Anda di halaman 1dari 16

Adenosine Deaminase from Streptomyces Coelicolor: Recombinant

Expression, Purification and Characterization


Nadya Nur Puspa Permatasari_260110150028

Pendahuluan
Adenosine deaminase (ADA, EC 3.5.4.4) mengkatalis adenosine secara
deaminasi irreversibel menjadi inosine dan amonia. Enzim ini ditemukan secara luas
dalam berbagai mikroorganisme, tumbuhan, invertebrata, dan mamalia. ADA
merupakan enzim yang diperlukan dalam metabolisme purin. Pada manusia, enzim ini
diperlukan untuk perkembangan sel B dan sel T, juga berperan dalam pertahanan
sistem imun [1]. Defisiensi genetik ADA menyebabkan sebuah penyakit yang dikenal
sebagai Severe Combined Immunodeficiency Disease (SCID), yang ditandai oleh
kekurangan limfosit B dan T [2].
Struktur kristal murin ADA menunjukkan bahwa protein ini adalah sebuah
metalloenzim besi yang memperlihatkan tipe 𝛼𝛽-barrel fold, dengan delapan 𝛽-strands
sentral dan delapan 𝛼-helix perifer. Selain itu, strukturnya mengandung lima tambahan
[3]
𝛼-helix . Mekanisme katalitik deaminasi telah disarankan untuk diproses dengan
serangan air langsung pada posisi C-6 cincin purin, menghasilkan pembentukan
[4]
tetrahedral intermediet (Fig.1). Dengan demikian, 6-hydroxyl-1,6-dihydropurine
riboside (HDPR) dan antibiotik nukleosida secara alami, 2’-deoxycoformycin, yang
meniru struktur hipotesis transisi tetrahedral intermediet, berikatan secara erat, dengan
masing-masing K1 10-13 dan 10-12 M.
Berdasarkan hal di atas, peneliti (Pornbanlualap dan Pornchanok, 2011)
melakukan ekspresi rekombinan, purifikasi, dan karakterisasi Adenosine Deaminase
(ADA) dari Streptomyces coelicolor. Streptomycetes adalah sekelompok filamen
gram-positif berbutir tanah yang mengandung filamen yang telah menangkap skrining
menarik yang sangat besar karena kemampuannya yang dapat menghasilkan dan
mensekresikan berbagai variasi antibiotik dan protein ekstraselular[5]. Diantara
berbagai antibiotik, yang dihasilkan oleh Streptomycetes adalah antibiotik nukleosida.
Urutan genom Streptomyces coelicolor A3(2) telah diprediksi mengandung gen
[6]
pengkode lebih dari 7500 protein, yang belum banyak dipelajari dan didefinisikan .
SCO4901 adalah salah satu gen yang telah dijelaskan dalam database sebagai
adenosine deaminase “putatif”. Namun, sejak protein ADA dan ADE telah terbukti
kira-kira memiliki ukuran yang sama, keseluruhan menunjukkan kesamaan urutan,
mengandung lipatan topologi serupa dan berbagi mesin katalistik yang sama, maka
seringkali sulit untuk membedakan keduanya. Karakterisasi urutan ADE dari
Aspergillus nidulans, Saccharomyces cerevisiae, dan Schilzosaccharmoyces pombe
menunjukkan bahwa protein ini lebih erat kaitannya dengan ADAs yang ditandai
secara biokimia daripada Bacillus subtilis dan Escherichia coli ADEs.
Berdasarkan urutan kesesuaian ascomycete-ADES dan ADA yang ditandai,
aturan struktural telah diusulkan untuk membedakan apakah protein tersebut
merupakan ADA atau ADE [7]. Asp19, Ser103, Ala183, dan Gly184 (dihitung menurut
murine ADA) telah diusulkan untuk menjadi karakteristik ADA, sedangkan Glu, Asp,
Asp atau Ser, dan Ser pada posisi yang sama adalah karakteristik ADE. Meskipun
Streptomycetes adalah produsen utama antibiotik nukleosida dan banyak antibiotik
nukleosida menunjukkan penghambatan efek pada enzim penyembuh purin, beberapa
enzim Streptomycetes telah dikarakteristik secara biokimia. Karena itu, laporan ini
menggambarkan ekspresi, karakterisasi spesifisitas substrat, dan penghambatan
adenosin deaminase dari S. coelicolor (ScADA) dengan transisi state analogs.

Metode
Bahan-bahan yang digunakan yaitu Adenosine, 2’-deoxyadenosine, adenine, 9-
𝛽-ᴅ-arabinofuranosyladenine (ara-A) dan IPTG dari Sigma/Aldrich. 2’-
Deoxycoformycin dan coformycin dari Dr. Robert K. Suhaldonik, Temple University
School of Medicine (USA). Nickelagarose dari Qiagen. S. coelicolor A3(2) dari Dr.
Keith Chater, John Innes Institute (UK), strain E. coli BL21 (DE3) dan pET-15b dari
Novagen.
Urutan metode yang dilakukan yaitu konstruksi plasmid, pemurnian protein,
analisis kinetik data, estimasi berat molekul, dan metal analysis. DNA genom
dimurnikan dari sel S. coelicolor yang didalamnya ditanam Yeast Extract-Malt Extract
(YEME) yang mengandung 34% sukrosa, 1% glukosa dan 0.5% MgCl2 pada suhu 30°C
[8]
. Konsentrasi DNA genom diukur dengan spektrofotometer (pada 260 nm). Ukuran
DNA genom dianalisis 1% gel agarosa. Primer forward (ADA-1: 5’-
TTTAAGCTTCATATG ACGAGCCGAAGCACCGAG-3’ , dimana garis bawah
menunjukkan Link HindIII dan NdeI yang ditambahkan) dan primer reverse (ADA- 2:
5’-TTTAGATCTTCAGCCGTCG GATTCCGAAGA-3’, dimana garis bawah
menunjukkan BgIII linker yang ditambahlan) dirancang sesuai urutan gen Adenosine
deaminase putatif dari S. coelicolor (Genebank Accession No. SCO4901). Daerah
pengkodean dilengkapi dengan adanya gen yang diperkuat oleh PCR dengan primer
ADA-1 dan ADA-2, menggunakan DNA kromosom yang dibuat dari S.coelicolor
sebagai template dan Taq DNA polymerase. PCR dilakukan sebagai berikut:
Denaturasi awal pada suhu 93°C selama 5 menit; 30 siklus denaturasi pada suhu 93°C
selama 1 menit, annealing pada 68°C selama 1 menit, dan ekstensi tambahan pada
72°C selama 1,5 menit. Produk PCR dimurnikan dengan kit pemurnian PCR (Qiagen)
dan diligasi menjadi vektor pGEM-T (Promega). Setelah transformasi menjadi E.coli
JM109 kompeten, rekombinan plasmid, pGEM-ada, dimurnikan dari klon positif
dengan metode alkali dan diurutkan untuk memastikan tidak ada mutasi yang
diperkenalkan oleh langkah penguatan PCR. Setelah pencernaan ganda dari pGEM-
ada dengan NdeI dan BgIII fragmen 1,2 kb dimurnikan dan diligasi menjadi pET-15b,
yang sebelumnya berlipat ganda dicerna dengan Ndel dan BamHI. Campuran ligasi itu
ditransformaskan menjadi E.coli BL21 (DE3) dan dipilih pada LB yang mengandung
600 𝜇g/ml ampicillin.
Untuk pemurnian Adenosine deaminase, 5 ml E.coli BL21 (DE3) membawa
PET-ada dari kultur yang tumbuh semalaman di LB ditambah dengan ampicillin 60
𝜇g/ml, dipindahkan ke satu liter LB. Kultur ditambahkan OD600 nm 0,5 dan diinduksi
dengan penambahan laktosa pada konsentrasi akhir 1 mM, karena laktosa terbukti
sebagai inducer yang efektif sebagi IPTG [9]. Setelah lima jam tambahan pertumbuhan,
sel-sel dipanen dengan sentrifugasi pada 10.000 g pada suhu 4 C, tersuspensi dalam
buffer lisis [20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM KCl, 1 mM EDTA, 0,5% Tween 20 dan
1 mM PMSF] dan terganggu dengan sonikasi. Sonicator diprogram untuk memberikan
pulse 15 s dengan jeda 10 s untuk total periode 30 menit Setelah sentrifugasi pada
12.000 g selama 30 menit, enzim dalam supernatan diendapkan dengan penambahan
amonium sulfat pada saturasi 80%. Protein yang diendapkan dikumpulkan dengan
sentrifugasi pada 10.000 g, dilarutkan dalam 4 ml buffer lisis dan didialisis empat kali
melawan 3 liter buffer yang mengandung 50 mM potasium fosfat (pH 7.5). Protein
yang didialisis tersebut ditambahkan ke resin Ni2 + -NTA (1 ml bed volume), yang
sebelumnya diseimbangkan dengan buffer B [20 mM Tris-HCl (pH 8), 500 mM KCl,
dan 0,1% Triton X-100]. Setelah mencuci kolom dengan 4 ml buffer B, enzim yang
diberi label polyhistidine dielusi dengan mencuci dengan buffer B yang masing-masing
mengandung imidazol 20, 100 dan 250 mM. Enzim yang dielusi dari kolom dianalisis
pada 10% SDS-PAGE.
Aktivitas adenosin deaminase diuji secara spektrofotometri dengan mengukur
penurunan absorbansi pada 265 nm konversi adenosin menjadi inosin dengan
spektrofotometer Shimazu. Satu mililiter reaksi yang mengandung 0,04-0,08 𝜇mol
adenosin dalam 50 mM potasium fosfat diinkubasi 1 menit di cuvette sebelum
penambahan enzim. Jumlah produk yang terbentuk dihitung dengan menggunakan
koefisien ekstingsi molar dari 8,4 mM-1 [10]
. Kesamaan panjang gelombang dan
koefisien ekstigsi molar digunakan untuk penentuan Km dan Vmax untuk Ara-A, 20-
deokyadenosin, adenin, AMP, ADP, dan ATP. Satu unit aktivitas enzim didefinisikan
sebagai jumlah enzim yang dibutuhkan untuk mengkonversi 1 𝜇mol substrat menjadi
produk pada 37°C dalam satu menit. Konsentrasi protein ditentukan dengan metode
Bradford, menggunakan albumin serum sapi sebagai standar.
Data kinetik digunakan pada persamaan yang sesuai dengan Program Plot Sigma.
Kecepatan awal (v) diperoleh dari variasi konsentrasi substrat pada persamaan: v =
Vmax [S] / Km + [S], di mana Vmax adalah kecepatan maksimum, [S] adalah
konsentrasi substrat, dan Km adalah konstanta Michaelis. Data kinetik diperoleh dari
inhibitor kompetitif pada persamaan: V = Vmax [S] / Km (1+ [I] / Ki) + [S], di mana
[I] adalah konsentrasi dari inhibitor dan Ki adalah konstanta inhibisi.
Posisi elusi ADA relatif aktif terhadap protein yang diketahui berat molekulnya
yang ditentukan oleh kromatografi eksklusi ukuran, menggunakan kolom HiPrep 16/60
Sephacryl S-200HR (Pharmacia). Sebuah larutan (0,5 ml) yang mengandung 0,4 mg /
ml ADA, 10 unit piruvat kinase (237 kDa), conalbumin 3 mg / ml (75 kDa), ovalbumin
4 mg / ml (43 kDa), 50 mM KH2PO4 (pH 7.0) dan 0,15 M NaCl diaplikasikan ke kolom
yang telah diseimbangkan dengan penyangga yang sama tetapi kekurangan enzim.
Laju alir 1 ml / menit dan profil elusi dipantau pada 280 nm dengan penyerapan UV.
Posisi elusi ADA terdeteksi oleh pengujian deaminasi yang telah dijelaskan di atas.
Sampel protein yang dimurnikan dianalisis untuk kandungan seng dengan Model
spektrofotometer serapan atom Varian AA280 FS pada 213,8 nm. Protein diukur
dengan perkiraan koefisien ekstingsi molar (pada 44.265 M-1 cm-1 pada 280 nm)
deengan metode Bradford, menggunakan albumin serum sapi sebagai standar.

Hasil
Dengan menggunakan primer ADA-1 dan ADA-2, reaksi PCR menghasilkan
Single Band dengan panjang yang benar 1,2 kb. Urutan nukleotida DNA yang
dimurnikan dari gel dipastikan sebagai putatif adenosin deaminase dari S.coelicolor
dengan urutan sebelum diklon ke PET-15b. Plasmid yang dihasilkan, pET-ada,
diharapkan bisa mengekspresikan sebuah protein dari 396 asam amino dengan 20 asam
amino tambahan, termasuk tag polyhistidine pada N-terminus dan diprediksi massa
molekul 45.987 Da. Struktur kristal murine ADA (Muada) menunjukkan bahwa enzim
tersebut berfungsi sebagai delapan strand paralel 𝛼𝛽 barel. Karena sisi aktif protein
dengan (𝛼/𝛽)8 barrel domain terletak di permukaan terminal COOH dari 𝛽 barrel,
penambahan polyhistidin pada NH2-terminus enzim diharapkan memiliki sedikit atau
tidak ada efek pada aktivitas katalitik.
Major Band dengan berat molekul sekitar 48 KDa diamati setelah lima jam
induksi dengan 1 mM laktosa (Fig. 2A). Pemurnian rekombinan S. coelicolor
adenosine deaminase (ScADA) dari satu liter E. coli BL21 (DE3) dan kultur sel pET-
ada menghasilkan protein dengan total 16,5 mg, dengan aktivitas spesifik 2,07 𝜇mol /
min / mg (Tabel 1) dan ~85% homogenitas seperti yang diperkirakan dari denaturasi
gel Elektroforesis poliakrilamida (Fig. 2A). Bila berat molekul enzim diperkirakan
dengan kromatografi eksklusi gel dengan menggunakan protein Massa dikenal sebagai
standar, Scada dielusi pada berat molekul 182.000 (Fig. 2B). Nilai ini konsisten dengan
enzim aktif yang terdiri dari empat subunit dengan berat molekul identik. Hal ini
berbeda dengan murine, manusia dan ADA plasmodial, dimana enzimnya aktif sebagai
monomer [13].

Perilaku kinetik enzim rekombinan dengan adenosin dan 20-deokyadenosin


mungkin cukup dijelaskan dengan baik menggunakan model sederhana Michaelis-
Menten. Nilai Km, Ki, dan Vmax dari enzim yang dimurnikan untuk substrat / inhibitor
ditunjukkan pada Tabel 2. Studi spesifitas substrat menunjukkan bahwa adenosin
adalah substrat terbaik dengan Vmax 15,4 (𝜇mol/ min / mg) dan nomor omset (Kcat)
11,5 s-1. Pergantian gugus hidroksil pada posisi 2’ dengan hidrogen (yaitu, 2’-
deoksiadenosin) cukup ditolerir, mengakibatkan penurunan Vmax relatif menjadi
17,5% dibandingkan dengan adenosin dan lebih dari 15 kali lipat Km. Pemindahan
bagian ribosil dari adenosin (yaitu adenin) atau inversi gugus hidroksil pada posisi 2’
(yaitu, ara-A) menghasilkan kehilangan yang hampir lengkap dari aktivitas sebagai
substrat. (Vmax <0,06%). Tambahan gugus fosfat ke posisi 5’ dari bagian ribosil
(yaitu, 5’-AMP, 5’-ADP, dan 5’-ATP) juga mengakibatkan hilangnya total aktivitas
sebagai substrat.
Karena tidak dideaminasi oleh enzim, adenin diuji sebagai sebuah inhibitor
enzim. Hasilnya menunjukkan bahwa adenin merupakan inhibitor lemah pada enzim
dengan Ki> 1 mM. Aspergillus oryzae dan ADAs usus intestinal mengikat adenosin
dan adenin dengan Km yang sama, walaupun pembentukan dideaminasi 103-104 lebih
cepat dari yang terakhir [14]
. Coformycin dan 2’-deoxycoformycin, yang strukturnya
menyerupai keadaan transisi reaksi deaminasi, inhibitor kompetitif enzim, dengan Ki
masing-masing 2,5×10-10 dan 3,4×10-9 M (Fig.3). Spesifisitas substrat dan inhibitor
menunjukkan bahwa adanya gugus hidroksil pada posisi C-2’ dari bagian ribosil
sepertinya berkontribusi ketat terhadap pengikatan substrat atau inhibitor pada enzim,
karena ribonukleosida (Adenosin dan koformisin) mengikat lebih erat dengan enzim
daripada deoksiribonukleosida (20-deokyadenosin dan 20-deoxycoformycin).
Sebaliknya, ADA terisolasi dari sumber lain yang telah dilaporkan sedikit lebih ketat
terhadap 20-deoxycoformycin daripada coformycin. Tidak ada onset lambat
penghambatan ScADA oleh Coformycin atau 20-deoxycoformycin yang diamati di
bawah kondisi percobaan. ScADA yang dimurnikan membutuhkan seng untuk
aktivitas katalitik. Dengan tidak adanya 1,10-fenantrolin, ScADA dipertahankan
hampir 100% aktivitas selama 60 menit. Ketika enzim diinkubasi 0,7 mM 1,10-
fenantrolin, enzim kehilangan kira-kira 90% aktivitas katalitiknya setelah 60 menit dari
inkubasi. Analisis kandungan logam dari enzim yang dimurnikan dengan spektroskopi
serapan atom menunjukkan bahwa enzim mengandung kira-kira 0,7 mol yang terikat
dengan seng / mol subunit (Tabel 4). Rasio subunit enzim zinc/mol kurang dari yang
diharapkan, hal ini mungkin karena jumlah zinc yang terdapat dalam medium
pertumbuhan perlu dimasukkan ke dalam enzim yang diekspresikan dan diinduksi
dengan laktosa.
Tujuan penelitian ini adalah untuk (i) menentukan apakah SCO4901
mengkodekan untuk ADA atau ADE, (ii) memurnikan protein rekombinan dan
menentukan struktur subunitnya, (iii) mengkarakterisasi substrat ddan spesifisitas
inhibitor enzim dan (iv) penjelasan hubungan evolusioner antara ADA dan ADE.
Sampai saat ini, tidak ada ADA atau ADE dari Streptomycetes yang telah dimurnikan
atau dikarakterisasi untuk spesifisitas substrat, terlepas dari kenyataan bahwa
organisme ini adalah produsen utama antibiotik nukleosida sebagai metabolit sekunder.
Misalnya, dua inhibitor paling ampuh dari ADA, coformycin dan 2’-deoxycoformycin,
[15]
diisolasi dari Streptomyces antibioticus . Sejak antibiotik nukleosida sering
menghambat enzim yang terlibat dalam nukleosida / nukleotida, metabolisme RNA
dan DNA, resistensi antibiotik telah terbukti menjadi prasyarat untuk produksi
antibiotik. Karena tidak ada ADA atau ADE dari Streptomycetes yang telah
dikarakterisasi secara biokimia, tidak jelas apakah enzim dalam salvage pathway dari
organisme ini mungkin telah berevolusi secara berbeda dengan mengubah spesifisitas
substrat / inhibitornya untuk menghindari efek penghambatan antibiotik.
ADA, ADE dan AMP deaminases adalah enzim yang terkait erat dengan
pemanfaatan mesin katalitik serupa untuk mengkatalisasi reaksi terkait secara mekanis.
Analisis filogenik urutan asam amino dari berbagai produk gen menunjukkan bahwa
protein ini milik famili adenyl-deaminase [4]. Famili ini berisi lima subfamili, termasuk
subfamili ADA, ADE, AMP deaminase, adenosine deaminase-like (ADAL), dan
adenosine deaminase-related grow factor (ADGF). Anggota famili mengandung
metionin (atau iso / leusin), prolin, lisin dan glisin (MPKG), meskipun residu ini bukan
bagian dari mesin katalitik (Fig. 4). Protein ADGF mengandung keempat residu ini,
sedangkan protein ADAL dan ADE hanya mengandung ketiga pertama. Pada sebagian
besar ADA, hanya residu PK yang dilestarikan.
Dengan menganalisis urutan asam amino dari tiga ADA yang ditandai dan tiga
[7]
ADEs ascomycete, Ribard dkk. telah menyarankan beberapa aturan yang bisa
digunakan untuk membedakan antara ADA dan ADE. Asp19, Ser103, Ala183 dan
Gly184 (diberi nomor sesuai murine ADA) merupakan karakteristik ADA, sedangkan
Glu, Asp, Asp atau Ser dan Ser, masing-masing merupakan karakteristik ADE (Tabel
3). Dari keempat residu tersebut, hanya dua residu, yaitu Asp dan Gly di ADA atau Glu
dan Ser di ADE, yang merupakan bagian dari mesin katalitik (Fig. 4). Karena SCO4901
mengandung Asp, Ala (bukan Ser seperti pada ADA atau Asp seperti di ADE), Ala dan
Gly, itu serupa, tapi tidak identik pada urutan ADA dibandingkan dengan ADE (Tabel
3).

Enzim rekombinan yang dimurnikan mendeaminasi adenosin dan 2’-


deoksiadenosin tapi bukan AMP. Meski adenin juga mengalami deaminasi oleh enzim,
laju deaminasi yang terjadi ~103 lebih lambat dibandingkan dengan adenosin (Tabel
2). Data ini sangat menguatkan bahwa enzim ScADA yang dimurnikan adalah
[7]
deaminase adenosin. Aturan empiris yang disarankan oleh Ribard dkk. tampaknya
bekerja dalam memprediksi apakah protein ADA atau ADE. Protein ADA dan ADE
keseluruhan menunjukkan kesamaan urutan (sekitar 25% identitas dan 40%
kesamaan). Untuk beberapa ADAs yang telah dicirikan, seperti A. oryzae dan ADAs
usus intestinal, adenosin dan adenin adalah substrat dari enzim[14]. Keduanya berikatan
dengan enzim dengan nilai Km yang sama, walaupun adenin dideaminasi 103-104 lebih
lambat dari adenosine.
ADE secara biokimia ditandai B. subtilis dan E. coli tanpa urutan kesamaan dengan
tiga ascomycete ADEs[7]. Selanjutnya, B. subtilis dan E. coli ADEs sangat spesifik
untuk adenin; tidak adenosin maupun nukleosida lainnya yang merupakan substrat
untuk enzim ini [15-16]. Jadi, aktivitas deaminase ADE dari B. subtilis dan E. coli, juga
ADE dari ascomycetes mungkin telah berevolusi secara independen oleh evolusi
konvergen.
Penyelarasan protein ADA dari sepuluh organisme yang berbeda oleh Maier et
[17]
al. mengungkapkan bahwa semua residu situs aktif dilestarikan. Dari sembilan
residu yang sangat dilestarikan ini, tiga di antaranya terlibat dalam logam koordinasi,
lima berinteraksi dengan cincin purin dan satu berinteraksi dengan bagian ribosil
adenosin. Delapan dari sembilan residu situs aktif yang dilestarikan juga dilestarikan
di ScADA. Mekanisme katalitik enzim ScADA yang terjadi diusulkan oleh mekanisme
eliminasi tambahan yang serupa seperti yang diusulkan untuk murine ADA dan S.
cerevisiae AMP deaminase [3,18] (Fig. 5).
Simpulan
Berdasarkan hal-hal di atas, dapat disimpulkan bahwa penelitian ini
menggambarkan ekspresi rekombinan, pemurnian dan karakterisasi ADA putatif dari
S. coelicolor. Enzim telah dimurnikan menjadi homogenitas. Berat molekul enzim asli
adalah 182 KDa dan terdiri dari empat subunit identik, dengan masing-masing berat
molekul 48,4 KDa. Adenosin dan 20-deoksiadenosin adalah substrat untuk enzim.
Karena adenin telah dideaminasi ~103 lebih lambat oleh enzim, jika dibandingkan
dengan adenosin, data ini menunjukkan dengan kuat bahwa enzim yang dimurnikan
adalah ADA dan bukan ADE. Mirip dengan ADA lainnya, ScADA dihambat oleh 2’-
deoxycoformycin. Untuk S. antibioticus yang menghasilkan coformycin dan 2’-
deoxycoformycin sebagai antibiotik nukleosida, organisme ini cenderung memiliki
ADA yang baru yang rsisten terhadap inhibisi oleh coformycin dan 2’-
deoxycoformycin.

Daftar Pustaka
[1] G. Cristalli, S. Costanzi, C. Lambertucci, G. Lupidi, S. Vittori, R. Volpini, E.
Camaioni. 2001. Adenosine Deaminase: Functional Implications and Different
Classes of Inhibitors. Med. Res. Rev. 21: 105–128.
[2] H. Kaneijam, T. Tanaka, Y. Nojima, S.F. Schlossman, C. Morioto. 1993. Direct
Association of Adenosine Deaminase with a T Cell Activation Antigen, CD26.
Science 261 : 466–469.
[3] D.K. Wilson, F.B. Rudolph, F.A. Quiocho. 1991. Atomic Structure of Adenosine
Deaminase Complexed with A Transition-State Analog: Understanding Catalysis
and Immunodeficiency Mutation. Science 252 : 1278–1284.
[4] B. Even, R. Wofenden. 1970. A Potential Transition State Analog for Adenosine
Deaminase. J. Am. Chem. Soc. 92 : 4751–4752.
[5] T. Weber, K. Welzel, S. Pelzer, A. Vente, W. Wohlleben. 2003. Exploiting The
Genetic Potential of Polyketide Producing Streptomycetes. J. Biotechnol. 106 :
221–232.
[6] S.D. Bentley, K.F. Chater, A.M. Gerdeno-Tarraga, G.L. Challis, N.R. Thomson,
C.W. James, D.E. Harris, M.A. Quail, H. Keiser, D. Harper, A. Bateman, S.
Brown, G. Chandra, C.W. Chen, M. Collins, A. Cronin, A. Fraser, A. Goble, J.
Hidalgo, T. Hornsby, S. Howarth, C.H. Huang, T. Kieser, L. Larke, L. Murphy,
K. Oliver, S. O’Neil, E. Rabbinowitsch, M.A. Rajandream, K. Rutherford, S.
Rutter, K. Seeger, D. Saunders, S. Sharp, R. Squares, S. Squares, K. Taylor, T.
Warren, A. Wietzorrek, J. Woodward, B.G. Barrell, J. Parkhill, D.A. Hopwood.
2002. Complete Genome Sequence of The Model Actinomyces Streptomyces
Coelicolor A3. Nature 417 : 141–147.
[7] C. Ribard, M. Rochet, B. Labedan, B. Daignan-Fornier, P. Alzari, C. Scazzochio,
N. Oestreicher. 2003. Sub-Families Of A/B Barrel Enzymes: A New Adenine
Deaminase Family. J. Mol. Biol. 334 : 1117–1131.
[8] T. Kieser, M.J. Bibb, M.J. Buttner, K.F. Chater, D.A. Hopwood. 2000. Practical
Streptomyces Genetics. England : John Innes Foundation.
[9] P. Howhan, S. Pornbanlualap. 2003. Cloning and Effective Induction of
Escherichia Coli Nucleoside Diphosphate Kinase by Lactose. SciAsia 29 : 347–
353.
[10] J. Cory, R.J. Suhadolnik. 1965. Structural Requirements of Nucleosides for
Binding by Adenosine Deaminase. Biochemistry 4 : 1729–1732.
[11] D.E. Ingolia, C.Y. Yeung, I.F. Orengo, M.L. Harrison, E.G. Frayne, F.B.
Rudolph, R.E. Kellems. 1985. Purification and Characterization of Adenosine
Deaminase from a Genetically Enriched Mouse Cell Line. J. Boil. Chem. 260 :
13261–13267.
[12] W.P. Schrader, A.R. Stacy. 1979. Immunoassay of The Adenosine Deaminase
Complexing Proteins of Human Tissues and Body Fluids. J. Biol. Chem. 254 :
11958–11963.
[13] E.T. Larson, W. Deng, B.E. Krumm, A. Napuli, N. Mueller, W.C. Van Voorthis,
F.S. Buckner, E. Fan, A. Lauricella, G. DeTitta, J. Luft, F. Zucker, W.G. Hol,
C.L. Verlinde, E.A. Merritt. 2008. Structures of Substrate- And Inhibitor-Bound
Adenosine Deaminase from A Human Malaria Parasite Show A Dramatic
Conformational Change and Shed Light on Drug Selectivity. J. Mol. Biol. 381 :
975–988.
[14] R. Wolfenden, J. Kaufman, J. B Macon. 1969. Ring-Modified Substrates of
Adenosine Deaminase. Biochemistry 8 : 2412–2415.
[15] L.A. Heppel, J. Hurwitz, B.L. Horeckek. 1957. Adenine Deaminase of
Azotobacter Vinelandii. J. Am. Chem. Soc. 79 : 630–633.
[16] H. Matsui, M. Shimaoka, H. Kawasaki, Y. Takenaka, O. Kurahashi. 2001.
Adenine Deaminase Activity of The Yic P Gene Product of Escherichia Coli.
Biosci. Biotechnol. Biochem. 65 : 1112–1118.
[17] S.A. Maier, J.R. Galellis, H.E. Mcdermid. 2005. Phylogenetic Analysis Reveals
A Novel Protein Family Closely Related to Adenosine Deaminase. J. Mol. Evol.
61 : 776–794.
[18] D.J. Merkler, P.C. Kline, P. Weiss, V.L. Schramm. 1993. Transition-State
Analysis of AMP Deaminase. Biochemistry 32 : 12993–13001.

Review jurnal dari :


Pornbanlualap, Somchai and Pornchanok Chalopagorn. 2011. Adenosine Deaminase
from Streptomyces Coelicolor: Recombinant Expression, Purification and
Characterization. Elsevier 78 : 167-173.