1. Disiapkan kaca objek baru dan bersih, diberi nomor sediaan 2. Dinyalakan lampu spiritus dan diletakkan antara petugas dan pot sputum 3. Diambil sedikit sampel sputum purulen menggunakan lidi tumpul bersih, kemudian diletakkan pada kaca objek 4. Sputum diratakan sampai berbentuk oval dengan ukuran 2 x 3 cm 5. Sputum kemudian dibuat ulir ulir kecil menggunakan lidi runcing (dilakukan saat sputum masih basah) 6. Sediaan dikeringkan pada suhu ruang 7. Sisa sputum dan lidi bekas pada pot sampel digenangi dengan desinfektan Hypochlorite 0,5% selama minimal 12 jam sebelum dibuang. B. Pewarnaan sediaan 1. Sediaan difiksasi di atas lampu spiritus dengan cara dilalukan sebanyak 3 kali 2. Diletakkan sediaan dengan bagian apusan menghadap ke atas pada rak yang ditempatkan di atas bak cuci atau baskom, antara satu sediaan dengan sediaan lainnya masingmasingberjarak kurang lebih 1 jari 3. Digenangi seluruh permukaan sediaan dengan carbol fuchsin. 4. Dipanaskan dari bawah dengan menggunakan lampu spiritus setiap sediaan sampai keluar uap, jangan sampai mendidih 5. Dinginkan selama minimal 5 menit 6. Dibilas sediaan dengan air mengalir secara hati-hati dari ujung kaca sediaan, Jangan ada percikan ke sediaan lain 7. Dimiringkan sediaan menggunakan penjepit kayu atau pinset untuk membuang air 8. Digenangi dengan asam alkohol sampai tidak tampak warna merah carbol fuchsin. Jangan sampai ada percikan ke sediaan lain 9. Digenangi permukaan sediaan dengan methylene blue selama 20-30 detik 10. Dibilas sediaan dengan air mengalir. Jangan ada percikan ke sediaan lain 11. Dimiringkan sediaan untuk mengalirkan sisa methylene blue 12. Dikeringkan pada suhu ruang 13. Dibaca dengan mikroskop perbesaran objektif 100x mrnggunakan minyak imersi. C. Hasil Pembacaan hasil menggunakan skala IUATLD (International Union Against Tuberculosis and Lung Disease) sbb:
- Negatif : tidak ditemukan BTA dalam 100 LP
- Scanty : ditemukan 1-9 BTA dalam 100 LP (tuliskan jumlah BTA) - 1+ : ditemukan 10-99 BTA dalam 100 LP - 2+ : ditemukan 1-10 BTA dalam 1 LP - 3+ : ditemukan >10 BTA dalam 1 LP PEMERIKSAAN SPUTUM BTA