriksaan sering mendeteksi populasi sel dengan penumpukan mutasi akibat kegagalan dalam replikasi
DNA, Perbaikan DNA, atau perakitan spindle.
Sistem Pengendalian siklus sel Berdasarkan Siklus yang Diaktifkan Protein Kinase
Pusat sistem kontrol siklus sel adalah keluarga protein kinase
dikenal sebagai cyclin-dependent kinase (Cdks). Kegiatan kinase naik dan turun seperti perkembangan sel
yang berlangsung selama siklus.
Perubahan siklus pada aktivitas Cdk dikendalikan oleh susunan kompleks enzim dan protein lainnya.
Yang paling penting dari regulator protein Cdk dikenal sebagai cyclin. Cdks tergantung pada cyclin untuk
aktivitasnya: kecuali mereka terikat erat ke cyclin, mereka memiliki aktivitas protein kinase (Gambar 17-
15).
Gambar 17-15. Dua komponen kunci dari sistem kontrol sel-siklus. A kompleks
cyclin dengan Cdk bertindak sebagai
protein kinase untuk memicu cellcycle
tertentu peristiwa. Tanpa cyclin, Cdk tidak
aktif.

Siklin awalnya bernama seperti itu karena mereka menjalani siklus sintesis dan degradasi dalam
setiap siklus sel. Level Cdk konstan dalam siklus sel sederhana. Perubahan kadar cyclin pada siklus
mengakibatkan perakitan siklik dan aktivasi cyclin-Cdk kompleks, pada akhirnya memicu aktivasi peristiwa
siklus sel (Gambar 17-16).
Gambar 17-16. Pandangan disederhanakan inti
dari sistem kontrol sel-siklus. Cdk rekan berturut-turut
dengan siklin yang berbeda untuk memicu berbeda
peristiwa siklus. Cdk kegiatan biasanya diakhiri oleh
degradasi cyclin.
Untuk mempermudah, hanya siklin yang bertindak
di fase S (S-cyclin) dan M fase (Mcyclin) ditampilkan,
dan mereka berinteraksi dengan Cdk tunggal, seperti yang
ditunjukkan, yang sehingga cyclin-Cdk kompleks yang
disebut sebagai S-Cdk dan M-Cdk, masing.

Ada empat kelas siklin, masing-masing ditentukan oleh tahap siklus sel pada yang mereka mengikat
Cdks dan fungsi. Tiga dari kelas-kelas yang diperlukan dalam semua eukariotik sel:
1. G1/ S-siklin mengikat Cdks pada akhir G1 dan berkomitmen sel DNA replikasi.
2. S-siklin mengikat Cdks selama fase S dan diperlukan untuk inisiasi DNA replikasi.
3. M-siklin mempromosikan peristiwa mitosis.
Dalam kebanyakan sel, kelas keempat siklin, G1-siklin, membantu mempromosikan bagian melalui
Start atau titik pembatasan dalam G1 akhir. Nama-nama Cdks individu dan siklin diberikan dalam Tabel 17-
1.

Bagaimana kompleks cyclin-Cdk


yang berbeda mendorong peristiwa
siklus sel? Jawabannya, tampaknya
bahwa protein cyclin tidak hanya
mengaktifkan pasangan Cdk, tetapi juga
mengarahkan ke protein target tertentu.
Sebagai akibatnya, masing-masing
cyclin-Cdk kompleks phosphorylates
substrat protein yang berbeda.
Kompleks cyclin-Cdk yang sama juga dapat menimbulkan efek yang berbeda pada waktu yang berbeda
dalam siklus, mungkin karena aksesibilitas beberapa substrat Cdk berubah selama siklus sel. Beberapa
protein yang berfungsi dalam mitosis, misalnya, dapat menjadi tersedia untuk fosforilasi hanya di G2.
Studi dari tiga-dimensi struktur protein Cdk dan cyclin mengungkapkan bahwa, dengan tidak adanya
cyclin, situs aktif dalam protein Cdk, sebagian terhalang oleh lempengan protein (Gambar 17-17A).
Pengikatan Cyclin menyebabkan lempeng menjauh dari situs aktif, sehingga aktivasi sebagian dari enzim
Cdk (Gambar 17-17B). Aktivasi penuh dari cyclin-Cdk kompleks terjadi ketika kinase yang terpisah, Cdk-
activating kinase (CAK), phosphorylates asam amino dekat pintu masuk situs Cdk aktif. Hal ini
menyebabkan perubahan konformasi kecil yang selanjutnya akan meningkatkan aktivitas Cdk,
memungkinkan kinase untuk memfosforilasi protein target secara efektif dan dengan demikian menginduksi
spesifik sel-siklus peristiwa
(Gambar 17-17C).
Gambar 17-17. Dasar struktural aktivasi Cdk. Gambar-
gambar didasarkan pada tiga-dimensi struktur manusia CDK2,
sebagaimana ditentukan oleh x-ray kristalografi. Lokasi ATP
terikat ditunjukkan. Enzim ditunjukkan di tiga negara. (A) Dalam
keadaan tidak aktif, tanpa terikat cyclin, situs aktif diblokir oleh
daerah dari protein yang disebut T-loop (merah). (B) The
mengikat cyclin menyebabkan T-loop untuk keluar dari situs
aktif, sehingga aktivasi parsial dari CDK2. (C) Fosforilasi CDK2
(oleh CAK) pada residu treonin di T-loop lebih mengaktifkan
enzim dengan mengubah bentuk T-loop, meningkatkan
kemampuan enzim untuk mengikat substrat proteinnya.

Aktivitas Cdk Bisa Ditekan Oleh Foforilasi Penghambat dan


Protein Penghambat.

Naik turunnya kadar cyclin adalah penentu utama


kegiatan Cdk selama siklus sel. Beberapa mekanisme tambahan,
penting untuk fine-tuning aktivitas Cdk pada tahap tertentu dalam
siklus sel. Aktivitas kompleks cyclin-Cdk dapat dihambat oleh
fosforilasi pada sepasang asam amino di atap sisi aktif. Fosforilasi sisi ini oleh protein kinase dikenal
sebagai Wee1 yang menghambat aktivitas Cdk, sementara defosforilasi dari sisi ini oleh fosfatase dikenal
sebagai Cdc25 yang meyebabkan aktivitas Cdk meningkat (Gambar 17-18).
Kita akan lihat nanti bahwa mekanisme pengaturan ini sangat penting dalam pengendalian akivitas
M-Cdk pada awal mitosis. Kompleks Cyclin-Cdk juga dapat diatur oleh pengikatan protein Cdk inhibitor
(CKIs). Ada beberapa protein CKI, yang terutama digunakan dalam kontrol fase G1 dan S. Struktur tiga
dimensi dari cyclin-Cdk-komplek CKI menunjukkan bahwa CKI mengikat secara dramatis mengatur ulang
struktur sisi aktif Cdk, membuatnya tidak aktif (Gambar 17-19).
Gambar 17-18. Pengaturan aktivitas Cdk oleh fosforilasi
penghambatan. Kompleks
cyclin-Cdk aktif dimatikan
ketika kinase Wee1
memfosforilasi dua sisi yang
berdekatan di atas sisi aktif.
Penghapusan fosfat oleh
fosfatase Cdc25 hasil aktivasi
dari kompleks cyclin-Cdk.
Untuk sederhananya, hanya satu
fosfat penghambatan
ditampilkan. Fosfat pengaktif
ditambahkan oleh CAK, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 17-
17.
Gambar 17-19. CKI merupakan penghambat kompleks cyclin-Cdk. Gambar ini didasarkan pada
struktur tiga dimensi dari kompleks cyclin Cdk2 manusia
yang terikat pada CKI p27 sebagaimana ditentukan oleh
kristalografi x-ray. p27 mengikat cyclin dan komplek Cdk,
mendistorsi sisi aktif Cdk
tersebut. p27 juga masuk ke
dalam sisi pengikat ATP,
akhirnya menghambat
aktivitas enzim.
Sistem Kontrol Siklus Sel Tergantung Pada Proteolisis
Kontrol siklus sel sangat bergantung pada setidaknya dua kompleks
enzim yang berbeda yang bertindak pada waktu yang berbeda dalam siklus
untuk menyebabkan proteolisis protein kunci dari sistem kontrol siklus sel,
sehingga menonaktifkan mereka. Terutama, komplek cyclin-Cdk yang tidak
aktif oleh proteolisis yang diregulasi siklin pada tahap siklus sel tertentu.
Kerusakan cyclin ini terjadi oleh mekanisme yang bergantung pada ubiquitin, seperti yang terlibat dalam
proteolisis banyak protein intraseluler lainnya. Sebuah kompleks enzim diaktifkan untuk mengenali urutan
spesifik asam amino pada siklin dan melekatkan beberapa salinan ubiquitin, menandai protein tersebut untuk
penghancuran lengkap di proteasomes.
Pembatasan laju dalam tahap kehancuran cyclin adalah reaksi akhir transfer ubiquitin yang
dikatalisis oleh enzim yang dikenal sebagai ligases ubiquitin (lihat Gambar 6-87B). Dua ligases ubiquitin
penting dalam penghancuran siklin dan regulator siklus sel lainnya. Dalam G1 dan fase S, sebuah kompleks
enzim yang disebut SCF bertanggung jawab atas ubiquitylation dan perusakan G1/S-cyclins dan beberapa
protein CKI yang mengontrol inisisai fase S. Dalam fase M, anaphase promoting complex (APC)
bertanggung jawab atas ubiquitylation dan proteolisis dari M-cyclin dan regulator mitosis lainnya.
Kedua kompleks multisubunit besar mengandung beberapa komponen terkait, tetapi mereka diatur
dengan cara yang berbeda. Aktivitas SCF konstan selama siklus sel. Ubiquitylation oleh SCF dikendalikan
oleh perubahan keadaan fosforilasi protein target: hanya fosforilasi protein khusus yang dikenali, diubiquity,
dan dihancurkan (Gambar 17-20A). Aktivitas APC, sebaliknya, berubah pada berbagai tahap siklus sel. APC
dihidupkan terutama oleh penambahan subunit pengaktif ke (Gambar 17-20B) kompleks. Kita akan
membahas fungsi SCF dan APC dengan lebih rinci nanti.

Gambar 17-20. Pengendalian proteolisis oleh SCF


dan APC selama siklus sel. (A)
fosforilasi protein target, seperti
ditampilkan yaitu CKI, memungkinkan
protein yang akan dikenali oleh SCF, yang
secara konstitutif aktif. Dengan bantuan
dari dua protein tambahan yang disebut E1
dan E2, SCF berfungsi sebagai ligase
ubiquitin yang mentransfer beberapa
molekul ubiquitin ke protein CKI. Protein
CKI ubiquitylated kemudian segera
dikenali dan terdegradasi dalam
proteasome. (B) M-cyclin ubiquitylation
dilakukan oleh APC, yang diaktifkan
dalam mitosis akhir dengan penambahan
suatu subunit pengaktivasi ke kompleks.
Kedua SCF dan APC berisi situs pengikat
yang mengenali sekuens asam amino
tertentu dari protein target.

Kontrol Siklus Sel juga Tergantung Pada Pengaturan Transkripsi


Kontrol siklus sel bergantung secara eksklusif pada mekanisme pasca-transkripsi yang melibatkan
regulasi aktivitas Cdk oleh fosforilasi dan pengikatan protein pengaturan seperti siklin, yang dengan
sendirinya diatur oleh proteolisis. Dalam siklus sel lebih kompleks, kontrol transkripsi memberikan
tambahan tingkat regulasi. Kadar cyclin di sebagian besar sel dikendalikan tidak hanya oleh perubahan
degradasi cyclin tetapi juga oleh perubahan transkripsi gen cyclin dan sintesis cyclin.

C. KONTROL INTRASELULER DARI PERISTIWA SIKLUS SEL

S-Phase cyclin-Cdk Kompleks (S-Cdks) Memulai Replikasi DNA Sekali Per Siklus
Sebuah sel harus memecahkan beberapa masalah dalam mengendalikan inisiasi dan penyelesaian
replikasi DNA. Tidak hanya harus replikasi terjadi dengan akurasi ekstrim untuk meminimalkan risiko
mutasi pada generasi sel berikutnya, tapi setiap nukleotida dalam genom harus disalin sekali, dan hanya
sekali, untuk mencegah efek merusak dari amplifikasi gen.
Sistem kontrol siklus sel memulai proses replikasi dan pada saat yang sama mencegah hal itu terjadi
lebih dari sekali per siklus. Petunjuk awal tentang pengaturan fase S berasal dari studi di mana sel-sel
manusia di berbagai tahapa siklus sel yang bergabung untuk membentuk sel tunggal dengan dua inti.
Percobaan ini menunjukkan bahwa ketika sel G1 menyatu dengan sel Sphase, replikasi DNA terjadi di
dalam inti G1 (mungkin dipicu oleh S-Cdk aktivitas di sel S-fase). Perpaduan dari sel G2 dengan sel S-fase,
bagaimanapun, tidak menyebabkan sintesis DNA dalam inti G2 (Gambar 17-21).

Gambar 17-21. Bukti dari eksperimen fusi sel untuk


menghalangi rereplication. Percobaan ini
dilakukan pada tahun 1970 dalam kultur sel
mamalia. (A) Hasil penelitian menunjukkan bahwa
S-fase sitoplasma mengandung faktor yang
mendorong inti G1 langsung ke sintesis DNA. (B)
Sebuah inti G2, setelah direplikasi DNA-nya,
refrakter terhadap faktor-faktor. (C) Penggabungan
dari sel G2 dengan sel G1 tidak mendorong inti G1
ke sintesis DNA, menunjukkan bahwa faktor sitoplasma yang ada untuk replikasi DNA dalam sel
fase S hilang ketika sel bergerak dari fase S ke G2. (Diadaptasi dari RT dan Johnson, PN Rao, Nature
226:717 722 1970.)
Studi ini memberikan petunjuk yang jelas bahwa sel-sel G1 hanya kompeten untuk memulai
replikasi DNA dan sel-sel yang telah menyelesaikan fase S (yaitu G2 sel) tidak mampu rereplicate DNA
mereka, bahkan ketika dilengkapi dengan S-Cdk aktivitas. Ternyata, perjalanan melalui mitosis diperlukan
untuk sel untuk memperoleh kembali kemampuan untuk menjalani fase S.
Replikasi DNA dimulai pada origin of replication, yang tersebar di berbagai lokasi di kromosom.
Asal replikasi sederhana dan didefinisikan dengan baik pada tunas jamur S. cerevisiae, dan sebagian besar
pemahaman kita tentang mesin inisiasi berasal dari studi organisme ini. Analisis protein yang mengikat
replikasi origin jamur telah diidentifikasi yaitu sebuah kompleks multiprotein besar yang dikenal sebagai
origin recognition complex (ORC). Kompleks ini berikatan dengan replikasi origin sepanjang siklus sel
dan berfungsi sebagai landasan pendaratan untuk beberapa protein pengaturan tambahan.
Salah satu dari protein pengaturan ini adalah Cdc6. Cdc6 hadir pada tingkat rendah selama sebagian
besar dari siklus sel tetapi meningkatkan secara sementara di G1 awal. Cdc6 berikatan dengan ORC pada
asal replikasi di G1 awal, dimana diperlukan untuk pengikatan kompleks yang terdiri dari suatu kelompok
protein yang terkait erat, protein Mcm. Kompleks protein yang dihasilkan besar, dibentuk pada origin yang
dikenal sebagai prereplicative compleks, atau pra-RC (Gambar 17-22).
Gambar 17-22. Inisiasi replikasi DNA sekali per siklus sel.
ORC tetap berhubungan dengan replikasi origin
sepanjang siklus sel. Pada G1 awal, Cdc6 berasosiasi
dengan ORC. Dibantu oleh Cdc6, kompleks cincin
Mcm kemudian berikatan dengan DNA yang
berdekatan, sehingga terjadi pembentukan kompleks
prereplicative. S-Cdk (dengan bantuan dari protein
kinase lain, tidak ditampilkan) kemudian memicu
penembakan origin, perakitan polimerase DNA dan
replikasi protein lainnya dan mengaktifkan cincin
protein Mcm untuk bermigrasi sepanjang untai DNA
sebagai helicases DNA. S-Cdk juga menghalangi
rereplication dengan menyebabkan pemisahan Cdc6
dari origin, mendegradasi, dan mengekspor semua
kelebihan Mcm keluar inti. Cdc6 dan Mcm tidak dapat
melanjutkan kembali replikasi DNA sampai M-Cdk
telah dinonaktifkan pada akhir mitosis (lihat teks).
Setelah pra-RC dirakit di G1, replikasi origin siap untuk
tembakan. Aktivasi S-Cdk di G1 akhir menarik pemicu dan
memulai replikasi DNA. Inisiasi replikasi juga membutuhkan
aktivitas protein kinase kedua, yang bekerja sama dengan S-
Cdk menyebabkan fosforilasi ORC. S-Cdk tidak hanya memulai menembakkan origin, tetapi juga
membantu mencegah rereplication dalam beberapa cara. Pertama, hal itu menyebabkan protein Cdc6 untuk
memisahkan dari ORC setelah origin ditembakkan. Ini hasil dari pembongkaran pra-RC, yang mencegah
replikasi terjadi lagi di origin yang sama. Kedua, mencegah protein Cdc6 dan Mcm merangkai kembali pada
origin lainnya. Fosforilasi Cdc6, memicu ubiquitylation Cdc6 oleh kompleks enzim SCF. Akibatnya, setiap
protein Cdc6 yang tidak terikat dengan origin akan terdegradasi dalam proteasomes. S-Cdk juga
memfosforilasi protein Mcm tertentu, yang memicu ekspor mereka dari inti, selanjutnya memastikan bahwa
kompleks protein Mcm tidak dapat mengikat replikasi origin (lihat Gambar 17-22).
Aktivitas S-Cdk tetap tinggi selama G2 dan awal mitosis, mencegah rereplication yang terjadi setelah
selesainya fase S. M-Cdk juga membantu memastikan rereplication yang tidak terjadi selama mitosis dengan
memfosforilasi protein Cdc6 dan Mcm. G1/S-Cdks membantu juga, dengan menginduksi ekspor Mcm dari
inti, memastikan bahwa kelebihan protein Mcm yang belum terikat ke origin di G1 akhir dibawa keluar dari
aktivitas sebelum replikasi dimulai. Dengan demikian, beberapa kompleks cyclin-Cdk bekerja sama untuk
menahan perakitan pra-RC dan mencegah rereplication DNA setelah fase S.
Sistem kontrol siklus sel terulang kembali untuk memungkinkan replikasi terjadi dalam siklus sel
berikutnya karena pada akhir mitosis, semua aktivitas Cdk dalam sel dikurangi menjadi nol. Hasil dari
defosforilasi Cdc6 dan protein Mcm memungkinkan perakitan pra-RC terjadi sekali lagi, menyiapkan
kromosom untuk putaran baru dari replikasi.
Aktivasi dari M-Phase cyclin-Cdk Komplexs (MCdks) Memicu Masuk ke Mitosis
Peristiwa mitosis yang dipicu oleh M-Cdk, yang diaktifkan setelah fase S selesai. Aktivasi M-Cdk
dimulai dengan akumulasi M-cyclin (cyclin B dalam sel vertebrata, lihat Tabel 17-1). Dalam siklus sel
embrio, sintesis M-cyclin konstan sepanjang siklus sel, dan hasil akumulasi M-cyclin berasal dari penurunan
degradasi.
Pada kebanyakan jenis sel, sintesis Mcyclin meningkat selama G2 dan M, terutama untuk
peningkatan M-cyclin transkripsi gen. Peningkatan protein M-cyclin mengarah ke akumulasi bertahap dari
M-Cdk (kompleks Cdk1 dan M-cyclin) sebagai pendekatan sel mitosis. Meskipun Cdk dalam kompleks
difosforilasi pada sisi aktif oleh enzim CAK, itu terjadi pada keadaan yang tidak aktif oleh fosforilasi
hambat di dua sisi tetangga oleh protein kinase Wee1 (lihat Gambar 17-18). Dengan demikian, pada saat sel
mencapai akhir G2, berisi persediaan melimpah dari M-Cdk yang prima dan siap untuk bertindak, namun
aktivitas M-Cdk ini ditekan oleh kehadiran dua kelompok fosfat yang memblokir situs aktif dari kinase.
Peristiwa yang sangat penting adalah aktivasi pada akhir G2 dari fosfatase, protein Cdc25 yang
menghilangkan fosfat penghambatan yang menahan M-Cdk (Gambar 17-23). Pada saat yang sama, aktivitas
inhibisi kinase Wee1 juga ditekan, selanjutnya memastikan bahwa aktivitas M-Cdk meningkat secara tiba-
tiba. Dua protein kinase mengaktifkan Cdc25. Satu, yang dikenal sebagai Polo kinase, phosphorylates
Cdc25 pada satu set sisi. Kinase pengaktif lainnya adalah M-Cdk sendiri, yang memfosforilasi sisi yang
berbeda di Cdc25. M-Cdk juga memfosforilasi dan menghambat Wee1. Kemampuan M-Cdk untuk
mengaktifkan aktivatornya sendiri (Cdc25) dan menghambat inhibitor sendiri (Wee1) menunjukkan bahwa
aktivasi M-Cdk dalam mitosis melibatkan umpan balik yang positif (lihat Gambar 17-23).
Gambar 17-23. Aktivasi M-Cdk. Cdk1
berasosiasi dengan M-cyclin sehingga kadar M-
cyclin perlahan naik. Kompleks M-Cdk yang
dihasilkan terfosforilasi pada sisi aktif oleh
kinase pengaktif Cdk (CAK) dan sepasang situs
penghambatan oleh kinase Wee1. Kompleks M-
Cdk tidak aktif yang dihasilkan kemudian
diaktifkan pada akhir G2 oleh fosfatase Cdc25.
Cdc25 dirangsang sebagian oleh Polo kinase.
CDC25 selanjutnya dirangsang oleh aktif M-
Cdk, menghasilkan umpan balik positif. Umpan balik ini ditingkatkan oleh kemampuan M-Cdk untuk
menghambat WeeI
Masuk ke Mitosis Dihambat oleh Replikasi DNA yang tidak lengkap: Checkpoint Replikasi DNA
Jika sel didorong ke mitosis sebelum selesai mereplikasi DNAnya, ia akan mewariskan set rusak atau
kromosom yang tidak lengkap ke sel anaknya. Bencana ini dihindari di sebagian besar sel dengan
mekanisme checkpoint replikasi DNA, yang menjamin bahwa inisiasi mitosis tidak dapat terjadi sampai
nukleotida terakhir di genom telah disalin. Sensor mekanisme, molekul alami yang tidak diketahui,
mendeteksi dengan baik DNA yang belum direplikasi dan mengirim sinyal negatif ke sistem kontrol siklus
sel, menghalangi aktivasi M-Cdk.
Dengan demikian, sel-sel normal diobati dengan inhibitor kimia sintesis DNA, seperti hidroksiurea,
tidak beranjak ke mitosis. Jika mekanisme checkpoint rusak, seperti dalam sel ragi dengan mutasi tertentu
atau dalam sel mamalia diobati dengan dosis tinggi kafein, sel terjun ke dalam mitosis bunuh diri meskipun
gagal untuk menyelesaikan replikasi DNA (Gambar 17-24). Sasaran akhir dari sinyal checkpoint negatif
adalah enzim yang mengontrol aktivasi M-Cdk. Sinyal negatif mengaktifkan protein kinase yang
menghambat protein fosfatase Cdc25 (lihat Gambar 17-18 dan 17-23). Akibatnya, MCdk tetap terfosforilasi
dan aktif sampai replikasi DNA selesai.
Gambar 17-24. Pos pemeriksaan replikasi
DNA. Dalam percobaan yang digambarkan sini,
sel-sel mamalia dalam kultur diobati dengan
kafein dan hidroksiurea, baik sendiri atau dalam
kombinasi. Hydroxyurea menghalangi sintesis
DNA. Penghambatan ini mengaktifkan
mekanisme checkpoint yang penahanan sel dalam
fase S, mitosis tertunda. tetapi jika kafein dan
hidroksiurea ditambahkan, mekanisme checkpoint gagal, dan sel melanjutkan ke mitosis sesuai dengan
jadwal normal mereka, dengan replikasi DNA yang tidak sempurna. Akibatnya, sel-sel mati.
M-Cdk Mempersiapkan Penggandaan Kromosom untuk Pembelahan
Salah satu karakteristik yang paling luar biasa dari kontrol siklus sel adalah protein kinase tunggal,
M-Cdk, yang mampu membawa semua penyusun ulang beragam dan kompleks yang terjadi pada tahap awal
mitosis. M-Cdk harus mendorong perakitan spindel mitosis dan memastikan bahwa kromosom yang
bereplikasi menempel pada spindel. Pada kebanyakan organisme, M-Cdk juga memicu kondensasi
kromosom, kerusakan membran inti, penataan ulang aktin sitoskeleton, dan reorganisasi aparatus Golgi dan
retikulum endoplasma. Masing-masing kejadian diduga dipicu ketika M-Cdk memfosforilasi struktur
tertentu atau protein regulasi yang terlibat dalam kegiatan tersebut, meskipun sebagian besar dari protein
ini belum diidentifikasi.
Kerusakan dari membran inti, misalnya, memerlukan pembongkaran lapisan dasar lamina inti yaitu
filamen Lamin terpolimerisasi yang memberikan struktur kaku membran inti. Fosforilasi langsung protein
Lamin oleh M-Cdk hasil depolimerisasinya, merupakan langkah awal yang penting dalam pembongkaran
membran (lihat Gambar 12-21).
Kondensasi kromosom juga tampaknya menjadi konsekuensi langsung dari fosforilasi oleh M-Cdk.
Sebuah kompleks lima protein, yang dikenal sebagai kompleks condensin, diperlukan untuk kondensasi
kromosom pada embrio Xenopus. Setelah M-Cdk difosforilasi beberapa subunit pada kompleks, dua dari
subunit mampu mengubah struktur melingkar molekul DNA dalam tabung reaksi. Diperkirakan bahwa
kegiatan melingkar (coiling) penting untuk kondensasi kromosom selama mitosis.
Fosforilasi oleh M-Cdk juga memicu penyusunan ulang mikrotubulus kompleks dan peristiwa lain
yang menyebabkan perakitan gelendong mitosis. Seperti dibahas dalam Bab 18, M-Cdk diketahui
memfosforilasi sejumlah protein yang mengatur sifat mikrotubulus, menyebabkan peningkatan
ketidakstabilan mikrotubulus yang diperlukan untuk perakitan spindel.
Pemisahan Sister Kromatid dipicu oleh Proteolysis.
Setelah M-Cdk memicu penyusunan ulang kompleks yang terjadi pada mitosis awal, siklus sel
mencapai puncaknya dengan pemisahan sister kromatid pada transisi metafase-ke-anafase. Meskipun
aktivitas M-Cdk menyiapkan tahap untuk peristiwa ini, sebuah kompleks enzim yang berbeda yakni
anaphase-promoting complex (APC) yang memulai pemisahan sister kromatid. APC sangat diatur ligase
ubiquitin yang mendorong penghancuran beberapa regulasi protein mitosis (lihat Gambar 17-20B).
Keterikatan dari dua sister kromatid ke kutub yang berlawanan oleh gelendong mitotik hasil mitosis
awal dalam kekuatan cenderung menarik dua kromatid terpisah. Kekuatan menarik ini pada awalnya
menolak karena sister kromatid terikat erat bersama-sama, baik di sentromer dan sepanjang lengan mereka.
Kohesi sister-kromatid tergantung pada kompleks protein, kompleks kohesi, yang disimpan di sepanjang
kromosom ketika digandakan dalam fase S. Protein cohesin (cohesins) berkaitan erat dengan protein
kompleks condensin terlibat dalam kondensasi kromosom, menyarankan asal evolusi yang sama untuk dua
proses.
Anafase dimulai dengan gangguan tiba-tiba pada kohesi antara sister kromatid, yang memungkinkan
mereka untuk pemisahan dan pindah ke kutub yang berlawanan dari poros. Proses ini dimulai oleh kaskade
penanda dari peristiwa sinyal. Pemisahan sister kromatid membutuhkan aktivasi enzim kompleks APC,
mendorong proteolisis yang merupakan pusat proses (Gambar 17-25). Target yang relevan dari APC adalah
protein securin. Sebelum anafase, mengamankan ikatan dan menghambat aktivitas protease disebut
separase. Penghancuran securin pada akhir metafase melepaskan separase, yang kemudian bebas untuk
membelah salah satu subunit dari kompleks cohesin. Dalam sekejap, kompleks kohesi menjauh dari
kromosom, dan sister kromatid terpisah (Gambar 17-26).
Gambar 17-25: Dua percobaan yang menunjukkan
kebutuhan akan
degradasi protein untuk keluar dari mitosis. (A) Sebuah
inhibitor APC telah ditambahkan ke ekstrak telur katak
menjalani mitosis in vitro (lihat Gambar 17-9). Inhibitor mitosis
ditangkap di metafase, menunjukkan proteolitik yang
diperlukan untuk pemisahan sister kromatid pada transisi
metafase-ke-anafase. Sebuah penangkapan yang sama terjadi
pada ragi kuncup dengan mutasi pada komponen APC. (B)
Suatu bentuk mutan nondegradable dari M-cyclin telah ditambahkan ke ekstrak telur mitosis katak. Selain
ini ditangkap mitosis setelah pemisahan sister kromatid, menunjukkan bahwa penghancuran M-cyclin tidak
diperlukan untuk pemisahan sister kromatid, melainkan diperlukan untuk keluar dari mitosis berikutnya.
(Berdasarkan SL Holloway et al, sel 73:1393 1402., 1993).
Aktivasi APC membutuhkan Cdc20 protein, yang mengikat dan mengaktifkan APC di mitosis (lihat
Gambar 17-26 dan 17-20B). Setidaknya dua proses yang mengatur Cdc20 dan ini berhubungan dengan
APC. Pertama, meningkatkan sintesis Cdc20 sebagai sel
pendekatan mitosis, karena peningkatan transkripsi gen.
Kedua, fosforilasi APC membantu Cdc20 mengikat APC,
sehingga membantu untuk menciptakan sebuah kompleks yang
aktif.
Gambar 17-26. Pemisahan sister kromatid dipicu oleh
APC. Aktivasi APC oleh Cdc20 mengarah ke ubiquitylation
dan penghancuran securin, yang biasanya menahan separase
dalam keadaan tidak aktif. Kehancuran securin memungkinkan separase untuk membelah subunit kompleks
cohesin yang mengikat sister kromatid. Kekuatan menarik dari gelendong mitosis kemudian menarik
kromatid kakak terpisah. Dalam kuncup ragi setidaknya, pembelahan cohesin oleh separase difasilitasi oleh
fosforilasi kompleks cohesin yang berdekatan dengan tempat pembelahan, tepat sebelum anafase dimulai.
Fosforilasi ini dimediasi oleh Polo kinase dan memberikan kontrol tambahan pada waktu transisi metafase-
ke-anafase.
Kromosom yang lepas menghalangi pemisahan sister kromatid: Checkpoint spindle.
Sel tidak mempersiapkan dirinya untuk peristiwa anafase sebelum sepenuhnya siap. Pada
kebanyakan sel, mekanisme pemeriksaan spindle beroperasi untuk memastikan bahwa semua kromosom
benar melekat pada poros/spindle sebelum pemisahan sister kromatid terjadi. Checkpoint tergantung pada
mekanisme sensor yang memantau keadaan kinetokor, wilayah khusus dari kromosom yang melekat ke
mikrotubulus pada spindle. Setiap kinetokor yang tidak benar melekat pada spindle mengirimkan sinyal
negatif ke sistem kontrol siklus sel, memblokir aktivasi Cdc20-APC dan pemisahan sister kromatid.

Gambar 17-27. Protein Mad2 pada kinetochores yang tidak terikat.


Mikrograf fluoresensi ini menunjukkan sel mamalia di prometaphase, dengan
gelendong mitosis di hijau dan sister kromatid dengan warna biru. Salah satu
pasangan sister kromatid belum melekat pada spindle. Kehadiran Mad2 pada
kinetokor dari kromosom tidak terikat dijelaskan dengan pengikatan antibodi
anti-Mad2 (red dot, ditunjukkan oleh panah merah). Kromosom lain baru saja
melekat pada spindle, dan kinetokor yang memiliki tingkat rendah Mad2
masih terhubung dengan itu (Titik pucat, ditunjukkan oleh panah putih). (Dari
JC Waters et al, J. sel Biol.., 141:1181 1.191 1.998 © The Rockefeller
University Press..)

Sifat alami dari sinyal yang dihasilkan oleh kinetokor yang tidak terikat tidak jelas, meskipun
beberapa protein, termasuk Mad2, yang direkrut untuk kinetochores tak terikat dan diperlukan untuk pos
pemeriksaan spindle supaya berfungsi. Bahkan kinetokor tunggal tidak terikat dalam sel hasil pengikatan
Mad2 dan penghambatan aktivitas Cdc20-APC dan penghancuran Securin (Gambar 17-27). Jadi, pemisahan
sister kromatid tidak dapat terjadi sampai kinetokor terakhir melekat.
Keluar dari Mitosis Membutuhkan Inaktivasi M-Cdk
Setelah kromosom telah dipisahkan ke kutub, sel harus membalikkan perubahan kompleks mitosis
awal. Spindle harus dibongkar, kromosom didecondensasi, dan membran nukleus direformasi. Karena dari
fosforilasi berbagai protein bertanggung jawab untuk menempatkan sel-sel dalam mitosis pada awalnya,
tidak mengherankan bahwa defosforilasi protein yang sama diperlukan untuk membuat mereka keluar. Pada
prinsipnya, ini dephosphorylations dan keluar dari mitosis bisa dipicu oleh inaktivasi M-Cdk, aktivasi
fosfatase, atau keduanya. Bukti menunjukkan bahwa inaktivasi M-Cdk yang utama bertanggung jawab.
Inaktivasi M-Cdk terutama terjadi oleh ubiquitin-tergantung proteolisis dari M-cyclins.
Ubiquitylation dari cyclin biasanya dipicu oleh kompleks Cdc20-APC yang sama yang mempromosikan
kehancuran Securin pada transisi metafase-to anaphase (lihat Gambar
17-20B). Dengan demikian, aktivasi kompleks Cdc20-APC mengarah
tidak hanya untuk anafase, tetapi juga untuk Inaktivasi M-Cdk yang
pada gilirannya menyebabkan semua peristiwa lain sehingga sel keluar
dari mitosis
Tahap G1 merupakan keadaan Ketidakaktifan Cdk Stabil
Dalam embrio hewan awal, inaktivasi M-Cdk di akhir mitosis
karena hampir seluruhnya aksi dari Cdc20-APC. Dengan demikian,
penghancuran Mcyclin di akhir mitosis segera mengarah ke inaktivasi
semua aktivitas APC dalam sel embrio. Ini adalah pengaturan yang
berguna dalam siklus sel embrio yang cepat, seperti inaktivasi APC segera setelah mitosis memungkinkan
sel untuk cepat mulai mengumpulkan M-cyclin baru untuk siklus berikutnya (Gambar 17-28A).

Gambar 17-28. Variasi dari fase G1 dengan menghambat Cdk stabil setelah
mitosis. (A) Pada awal siklus sel embrio, aktivitas Cdc20-APC meningkat pada akhir metafase,
memicu penghancuran M-cycli. Karena aktivitas M-Cdk merangsang merangsang Cdc20-APC,
hilangnya M-cyclin menyebabkan inaktivasi APC setelah mitosis, yang memungkinkan M-cyclin
mulai digumpulkan lagi. (B) Dalam sel yang mengandung fase G1, penurunan aktivitas M-Cdk pada
mitosis akhir mengarah pada aktivasi Hct1-APC (serta akumulasi protein CKI, tidak ditampilkan).
Hal ini memastikan penekanan terus aktivitas Cdk setelah mitosis, seperti yang diperlukan untuk fase
G1
Akumulasi cyclin yang cepat, segera setelah mitosis tidak berguna, dalam siklus sel yang berisi fase
G1. Dalam siklus ini, perkembangan ke tahap berikutnya S tertunda di G1 untuk memungkinkan
pertumbuhan sel dan siklus yang akan diatur oleh sinyal ekstraseluler. Dengan demikian, kebanyakan sel
melakukan beberapa mekanisme untuk memastikan bahwa reaktivasi Cdk dicegah setelah mitosis. Salah
satu mekanisme memanfaatkan protein lain yang mengaktifkan APC disebut Hct1, kerabat dekat dari
Cdc20.
Meskipun kedua Hct1 dan Cdc20 mengikat dan mengaktifkan APC, mereka berbeda dalam satu hal
penting. Kompleks Cdc20-APC diaktifkan oleh M-Cdk, kompleks Hct1-APC dihambat oleh M-Cdk, yang
secara langsung memphosphorylates Hct1. Sebagai hasil dari hubungan ini, peningkatan aktivitas Hct1-APC
di akhir mitosis setelah kompleks Cdc20-APC memulai penghancuran M-cyclin. Kehancuran M-cyclin akan
berlanjut setelah mitosis: meskipun aktivitas Cdc20-APC telah menurun, aktivitas Hct1-APC tinggi
(Gambar 17-28B).
Mekanisme kedua yang menekan aktivitas Cdk di G1 tergantung pada peningkatan produksi CKIs,
protein penghambat Cdk dibahas sebelumnya. Pengikatan sel ragi, di mana mekanisme ini paling baik
dipahami, mengandung protein yang disebut CKI Sic1, yang mengikat dan menonaktivkan M-Cdk di akhir
mitosis dan G1. Seperti Hct1, Sic1 dihambat oleh M-Cdk, yang memphosphorylasi Sic1 selama mitosis. M-
Cdk juga phosphorylates dan menghambat protein regulasi gen yang diperlukan untuk sintesis Sic1,
sehingga produksi Sic1 menurun. Dengan demikian, Sic1 dan M-Cdk, seperti Hct1 dan M-Cdk, saling
menghambat satu sama lain. Akibatnya, penurunan aktivitas M-Cdk yang terjadi pada akhir mitosis memicu
akumulasi cepat protein Sic1, dan CKI membantu memastikan bahwa aktivitas M-Cdk yang stabil terhambat
setelah mitosis.
Pada kebanyakan sel, inaktivasi M-Cdk dalam mitosis akhir juga hasil dari penurunan transkripsi
gen M-cyclin. Dalam tunas ragi, misalnya, M-Cdk mempromosikan ekspresi gen, sehingga menghasilkan
umpan balik yang positif. Loop ini dimatikan sel keluar dari mitosis: inaktivasi M-Cdk oleh Hct1 dan Sic1
mengarah pada penurunan transkripsi gen M-cyclin dan dengan demikian menurun sintesis M-cyclin.
Singkatnya aktivitas Hct1-APC, akumulasi CKI, dan penurunan produksi cyclin bertindak bersama-
sama untuk memastikan bahwa awal fase G1 adalah saat ketika semua aktivitas Cdk ditekan. Seperti di
banyak aspek lain dari kontrol siklus sel, penggunaan bebarapa mekanisme pengaturan membuat sistem
menekan dengan kuat, sehingga masih beroperasi dengan efisiensi yang wajar bahkan jika salah satu
mekanisme gagal.
Bagaimana sel lepas dari keadaan stabil G1 untuk memulai fase S? Seperti yang kita uraikan nanti,
lepas biasanya terjadi melalui akumulasi G1-siklin. Pada tunas ragi, misalnya, siklin ini tidak menjadi
sasaran perusakan oleh Hct1-APC dan tidak dihambat oleh Sic1. Akibatnya, akumulasi G1 cyclin
menyebabkan peningkatan unopposed pada aktivitas G1-Cdk (Gambar 17-29). Pada sel-sel hewan,
akumulasi G1-siklin dirangsang oleh sinyal ekstraseluler yang mendorong proliferasi sel, seperti yang kita
bahas nanti.
Gambar 17-29. Pengendalian perkembangan G1 oleh
aktivitas Cdk dalam kuncup ragi. Sel-sel keluar dari
mitosis dan menonaktifkan M-Cdk, menghasilkan
peningkatan Hct1 dan aktivitas Sic1 hasil dari inaktivasi
Cdk stabil selama G1. Ketika kondisi yang tepat untuk
memasuki siklus sel baru, peningkatan G1-Cdk dan G1/S-
Cdk menyebabkan penghambatan Sic1 dan Hct1 oleh
fosforilasi, memungkinkan aktivitas S-Cdk meningkat.
Pada tunas ragi, aktivitas G1-Cdk memicu
transkripsi gen G1/S-cyclin, menyebabkan peningkatan
sintesis G1/S-cyclins dan pembentukan kompleks G1 / S-
Cdk, yang juga tahan terhadap Hct1-APC dan Sic1 .
Aktivitas G1/S-Cdk meningkat memulai peristiwa
persiapan sel untuk memasuki fase S. Ini merangsang transkripsi gen cyclin-S, yang mengarah ke sintesis S-
siklin dan pembentukan kompleks S-Cdk. Kompleks ini dihambat oleh Sic1, tapi fosforilasi G1/S-Cdk dan
inaktivasi Sic, menyebabkan aktivai S-Cdk. G1/S-Cdk dan S-Cdk juga memfosforilasi dan menonaktifkan
Hct1-APC. Dengan demikian, loop umpan balik yang sama yang memicu dengan cepat inaktivasi M-Cdk
dalam mitosis akhir sekarang bekerja secara terbalik pada akhir G1 untuk memastikan aktivasi cepat dan
lengkap dari aktivitas S-Cdk.
The Protein Rb Berfungsi sebagai rem dalam G1 Sel Mamalia
Pengendalian perkembangan G1 dan inisiasi S-fase sering terganggu dalam sel kanker, menyebabkan
tidak terkendalinya siklus sel masuk dan proliferasi sel.
Sel hewan menekan aktivitas Cdk di G1 oleh tiga mekanisme yang sama disebutkan sebelumnya
untuk ragi budding: aktivasi Hct1, akumulasi dari protein CKI (p27 dalam sel mamalia), dan penghambatan
transkripsi gen cyclin.
Seperti dalam ragi, aktivasi kompleks G1-Cdk membalikkan semua tiga mekanisme penghambatan
di akhir G1. Efek terbaik dipahami dari aktivitas G1-Cdk dalam sel-sel hewan yang dimediasi oleh protein
regulasi gen yang disebut E2f. Ini terikat pada urutan spesifik DNA dalam promotor dari banyak gen yang
menyandi protein yang diperlukan untuk masuk S-fase, termasuk G1/S-cyclins dan S-siklin. Fungsi utama
E2f dikendalikan oleh interaksi dengan protein retinoblastoma (Rb), penghambat perkembangan siklus sel.
Selama G1, Rb mengikat E2f dan menghambat transkripsi gen fase S. Ketika sel-sel dirangsang untuk
memisah oleh sinyal ekstraseluler, G1-Cdk aktif menumpuk dan phosphorylates Rb, mengurangi afinitas
untuk E2f. Rb kemudian berdisosiasi, memungkinkan untuk E2f mengaktifkan ekspresi gen Sfase (Gambar
17-30).

Gambar 17-30. Mekanisme pengendalian inisiasi fase


S pada sel hewan. Aktivitas G1-Cdk (cyclin D-
CDK4) memulai fosforilasi Rb. Inactivates Rb
ini, membebaskan E2f untuk mengaktifkan
transkripsi gen fase S, termasuk gen untuk G1/S-
cyclin (cyclin E) dan S-cyclin (cyclin A).
Tampilan yang dihasilkan dari kegiatan G1/S-
Cdk dan S-Cdk lebih meningkatkan fosforilasi
Rb, membentuk sebuah loop umpan balik positif.
E2f bertindak kembali untuk merangsang transkripsi gen sendiri, membentuk satu lingkaran umpan
balik positif.
Sistem kontrol transkripsi ini, seperti begitu banyak sistem kontrol lain yang mengatur siklus sel,
termasuk loop umpan balik yang mempertajam transisi G1 / S (lihat Gambar 17-30):
 E2f dibebaskan meningkatkan transkripsi gennya sendiri.
 E2f-tergantung transkripsi dari gen G1/S-cyclin dan S-cyclin mengarah ke peningkatan aktivitas
G1/S-Cdk dan S-Cdk, yang pada akhirnya meningkatkan fosforilasi Rb dan mendorong rilis E2f
lanjut.
 Peningkatan kegiatan G1/S-Cdk dan S-Cdk meningkatkan fosforilasi Hct1 dan p27, menyebabkan
inaktivasi atau perusakan.
Seperti dalam sel ragi, hasil dari semua interaksi adalah aktivasi cepat dan lengkap dari S-Cdk
kompleks yang diperlukan untuk inisisasi fase S.
Protein Rb awalnya diidentifikasi melalui studi dari bentuk warisan kanker mata pada anak-anak,
yang dikenal sebagai retinoblastoma (dibahas dalam Bab 23). Hilangnya kedua salinan gen Rb
menyebabkan proliferasi sel yang berlebihan dalam retina yang belum matang, menunjukkan bahwa protein
Rb sangat penting untuk menahan laju pembelahan sel dalam retina berkembang. Kehilangan Rb secara
tidak langsung menyebabkan peningkatan proliferasi tipe sel lainnya, sebagian karena Hct1 dan p27
memberikan bantuan dalam kontrol G1, dan sebagian karena tipe sel lainnya mengandung protein Rb yang
memberikan dukungan cadangan dalam ketiadaan Rb. Hal ini juga mungkin karena protein lain, yang tidak
terkait dengan Rb, membantu mengatur aktivitas E2f
Perkembangan Siklus Sel Terkoordinasi Dengan Pertumbuhan sel
Sel berproliferasi untuk mempertahankan ukuran konstan, panjang siklus sel harus sesuai dengan
waktu yang dibutuhkan sel untuk menggandakan ukuran. Jika waktu siklus yang lebih pendek dari ini, sel-
sel akan semakin kecil dengan masing-masing bagian, jika itu lebih panjang, sel-sel akan lebih besar dengan
masing-masing bagiannya. Karena pertumbuhan sel tergantung pada nutrisi dan sinyal pertumbuhan di
lingkungan, lamanya siklus sel harus mampu menyesuaikan diri dengan kondisi lingkungan yang bervariasi
(Gambar 17-31).

Gambar 17-31. Kontrol ukuran sel melalui kontrol


siklus sel dalam ragi. Grafik ini menunjukkan
hubungan antara tingkat pertumbuhan, ukuran
sel, dan waktu siklus sel. (A) Jika pembelahan
sel berlanjut pada tingkatan yang tidak berubah
ketika sel-sel kekurangan gizi dan berhenti
tumbuh, sel anak yang dihasilkan pada masing-
masing divisi akan menjadi semakin kecil. (B) sel Ragi menanggapi beberapa bentuk kekurangan gizi
dengan memperlambat laju peningkatan melalui siklus sel sehingga sel-sel memiliki lebih banyak
waktu untuk tumbuh. Akibatnya, ukuran sel tetap tidak berubah atau berkurang sedikit. (Sebuah unit
waktu adalah waktu siklus diamati ketika nutrisi yang berlebihan.
Ada bukti bahwa kuncup ragi mengkoordinasikan pertumbuhan dan perkembangan siklus sel dengan
memantau jumlah total dari cyclin G1 disebut Cln3. Karena Cln3 disintesis secara paralel dengan
pertumbuhan sel, konsentrasi tetap konstan sedangkan jumlah total meningkat sebagai sel tumbuh. Jika
jumlah Cln3 secara artifisial meningkat, sel-sel membelah dengan ukuran yang lebih kecil dari normal,
sedangkan jika artifisial menurun, sel-sel membelah dengan ukuran yang lebih besar dari biasanya.
Percobaan ini konsisten dengan pendapat bahwa sel mempersiapkan untuk membelah ketika jumlah total
Cln3 mencapai ambang batas.
Gambar 17-32. Sebuah model hipotetis tentang
bagaimana sel tunas ragi mungkin mengkoordinasikan
pertumbuhan sel dengan kemajuan siklus sel. Sel berisi
sejumlah tetap protein (merah) yang terikat pada DNA
dan mengikat dan menghambat Cln3 molekul (hijau).
Sebagai sel tumbuh, jumlah total molekul Cln3meningkat
secara paralel dengan total protein sel. Ketika sel
berukuran kecil (kiri), semua Cln3 tidak aktif karena kelebihan protein pengikat Cln3. Bagaimanapun,
sebagai sel tumbuh, mencapai ukuran ambang di mana jumlah Cln3 molekul sama dengan jumlah protein
pengikat Cln3 (tengah). Ketika sel melebihi ukuran ini, Cln3 bebas dapat mengikat Cdk, yang dapat memicu
siklus sel berikutnya (kanan).
Perkembangan Siklus Sel yang Diblokir oleh Kerusakan DNA dan p53: Checkpoints Kerusakan DNA

Ketika kromosom mengalami kerusakan, karena dapat terjadi setelah terpapar radiasi atau bahan
kimia tertentu, penting bahwa mereka harus diperbaiki sebelum sel mencoba untuk menduplikasi atau
memisahkan diri. Sistem kontrol siklus sel dengan mudah dapat mendeteksi kerusakan DNA dan
menghentikan proses siklus di checkpoint kerusakan DNA. Kebanyakan sel memiliki minimal dua pos
pemeriksaan satu di G1 akhir, yang mencegah masuk ke fase S, dan satu di G2 akhir, yang mencegah masuk
ke mitosis.
Pos pemeriksaan G2 tergantung pada mekanisme yang serupa dengan yang dibahas sebelumnya
bahwa penundaan masuk ke mitosis dalam menanggapi replikasi DNA yang tidak lengkap. Ketika sel-sel di
G2 terkena radiasi merusak, misalnya, DNA yang rusak mengirimkan sinyal ke rangkaian protein kinase
yang memfosforilasi dan menonaktifkan fosfatase Cdc25. Blok ini defosforilasi dan mengaktivasi M-Cdk,
sehingga menghalangi masuk ke mitosis. Ketika kerusakan DNA diperbaiki, sinyal hambat dimatikan, dan
perkembangan siklus sel dilanjutkan kembali.
Blok checkpoint G1 perkembangan menuju fase S dengan menghambat aktivasi kompleks G1/S-Cdk
dan S-Cdk. Pada sel mamalia, misalnya, kerusakan DNA menyebabkan aktivasi dari gen protein regulator
p53, yang merangsang transkripsi beberapa gen. Salah satu gen mengkode CKIprotein disebut p21, yang
mengikat G1/S-Cdk dan S-Cdk dan menghambat aktivitas mereka, sehingga membantu untuk memblokir
masuk ke fase S.
Kerusakan DNA mengaktifkan p53 dengan mekanisme tidak langsung. Dalam sel-sel rusak, p53
sangat tidak stabil dan hadir pada konsentrasi yang sangat rendah. Hal ini karena berinteraksi dengan protein
lain, MDM2, yang bertindak sebagai ligase ubiquitin yang menargetkan p53 perusakan oleh proteasomes.
Kerusakan DNA mengaktivasi protein kinase yang memfosforilasi p53 dan dengan demikian mengurangi
ikatan dengan Mdm2. Hal ini mengurangi degradasi p53, yang menghasilkan peningkatan yang ditandai
dalam konsentrasi p53 dalam sel. Selain itu, penurunan ikatan dengan Mdm2 meningkatkan kemampuan
p53 untuk merangsang transkripsi gen (Gambar 17-33).
Gambar 17-33. Bagaimana kerusakan DNA
menahan siklus sel di G. Ketika DNA rusak,
protein kinase yang memfosforilasi p53
diaktifkan. Mdm2 biasanya mengikat p53 dan
promotes ubiquitylation dan menghancuran
proteasomes. Fosforilasi blok p53 terikat ke
Mdm2, sebagai akibatnya, p53 terakumulasi ke
tingkat tinggi dan menstimulasi transkripsi gen
yang mengkode protein CKI, p21. P21
mengikat dan inactivates kompleks G1/S-Cdk
dan S-Cdk, menahan sel di G1. Dalam beberapa
kasus, kerusakan DNA juga menginduksi
fosforilasi Mdm2 atau penurunan produksi
Mdm2, yang menyebabkan peningkatan p53
(tidak ditampilkan).
Seperti pos pemeriksaan lain, checkpoint kerusakan DNA tidak diperlukan untuk pembelahan sel
normal jika kondisi lingkungan ideal. Kondisi jarang yang ideal, namun: rendahnya tingkat kerusakan DNA
terjadi dalam kehidupan normal sel apapun, dan kerusakan ini terakumulasi dalam sel anakan jika pos
pemeriksaan kerusakan tidak berfungsi. Dalam jangka panjang, akumulasi kerusakan genetik dalam sel
kurang pos pemeriksaan mengarah ke peningkatan frekuensi kanker hasil mutasi. Memang, mutasi pada gen
p53 terjadi pada setidaknya setengah dari semua kanker pada manusia. Hilangnya fungsi p53
memungkinkan sel kanker untuk mengakumulasi mutasi lebih mudah. Demikian pula, penyakit genetik
langka yang dikenal sebagai Ataksia telangiectasia disebabkan oleh cacat di salah satu kinase protein yang
memfosforilasi dan mengaktifkan p53 dalam menanggapi kerusakan DNA yang diinduksi sinar-X, pasien
dengan penyakit ini sangat sensitif terhadap sinar-X karena hilangnya checkpoint kerusakan DNA, dan
akibatnya mereka menderita peningkatan kanker.
Bagaimana jika kerusakan DNA begitu parah sehingga perbaikan tidak dimungkinkan lagi? Dalam
hal ini, respon berbeda pada organisme yang berbeda. Organisme uniseluler seperti ragi kuncup transiently
menangkap siklus sel mereka untuk memperbaiki kerusakan. Jika perbaikan tidak dapat diselesaikan, siklus
dilanjutkan meskipun kerusakan kecil. Untuk organisme bersel tunggal, hidup dengan mutasi tampaknya
lebih baik daripada tidak hidup sama sekali.
Pada organisme multiseluler, bagaimanapun kesehatan organisme lebih diutamakan daripada
kehidupan sel individu. Sel yang membelah dengan kerusakan DNA yang parah mengancam kehidupan
organisme, karena kerusakan genetik sering dapat menyebabkan kanker dan cacat mematikan lainnya.
Dengan demikian, sel hewan dengan kerusakan DNA yang parah tidak mencoba melanjutkan divisi,
melainkan bunuh diri dengan menjalani kematian sel terprogram, atau apoptosis, seperti yang kita bahas
dalam bagian berikutnya. Keputusan untuk mati dengan cara ini juga tergantung pada aktivasi p53, dan
inilah fungsi p53 yang tampaknya paling penting dalam melindungi kita terhadap kanker.
Sebagai review, protein regulasi utama siklus sel dirangkum dalam Tabel 17-2, dengan struktur
umum dari sistem kontrol sel-siklus yang ditunjukkan pada Gambar 17-34.
Gambar 17-34. Gambaran dari sistem kontrol siklus
sel. Inti dari sistem kontrol siklus sel terdiri dari
serangkaian kompleks cyclin-Cdk (kuning). Kegiatan
setiap kompleks juga dipengaruhi oleh berbagai
mekanisme penghambatan checkpoint yang
memberikan informasi tentang lingkungan
ekstraselular, kerusakan sel, dan peristiwa siklus sel
yang tidak lengkap (atas). Mekanisme ini tidak hadir
di semua jenis sel, misalnya banyak yang hilang pada
awal siklus sel embrio.
Table 17-2. Summary of the Major Cell-cycle Regulatory
Proteins
GENERAL NAME FUNCTIONS AND COMMENTS
Protein kinase dan
protein fosfatase
yang memodifikasi
Cdk
Cdk-activating kinase phosphorylates sisi aktif Cdks
(CAK)
Wee1 kinase phosphorylates situs penghambatan dalam Cdks;
terutama yang terlibat dalam pengendali masuk ke mitosis
Cdc25 phosphatase menghilangkan penghambat fosfat dari Cdks, tiga anggota (Cdc25A, B, C) pada
mamalia, Cdc25C adalah aktivator Cdk1 pada awal mitosis
Protein Penghambat
Cdk (CKI)
Sic1 (budding yeast) menekan aktivitas Cdk di G1; fosforilasi oleh Cdk1 memicu kehancuran
p27 (mammals) menekan aktivitas G1/S-Cdk dan S-Cdk di G1, membantu sel untuk menarik
diri dari siklus sel ketika mereka akhirnya terpisah; fosforilasi oleh CDK2
memicu ubiquitylation oleh SCF
p21 (mammals) menekan aktivitas G1/S-Cdk dan S-Cdk menyusul kerusakan DNA di G1;
transcripsi diaktifkan oleh p53
p16 (mammals) menekan aktivitas G1-Cdk di G1, seringkali tidak aktif pada kanker

Ubiquitin ligases dan


aktivatornya
SCF mengkatalisis ubiquitylation dari protein regulasi yang terlibat dalam kontrol
G1, termasuk CKIs (Sic1 dalam ragi budding, p27 pada mamalia); fosforilasi
protein target biasanya diperlukan untuk kegiatan ini
APC mengkatalisis ubiquitylation protein regulasi yang terutama terlibat ketika
keluar dari mitosis, termasuk Securin dan M-siklin; diatur oleh asosiasi
dengan subunit aktivasi
Cdc20 APC-pengaktif subunit di semua sel; pemicu
awal aktivasi APC di metafase-anafase untuk
transisi, dirangsang oleh aktivitas M-Cdk
Hct1 mempertahankan aktivitas APC setelah anafase dan seluruh G1, dihambat
oleh aktivitas Cdk
Protein pengatur gen
E2F mendorong transkripsi gen yang dibutuhkan untuk perkembangan G1/S,
termasuk gen penyandi G1/S siklin, S-siklin, dan protein yang dibutuhkan
untuk sintesis DNA, dirangsang ketika G1-Cdk memfosforilasi Rb dalam
menanggapi mitogens ekstraseluler

p53 mendorong transkripsi gen yang menginduksi penghentian siklus sel


(terutama p21) atau apoptosis dalam menanggapi kerusakan DNA atau stres
sel lain, diatur oleh asosiasi dengan Mdm2, yang mendorong penurunan p53