Inhibición competitiva

A. Inhibición Competitiva
En este tipo de inhibición, la molécula inhibidora I se combina con la enzima E, originando un
complejo EI que no puede unir el sustrato. La unión de S e I es mutuamente excluyente.
La ecuación de conservación de la enzima en presencia de S e I es:

1. Et = E + ES + EI
2.
k1 k2
E + S ES E + P
k-1

3.
ki
E + I EI
k-i

4. Ki = E x I = ki (constante de disociación)
EI k-i

5a. EI = E x I y 5b. ES = E x S
Ki Km

Recordando que en condiciones de velocidad inicial:

v = k2 x ES

6. v = k2 x ES
Et E + ES + EI

Introduciendo ecuaciones 5a y 5b tenemos:

7. v = k2 x E x S /Km
Et E+ExS +ExI
Km Ki
8. v = S/Km multiplicando por Km
Vm (1 + S/Km + I/Ki )

9. v= Vm x S
Km (1 + I/Ki) + S

La ecuación 9 describe una inhibición competitiva. Se puede observar que esta expresión tiene la
misma forma que la ecuación clásica de Michaelis-Menten, excepto que ahora la Km aparente tiene
un significado diferente. Así, en presencia de un inhibidor competitivo, la ecuación 9 dice que sólo
cambia la Km de la enzima y que el cambio es por un factor (1 + I/Ki). La velocidad máxima, en
cambio, no se afecta. Note que no se ha hecho ninguna suposición acerca del sitio de unión de I.
 Gráfico de dobles recíprocos para una
inhibición competitiva

+ Inhibidor
competitivo

Sin inhibidor

- 1/Km 1/ Vmax
α = 1 + [I] / Ki
Gráficos secundarios para una
inhibición competitiva
Inhibición incompetitiva
 C. Inhibición Incompetitiva
El inhibidor se une sólo al complejo ES. La enzima libre no forma complejo con el inhibidor. Este tipo
de inhibición es rara en reacciones enzimáticas de un solo sustrato, pero ocurre más frecuentemente en
sistemas complejos.

La ecuación de conservación de la enzima es:

1. Et = E + ES + ESI

k1 k2
E + S ES E + P
k-1

ES + I ESI

Ki = ES x I
ESI

v= k2 x ES
Et E + ES + ESI

v= k2 ( E x S/ Km)
Et E+ExS + ExSxI
Km Km Ki

v= S / Km multiplicando por Km
Vm 1 + S/Km + S x I
Km Ki

v= S dividiendo por (1 + I/Ki)

Vm Km + S (1 + I/Ki)

v = Vm / (1 + I/Ki) x S
Km / (1 + I/Ki) + S
α´ = 1 + [I] / Ki
Inhibicion No Competitiva

KI
 Inhibicion No Competitiva

KI

iguales
 B. Inhibición No Competitiva Clásica
El inhibidor puede unirse tanto a la enzima libre, como al complejo ES.

La ecuación de conservación de la enzima en presencia de S e I es:

1. Et = E + ES + EI + ESI
2.
k1 k2
E + S ES E + P
k-1

E+I EI

ES + I ESI

EI + S ESI

3. Ki = E x I = ES x I
EI ESI

4. ESI = ES x I = E x S x I
Ki Km Ki

v= k2 x ES
Et E + ES + Ei + ESI

v= k2 ( E x S/ Km) multiplicando por Km

Et E+ExS + ExI + ExSxI
Km Ki Km Ki
v= S
Vm Km + S + Km x I + S x I
Ki Ki

v= S dividiendo por (1 + I/Ki)

Vm Km (1 + I/Ki) + S (1 + I/Ki)

v = Vm/ (1 + I/Ki) x S
Km + S
 Inhibición mixta

distintas
 Gráfico de dobles recíprocos para una inhibición mixta
α = 1 + [I] / Ki
α´ = 1 + [I] / Ki´
 Identificación de residuos de aminoácidos
del sitio activo

1. Modificación Química (inhibidores irreversibles)

2. Mutagénesis sitio-específica (sitio-dirigida)

 Rol de aminoácidos en actividad enzimática
 Producir enzimas con características especiales
 Inhibidores Irreversibles

• agentes específicos de grupos

• marcación por afinidad
• basada en el mecanismo (inhibidores suicidas)
 Modificación química de proteínas

 Las cadenas laterales de los aminoácidos reaccionan con una

gran cantidad de reactivos químicos formando enlaces
covalentes.

 Los reactivos son inespecíficos y reaccionan con cualquier

residuo que se encuentre accesible.

 La modificación puede llevar a una pérdida irreversible de la

actividad:
- Si se bloquea un residuo catalíticamente esencial.
- Si se impide estéricamente la unión del sustrato.
- Si se distorsiona la proteína.

El objetivo de la modificación química de las proteínas es:

 Obtener información respecto del mecanismo de reacción.

 Modificar su actividad.
1. Agentes específicos de grupos (grupos SH)

2. Marcación por afinidad

análogo de DHAP
 grupos Compuesto con grupo funcional
reactivos reactivo R-X

Sustrato

Reacción preferencial en el sitio activo

R-X R Enzima inactiva

Reacción no específica
R

R
R-X
Enzima inactiva

R
Modificación de un grupo X- fuera del sitio activo de una enzima
causa un cambio conformacional que lleva a la pérdida de actividad
enzimática

Sitio activo

Y-Z
X- X-Y + Z-
 Criterios que deben ser satisfechos para suponer que un
cierto residuo de aminoácido modificado químicamente
está en el sitio activo.

Relación estequiométrica entre el grado Adición de un sustrato o inhibidor

de inactivación y el grado de que se una al sitio activo debe proteger
modificación de la inactivación

100 100

+ sustrato

% actividad
% actividad

50 50

control

0 0.5 1.0 0
grado de modificación Tiempo