AULA 04

BIOLOGIA
MOLECULAR
Prof. M.sc Luciana Lima de A. da Veiga
 DNA
◦ Condições essenciais para a molécula de DNA:
◦ O material genético tem de ser capaz de guardar uma enormidade de
informações, pois é responsável por codificar todas as proteínas (e são
muitas!!!) que um organismo expressa.
◦ A duplicação do DNA em cada multiplicação celular precisa ser um
processo “confiável”.
◦ A molécula de DNA precisa permitir alterações, o que denominamos
MUTAÇÃO, em raras situações.
◦ São estas mutações que conferem a variação genética aos indivíduos de
uma população, na qual atua a seleção natural.
O que é mutação?
 Mutação é...
◦É a alteração na sequência de bases na
molécula de DNA constituinte do gene é
que se chama de mutação gênica.
 O albinismo
◦O albinismo é causada por uma mutação na
enzima tirozinase que transforma o aminoácido
tirozina em pigmento da pele, a melanina.
◦Esta doença ocorre em animais e nas plantas e
é hereditária.
Eu tenho um gato branco, ele
é simplesmente branco ou é
albino?
 TALVEZ.
◦ 1- O pelo de um gato albino deve ser branco mas sem nenhuma mancha de
cor.
◦ 2 - Os olhos de um gato albino devem ser azuis ou de duas cores.
◦ Estas duas características podem não estar juntas, há gatos que podem ser
albinos, mas com os olhos claros ou ao contrário, nem todas estas alterações
devem ocorrer em um só indivíduo.
◦ 3 - A pele deste tipo de gato deve ser rosada e sem nenhuma mancha nem
pinta.
◦ 4 - Tanto seu nariz, como as almofadas das patas e suas orelhas são cor de rosa,
e terão pouca ou nenhuma sensibilidade à luz, por isso deve sempre protegê-los
do sol.
◦ 5 - Os lábios e as pálpebras dos gatos albinos também carecem de
pigmentação, ou seja, serão também cor de rosa.
Voltando para a molécula de DNA...
◦Armazenar informações;
◦Duplicar-se de forma a garantir a
perpetuação dessas informações;
◦Permitir mutações em sua molécula,
garantindo, assim, a variabilidade
◦genética e, consequentemente, o processo
evolutivo.
 Bases nitrogenadas do DNA
◦Erwin Chargaff (1940) e colaboradores:
Pesquisas para investigar a composição
de bases nitrogenadas no DNA;
◦Evidenciaram que estas variam
enormemente entre organismos
diferentes, mas dentro de uma pequena
faixa nas espécies correlatas;
◦Observou que as quantidades de certas
bases são muito similares;
 oAs pesquisas de Chargaff permitiu concluir que:
o1) A composição de bases no DNA geralmente varia entre as espécies.

2) Os DNAs isolados de diferentes tecidos de uma mesma espécie apresentam a

mesma composição de bases;

3) A composição de bases de uma dada espécie não varia com a idade, o estado
nutricional ou fatores ambientais.

4) Todos os DNAs celulares, independentemente da espécie, apresentam igual número

de RESÍDUOS DE NUCLEOTÍDEOS derivados de adenina e timina, isto é nº de A = nº de T
(ou simplesmente A = T), e igual número de resíduos de nucleotídeos derivados de
guanina e citosina, isto é, nº de G = nº de C (ou simplesmente G = C).
A partir dessas relações pode-se afirmar que a soma de nucleotídeos purínicos é igual
a soma de nucleotídeos pirimidínicos, o que pode ser representado em função
apenas das bases nitrogenadas.
 RESÍDUOS DE NUCLEOTÍDEOS

◦As unidades formadoras de um ácido nucléico são

denominadas nucleotídeos.

◦No entanto, quando essas unidades são obtidas a

partir da degradação de um ácido nucléico são
chamadas resíduos de nucleotídeos.
nº de A + nº de G = nº de T + nº de C

ou simplesmente A + G = T + C

Essa foi de suma importância para

a elucidação da estrutura
tridimensional do DNA e também
contribuíram para uma melhor
compreensão de como a
informação genética é codificada
no DNA e passa de uma geração
para outra.
 De acordo com a regra de Chargoff:
A+G=T+C

◦Mas ao fazer a relação destas, posso ter

valores diferenciados nas espécies. Ou seja,
mesmo a soma dessas bases sendo igual, a
relação pode ser variada.

◦Exemplo: [G] + [C] / [A] + [T]

 A dupla hélice
do DNA

◦ Os estudos de Rosalind Franklin e Maurice Wilkins (1950) com a DIFRAÇÃO

DE RAIOS X levaram os pesquisadores a deduziram que as moléculas de
DNA eram helicoidais com duas periodicidades ao longo de seu eixo.
◦ O problema consistia em formular um modelo tridimensional da molécula
de DNA que pudesse não apenas justificar os dados de difração de raios
X, como também as equivalências de bases específicas, A = T e G = C,
descobertas por Chargaff.
 ◦ Padrão representativo de difração de raios-X do DNA. As manchas formando uma
cruz no centro da figura são um indicativo de estrutura helicoidal.
◦ As manchas fortes à esquerda e à direita da figura correspondem à distância de 3,4 Å
e indicam que a estrutura do DNA se repete a cada 3,4 Å ao longo do eixo central.
◦ James Watson e Francis Crick, em 1953 propôs o modelo de estrutura
tridimensional da molécula de DNA, que teve como base muitas
evidências químicas e biológicas, tendo sido capaz de justificar todos os
dados disponíveis na época.
 Bases nitrogenadas

Esqueleto
de açúcar e
fosfato.
◦ A estrutura de DNA dupla hélice sugeriu imediatamente um
mecanismo para a transmissão da informação genética,
com base na principal característica do modelo, a
complementaridade das duas fitas de DNA.
◦ Watson e Crick previram que esta estrutura podia ser
replicada (duplicada) pela separação das duas fitas,
seguida de síntese da fita complementar a cada uma
delas.
◦ Como os nucleotídeos de cada fita se ligam de acordo
com regras de pareamento de bases, cada fita
preexistente funcionaria como um molde para guiar a
síntese de uma fita complementar, o que foi confirmado
experimentalmente.
UMA REVOLUÇÃO
NO ENTENDIMENTO
DA HERANÇA
BIOLÓGICA
◦ O DNA é composto por duas cadeias de nucleotídeos: Porém não são
lado a lado;
◦ Os polímeros de nucleotídeos apresentam uma orientação 5’ → 3’
definida pelo esqueleto açúcar-fosfato.

◦ A cadeia representada à esquerda apresenta a extremidade 5’ na parte inferior e a extremidade 3’ na parte superior.
Já a cadeia representada à direita apresenta a extremidade 3’ na parte inferior e a extremidade 5’ na parte superior, ou
seja elas estão posicionadas na dupla hélice em orientações opostas, ou em sentido inverso, ou, simplesmente, elas são
“antiparalelas”.
 A natureza antiparalela da dupla hélice
assegura o alinhamento ótimo das bases e,
portanto, maximiza a interação do tipo
ponte de hidrogênio.
◦Vale lembrar que:

◦ As cadeias de DNA são ditas “complementares”, pois a base presente em uma das cadeias
determina a base presente na outra cadeia.
◦ Além disso, esta complementaridade de bases assegura a formação de uma duplicata exata da
informação genética parental quando o DNA é replicado.
Em síntese:
◦Pontes de hidrogênio:

◦ São interações do tipo pontes de hidrogênio que mantêm os filamentos unidos.

◦ Os dois átomos de hidrogênio no grupamento NH2 são ligeiramente positivos (δ+), uma vez que o
nitrogênio, por ser mais eletronegativo que o hidrogênio, tende a atrair os elétrons envolvidos nas
ligações N – H.
◦ O átomo de oxigênio, por ser também mais eletronegativo que o carbono, atrai os pares de elétrons
◦ da ligação dupla com o carbono, ficando ligeiramente negativo (δ-).
◦ Esta situação propicia a formação de uma ponte de hidrogênio, que nada mais é
que a interação que se forma entre um H ligeiramente positivo e um átomo
ligeiramente negativo, que neste exemplo é o oxigênio, mas podendo ser
também o nitrogênio.
◦ As pontes de hidrogênio são fracas, com cerca de apenas 3% da força de uma ligação covalente.
◦DESNATURAÇÃO E RENATURAÇÃO DO DNA:

◦ Desnaturação e renaturação são fenômenos físicos fundamentais para os processos de replicação,

transcrição e recombinação da molécula de DNA.
◦ A desnaturação ocorre quando as pontes de hidrogênio entre as cadeias complementares se
rompem e as fitas se separam.
◦ O inverso é chamado de renaturação, e permite que todas as propriedades originais da molécula
sejam restabelecidas.

◦ O que promove a desnaturação do DNA?

◦ A desnaturação da estrutura secundária do DNA pode ser obtida em solução por aumento da
temperatura, por titulação com ácidos ou álcalis e por agentes desnaturantes, como a formamida e
o dimetil-sulfóxido (DMSO).
◦ Em altas temperaturas ou pH extremos o DNA sofre desnaturação, isto porque ocorre ruptura das
pontes de hidrogênio entre os pares de bases. Esta desnaturação faz com que diminua a
viscosidade da solução de DNA.
◦ Durante a desnaturação nenhuma ligação covalente é desfeita, ficando, portanto as duas fitas de
DNA separadas.
◦ Quando o pH e a temperatura voltam ao normal, as duas fitas de DNA espontaneamente
se enrolam formando novamente o DNA dupla fita. Este processo envolve duas etapas:
uma mais lenta, pois envolve o encontro casual das fitas complementares de DNA,
formando um curto segmento de dupla hélice; e outra mais rápida, envolvendo a
formação das pontes de hidrogênio entre as bases complementares, reconstruindo a
conformação tridimensional.
◦ Os ácidos protonizam os anéis nitrogenados de A, G e C, enquanto os álcalis
desprotonizam os anéis nitrogenados de U e T. Esses tratamentos geram grupos
carregados no interior da hélice, rompendo as pontes de hidrogênio entre as bases.
◦ Através da medida da absorbância da luz ultravioleta no espectrofotômetro, é possível
acompanhar a desnaturação da molécula de DNA. A medida de absorção da luz UV a
260nm é máxima, e ocorre quando as fitas da dupla hélice estão completamente
separadas e as bases expostas ao meio. A absorbância também aumenta com o
aumento da temperatura, desnaturando a molécula.
 EXERCÍCIOS
◦ 1) A molécula de DNA apresenta uma forma peculiar, uma dupla hélice. Pensando nesse formato e nas
necessidades que essa molécula tem para os organismos vivos, quais são as principais características que esta
molécula deve apresentar?
◦ 2) Qual a importância da mutação para os organismos?
◦ 3) Descreva o albinismo?
◦ 4) As pesquisas de Chargaff em relação ao DNA permitiu chegar as quais conclusões?
◦ 5) O que diz a regra de Chargaff?
◦ 6) O que são resíduos de nucleotídeos?
◦ 7) Descreva a estrutura do DNA?
◦ 8) Qual a importância da natureza antiparalela da dupla hélice do DNA?
◦ 9) As cadeias de DNA são chamadas de complementares uma da outra. Por quê? Qual a importância dessa
complementação?
◦ 10) Cite uma vantagem do modelo de DNA ser enovelado?
◦ 11) Uma das fitas do DNA dupla hélice apresenta a seguinte sequência:
◦ 5’ GCGCAATATTTCTCAAAATATTGCGC 3’. Escreva a sequência de bases da fita complementar, especificando as
extremidades.
◦ 12) Represente os pares de bases presentes no DNA dupla hélice, destacando as interações existentes entre eles.
◦ 13) O que significa o aumento de absorção de luz UV (260nm) de uma solução de DNA quando ela é aquecida?
 Vamos fazer um exercício
◦ Amostras de DNA foram isoladas de duas espécies, X e Y, não identificadas.
◦ O DNA da espécie X contém 35% de adenina, enquanto o DNA da espécie Y contém
apenas 17% de adenina.
◦ Pergunta-se:
◦ a) Determine as proporções relativas que você espera encontrar de adenina,
◦ citosina, guanina e timina nas duas amostras de DNA.
◦ b) Que hipóteses você utilizou para determinar os percentuais de bases nas
◦ amostras de DNA?
◦ c) Sabendo que uma das espécies foi isolada de uma corrente de água quente
◦ (64ºC), sugira qual dos DNAs foi extraído dessa bactéria. Explique.