CORPORACIÓN TECNOLÓGICA DE BOGOTÁ

PLANTILLA GUIA PRACTICAS DE LABORATORIO

Versión: 01 Fecha: 01/01/2016 Código: DO-RG-014 Página: 1 de 3

PROGRAMA NOMBRE
Tecnología en Química Industrial DEL CURSO
Análisis Instrumental

PRACTICA No. NOMBRE DE LA PRACTICA DURACIÓN EN HORAS

Cromatografía líquida HPLC 1. Desarrollo de una
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técnica y cuantificación de un producto comercial

1. INTRODUCCIÓN

La cromatografía es un método físico en el cual uno o más componentes se distribuyen entre dos
fases, una de ellas sólida. Es una de las técnicas experimentales más utilizadas para la detección
específica de moléculas. Usando esta técnica se puede cuantificar por diferentes metodologías como la
curva de calibración, adición patrón y estándar interno. En el caso del sistemas de detección se tiene que
se puede cuantificar en la región UV o Visible según el componentes que tenga encendido en el
equipo. Es una técnica usada ampliamente en la industria química dando por entendido que incluye la
farmacéutica para el análisis de principios activos y materias primas.

2. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA

En cuanto al funcionamiento del equipo se debe considerar un poco de historia: En 1906, Martin
Tswett publicó el primer artículo sobre la Cromatografía. Tswett separo los componentes de la
Clorofila utilizando Carbonato de Calcio como Absorbente y Éter de Petróleo como eluyente. En 1931,
Kuhn y sus colaboradores aislaron alfa y Beta carotenos de la zanahoria, empleando el mismo
método de Tsweet. En general las características que presenta un Cromatograma deber ser entre
otras:
 Un “Cromatograma” debe de presentar Picos de forma simétrica y bien definidos.
 Debe de presentar alturas de Pico dentro de la escala de registro.
 Debe de tener una línea base consistente.
 No debe de presentar bandas anchas.

El sistema de entrega del solvente tiene 3 funciones básicas;

1. Proporcionar el flujo exacto y constante

2. Proporcionar la Composición exacta de la fase móvil
3. Proporciona la fuerza necesaria para empujar la fase móvil a través de la columna.

Es muy importante filtrar todos los solventes y las muestras, limpiar la columna para remover sales
después de su uso y tapar la columna cuando no se use. Almacenar la columna en el solvente
apropiado. Tener en cuenta el rango de funcionamiento de pH de la columna. No operar columnas
fabricadas en sílica por periodos extensos a altas temperaturas. Para el manejo del equipo es
importante considerar las opciones que tiene en la interface usuario-equipo de acuerdo do a la
organización “ORGANIZACIÓN SOFTWARE EZ-Chrom”.
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3. OBJETIVOS

Generales:
 Esta práctica será demostrativa para los estudiantes y su objetivo es que ellos reconozcan el
equipo, el software que lo maneja y los implementos (consumibles) que se utilizan para su
funcionamiento y el uso de la técnica para separar, identificar y cuantificar.

Específicos:
 Reconocer el funcionamiento del equipo y su manejo, así como también su importancia en la industria.
 Establecer las condiciones cromatografías para separar, identificar y cuantificar los componentes
de una mezcla según recomendaciones del docente.
 Establecer la importancia de los componentes en el equipo y su disposición en el sistema modular y
otros sistemas.
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4. MATERIALES Y REACTIVOS

REACTIVOS MATERIALES EQUIPO

Agua HPLC
Metanol HPLC
Acetonitrilo HPLC
Ácido fosfórico concentrado
Ácido ascórbico ASA
Balones aforados 50 mL
Pipeta aforada 10 mL
Cromatógrafo líquído HPL
Pipeta graduada 10 mL
marca EZICHROM
Vaso de precipitado 250 mL

5. PRECAUCIONES

 NO OLVIDE el uso de EPP (elementos de protección personal): gafas, guantes y bata

 Revisar el manejo del equipo según especificaciones del docente.
 Se deben filtrar las soluciones antes de pasar las muestras a los viales.
 En el compartimiento de los viales 1-200, es necesario conocer en qué número queda la muestra o
estándar.
 Conocer cuáles son los posibles problemas que se presentan durante el manejo del equipo
y como se solucionan.

6. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ASCÓRBICO EN UNA TABLETA DE VITAMINA C

 Determinar el contenido de ácido ascórbico en tabletas de vitamina C usando la técnica de cromatografía

líquida de alta eficiencia (HPLC).
 Analizar cuantitativamente el contenido de ácido ascórbico mediante el uso de curva de calibración externa.
 Determinar la precisión del análisis y compararla con la dispersión de la composición en el lote de producción
del fármaco.

Nota: no olvide revisar la especificación del producto COMERCIAL para empezar a realizar su trabajo
experimental

7. SEGÚN EL DESARROLLO EXPERIMENTAL REALICE LAS SIGUIENTES ACTIVIDADES

PREVIAS AL LABORATORIO

 Consulte cuales son los parámetros en HPLC más importantes y su utilidad.

 Diga que funciones tiene cada uno de los componentes descritos en la práctica.

BIBLIOGRAFÍA SUGERIDA
 QUATTROCHI O, Andrizzi S., Laba R. "Introducción a la HPLC". Artes Gráficas Farro S.A. Buenos
Aires- Argentina, 1992.
 SKOOG D, Holler F, Nieman T. "Principios de análisis instrumental 5a ed". Madrid-España. McGraw-
Hill. 2001