UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH

UJI STABILITAS OBAT SPIRONOLAKTON TERHADAP

PERUBAHAN pH DENGAN MENGGUNAKAN
KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (KCKT)

SKRIPSI

Ririn Astri Sabdowati

1111102000040

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN

PROGRAM STUDI FARMASI
JAKARTA
JUNI 2015
 UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH

UJI STABILITAS OBAT SPIRONOLAKTON TERHADAP

PERUBAHAN pH DENGAN MENGGUNAKAN
KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (KCKT)

SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat memperoleh gelar sarjana Farmasi

Ririn Astri Sabdowati

1111102000040

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN

PROGRAM STUDI FARMASI
JAKARTA
JUNI 2015

ii
 HALAMAN PERNYATAAN ORISINILITAS

Skripsi ini adalah hasil karya saya sendiri, dan semua sumber baik yang dikutip

maupun dirujuk telah saya nyatakan benar.

Nama : Ririn Astri Sabdowati

NIM : 1111102000040

Tanda Tangan :

Tanggal : 8 Juni 2015

iii
 LEMBAR PERSETUJUAN PEMBIMBING

NAMA : RIRIN ASTRI SABDOWATI

NIM : 1111102000040
PROGRAM STUDI : Strata-1 Farmasi
JUDUL : UJI STABILITAS OBAT SPIRONOLAKTON
TERHADAP PERUBAHAN pH DENGAN
MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA
TINGGI (KCKT)

Disetujui Oleh:

Pembimbing I
Pembimbing II

Nelly Suryani, Ph.D, Apt

NIP. 19651024 200501 2 001 Supandi, M.Si, Apt

Mengetahui,
Kepala Program Studi Farmasi
Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

Umar Mansur, M. Sc,. Apt

iv
 HALAMAN PENGESAHAN

Skripsi ini diajukan oleh :

Nama : Ririn Astri Sabdowati
NIM : 1111102000040
Program Studi : Farmasi
Judul Skripsi : Uji Stabilitas Obat Spironolakton Terhadap Perubahan
pH Dengan Menggunakan Kromatografi Cair Kinerja
Tinggi (KCKT)

Telah berhasil dipertahankan di hadapan Dewan Penguji dan diterima sebagai bagian
persyaratan yang diperlukan untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi pada Program
Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri
(UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta

DEWAN PENGUJI

Pembimbing 1 : Nelly Suryani, Ph.D., Apt ( )

Pembimbing 2 : Supandi M.Si., Apt ( )

Penguji 1 : Umar Mansur, M.Sc., Apt ( )

Penguji 2 : Lina Elfita M.Si., Apt ( )

Ditetapkan di : Jakarta
Tanggal : 8 Juni 2015

v
 ABSTRAK

Nama : Ririn Astri Sabdowati

Program Studi : Farmasi
Judul Skripsi : Uji Stabilitas Obat Spironolakton Terhadap Perubahan PH dengan
Menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)

Spironolakton merupakan obat hipertensi golongan diuretik antagonis aldosteron yang

umumnya dibuat dalam bentuk tablet salut film tidak dalam bentuk larutan ataupun suspensi. Di
Indonesia spironolakton terkadang digabung dengan obat-obat lain terutama untuk pasien geriatrik
yang mengalami komplikasi penyakit yang terkadang sulit untuk menelan obat ataupun pasien
tersebut dalam keadaan koma. Pencampuran obat dan perubahan bentuk sediaan obat sebelum
digunakan dapat mempengaruhi pH akhir sediaan. Sedangkan spironolakton merupakan senyawa
ester yang mengandung gugus lakton yang mudah terhidrolisis pada perubahan pH. Dimana reaksi
ini akan menyebabkan terjadinya degradasi spironolakton. Pada penelitian ini, persentase kadar
spirononlakton dalam sediaan suspensi yang dibuat dengan cara menggerus tablet spironolakton
dan mensuspensikannya dengan air diukur dengan mengunakan metode KCKT. Suspensi
spironolakton yang telah dibuat ditambahkan dapar untuk memberi variasi suasana pH hingga
diperoleh pH 3,5,7 dan 9 dan diujikan pada menit ke 0,15,30,45, dan 60. Persen kadar
spironolakton pada ph 3 adalah 19%, 21%, 22%,27%,dan 40%. Pada pH 5 100%,88%,85%,74%
dan 91%. Pada pH 7 61%,46%,38%,27%,dan 35%. Pada pH 9 54%,50%,41%,38%, dan 38%.
Kadar spironolakton pada pH 3, 7, dan 9 pada semua menit sudah tidak dapat diterima, sesuai
ketentuan kadar spironolakton dalam sediaan. Sedangkan pada pH 5 pada menit ke-0 saja yang
masih dapat diterima. Spironolakton lebih stabil pada atau mendekati pH optimum yaitu 4.5.

Kata Kunci : Suspensi spironolakton, spironolakton, stabilitas, kadar, pH, persen degradasi

vi
 ABSTRACT

Name : Ririn Astri Sabdowati

Study program : Pharmacy
Thesis title : Stability Test on Spironolactone towards pH changes using High
Performance Liquid Chromatography (HPLC)

Spironolactone is an aldosterone antagonist diuretic drug for hypertension which is

generally made in form of film-coated tablets not liquid nor suspension. In Indonesia,
spironolactone is sometimes combined with other medicines especially for geriatric patients who
suffer complications and sometimes have difficulty in swallowing medicine or those patients who
are in a comma-state. Mixture of drug and the changes of drug form before being used can affect
the final pH, while spironolactone is an ester containing lactone group which is easily hydrolyzed
towards change of pH. This reaction will cause degradation of spironolactone. In this research, the
spironolactone percentage in suspension was created by grinding the spironolactone tablet and
suspended it with water measured by using HPLC method. Buffer was added to the spironolactone
suspension to give variation to pH solution until pH 3, 5, 7, and 9 were obtained which then tested
on minute 0, 15, 30, 45, and 60. The percentages of spironolactone at pH 3 were 19%, 21%, 22%,
27%, and 40%. At pH 5 the percentages were 100%, 88%, 85%, 74% and 91%, while at pH 7 were
61%, 46%, 38%, 27%, and 35%. At ph 9, the percentages were 54%, 50%, 41%, 38%, and 38%.
The spironolactone at pH 3, 7, and 9 at all minutes could not be accepted in accordance to the
spironolactone in the formulation. Meanwhile, at ph 5, the only one that could be accepted was at
minute 0. Spironolactone was more stabilized at or near optimum pH which was 4.5.

Keywords: Suspension spironolactone, spironolactone, stability, concentration, pH, percent

degradation

vii
 DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL........................................................................................................ ii
HALAMAN PERNYATAAN ORISINILITAS ............................................................. iii
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ............................................................. iv
LEMBAR PENGESAHAN SKRIPSI.............................................................................. v
ABSTRAK ...................................................................................................................... vi
ABSTRACT ................................................................................................................... vii
KATA PENGANTAR .................................................................................................. viii
HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH .................................... x
DAFTAR ISI ................................................................................................................... xi
DAFTAR GAMBAR .................................................................................................... xiii
DAFTAR TABEL ......................................................................................................... xiv
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................................. xv
BAB I PENDAHULUAN ............................................................................................... 1
I.1. Latar Belakang ....................................................................................................... 1
I.2. Rumusan Masalah .................................................................................................. 3
I.3. Tujuan Penelitian ................................................................................................... 3
I.4. Manfaat Penelitian ................................................................................................. 3
BAB II TINJAUAN PUSTAKA .................................................................................... 4
2.1. Stabilitas Obat ....................................................................................................... 4
2.2. Stabilitas Obat Terhadap pH ................................................................................. 6
2.3. Degradasi Obat ..................................................................................................... 7
2.4. Tablet Salut .......................................................................................................... 10
2.5. Spironolakton ...................................................................................................... 10
2.6. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) ....................................................... 14
BAB III METODE PENELITIAN ............................................................................. 18
3.1. Tempat dan Waktu Penelitian ............................................................................. 18
3.2. Alat dan Bahan .................................................................................................... 18
3.3. Prosedur Kerja ..................................................................................................... 18
3.3.1 Pembuatan Fase Gerak ............................................................................. 18
3.3.2 Preparasi Standar ...................................................................................... 18
3.3.3 Optimasi dan Validasi ............................................................................... 19
3.3.4 Preparasi dan Pengujian Sampel .............................................................. 20
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN...................................................................... 22
4.1. Penentuan Panjang Gelombang Optimum........................................................... 22
4.2. Pemilihan Fase Gerak .......................................................................................... 22
4.3. Uji Kesesuaian Sistem ......................................................................................... 22
4.4. Pembuatan Kurva Kalibrasi................................................................................. 23
4.5. Uji Akurasi dan Perolehan Kembali .................................................................... 24
4.6. Uji Presisi ............................................................................................................ 25

xi
 4.7. Pengukuran Kadar Spironolakton dalam Sampel ................................................ 26
4.8. Uji Statistik Nilai Normalitas .............................................................................. 29
4.9. Uji Statistik Nilai Homogenitas dan ANOVA .................................................... 29
4.10. Pembahasan Pengukuran Kadar Spironolakton dalam Sampel ......................... 30
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ....................................................................... 34
5.1. Kesimpulan .......................................................................................................... 34
5.2. Saran .................................................................................................................... 34
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................... 35

xii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1. Contoh hidrolisis dengan katalis asam ...................................................... 8

Gambar 2.2. Contoh hidrolisis dengan katalis basa ...................................................... 8
Gambar 2.3. Struktur Spironolakton............................................................................. 10
Gambar 2.4. Struktur Lakton ....................................................................................... 12
Gambar 2.5. Instrumen KCKT .................................................................................... 15
Gambar 4.1. Kurva Kalibrasi ....................................................................................... 23
Gambar 4.2. Grafik perbandingan pH akhir sediaan terhadap Waktu ......................... 30
Gambar 4.3. Spironolakton .......................................................................................... 31
Gambar 4.4 Hidrolisis Gugus Ester Dalam Suasana Asam ......................................... 32
Gambar 4.5. Hidrolisis Gugus Ester Dalam Suasana Basa ......................................... 32
Gambar 4.6. Proses Pembentukan Canrenone Secara Kimiawi ................................... 33

xiii
 DAFTAR TABEL

Tabel 4.1. Uji kesesuaian Sistem .................................................................................. 23

Tabel 4.2. Kurva Kalibrasi ............................................................................................ 23
Tabel 4.3. Uji Akurasi ................................................................................................... 24
Tabel 4.4. Uji Presisi .................................................................................................... 25
Tabel 4.5. Persentase Kadar Spironolakton pada pH 3 ................................................. 26
Tabel 4.6. Persentase Kadar Spironolakton pada pH 5 ................................................. 27
Tabel 4.7. Persentase Kadar Spironolakton pada pH 7 ................................................. 27
Tabel 4.8. Persentase Kadar Spironolakton pada pH 9 ................................................. 28
Tabel 4.9. Uji Statistik ANOVA .................................................................................. 29

xiv
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Alur Kerja ............................................................................................... 36

Lampiran 2. Sertifikat Spironolakton Standar Sigma .................................................. 37
Lampiran 3. Panjang Gelombang Maksimum Spironolakton ...................................... 38
Lampiran 4. Perhitungan Persiapan Kurva Kalibrasi .................................................. 39
Lampiran 5. Kromatogram Larutan Standar dan Tablet ............................................. 41
Lampiran 6. Kromatogram Kalibrasi .......................................................................... 42
Lampiran 7. Kurva Dan Tabel Kalibrasi ..................................................................... 43
Lampiran 8. Hasil Kromatogram Uji Kesesuaian Sistem ........................................... 44
Lampiran 9. Hasil Uji Kesesuaian Sistem ................................................................... 45
Lampiran 10. Hasil Uji Akurasi .................................................................................. 46
Lampiran 11. Hasil Uji Presisi .................................................................................... 47
Lampiran 12. Perhitungan Preparasi Sampel dan Luas Area secara Manual .............. 49
Lampiran 13. Hasil Kromatogram pH 3 ....................................................................... 50
Lampiran 14. Hasil dan Kurva pH 3 ............................................................................ 51
Lampiran 15. Hasil Kromatogram pH 5 ...................................................................... 52
Lampiran 16. Hasil dan Kurva pH 5 ............................................................................ 53
Lampiran 17. Hasil Kromatogram pH 7 ....................................................................... 54
Lampiran 18. Hasil dan Kurva pH 7 ............................................................................ 55
Lampiran 19. Hasil Kromatogram pH 9 ....................................................................... 56
Lampiran 20. Hasil dan Kurva pH 9 ........................................................................... 57
Lampiran 21. Kurva Perbandingan Konsentrasi terhadap Waktu ............................... 58
Lampiran 22. Hasil Uji Statistik ANOVA, Normalitas dan Homogenitas ................. 59

xv
 BAB I
PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang
Stabilitas dalam arti luas dapat didefinisikan sebagai ketahanan suatu produk
sesuai dengan batas-batas tertentu selama penyimpanan dan penggunaanya atau
umur simpan suatu produk dimana produk tersebut masih mempunyai sifat dan
karakteristik yang sama seperti pada waktu pembuatan. (David B. Troy, 2006;
USP 30)
Obat dibuat dalam berbagai bentuk sediaan disesuaikan dengan cara dan
tujuan pemakaian, pertimbangan sifat bahan obat dan sebagainya. Bila bentuk
suatu sediaan obat diubah seperti dilarutkan, diserbuk, ditambahkan bahan
tambahan lain atau dilakukan modifikasi faktor lingkungan seperti pada kondisi
penyimpanan, kemungkinan dapat terjadi perubahan pada stabilitas obat tersebut.
(Connors et al, 1992)
Ada beberapa parameter yang perlu dipertimbangkan dalam memformulasi
suatu sediaan obat yang stabil. Diantaranya sifat kimia, sifat fisik, mikrobiologi,
efek terapi, efek toksik. Evaluasi stabilitas sediaan tidak hanya memperhitungkan
zat aktif farmasi, tetapi juga eksipien dan kemasan produk obat. Selanjutnya,
karena kemudahan dan ketersediaan bahan, pada praktek umum dilakukan
pembuatan cairan suspensi oral yang disiapkan dari bentuk sediaan padat seperti
tablet atau kapsul yang tersedia. Oleh karena itu potensi interaksi tambahan dapat
terjadi antara obat. (Niazi, Sarfaraz, 2006)
Beberapa hal yang dapat mempengaruhi stabilitas dari sediaan farmasi salah
satunya adalah interaksi bahan aktif dengan bahan aktif lain dalam
penggunaannya, faktor lingkungan seperti temperatur juga mempengaruhi
stabilitas obat. Demikian pula faktor formulasi seperti pH, sifat dalam air dan sifat
pelarutnya dapat mempengaruhi stabilitas obat (David B. Troy, 2006; USP. 30)
Secara fisiologis, larutan obat harus diformulasikan sedekat mungkin ke pH
stabilitas optimumnya karena besarnya laju reaksi hidrolitik yang dipengaruhi atau
dikatalisis oleh gugus hidroksi. (Ansel, 1994; Lachman et al,2007)

1 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 2

Kebanyakan molekul obat baik asam atau basa lemah akan terionisasi
yang ditentukan oleh pKa senyawa dan pH cairan biologis dimana obat itu akan
terlarut. pH dari larutan obat mungkin memiliki efek yang besar pada stabilitas,
bergantung pada mekanisme reaksinya. Ketika obat diformulasikan dalam bentuk
larutan, penting untuk mengetahui pH optimum sediaan. Kebanyakan obat akan
berkontak dengan air dan bahkan obat berbentuk solid dapat kontak dengan air.
Oleh karena itu, hidrolisis menjadi reaksi yang paling banyak ditemukan.
Hidrolisis sering menjadi jalur degradasi dari obat-obat yang memiliki gugus ester
dan amida. (Banker, Gilbert S and C T Rhodes, 2002; Min Li, 2012)
Spironolakton umumnya dibuat dalam bentuk tablet salut film dengan
kekuatan dosis 25, 50 dan 100 mg tidak dalam bentuk larutan ataupun suspensi.
Spironolakton praktis tidak larut dalam air dan larut dalam alkohol. Sedikit larut
dalam kondisi basa. Sediaan larutan oral yang dibuat dengan spironolakton stabil
setidaknya selama 30 hari dan biasanya memiliki nilai pH akhir 3.5 – 6.5.
(Mahmoud, Ismail M et al, 2014)
Spironolakton merupakan senyawa ester yang memiliki struktur lakton yang
mudah terhidrolisis. Struktur lakton merupakan salah satu dari senyawa karbonil
labil yang memiliki pusat elektropositif yang mudah bereaksi dengan nukleofil.
(Banker, Gilbert S and C T Rhodes, 2002)
Lakton merupakan ester siklik. Menurut studi oleh Kaufman, antara
hidrolisis menghasilkan reaksi campuran yang sama dibawah katalis asam.
Lovastatin dan simvastatin, dua anggota dalam golongan obat untuk
hyperlipidemia yang mengandung lakton yang mudah terhidrolisis. Kaufman
mempelajari kinetika hidrolisis dan termodinamika kedua obat. Karena struktur
dari dua obat hanya berbeda oleh kelompok metilen yang jauh dari bagian lakton,
dua obat ini ditemukan memiliki parameter kinetik dan termodinamika yang
sangat mirip. Energi aktivasi untuk hidrolisis kedua obat harus berada di
lingkungan di ph 2. Sedangkan daptomycin adalah antibiotik lipopeptida yang
mengandung cincin makrosiklik ester dihubungkan dengan sembilan ikatan amida
dan satu ikatan ester. Energi aktivasi untuk hidrolisis ikatan ester terjadi pada pH
10. (Min Li, 2012)

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 3

Di Indonesia spironolakton terkadang digabung dengan obat-obat lain terutama

untuk pasien geriatrik yang mengalami komplikasi penyakit yang terkadang sulit
untuk menelan obat ataupun pasien tersebut dalam keadaan koma sehingga sulit
untuk diberikan obat berbentuk tablet. Pencampuran obat dan perubahan bentuk
sediaan obat sebelum digunakan terkadang dapat mempengaruhi pH akhir sediaan.
Sedangkan spironolakton merupakan senyawa ester yang mengandung gugus lakton
yang mudah terhidrolisis pada perubahan pH.
Oleh karena itu perlu dilakukan uji stabilitas obat dalam pemberian obat
antihipertensi Spironolakton terhadap pengaruh perubahan variasi pH yaitu 3, 5, 7
dan 9 dalam sediaan suspensi sederharna menggunakan KCKT.
1.2. Rumusan Masalah
Masalah yang diangkat dalam penelitian ini adalah di Indonesia spironolakton
terkadang digabung dengan obat-obat lain sehingga dapat mempengaruhi pH akhir
sediaan. Oleh karena itu perlu dilakukan uji stabilitas obat Spironolakton terhadap
pengaruh perubahan variasi pH yaitu 3, 5, 7 dan 9 dalam sediaan suspensi
sederharna menggunakan KCKT. Adakah penurunan kadar dari spironolakton yang
disebabkan oleh pengaruh perubahan pH.
1.3. Tujuan Penelitian
 Melakuan analisa kandungan kadar dari spironolakton dalam variasi suasana
pH asam dan basa 3, 5, 7, dan 9.
I.4. Manfaat Penelitian
 Memberikan informasi kondisi kestabilan spironolakton dalam variasi
suasana pH asam dan basa.
 Sebagai informasi bagi dokter, farmasis darn tenaga kesehatan lain di rumah
sakit dalam memberikan obat yang rasional dan tepat.

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Stabilitas Obat
Stabilitas dalam arti luas dapat didefinisikan sebagai ketahanan suatu
produk sesuai dengan batas-batas tertentu selama penyimpanan dan penggunaanya
atau umur simpan suatu produk dimana produk tersebut masih mempunyai sifat
dan karakteristik yang sama seperti pada waktu pembuatan. Banyak faktor yang
mempengaruhi stabilitas dari sediaan farmasi, antara lain stabilitas bahan aktif,
interaksi antara bahan aktif dengan bahan tambahan, proses pembuatan bentuk
sediaan, kemasan, cara pengemasan dan kondisi lingkungan yang dialami selama
pengiriman, penyimpanan, penanganan dan jarak waktu antara pembuatan dan
penggunaan. Faktor lingkungan seperti temperatur, radiasi cahaya dan udara
(khususnya oksigen, karbon dioksida dan uap air) juga mempengaruhi stabilitas.
Demikian pula faktor formulasi seperti ukuran partikel, pH, sifat dari air dan sifat
pelarutnya dapat mempengaruhi stabilitas. (David B. Troy,Paul Beringer, 2006;
USP 30)
Stabilitas produk obat dibagi menjadi stabilitas secara kimia dan stabilitas
secara fisika. Faktor-faktor fisika seperti panas, cahaya, dan kelembapan, mungkin
akan menyebabkan atau mempercepat reaksi kimia, maka setiap menentukan
stabilitas kimia, stabilitas fisika juga harus ditentukan (Attwood dan Florence,
2011).
Stabilitas fisika didasari pada perubahan sifat fisika dari suatu produk yang
tergantung waktu (periode penyimpanan). Contoh dari perubahan fisika antara
lain migrasi (perubahan) warna, perubahan rasa, perubahan bau, perubahan tekstur
atau penampilan. Evaluasi dari uji stabilitas fisika meliputi: pemeriksaan
organoleptis, homogenitas, pH, bobot jenis (Attwood dan Florence, 2011).
Stabilitas kimia suatu obat merupakan faktor yang menentukan lamanya
waktu suatu obat untuk mempertahankan integritas kimia dan potensinya seperti
yang tercantum pada etiket dalam batas waktu yang ditentukan. Pengumpulan dan
pengolahan data merupakan langkah menentukan baik buruknya sediaan yang
dihasilkan (Attwood dan Florence, 2011).

4 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 5

Secara reaksi kimia, zat aktif dapat terurai karena beberapa faktor
diantaranya ialah oksigen (oksidasi), air (hidrolisa), suhu (oksidasi), cahaya
(fotolisis), karbondioksida (turunnya pH larutan), sesepora ion logam sebagai
katalisator reaksi oksidasi. Jadi jelasnya faktor luar juga mempengaruhi
ketidakstabilan kimia seperti, suhu, kelembaban udara dan cahaya (Attwood dan
Florence, 2011).
Stabilitas mikrobiologi suatu sediaan adalah keadaan tetap di mana sediaan
bebas dari mikroorganisme atau memenuhi syarat batas miroorganisme hingga
batas waktu tertentu. Stabilitas mikrobiologi diperlukan oleh suatu sediaan
farmasi untuk menjaga atau mempertahankan jumlah dan menekan pertumbuhan
mikroorgansme yang terdapat dalam sediaan tersebut hingga jangka waktu
tertentu yang diinginkan (Attwood dan Florence, 2011).
Stabilitas sediaan farmasi merupakan salah satu kriteria yang amat penting
untuk suatu hasil produksi yang baik. Ketidakstabilan produk obat dapat
mengakibatkan terjadinya penurunan sampai dengan hilangnya khasiat, obat dapat
berubah menjadi toksik atau terjadinya perubahan penampilan sediaan (warna,
bau, rasa, konsistensi dan lain - lain) yang akibatnya merugikan bagi pemakai.
(Connors et al, 1994)
Obat dibuat dalam berbagai bentuk sediaan disesuaikan dengan cara dan
tujuan pemakaian, pertimbangan sifat bahan obat dan sebagainya. Bila bentuk
suatu sediaan obat diubah seperti dilarutkan, diserbuk, ditambahkan bahan
tambahan lain atau dilakukan modifikasi faktor lingkungan seperti pada kondisi
penyimpanan, kemungkinan dapat terjadi perubahan pada stabilitas obat tersebut.
(Connors et al, 1994)
Ketidakstabilan suatu sediaan farmasi dapat dideteksi melalui perubahan
sifat fisika, kimia serta penampilan dari suatu sediaan farmasi. Besarnya
perubahan kimia sediaan farmasi ditentukan dari laju penguraian obat melalui
hubungan antara kadar obat dengan waktu, atau berdasarkan derajat degradasi dari
suatu obat yang jika dipandang dari segi kimia, stabilitas obat dapat diketahui dari
ada atau tidaknya penurunan kadar selama penyimpanan.

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 6

Secara fisiologis, larutan obat harus diformulasikan sedekat mungkin ke

pH stabilitas optimumnya karena besarnya laju reaksi hidrolitik dipengaruhi /
dikatalisis oleh gugus hidroksi. (Ansel, 1994; Lachman et al, 2007)
2.2 Stabilitas Obat Terhadap pH
Kebanyakan molekul obat baik asam atau basa lemah akan terionisasi
yang ditentukan oleh pKa senyawa dan pH cairan biologis dimana obat itu akan
terlarut. pH dari larutan obat mungkin memiliki efek yang besar pada stabilitas,
bergantung pada mekanisme reaksinya. Ketika obat diformulasikan dalam bentuk
larutan, penting untuk mengetahui pH optimum sediaan. (Banker, Gilbert S and C
T Rhodes, 2002)
Kebanyakan obat parenteral, obat akan berkontak dengan air dan bahkan
obat berbentuk solid dapat kontak dengan air. Oleh karena itu, hidrolisis menjadi
reaksi yang paling banyak ditemukan. Hidrolisis sering menjadi jalur degradasi
dari obat-obat yang memiliki gugus ester dan amida. Ketika obat tidak terion
dalam air, maka akan ada tiga kemungkinan reaksi hidrolitik. Degradasi dapat
terjadi akibat katalis asam tertentu yang disebabkan oleh kinetik pada tahap
pertama, hidrolisis air (tahap kedua) dan katalisis basa spesifik (tahap ketiga).
(Min Li, 2012; Banker, Gilbert S and C T Rhodes, 2002)
Lakton merupakan cincin ester. Laktonisasi yang merupakan reforming
cincin ester meningkat pada lakton dengan ukuran cincin kecil dan sedang.
Menurut studi oleh Kaufman, antara hidrolisis dan laktonisasi menghasilkan
reaksi campuran yang sama dibawah katalis asam. Katalisasi oleh asam pada
hidrolisis dari lakton bersifat reversible. (Min Li, 2012)
Degradasi dari banyak senyawa obat dalam larutan dapat dipercepat atau
diperlambat secara ekponensial oleh nilai pH yg naik atau turun dari rentang pH
nya. Nilai pH yang di luar rentang dan paparan terhadap temperatur yang tinggi
adalah faktor yang mudah mengkibatkan efek klinik dari obat secara signifikan,
akibat dari reaksi hidrolisis dan oksidasi. Larutan obat atau suspensi obat dapat
stabil dalam beberapa hari, beberapa minggu, atau bertahun-tahun pada formulasi
aslinya, tetapi ketika dicampurkan dengan larutan lain yg dapat mempengaruhi
nilai pH nya, senyawa aktif dapat terdegradasi dalam hitungan menit.

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 7

Sistem pH dapar yang biasanya terdegradasi dari asam atau basa lemah
dan garamnya biasanya ditambahkan ke dalam sediaan cair ditambahkan untuk
mempertahankan pHnya pada rentang dimana terjadinya degradasi obat minimum.
(Min Li, 2012)
2.3 Degradasi Obat
Substansi obat yang digunakan dalam farmasetikal memiliki struktur
molekul yang berbeda-beda. Oleh karena itu rentan terdegradasi oleh banyak dan
berbagai macam jalur degradasi. Jalur degradasi antara lain adalah hidrolisis,
dehidrasi, isomerisasi dan rasemisasi, eliminasi, oksidasi, photodegradasi dan
interaksi kompleks dengan eksipien ataupun dengan obat lain. Ini sangat berguna
untuk memperkirakan ketidakstabilan kimia yang terjadi berdasarkan struktur
melekulnya. Banyak obat yang cukup stabil, tetapi kelompok dengan gugus
fungsional seperti ester dan cincin laktam yang terdapat pada beberapa obat rentan
terhadap hidrolisis dan gugus fungsional seperti katekol dan fenol cukup mudah
teroksidasi. (Min Li, 2012; Lee, David C, M L Webb, 2009)
a. Hidrolisis
Hidrolisis merupakan salah satu dari reaksi utama dari degradasi obat
terutama dalam bentuk larutan. Hidrolisis adalah proses dua tahap, dimana
nukleofil, seperti air dan ion hidroksi yang ditambahkan yang kemudian akan
membentuk senayawa intermediet dari leaving group yang terlepas pada tahap
kedua. Struktur senyawa mempengaruhi tingkat hidrolisis, dimana semakin
kuat asam konjugasi yang terlepas maka reaksi yang terjadi semakin cepat.
Banyak obat yang mengandung gugus fungsional yang sangat rentan terhadap
hidrolisis.
Contoh dari dua tipe reaksi hidrolisis (Niazi, Sarfaraz, 2006):

X = OR (ester), NR1R2 (amida) (Tipe I)

X = Halogen atau Leaving Group (tipe II)

Hidrolisis tipe satu dapat dikatalisasi baik oleh asam dan basa, oleh karena
itu kontrol pH formulasi merupakan salah satu hal yang mempengaruhi tingkat
dekomposisi (Niazi, Sarfaraz, 2006):.

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 8

Gambar 2.1. Contoh hidrolisis dengan katalis asam

Gambar 2.2. Contoh hidrolisis dengan katalis basa

Beberapa obat-obat yang memiliki gugus fungsi yang rentan terhadap

hidrolisis antara lain aspirin (ester), spironolakton (tiol ester, lakton),
kloramfenikol (amida), sulfonamide, fenobarbitak (imida), methicillin
(lactam) dan klorambusil (alifatik terhalogenasi) (Niazi, Sarfaraz, 2006):.
Degradasi melalui reaksi hidrolisis dipengaruhi oleh sejumlah factor
seperti pH larutan, garam penyangga, dan kekuatan ion. Faktor yang paling
penting adalah pH larutan. Oleh karena itu penyesuaian pH dan penggunaan
dapar yang tepat dan jika memungkinkan dalam jumlah sangat kecil (Niazi,
Sarfaraz, 2006)

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 9

b. Oksidasi
Reaksi penguraian kedua yang paling umum adalah melalui reaksi
oksidasi. Penguranga/ oksidasi (redoks) merupakan reaksi yang melibatkan
baik transfer oksigen atau hidrogen ataupun elektron. Oksidasi disebabkan
oleh adanya oksigen dan reaksi yang dapat diinisasi oleh pemanasan, cahaya,
dan paparan logam yang menghasilkan radikal bebas organic. Radikal ini
menyebarkan reaksi oksidasi yang berlangsung hingga inhibitor
menghancurkan radikal atau sampai terbentuknya reaksi samping yang
memutuskan rantai. Sensitivitas masing-masing entisitas obat baru terhadap
oksigen atmosfir harus dievaluasi untuk mententukan apakah produk akhir
perlu dikemas dalam kondisi kedap udara dan jika harus mengandung
antioksidan (Niazi, Sarfaraz, 2006).
Obat mungkin akan terdegradasi menjadi substansi toksik. Oleh karenanya
penting untuk mengetahui tidak hanya berapa banyak obat tersebut berkurang tapi
juga apa yang menyebabkannya terdegradasi. Beberapa kasus, zat pendegradasi
mungkin berupa zat toksik. Contohnya obat pralidoxine yang terdegradasi melalui
dua jalur pH. Di kondisi pH basa, produk toksik cyanid terbentuk, pada obat lain,
Contohnya zat pendegradasi dari tetrasiklin adalah epianhydrotetrasiklin diketahui
dapat menyebabkan sindrom fanconi. Terkadang, hasil reaksi intermediet yang
terbentuk diketahui atau dicurigai memiliki efek toksik. Contohnya adalah
penisilin pada pH asam akan berubah menjadi asam penicilenik yang dicurigai
berkontribusi dalam efek alergi terhadap penisilin. (Yoshioka, Sumie and Stella,
Valentino J, 2000)
Degradasi obat mungkin akan membuat obat berubah bentuk secara
estetika sehingga tidak dapat digunakan. Produk yang diduga dapat
mengkontaminasi jika didapati perubahan yang signifikan, seperti perubahan
warna dan bau. Contohnya adalah epinephrine yang teroksidasi menjadi
adrenochrome akan berubah warna menjadi warna merah pekat. Produk
epinephrine yang berubah warna menjadi pink sudah dianggap tercemar.
Meskipun obat mungkin akan stabil dalam formulasinya, formulator harus juga
membuat obat dapat stabil di kondisi pH dalam saluran GI dan pada usus halus.
(Yoshioka, Sumie and Stella, Valentino J, 2000)

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 10

2.4 Tablet Salut

Tablet salut merupakan tablet yang ditutupi dengan satu atau lebih lapisan
dari campuran zat seperti gula, polimer, dan bahan- bahan lain yang terkadang
juga aktif. Tablet dilapisi kerena berbagai alasan. Beberapa alasannya seperti
melindungi zat aktif dari udara, kelembaban, cahaya, bau, rasa atau bahan- bahan
yang dapat merusak zat aktif. (WH0, 2006)
Tablet salut dibagi menjadi (International Pharmacopoeia,2006) :
a. Tablet salut gula
Tablet yang dilapisi oleh gula untuk memperbaiki/ menutup rasa dari zat
aktif.
b. Tablet salut film
Tablet yang disalut dengan lapisan tipis resin, polimer dan atau platicizer
yang mampu membentuk film yang bertujuan untuk memperbaiki sifat
fisika kimia zat aktif.
c. Tablet modified release
Tablet yang disalut oleh matriks yang mengandung bahan pengisi yang
dibuat secara terpisah atau bersama dengan zat aktif yang berguna untuk
memodifikasi laju pelepasan obat dalam tubuh.
2.5 Spironolakton
o Bentuk sediaan : Letonal tablet 100 mg
o Nama IUPAC : 7α-acetylthio-3-oxo-17α-pregn-4-ene-21,17-carbolactone
o Berat molekul : 416.57
o Struktur kimia : C24H32O4S
Gambar 2.3. Struktur Spironolakton

(Sumber : USP 30)

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 11

o Fisikokimia :
 Pemerian : hablur krem muda hingga coklat muda, bau lemah seperti
merkaptan dan stabil di udara.
 Kelarutan : praktis tidak larut dalam air, mudah larut dalam benzene
dan kloroform, larut dalam etil asetat dan alkohol, sukar larut dalam
minyak lemah.
o Stabilitas :
Spironolakton tersedia secara komersial dalam beberapa kekuatan tablet
untuk pemberian oral untuk orang dewasa dan anak-anak. Namun, ada kalanya
digunakan untuk mengobati pasien lansia atau koma yang memerlukan persiapan
dan penggunaan suspensi oral. The United States Pharmacopeia (USP) telah
menetapkan beyond use dating (BUD) untuk sediaan oral dan topikal dalam
berbagai kegunaan. Tujuan BUD adalah untuk memastikan pasien menyadari
manfaat terapeutik produk suspensi oral yang disiapkan. Studi telah dilakukan
untuk menentukan stabilitas spironolakton ketika disiapkan dalam suspensi di
masa lalu.
Satu studi yang dilakukan oleh Nahata et al mengemukakan stabilitas
suspensi spironolakton selama setidaknya 90 hari ketika suspensi disimpan di
bawah pendinginan dan pada suhu kamar. Sebuah studi serupa yang dilakukan
oleh Mathur et al meneliti tiga konsentrasi suspensi spironolakton (2,5, 5, dan 10
mg mL -1) pada tiga suhu yang berbeda (5°C, suhu kamar lingkungan, dan 30°C)
untuk jangka waktu empat minggu. Hasil ini menunjukkan bahwa suspensi yang
stabil untuk masa studi empat minggu. Sebuah studi oleh Allen dan Erickson
(1996) mengevaluasi 25 mg mL -1 suspensi spironolakton disimpan pada suhu 5 °
C dan 25 ° C selama periode enam puluh hari dan menemukan stabilitas kimia
spironolakton dapat diterima sesuai standar USP. (Basusarkar et al, 2013)
Spironolakton merupakan senyawa ester yang memiliki struktur lakton yang
mudah terhidrolisis. Struktur lakton merupakan salah satu dari senyawa karbonil
labil yang memiliki pusat elektropositif yang mudah bereaksi dengan nukleofil.
(Banker, Gilbert S and C T Rhodes, 2002s 4th Ed)

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 12

Gambar 2.4. Struktur Lakton

(Sumber: Banker, Gilbert S and C T Rhodes, 2002s 4th Ed)

Spironolakton umumnya dibuat dalam bentuk tablet salut film dengan
kekuatan dosis 25, 50 dan 100 mg tidak dalam bentuk larutan ataupun suspensi.
Spironolakton praktis tidak larut dalam air dan larut dalam alkohol. Sedikit larut
dalam kondisi basa dengan stabilitas maksimum pada pH 4.5. Sediaan larutan oral
yang dibuat dengan spironolakton stabil setidaknya selama 30 hari dan biasanya
memiliki nilai pH akhir 3.5 – 6.5. (Mahmoud, Ismail M et al, 2014)
Dekomposisi spironolakton terhadap pengaruh pH menunjukkan bahwa
nilai pH optimum stabilitas untuk spironolakton adalah 4.5 pada suhu 40 oC.
sedangkan pengaruh kekuatan ionik dari dapar tidak memengaruhi secara konstan
dekomposisi dari spironolakton.Sehingga dapat diasumsikan bawha spironolakton
yang tidak terionisasi bereaksi dengan ion H+ dan OH- Pada penelitian ini diteliti
nilai dekomposisi spironolakton terhadap pengaruh pH menurut orde satu. Pada
pH 4.5 efek pH menunjukkan nilai dekomposisi minimum dengan nilai K
0.00095. sedangkan pada suasana asam pH 2.3 nilai K adalah 0.0079. pada pH 7.3
nilai K yang diperoleh adalah 0.025 dan pada ph 8.3 nilai K= 0.126. (Pramar,et al,
1991)
Pembentukan metabolit dari spironolakton menjadi canrennone juga telah
dilakukan dengan menggunakan reaksi kimia menggunakan medium air pada pH
13 melalui mekanisme deasetilasi. Pada tahap pertama terjadi hidrolisis cepat pada
pH 13, spironolakton berubah menjadi metabolitnya yaitu 7α-thiol. Tahap kedua
adalah eliminasi H2S secara perlahan dan membentuk canrenone. (W. Sadée, et al,
1974)
o Indikasi :
Spironolakton bekerja di tubulus distal ginjal untuk meningkatkan ekskresi
natrium dan air dan mengurangi eliminasi kalium. Spironolakton merupakan
antagonis kompetitif untuk mineralokortikoid, seperti aldosteron. reseptor

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 13

mineralokortikoid adalah protein intraseluler yang dapat mengikat aldosteron.

spironolakton mengikat reseptor dan kompetitif menghambat aldosteron mengikat
reseptor. ketidakmampuan aldosteron untuk mengikat reseptor mencegah
reabsorpsi natrium dan klorida ion dan air yang terkait. situs yang paling penting
dari reseptor ini adalah pada akhir distal rumit tubulus dan mengumpulkan sistem.
(Bernal et al, 2014; Lemke, Thomas L et al)
Spironolakton menghambat efek aldosteron dengan bersaing menuju reseptor
aldosteron intraseluler dalam sel tubulus distal (benar-benar bekerja pada reseptor
aldosteron di saluran pengumpul). Hal ini meningkatkan ekskresi air dan natrium,
sekaligus mengurangi ekskresi kalium. Spironolakton memiliki onset cukup
lambat. Spironolakton memiliki aktivitas anti-androgen dengan cara mengikat
reseptor androgen dan mencegah dari berinteraksi dengan dihidrotestosteron.
(Kher et al, 2013)
Pada pemberian oral, sekitar 90% dari dosis spironolakton diserap dan
dimetabolisme secara signifikan selama first pass metabolism oleh hati akan
membentuk metabolit aktif, yaitu canrenone. Canrenone merupakan antagonis
aldosteron. Anion canrenoate tidak aktif sebagai antagonis aldosteron berbeda
dengan canrenone, yang ada dalam bentuk lakton. canrenone telah diusulkan
untuk menjadi bentuk aktif dari spironolakton sebagai antagonis aldosteron.
pembentukan canrenone, bagaimanapun, tidak bisa sepenuhnya menjelaskan
aktivitas total spironolakton. Baik canrenone dan kalium canrenoate digunakan
sebagai diuretik di negara lain, namun belum tersedia di AS. (Lemke, Thomas L
et al)
Pengujian kadar dengan KCKT menurut USP :
 Fase gerak : Campuran methanol : air (60:40)
 Larutan standar : dilarutkan dengan asetonitril:air (50:50) secara
kuantitatif hingga didapat 0,5 mg/ml
 Detektor : 250 nm
 Laju alir : 1 ml/ menit
 Tailing factor : Tidak lebih dari 20
 Standart Deviation : Tidak lebih dari 1,5%

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 14

2.6 Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)

KCKT merupakan teknik pemisahan yang diterima secara luas untuk analisis
dan pemurnian senyawa tertentu dalam suatu sampel pada sejumlah bidang antara
lain; farmasi, lingkungan dan industri-industri makanan. Kegunaan umum KCKT
adalah untuk pemisahan sejumlah senyawa organik, anorganik, maupun senyawa
biologis, analisis ketidakmurnian (impurities) dan analisis senyawa-senyawa
yang tidak mudah menguap (non volatil).
KCKT paling sering digunakan untuk: menetapkan kadar senyawa-senyawa
tertentu seperti asam-asam amino, asam-asam nukleat dan protein- protein dalam
cairan fisiologis, menentukan kadar senyawa -senyawa aktif obat dan lain-lain.
Kelebihan KCKT antara lain:
 Mampu memisahkan molekul-molekul dari suatu campuran
 Resolusinya baik
 Mudah melaksanakannya
 Kecepatan analisis dan kepekaannya tinggi
 Dapat dihindari terjadinya dekomposisi/kerusakan bahan yang
dianalisis
 Dapat digunakan bermacam-macam detector
 Kolom dapat digunakan kembali
 Mudah melakukan rekoveri cuplikan
 Tekniknya tidak begitu tergantung pada keahlian operator dan
reprodusibilitasnya lebih baik
 Instrumennya memungkinan untuk bekerja secara otomatis dan
kuantitatif
 Waktu analisis umumnya singkat
 Kromatografi cair preparatif memungkinkan dalam skala besar
 Ideal untuk molekul besar dan ion.
Keterbatasan metode KCKT adalah untuk identifikasi senyawa, kecuali
jika KCKT dihubungkan dengan spektrometer massa (MS). Keterbatasan lainnya
adalah jika sampelnya sangat kompleks, maka resolusi yang baik sulit diperoleh.
(Munson, 2000)

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 15

A. Cara Kerja KCKT

Kromatografi merupakan teknik yang mana solut atau zat-zat terlarut terpisah
oleh perbedaan kecepatan elusi, dikarenakan solut-solut ini melewati suatu kolom
kromatografi. Pemisahan solut-solut ini diatur oleh distribusi dalam fase gerak
dan fase diam. Penggunaan kromatografi cair membutuhkan penggabungan
secara tepat dari berbagai macam kondisi operasional seperti jenis kolom, fase
gerak, panjang dan diameter kolom, kecepatan alir fase gerak, suhu kolom, dan
ukuran sampel. (Rohman, 2007)
B. Komponen KCKT
Gambar 2.5. Instrumen KCKT

a. Wadah Fase Gerak

Wadah fase gerak harus bersih dan lembam (inert). Wadah pelarut kosong
ataupun labu laboratorium dapat digunakan sebagai wadah fase gerak.
Wadah ini biasanya dapat meampung fase gerak antara 1 sampai 2 liter
pelarut. Fase gerak sebelum digunakan harus dilakukan degassing
(penghilangan gas) yang ada pada fase gerak, sebab adanya gas akan
berkumpul dengan komponen lain terutama dipompa dan detektor
sehingga akan mengacaukan analisis. (Rohman, 2007)
b. Pompa
Pompa yang cocok digunakan untuk KCKT adalah pompa yang
mempunyai syarat sebagaimana syarat wadah pelarut yakni : pompa harus
inert terhadap fase gerak. Bahan yang umum dipakai untuk pompa adalah
gelas, baja tahan karat, teflon, dan batu nilam. Pompa yang digunakan
sebaiknya mampu memberikan tekanan sampai 5000 psi dan mampu

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 16

mengalirkan fase gerak dengan kecepatan alir 3 ml/menit. Untuk tujuan

preparatif, pompa yang digunakan harus mampu mengalirkan fase gerak
dengan kecepatan 20 mL/ menit. (Rohman, 2007)
c. Injektor
Ada 3 jenis injektor, yakni syringe injector, loop valve dan automatic
injector (autosampler). Syringe injector merupakan bentuk injektor yang
paling sederhana. Pada waktu sampel diinjeksikan ke dalam kolom,
diharapkan agar aliran pelarut tidak mengganggu masuknya keseluruhan
sampel ke dalam kolom. Sampel dapat langsung diinjeksikan ke dalam
kolom (on column injection) atau digunakan katup injeksi. (Adnan, 1997;
Meyer, 2004)
d. Kolom
Kolom merupakan jantung kromatografi. Keberhasilan atau kegagalan
analisis bergantung pada pemilihan kolom dan kondisi kerja yang tepat.
Kolom dapat dibagi menjadi dua kelompok :
 Kolom analitik : garis tengah dalam 2 – 6 nm. Panjang bergantung
pada jenis kemasan,untuk kemasan pelikel biasanya panjang kolom 50
– 100 cm. Untuk kemasan mikropartikel berpori, biasanya 10 – 30cm;
 Kolom preparatif : umumnya bergaris tengah 6 mm atau lebih besar
dan panjang kolom 25 – 100 cm. Kolom umumnya dibuat dari
stainless steel dan biasanya dioperasikan pada temperatur kamar,
tetapi bisa juga digunakan temperatur lebih tinggi, terutama untuk
kromatografi penukar ion dan kromatografi eksklusi. Kemasan kolom
tergantung pada mode KCKT yang digunakan. (Johnson, 1991)
e. Detektor
Suatu detektor dibutuhkan untuk mendeteksi adanya komponen cuplikan
dalam aliran yang keluar dari kolom. Detektor-detektor yang baik
memiliki sensitifitas yang tinggi, gangguan (noise) yang rendah, kisar
respons linier yang luas, dan memberi tanggapan/respon untuk semua tipe
senyawa. Suatu kepekaan yang rendah terhadap aliran dan fluktuasi
temperatur sangat diinginkan, tetapi tidak selalu dapat diperoleh.

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 17

f. Fase Gerak
Fase gerak atau eluen biasanya terdiri atas campuran pelarut yang dapat
bercampur yang secara keseluruhan berperan dalam daya elusi dan
resolusi. Daya elusi dan resolusi ini ditentukan oleh polaritas keseluruhan
pelarut, polaritas fase diam, dan sifat komponen-komponen sampel Dalam
kromatografi cair komposisi pelarut atau fase gerak adalah satu variabel
yang mempengaruhi pemisahan.(Johnson, 1991).
Gelembung udara (degassing) yang ada harus dihilangkan dari pelarut,
karena udara yang terlarut keluar melewati detektor dapat menghasilkan
banyak noise sehingga data tidak dapat digunakan (Johnson, 1991).
C. Validasi
Validasi adalah suatu tindakan terhadap parameter tertentu pada prosedur
penetapan yang dipakai untuk membuktikan bahwa parameter tersebut
memenuhi persyaratan untuk penggunaannya. Parameter analisis yang
ditentukan pada uji kesesuaian system adalah akurasi, presisi, batas
deteksi, batas kuantitasi, spesifikasi, linieritas dan rentang, kekasaran
(Ruggedness) dan ketahanan (Robutness). (WHO, 1992)
a. Presisi
Merupakan ukuran keterulangan metode analisis dan biasanya
diekspresikan sebagai relatif standar deviasi (RSD) dari sejumlah
sampel yang berbeda secara signifikan secara statistik.
b. Batas deteksi (limit of detection, LOD)
Didefinisikan sebagai konsentrasi analit terendah dalam sampel yang
masih dapat terdeteksi.
c. Batas kuantitasi (limit of quantitation, LOQ)
Didefinisikan sebagai konsentrasi analit terendah dalam sampel yang
dapat ditentukan dengan presisi dan akurasi yang dapat diterima pada
kondisi operasional metode yang digunakan.
d. Linieritas
Merupakan kemampuan suatu metode untuk memperoleh hasil hasil
uji yang secara langsung proporsional dengan konsentrasi analit pada
kisaran yang diberikan (Rohman, 2007).

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 BAB III
METODE PENELITIAN
3.1. Tempat dan Waktu Penelitian
 Tempat Penelitian :
Penelitian dilakukan di laboratorium Pharmacy Natural Analysis Kampus
FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
 Waktu Penelitian :
Waktu Penelitian yaitu sekitar bulan November 2014 – April 2015
3.2. Alat dan Bahan
Alat yang diperlukan meliputi KCKT (Dionex Ultimate 3000) yang terdiri
dari pompa, autosampler, kolom, detector DAD (Diode Array Detector) dan
program komputer PC (Chromaleon) sebagai instrumental uji utama.
Spektrofotometer Uv-Visible (Hitachi u-2910), Ultrasonikator (Branson 5510),
pH Meter (Horiba), dan magnetic Stirer. Neraca digital, mikropipet, syringe filter,
peralatan gelas dan spuit.
Bahan yang diperlukan meliputi bahan Uji utama yaitu tablet spironolakton
dengan merek letonal (mengandung Spironolakton 25 mg). spironolakton standar
(Sigma-Aldirch) Aquabidest (Wida) Dan metanol Grade KCKT (Merck) Untuk
pengujian pH menggunakan larutan dapar yang dibuat dari KH2PO4 dan K2HPO4.
3.3 Prosedur Kerja
3.3.1. Pembuatan Fase Gerak
Fase gerak digunakan dari campuran methanol : Air 60: 40 yang
merupakan fase gerak untuk pengujian spironolakton menurut USP.
Pembuatan fase gerak ini adalah dengan cara mencampurkan methanol
Grade KCKT dan Aquabidest dengan perbandingan 60:40 secara
kuantitatif. Kemudian disaring dan dilakukan proses penghilangan
gelembung dengan cara sonikasi.
3.3.2. Preparasi Standar
Serbuk murni spironolakton ditimbang dengan seksama 50 mg lalu
dilarutkan dengan 50 ml methanol hingga larut sempurna hingga
diperoleh konsentrasi 1000 ppm.

18 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 19

3.3.3. Optimasi dan Validasi

Optimasi dan validasi yang dilakukan yaitu meliputi penentuan panjang
gelombang maksimum, uji presisi, akurasi, LOD, LOQ dan kurva
kalibrasi larutan standar.
A. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Penentuan panjang gelombang maksimum untuk spironolakton
menggunakan spetrofotometer UV-Vis. Pengujian ini dengan
mengencerkan larutan induk standar hingga konsentrasi 10 ppm. Larutan
tersebut kemudian diuji serapannya dengan rentang panjang gelombang
200- 400 nm. dan dicatat nilai serapan dan panjang gelombang
maksimumnya.
B. Uji Kesesuaian Sistem
Optimasi alat dilakukan sesuai dengan Farmakope Indonesia yatu dengan
menggunakan 1 konsentrasi larutan standar yang diencerkan hingga
diperoleh konsentrasi 100 ppm yang diinjeksikan sebanyak 6 kali yang
dideteksi dengan menggunakan panjang gelombang maksimum.
C. Pembuatan kurva kalibrasi
Kurva kalibrasi spironolakton dibuat dengan menggunakan rentang
konsentrasi spironolakton 25, 50, 75, 100, 125 dan 150 ppm yang dibuat
dengan cara mengencerkan larutan standar. Masing-masing konsentrasi
diinjeksikan sebanyak 50µl duplo dengan pengujian menggunakan
panjang gelombang maksimum. Dan akan didapatkan nilai absorbansi dan
dibuat dalam bentuk kurva yang linear. Serta dapat dihitung nilai LOD dan
LOQ.
D. Uji Akurasi
Pengujian akurasi dengan menggunakan 3 konsentrasi larutan standar yang
dapat mewakili konsentrasi sampel uji. Konsentrasi sampel uji adalah 100
ppm sehingga konsentrasi 100 ppm ini dianggap sebagai nilai persentanse
100%. maka konsentrasi yang digunakan pada pengujian ini adalah 120,
100 ppm dan 80 ppm yang mewakili nilai persentase 120%, 100%, dan
80%. Larutan standar yang diencerkan hingga diperoleh konsentrasi
tersebut tiap seri konsentrasi diinjeksikan sebanyak 3 kali yang dideteksi

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 20

dengan menggunakan panjang gelombang maksimum dan dibandingkan

hasil pembacaan nilai konsentrasi oleh KCKT dengan nilai konsentrasi
yang dibuat. Pada pengujian ini akan didapatkan nilai persentase perolehan
kembali (recovery) dengan range 95%-105%, dan persentase differensiasi.
E. Uji Presisi
Uji presisi dilakukan dengan menginjeksikan larutan standar yang dibuat
hingga diperoleh konsentrasi 120, 100 dan 80 ppm sebanyak 3 kali.
Pengujian ini dilakukan secara intraday dalam saat 0 jam, 9 jam dan 24
jam. Dan pengujian interday yaitu hari pertama (0 jam) dan hari kedua (48
jam). Lalu dihitung nilai SD dan Persentase RSD dengan batasan nilai
RSD ≤ 2.
3.3.4. Preparasi dan Pengujian Sampel
a. Pembuatan Dapar (Europe Pharmacopeia)
1. Dapar pH 3 dibuat dengan KH2PO4 0,34 gr yang dilarutkan ke dalam
40 ml aquabiset. Kemudian di cek dengan pH meter, kemudian
diadjust dengan menggunakan asam ortofosfat hingga ph 3.
Kemudian dicukupkan dengan aquabidest hingga 50 ml.
2. Dapar pH 9 dibuat dengan K2HPO4 0,34 gr yang dilarutkan ke dalam
40 ml aquabiset. Kemudian di cek dengan pH meter, kemudian
diadjust dengan menggunakan NaOH hingga ph 9. Kemudian
dicukupkan dengan aquabidest hingga 50 ml.
b. Penyiapan Sampel
Tablet uji sebanyak 20 tablet digerus dan kemudian ditimbang setara.
Kemudian masing- masing dilarutkan dalam 30 ml aquadest. Lalu
ditambahkan larutan dapar hingga pH sediaan diperoleh masing-masing
sampel adalah 3, 5, 7 dan 9. Kemudian masing-masing dicukupkan
dengan aquadest hingga volume 50 ml. masing-masing sampel kemudian
diberi perlakuan yaitu didiamkan dalam rentang waktu yang dibedakan
yaitu 0 menit, 15 menit, 30 menit, 45 menit dan 60 menit dan disonikasi
selama 1 menit pada setiap rentang waktu pengambilan cuplikan.

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 21

c. Pengujian Sampel

Cuplikan yang telah diambil diencerkan dengan metanol dan diajust

dengan dapar fosfat untuk menyamakan pH sampel dengan pH optimum
spironolakton yaitu pH 4.5. Sampel diencerkan hingga diperoleh
konsentrasi 100 ppm. Sampel uji divortex selama 5 menit. Kemudian
disentrifuge selama 5 menit dengan kecepatan 5000 rpm dengan suhu
25oC untuk mengendapkan eksipien tablet. Supernatant yang didapatkan
kemudian diambil dan disaring dengan menggunakan srynge filter
dengan bantuan spuit lalu dimasukkan kedalam tabung sampel uji
KCKT. Sampel uji lalu diinjeksikan sebanyak 50µl dengan waktu
running sampel selama 15 menit dengan kondisi maksimum
spironolakton.

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1. Kesimpulan

1. Persen kadar spironolakton dalam rentang waktu 0-60 menit pada pH 3

adalah 19%, 21%, 22%,27%,dan 40%. Pada pH 5 100%,88%,85%,74% dan

91%. Pada pH 7 61%,46%,38%,27%,dan 35%. Pada pH 9

54%,50%,41%,38%, dan 38%.

2. Kadar spironolakton pada pH 3, 7, dan 9 pada semua menit sudah tidak

dapat memenuhi syarat sesuai ketentuan kadar spironolakton dalam sediaan.

Sedangkan pada pH 5 pada menit ke-0 saja yang masih memenuhi syarat.

3. Dengan perubahan suasana pH semakin jauh dari pH optimum yaitu 4.5

baik asam maupun basa, semakin besar penurunan persentase kadar

spironolakton dalam sediaan suspensi sederhana.

5.2. Saran

1. Diperlukan pengujian dengan fase gerak yang berbeda agar dapat

memisahkan peak kromatogram yang berdempetan dengan peak

kromatogram sampel

2. Diperlukan pengujian mengenai hasil samping dari degradasi

spironolakton terhadap perubahan pH

34 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 35

DAFTAR PUSTAKA

Adnan, M, 1997, Teknik Kromatografi untuk Analisis Makanan, Penerbit Andi Alim,
Yogyakarta

Anonim, World Health Organizations, 1992

Anonim. Europe Pharmacopeia

Ansel H.C, 1994., Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi, ed 4, Penerjemah Farida

Ibrahim, Universitas Indonesia Press, Jakarta, 155-164

Attwood D dam Florence, 2011, Physicochemical Principles of Pharmacy Ed.5,

Chapman and Hall Inc

Banker, Gilbert S and C T Rhodes, 2002, Modern Pharmaceutics: Fourth Edition,

Revised, and Expanded, Marcel Dekker, Inc, New York

Basusarkar, Arindam et al,2013, Chemical Stability of Compounded Spironolactone

Suspension in Proprietary Oral Mix Over a 90-day Period at Two Controlled
Temperatures in Different Storage Containers, Int. J. Pharm. Sci. Rev. Res.,
23(1), Nov-Dec 2013, ISSN 0976044X

Bernal, Nora Provenza et al, 2014, Development, Physical-Chemical Stability, and

Release Studies of Four Alcohol-Free Spironolactone Suspensions for Use in
Pediatrics, dx.doi.org/10.14227/DT210114P19

Connor K.A, Amidan, Kennon L, 1994., Chemical Stability of Pharmaceuticals, John

Willey and Sons, New York, 8-17

David B. Troy,Paul Beringer, 2006, Remington's Pharmaceutical Sciences, 21th ed,

Lippincott Williams & Wilkins,

Departemen Kesehatan, 1995., Farmakope Indonesia, edisi IV, Direktorat Jenderal

Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta

Haywood, Alison and Beverley, Glass, 2013, Liquid Dosage Forms Extemporaneously
Prepared from Commercially Available Products- Considering New Evidence
on Stability, J Pharm Sci 441- 455

Johnson, E L dan Stevenson, 1991, DASAR KROMATOGRAFI CAIR, Penerjemah:

Kosasih Padmawinata, Penerbit ITB

Kher, Govind et al, 2013, Development and Validation of a HPTLC Method for
Simultaneous Determination of Furosemide and Spironolactons in Its Tablets
Formulation, Research Journal of Pharmaceutical, Biological and Chemical
Sciences, ISSN: 0975-8585

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 35

Lachman, L., Lieberman, H. A., Kanig, J. L., 2007, Teori dan Praktek Farmasi Industri,
Edisi ketiga, diterjemahkan oleh: Suyatmi, S., Penerbit Universitas Indonesia,
Jakarta, 760-779, 1514 – 1587

Lee, David C, M L Webb, 2009, Pharmaceutical Analysis, Wiley

Lemke, Thomas L et al, Foye’s Principles of Medical Chemistry Sixth Edition, Wolters
Kluwer Health Lippincott Williams & Wilkins

Mahmoud, Ismail M et al, 2014, Extemporaneous Preparations of Pediatric Oral

Formulations: Stability Studies Conducted In Spironolactone Suspensions,
Powders and Capsules in Saudi Hospital Pharmacies, Journal of Global Trends
in Pharmaceutical Sciences Vol. 5 Issue-2, ISSN: 2230-7346

Meyer. V R, 2004, Practical High-Performance Liquid Chromatography, Chichester:

John Wiley and Sons Inc

Min Li, 2012, Organic Chemistry of Drug Degradation, The Royal Society of
Chemistry, Cambridge

Munson J W, 2000, Analisa Farmasi Metode Modern, The Upjohn Company

Kalamazoo, Michigan

Niazi, Sarfaraz, 2006, Handbook of Preformulation: Chemical, Biological, and

Botanical Drugs, Informa Healthcare USA Inc, New York

Pramar, Yasoda and V, D. Gupta, 1990, Preformulation Studies of Spironolactone :

Effect of pH, Two Buffer Species, Ionic Strength, and Temperature on Stability,
Departemen of Pharmaceutics, University of Houston, TX 77030

Rohman, Abdul, 2007, Kimia Farmasi Analisis, Pustaka Pelajar, Yogjakarta

The United States pharmacopoeia, 1990, 22nd., United States Pharmacopoeia

Convention, Twin Brook Parkway, Rockville, 1226-1228, 1703

W. Sadee,U.Abshagen, C. Finn, and N. Rietbrock, 1974, Conversion of Spironolactone

to Canrenone and Disposition Kinetics of Spironolactone and Canrenoate-
Potassium in Rats, Naunyn-Schmiedeberg’s Arch. Pharmacol. 283, 303-318

Yoshioka, Sumie and Stella, Valentino J, 2000, Stability of Drugs and Dosage Forms,
Library of Congress Cataloging in Publication Data

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

LAMPIRAN
 37

Lampiran 1. Alur Kerja

Optimasi HPLC

Penentuan Penentuan Uji Pembuatan Optimasi , uji

fase gerak ʎmax Kesesuaian Kurva akurasi dan
sistem kalibrasi presisi

Persiapan Sampel Spironolakton

tablet yang disuspensikan

Diberi dapar Diberi dapar Diberi dapar Diberi dapar

hingga pH 3 hingga pH 5 hingga pH 7 hingga pH 9

didiamkan dalam rentang waktu yang dibedakan yaitu 0

menit, 15 menit, 30 menit, 45 menit dan 60 menit dan
disonikasi selama 1 menit pada setiap rentang waktu.

Analisa
degradasi kadar
dengan KCKT

Presentase
Degradasi

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 38

Lampiran 2. Sertifikat Spironolakton Standar Sigma

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 39

Lampiran 3. Scanning Panjang Gelombang Maksimum Spironolakton

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 40

Lampiran 4. Perhitungan Persiapan Kurva Kalibrasi

Massa Spironolakton standar : 50 mg

Dilarutkan dalam 50 ml methanol = 1000µg/ml~ 1000 ppm

Diencerkan dalam labu ukur 5 ml

Seri Konsentrasi 25, 50, 75, 100, 125, 150 ppm

 Pembuatan larutan konsentrasi 25 ppm

M1V1 = M2V2

1000V1 = 25.5

V1 = 0,125ml ~ 125µl

 Pembuatan larutan konsentrasi 50 ppm

M1V1 = M2V2

1000V1 = 50.5

V1 = 0,25ml ~ 250µl

 Pembuatan larutan konsentrasi 75 ppm

M1V1 = M2V2

1000V1 = 75.5

V1 = 0,375ml ~ 375µl

 Pembuatan larutan konsentrasi 100 ppm

M1V1 = M2V2

1000V1 = 100.5

V1 = 0,5ml ~ 500µl

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 41

 Pembuatan larutan konsentrasi 125 ppm

M1V1 = M2V2

1000V1 = 125.5

V1 = 0,625ml ~ 625µl

 Pembuatan larutan konsentrasi 150 ppm

M1V1 = M2V2

1000V1 = 150.5

V1 = 0,750ml ~ 750µl

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 42

Lampiran 5. Kromatogram Larutan Standar dan Tablet

Kromatogram Larutan Standar

Kromatogram Tablet

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 43

Lampiran 6. Kromatogram Kalibrasi

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 44

Lampiran 7. Kurva Dan Tabel Kalibrasi

KURVA KALIBRASI

300

250
Luas Area (MaU)

200

150 y = 1.7856x + 2.5175

R² = 0.9998
100

50

0
0 50 100 150 200
Konsentrasi

Keterangan :
a = 2,5175
b = 1,7856
R2 = 0.9998

konsentrasi (ppm) Luas Area (MaU)

x y

25 47.2483

50 91.3069

75 138.0929

100 179.1573

125 226.1239

150 270.6301

LOD 1.542

LOQ 4.672

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 45

Lampiran 8. Hasil Kromatogram Uji Kesesuaian Sistem

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 46

Lampiran 9. Hasil Uji Kesesuaian Sistem

Parameter Syarat Hasil Rata-rata Keterangan

0.039
0.032
0.069
RSD Peak Waktu retensi <2 0.064 √
0.118
0.126
0
2729
2456
2785
Theoritical plates (USP) ≥2500 2560 √
2724
2455
2456
0.948
0.915
0.952
Peak Asymetry ≤5 0.871 √
0.913
0.841
0.799
0.39
0.278
0.228
RSD Peak Area ≤2 0.279 √
0.198
0.208
0.372

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 47

Lampiran 10. Hasil Uji Akurasi

absorbansi
konsentrasi absorbansi
hasil
(ppm) hasil analisis
sesungguhnya
No x A B %diff %recovery
1 80 137.7063 145 -5.2689 94.7311
2 80 137.0563 145 -5.7161 94.2839
3 80 135.9134 145 -6.5023 93.4977
4 80 141.6781 145 -2.5366 97.4634
5 80 137.9539 145 -5.0986 94.9014

rata-rata 138.0616 145.3655 -5.0245 94.9755

No x A B %diff %recovery
1 100 188.6883 181.0775 4.2031 104.2031
2 100 183.0111 181.0775 1.0678 101.0678
3 100 188.0929 181.0775 3.8743 103.8743
4 100 188.8325 181.0775 4.2827 104.2827
5 100 189.8036 181.0775 4.8190 104.8190

rata-rata 187.68568 181.0775 3.6494 103.6494

No x A B %diff %recovery
1 120 217.489 216.7895 0.3227 100.3227
2 120 218.6431 216.7895 0.8550 100.8550
3 120 215.5631 216.7895 -0.5657 99.4343
4 120 217.9314 216.7895 0.5267 100.5267
5 120 215.6712 216.7895 -0.5158 99.4842
rata-rata 217.05956 216.7895 0.1246 100.1246

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 48

Lampiran 11. Hasil Uji Presisi

Hasil Rata-Rata
Kons Jam ke- SD RSD
Abs (x-x)2 Abs
137.7063 0.1262
137.0563 1.0106
0 135.9134 138.0616
4.6148 2.5052 1.8145
141.6781 13.0791
137.9539 0.0116
137.9379 2.4823
137.2315 5.2073
139.51344
9 141.4005 3.5610 2.2756 1.6308
141.5838 4.2864
139.4135 0.0100
80
138.4703 18.0095
142.7564 0.0018
24 141.6631 1.1045 142.71406 2.3223 1.6391
143.8523 1.2956
146.8282 16.9261
138.7054 6.8295
143.2192 3.6117
48 139.2323 4.3532 141.31874 2.0611 1.4659
141.2514 0.0045
144.1854 8.2177
188.6883 1.0052
183.0111 21.8517
187.68568
0 188.0929 0.1658 2.7819 1.4822
188.8325 1.3152
189.8036 4.4856
190.3298 1.0047
188.5502 0.6041
9 187.6504 2.8125 189.32746 1.1378 0.6029
188.3746 0.9079
191.7323 5.7833
190.3298 3.0692
100
188.5502 12.4715
192.0817
24 187.6504 19.6364 1.1378 0.6029
188.3746 13.7426
205.5035 180.1447

190.0256 84.9055
190.8484 70.4193
48 190.5707 75.1571 199.24002 0.6573 0.3456
189.3587 97.6405
235.3967 1307.3055

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 49

217.489 0.1844
218.6431 2.5076
217.05956
0 215.5631 2.2394 1.3178 0.6061
217.9314 0.7601
215.6712 1.9275
217.9159 0.2481
218.9111 2.2299
217.41782
9 216.7765 0.4113 0.8936 0.4104
217.4779 0.0036
216.0077 1.9884
120
217.593 0.0905
218.11 0.0468
24 217.2847 0.3710 217.89378 1.3285 0.6086
220.2309 5.4621
216.2503 2.7010
217.7155 0.0253
216.1244 3.0630
217.87454
48 216.9025 0.9449 0.6514 0.3004
216.8165 1.1194
221.8138 15.5178

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 50

Lampiran 12. Perhitungan Preparasi Sampel dan Perhitungan Luas Area secara
Manual

Berat total sampel : 25 mg Spironolakton

Volume Suspensi : 50 ml aquadest

= 500µg/ml~ 500 ppm

Pengenceran 100 ppm, konsentrasi yang diinjekkan ke dalam KCKT

Diambil cuplikan 300 µl dan dicukupkan dengan methanol-dapar hingga 1500 µl

M1V1 = M2V2
500V1 = 100.1500
V1 = 300 µl

Rumus perhitungan Luas Area (mAu) secara manual

x = mAu

Rumus Perhitungan Konsentrasi Akhir Spironolakton

y = 1.7856x + 2.5175

diketahui :

y = Luas Area

x = Konsentrasi Spironolakton

Rumus Perhitungan Persentase Kadar

x 100%

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 51

Lampiran 13. Hasil Kromatogram pH 3

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 52

Lampiran 14. Hasil dan Kurva pH 3

Konsentrasi Konsentrasi
Waktu Area / SD Persen Kadar (%)
Awal (ppm) Akhir (ppm)

0 36.30697 / 2.76 100 18.92331 19

15 40.24055 / 2.04 100 21.12626 21

30 42.4618 / 2.32 100 22.37024 22

45 50.07035 / 0.033 100 26.6313 27

60 73.4604 / 1.81 100 39.73057 40

PH 3

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 53

Lampiran 15. Hasil Kromatogram pH 5

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 54

Lampiran 16. Hasil dan Kurva pH 5

Konsentrasi Konsentrasi Akhir Persen Kadar

Waktu Area / SD
Awal (ppm) (ppm) (%)

0 181.6558 / 3.23 100 100.3284 100

15 159.02 / 2.22 100 87.647 88

30 154.596 / 2.49 100 85.16941 85

45 135.2707 / 0.90 100 74.34653 74

60 164.145 / 0.58 100 90.51719 91

PH 5

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 55

Lampiran 18. Hasil Kromatogram pH 7

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 56

Lampiran 19. Hasil dan Kurva pH 7

Konsentrasi Konsentrasi Akhir Persen Kadar

Waktu Area / SD
Awal (ppm) (ppm) (%)

0 110.9063 / 4.46 100 60.70258 61

15 83.81825 / 2.02 100 45.53133 46

30 115.9023 / 0.62 100 38.46485 38

45 202.6765 / 0.17 100 26.96664 27

60 262.6525 / 1.17 100 35.36381 35

PH 7

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 57

Lampiran 19. Hasil Kromatogram pH 9

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 58

Lampiran 20. Hasil dan Kurva pH 9

Konsentrasi Konsentrasi Persen Kadar

Waktu Area / SD
Awal (ppm) Akhir (ppm) (%)

0 98.4725 / 1.12 100 53.73824 54

15 90.92292 / 0.21 100 49.5102 50

30 76.1625 / 0.22 100 41.24384 41

45 70.68675 / 1.11 100 38.17722 38

60 70.305 / 1.28 100 37.96343 38

Ph 9

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 59

Lampiran 21. Kurva Perbandingan Konsentrasi dengan perbedaan pH akhir

sediaan terhadap Waktu

120.0000

100.0000

80.0000
konsentrasi

ph 3
60.0000
ph 5
40.0000 ph 7
ph 9
20.0000

0.0000
0 10 20 30 40 50 60 70
Waktu

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 60

Lampiran 22. Hasil Uji Statistik ANOVA, Normalitas dan Homogenitas

Tabel Analisa Statistik Uji Normalitas

Shapiro-Wilk

PH Statistic df Sig.
KONSENTRASI PH 3 .834 5 .148
PH 5 .978 5 .925
PH 7 .962 5 .824
PH 9 .861 5 .231

Tabel Analisa Statistik Uji Homogenitas

Levene Statistic df1 df2 Sig.
.455 3 16 .717

Tabel Uji Statistik ANOVA

Between Groups 10548.462 3 3516.154 38.172 .000
Within Groups 1473.812 16 92.113
Total 12022.273 19

Tabel Uji Statistik LSD

95% Confidence Interval
Mean Difference
(I) PH (J) PH (I-J) Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound
PH 3 PH 5 * 6.070032161
-6.184537000E1 .000 -7.47132633E1 -4.89774767E1
E0
PH 7 * 6.070032161
-1.564950600E1 .020 -2.85173993E1 -2.78161265
E0
PH 9 * 6.070032161
-1.837025000E1 .008 -3.12381433E1 -5.50235665
E0
PH 5 PH 3 * 6.070032161
6.184537000E1 .000 48.97747665 74.71326335
E0
PH 7 * 6.070032161
4.619586400E1 .000 33.32797065 59.06375735
E0
PH 9 * 6.070032161
4.347512000E1 .000 30.60722665 56.34301335
E0
PH 7 PH 3 * 6.070032161
1.564950600E1 .020 2.78161265 28.51739935
E0
PH 5 * 6.070032161
-4.619586400E1 .000 -5.90637573E1 -3.33279707E1
E0
PH 9 6.070032161
-2.720744000 .660 -1.55886373E1 10.14714935
E0
PH 9 PH 3 * 6.070032161
1.837025000E1 .008 5.50235665 31.23814335
E0
PH 5 * 6.070032161
-4.347512000E1 .000 -5.63430133E1 -3.06072267E1
E0
PH 7 6.070032161
2.720744000 .660 -1.01471493E1 15.58863735
E0

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta