Anda di halaman 1dari 12

JOURNAL READING

A male and female RNA marker to infer sex in forensic


analysis

Oleh:
Alles Firmansyah 1210312035
Devi Yunita Purba 1010312096
Doni Andika Putra 1210312121
Dwiva Try Rakhmawati 1210312070

Preseptor:
dr. Taufik Hidayat, M.Sc, Sp.F

BAGIAN ILMU KEDOKTERAN FORENSIK DAN MEDIKOLEGAL


FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS ANDALAS
2018
Abstrak
Dalam ilmu forensik, profil DNA digunakan untuk identifikasi pelacakan pendonor,
sedangkan message RNA (mRNA) dapat digunakan untuk mengidentifikasi asal selulernya
seperti cairan tubuh atau jaringan organ. Adanya sel laki-laki dapat dengan mudah dinilai
oleh penggabungan penanda kromosom Y secara kuantitas atau sistem profil STR. Namun,
tidak ada penanda secara forensik untuk mengidentifikasi sel perempuan secara positif;
keberadaan DNA perempuan hanya dideduksi dari tidak adanya kromosom Y, atau
ketidakseimbangan sinyal X-Y pada lokus Amelogenin atau respons yang tidak seimbang
dari kuantitas total dan spesifik dari kromosom Y. Kehadiran dua kromosom X dalam sel-sel
perempuan melibatkan kompensasi dosis, yang dicapai melalui inaktivasi salah satu
kromosom X pada perempuan. Karena proses ini melibatkan molekul RNA spesifik,
identifikasi bahan seluler perempuan mungkin dapat dilakukan melalui pembuatan profil
RNA. Selain itu, bahan seluler laki-laki dapat diidentifikasi melalui ekspresi RNA dari
kromosom Y. RNA yang secara istimewa diekspresikan pada kedua jenis kelamin dinilai
berpotensi sebagai penanda jenis kelamin dalam tes RNA forensik. Untuk mengonfirmasi
jenis kelamin secara spesifik, cairan tubuh dan jaringan organ berbagai donor dari kedua jenis
kelamin perlu diuji. Selain itu, perlu dinilai sensitivitas penanda dan kesesuaian identifikasi
positif antara laki-laki-perempuan serta sampel yang terdegradasi digunakan untuk menilai
kemampuan penanda tersebut dalam dunia forensik. Penambahan penanda jenis kelamin yang
spesifik merupakan informasi tambahan yang berguna dalam sistem pengarsipan profil RNA
dan kedua penanda disatukan dengan tes RNA yang sudah ada dari cairan tubuh atau organ
tubuh target. Hal ini merupakan tes forensik pertama yang memungkinkan identifikasi secara
positif dari bahan seluler perempuan.

2
Pendahuluan
Dalam ilmu forensik, profil DNA umumnya digunakan untuk identifikasi pelacakan
pendonor, dimana jenis kelamin (mengacu pada asal genetika) pendonor umumnya
didapatkan dari respons gen tunggal Amelogenin (AMEL) yang terletak pada kromosom X
dan kromosom Y.1,2 Metode penentuan jenis kelamin berdasarkan AMEL tergantung pada
amplifikasi secara simultan dari perbedaan ukuran kromosom X dan Y target dan
menggunakan ada atau tidak adanya sinyal Y untuk menentukan jenis kelamin.1-3 AMEL-Y
dapat ditiadakan karena rendahnya kadar DNA yang masuk atau mutasi primer dari tempat
berikatan yang dapat menyebabkan kesalahan penafsiran laki-laki sebagai perempuan.1-4
Adanya peralatan Short Tandem Repeats (STR) yang paling baru dikembangkan dapat
menghindari permasalahan tersebut karena mereka membawa penanda STR kromosom Y
tambahan.3,5-7 Namun demikian, saat ini tidak ada penanda forensik yang tersedia untuk
mengidentifikasi bahan sel perempuan secara positif. Pada dasarnya ketiadaan atau relatif
rendahnya puncak sinyal AMEL-Y atau STR-Y digunakan untuk menentukan jenis kelamin
perempuan1-3, akan lebih sulit untuk diterapkan pada campuran laki-laki-perempuan. Pada
tingkat DNA, kromosom X tidak dapat digunakan untuk membedakan DNA perempuan dan
laki-laki. Namun, penanda spesifik perempuan dapat ditemukan pada RNA atau tingkat
protein sebagai proses seluler tertentu yang spesifik pada perempuan. Karena analisis
forensik mungkin melibatkan semua jenis cairan tubuh atau jaringan organ, kami bertujuan
untuk proses yang terjadi di semua sel perempuan diploid seperti proses yang mengarah ke
inaktivasi kromosom X. Pada mamalia, inaktivasi satu kromosom X memberikan kadar
kesetaraan kromosom X fungsional antara laki-laki XY dan perempuan XX. Identifikasi
bahan seluler perempuan mungkin dapat dilakukan melalui penargetan produk seluler yang
terlibat dalam inaktivasi kromosom X. Karena inaktivasi kromosom X merupakan proses
yang diinduksi RNA (lihat uraian proses di bawah), penanda RNA tampaknya lebih
menjanjikan daripada penanda berbasis protein.
Profil dari messenger RNA (mRNA) telah semakin diterapkan dalam dekade terakhir
untuk mengumpulkan informasi dari cairan tubuh8-15 dan jaringan organ16,17 sebagai bukti
dalam suatu pelacakan. Memprofilkan RNA secara umum dilakukan bersamaan dengan
memprofilkan DNA melalui pewarnaan ekstraksi DNA / RNA. Namun profil mRNA, saat ini
memiliki kemungkinan yang kecil dalam memberikan informasi mengenai pelacakan donor.
Penggabungan gen-gen jenis kelamin yang bias ke dalam sistem profil mRNA yang saat ini
digunakan dapat memberikan informasi tambahan mengenai jenis kelamin para donor.
Penanda spesifik RNA perempuan dan laki-laki telah diketahui secara luas sebelumnya

3
berguna terutama dalam hal evolusi biologis, genetika medis dan klinis18,19 seperti untuk
memeriksa perbedaan jenis kelamin pada genetika kanker20,21, gangguan neuropsikiatrik22
atau penyakit manusia20,23. Dalam ilmu forensik, belum ada kegunaannya yang telah
diketahui secara luas.
Untuk penelitian ini, dua penanda dengan ekspresi jenis kelamin bias secara global24
dinilai, yaitu XIST dan RPS4Y1. XIST (X Inactive Specific Transcript), kandidat penanda
RNA perempuan, merupakan RNA non-coding panjang (lncRNA) yang terlibat dalam
inaktivasi kromosom X (XCI).25 Proses ini mengarah pada inaktivasi acak pada salah satu
dari dua kromosom X pada perempuan, menghasilkan X yang aktif dan tidak aktif (Xa dan
Xi), untuk memberikan kesetaraan kadar kromosom X pada laki-laki dan perempuan.26-28
XCI dikendalikan oleh pusat inaktivasi X-kromosom (Xic) yang terlibat dalam penghitungan
jumlah kromosom X untuk diinaktivasi, memilih dan memulai XCI penyebaran inaktivasi
pada seluruh Xi.29,30 Xic berisi empat gen RNA non-translasi, yaitu JPX, FTX, XIST dan
TSIX.27,28 Baik JPX maupun FTX mengeluarkan XCI dan menunjukkan peran spesifik pada
perempuan dalam meregulasi ekspresi XIST.31,32 Ekspresi dua gen ini, bagaimanapun,
tampaknya tidak sepenuhnya spesifik untuk perempuan.28,33 Ekspresi XIST dimulai pada
awal embriogenesis dan diekspresikan secara khusus dari Xic-nya Xi. RNA dari XIST tidak
ditranslasikan, meskipun tetap disambung, ditutup dan dipolimerisasi. Transkripsi terbesar
dari XIST pada manusia adalah 19 kb dan tetap berada di nukleus, yang melapisi Xi untuk
menonaktifkan kromosom. Laki-laki tidak memiliki kompensasi dari kadarnya, sehingga
membuat ekspresi XIST menjadi spesifik pada perempuan.34 Transkripsi XIST pada sel laki-
laki hanya terjadi dalam sel germinal sebelum proses meiosis.30,35 Kandidat penanda lainnya,
TSIX, ditranskripsikan antisense ke XIST dan merupakan regulator negatif XIST. TSIX
diekspresikan sebelum inaktivasi dan berasal dari kedua kromosom X; ekspresinya ditekan
setelah proses inaktivasi selesai.29,30 Sehingga XIST menjadi kandidat penanda pada
perempuan yang dipilih dalam penelitian ini.
Mayoritas gen spesifik laki-laki terletak di kromosom Y seperti DBY, SMCY, UTY,
RPS4Y, dan USP9Y.22,24,36 Kromosom Y mengkode protein ribosom RPS4Y1 (protein
Ribosom S4, Y-linked 1)36,37 dipilih, karena gen ini telah diketahui memiliki perbedaan
ekspresi rata-rata tertinggi antara perempuan dan laki-laki24 dan diekspresikan pada seluruh
jaringan manusia.36,37
Dalam penelitian ini kami menilai fungsi dari gabungan penanda spesifik RNA jenis
kelamin ini pada multipleks mRNA yang saat ini digunakan15,17, yang dapat memberikan
kemungkinan baru dalam analisis forensik.

4
2. Bahan dan Metode
2.1. Pengumpulan Sampel
Optimasi konsentrasi primer dari penanda seks dilakukan dengan menggunakan satu
set sampel kontrol yang berasal dari sampel donor tunggal dari berbagai badan flUID dan
jaringan organ dijelaskan sebelumnya pada referensi. [15-17] digunakan untuk confirm seks-
spesifikfikota penanda calon. Sampel ini termasuk 30 badan donor tunggalflUID dari sepuluh
laki-laki dan 20 perempuan donor terdiri dari empat sampel masing-masing untuk darah, air
liur, mukosa vagina, sekresi menstruasi, air mani subur, kulit, mukosa hidung, ditambah dua
sampel semen steril diperoleh dari donor vasectomised. Sampel jaringan organ set mencakup
total 21 donor tunggal jaringan organ otopsi yang terdiri dari otak, paru-paru, hati, otot
rangka, jantung, ginjal dan jaringan kulit dari satu dua donor pria dan wanita.
Tabel 1 Urutan primer untuk dua seks-spesifikfic spidol.

Pilihan pertama1 Manusia RNA total Survey Panel (Ambion1oleh Life Technologies, Carlsbad, USA). Panel ini
berisi Total kolam RNA dari setidaknya tiga donor untuk berbagai jaringan manusia dan rincian tentang seks
donor disediakan oleh produsen. Sampel dipilih untuk digunakan dalam penelitian ini mengandung bahan donor
semata-mata laki-laki atau semata-mata perempuan, yaitu usus besar, prostat, trakea, testis dan limpa donor laki-
laki dan leher rahim, otot rangka, plasenta dan ovarium donor perempuan. kolam RNA datang dalam
konsentrasi 1mg /mL dan mereka diproses sehingga setelah transkripsi terbalik masukan cDNA sesuai dengan 5
RNA pg digunakan dalam PCR (yang juga merupakan jumlah RNA manusia digunakan untuk mengoptimalkan
Organtyper [16]).
Sampel campuran dianalisis untuk confideteksi rm kedua penanda seks dalam kasus
campuran pria-wanita dan untuk menilai penanda drop-out dari dua seks-spesifikfic penanda
ketika rasio laki-laki-perempuan tidak seimbang. set ini termasuk tujuh darah: campuran
darah dengan berbagai masukan dari laki-laki dan kontribusi perempuan, yaitu rasio laki-laki-
perempuan dari 1: 0, 0: 1,1: 1, 1: 1/2, 1/2: 1, 1: 1 / 5 dan 1/5: 1. Campuran disiapkan dengan
menggabungkan cDNA tunggal laki-laki donor dan ekstrak darah perempuan, rasio
dijelaskan jangan karena itu tidak berhubungan dengan rasio DNA.
Penerapan penanda seks (parah) terdegradasi sampel dinilai dengan menganalisis satu
set sepuluh sampel organ digali. Sampel ini sebelumnya telah digunakan dalam studi yang
bertujuan untuk mencari tren degradasi asam nukleat dan interval post mortem[17]. set

5
sampel organ digali ini terdiri dari sepuluh sampel jaringan organ yang berasal dari empat
perempuan dan enam laki-laki yang telah digali setelah kali pemakaman mulai dari empat
hingga lebih dari 40 tahun.
Terakhir, nilai tambah dari jenis kelamin-spesifikfipenanda c RNA dalam pengaturan
forensik disajikan melalui analisis sampel mimisan laki-laki. Sampel ini telah digunakan
dalam studi sebelumnya dan kemudian bisa, berdasarkan mRNA profiling hasil, tidak
Specified seperti karena co-ekspresi berbagai tubuh flspidol uid [15].
Spesimen organ otopsi dan digali telah digunakan dalam penelitian sebelumnya dan
membawa persetujuan yang diperlukan [16,17]. Tubuhflsampel cairan yang digunakan untuk
penelitian ini dikumpulkan dengan persetujuan dari donor sukarela yang bahan sel
digunakan.

2.2. pemilihan penanda dan desain primer


Sex-spesifikfic penanda dipilih dari data RNA sequencing yang dihasilkan oleh
Genotipe-Tissue Ekspresi (GTEx) proyek sebagai dijelaskan dalam Ref. [24]. Dua spidol,
yaitu antara dua jenis kelamin XIST (perempuan) dan RPS4Y1 (laki-laki), menunjukkan
perbedaan ekspresi rata-rata tertinggi pada wanita dibandingkan laki-laki dipilih dari daftar
gen diekspresikan seks-bias global yang[24].

XIST dan RPS4Y1 primer set dikembangkan menggunakan ledakan Ensembl dan
NCBI primer [38,39], Dengan setidaknya salah satu primer meliputi ekson-ekson
persimpangan. Primer yang dirancang sedemikian rupa sehingga Amplifiproduk kation akan
fit dalam dua mRNA yang ada profiling multiplexes, yaitu sel-typer [15] dan Organtyper
[16,17] multiplexes. Rincian tentang urutan primer dari dua jenis kelamin spidol ditampilkan
di Tabel 1.

Tes awal dilakukan untuk menilai penanda perfor-Mance, fragmen ukuran dan
mengoptimalkan konsentrasi primer. Awalnya, kedua penanda seks dan rumah tangga
penanda 18S rRNA-[16,17] adalah dikombinasikan dalam tripleks dan diterapkan untuk
sampel mengandung bahan donor semata-mata laki-laki atau perempuan (FirstChoice1
Survey Panel, Bagian 2.1). konsentrasi primer dari penanda seks yang dioptimalkan dengan
menilai berbagai konsentrasi (0,2, 0,4 dan 0,8mM) sementara 18S-rRNA tetap konsentrasi
standar (0.015 mM [9,17]). Konsentrasi primer yang optimal untuk kedua XIST dan RPS4Y1
ditetapkan pada 0,2mM, setelah itu kedua penanda seks digabungkan ke dalam sel-typer [15]

6
dan Organtyper [17] multiplex.

2.3. Profil RNA


DNA / RNA co-ekstraksi, pengobatan DNase, quanti DNAfikation, presipitasi etanol
dan transkripsi terbalik dilakukan seperti yang dijelaskan dalam Ref. [8]. ekstrak RNA yang
etanol-diendapkan sebelum reverse transkripsi ketika hasil total DNA dari sampel di bawah 1
ng dan diproses seperti yang dijelaskan dalam Ref.[9].
Protokol transkripsi terbalik disesuaikan ketika menjadi jelas bahwa penanda seks
XIST itu buruk amplified di Sel Musical [15] dan Organtyper [17] multiplexes. Untuk
bantuan ini, versi unlabelled dari XIST yang membalikkan primer disajikan dalamTabel 1.
disebut sebagai XIST RT-primer, ditambahkan selama fiLangkah pertama dari protokol
transkripsi terbalik, di mana Acak Decamers (5 mM per reaksi) yang dikombinasikan dengan
ekstrak RNA dan terdenaturasi. konsentrasi acak Decamers dan XIST RT-primer yang
dioptimalkan untukfiKonsentrasi nal dari 4,7 mM dan 0,625 mM per reaksi, masing-masing
(setelah mempertimbangkan berbagai 2,5-4.8 mM Acak Decamers dan 5-0,3 mM XIST RT-
primer). Input dari ekstrak RNA (maksimum 10mL) tetap disesuaikan. Tidak ada efek negatif
yang diamati oleh perubahan ini dalam protokol, sedangkan rata-rata puncak ketinggian
sinyal XIST didorong perkiraanfivefold (data tidak ditampilkan).
PCR amplifikation dan deteksi produk untuk semua analisis RNA dilakukan sesuai
dengan protokol standar [8]. produk PCR yang purified [8] sebelum deteksi melalui Genetik
Analyzer 3130XL (Life Technologies). Purified amplifiproduk kation dianalisis dengan
menggunakan POP-4 pemisahan matriks (Life Technologies) dan 3 kV, 10 s pengaturan
injeksi. ProfiAnalisis le dilakukan dengan menggunakan Genemapper ID-X versi 1.1.1 (Life
Technologies) dengan ambang batas deteksi 150 relatif flunit uorescence (RFU).
Interpretasi data RNA dilakukan sesuai dengan “x = n / 2” pedoman dan empat PCR
ulangan per sampel seperti yang dijelaskan dalam metode ini membandingkan jumlah diamati
(x) dengan jumlah teoritis mungkin puncak (n) di semua ulangan. Sebuah jenis sel
mencetak“diamati” ketika sedikitnya setengah dari puncak mungkin diamati (xn / 2),
dinotasikan “sporadis diamati” bila kurang dari setengah dari puncak mungkin diamati (0 < x
< n / 2) dan mencetak “tidak diamati” bila tidak ada puncak yang terdeteksi (x = 0).

2.4 Profil DNA


Profil DNA diperoleh dengan Kit Amplifikasi AmpF PCR (Life Technologies)
menggunakan input 500 pg DNA maksimal berdasarkan kuantifikasi sebagaimana

7
dideskripsikan di [8]. Produk PCR dipisahkan berdasar pada protokol yang terstandarisasi [8]
menggunakan 3130XL Genetic Analyzer (Life Technologies) dengan pemisahan matriks
POP-4 (Life Technologies). Analaisis profil menggunakan Genemapper ID-X versi 1.1.1
(Life Technologies) dengan ambang deteksi 50 rfus.

3. Hasil dan diskusi

3.1 Spesifisitas
Setelah seleksi dari satu kandidat marker RNA spesifik jenis kelamin untuk setiap jenis
kelamin. Set primer didesain dan diuji pada set sampel komtrol (seksi 2.1 dan 2.2) dengan
hasil positif. Kondisi pengujian dioptimalkan (seksi 2.2 dan 2.3) setelah kedua marker
bergabung kedalam Cell-typer dan Sex-Organ multipleksus (sekarang merujuk sebagai Sex-
Cell-typer dan Sex-Organ-typer). Spesifisitas jenis kelamin dari marker diukur menggunakam
cairan tubuh donor (n=30, masing-masing empat replika) dan jaringan organ (n=21, masing-
masing empat replika). Sebuah kontribusi donor dikonfirmasi untuk semua sampel via profil
NGM, kecuali donasi semen dari laki-lai yang divasektomi, yang kurang spermatozoa dan
DNA (data tidak ditampilkan).
Sebuah ikhtisar dari spesifisitas hasil dari sebuah donor cairan tubuh dan jaringan organ
diperlihatkan pada Tabel 2. Jenis kelamin perempuan dikoreksi skor “observasi” pada 97%
dari sampel perempuan (satu sampel dikoreksi skor “observasi sporasis”) dan jenis kelamin
laki-laki dikoreksi skor “observasi” pada 94% dari sampel laki-laki (satu sampel hasilnya
skor “tidak observasi”). Ini meliputi deteksi dari marker jenis kelamin laki-laki pada sampel
semen dari donor yang divasektomi, pada tidak ada profil DNA yang didapat menggunakan
standar profil NGM (data tidak ditunjukkan). Deteksi dari RPS4Y1 pada semen azoosperma
dapat dijelaskan sebagai RPS4Y1 adalah marker RNA ribosom, karena itu ekspresi tidak
terbatas pada spermatozoa, dan juga diekspeesikan di cairan seminal (tidak seperti marker
KLK3 dan SEMG1 termasuk di Cell-Typer [15]). Selanjutnya, tidak ada “observasi” skoring
salah terjadi dari marker perempuan XIST pada sampel laki-laki atau marker laki-laki
RPS4Y1 pada sampel perempuan, mengindikasikan marker spesifik jenis kelamin dengan
tidak ada skoring positif palsu.
Contoh profil RNA elektroferogram setelah analisa cairan tubub donor dan jaringan organ
disajikan pada gambar 1. Terlihat penempatan posisi marker jenis kelamin pada Sex-Cell-
Typer dan Sex-Organtyper multipleksus dan kebenaran deteksi dari marker kenis kelamin
pada sampel laki-laki dan perempuan.

8
Hal ini dideskripsikan dalam penelitian medis, seperti penelitian kanker, yang ekspresi dei
XIST dikorelasikan dengan perkembangan daei beberapa kanked [20,21,35], mengarah pada
deteksi dari marker perempuan XIsT pada sel kanker laki-laki. Dalam skenario forensik hal
ini bisa revelan, misalnya ketika peluru dianalisa yang berpotensi menyebabkan perforasi
jaringan organ kanker.
Untuk menginvestigasi reksi silang ini, sekumpulan dari 28 sampel, yang besar kemungkinan
memiliki sel kanker dan sel-sel itu diambil dari pasien di rumah sakit, dianaliaa menggunakan
Sex-Organtyper multipleks. Sampel biobank ini meliputi donor dari 14 laki-laki dan 14
perempuan yang terbagi lebih empat sampel untuk setiap otak, paru, hati, otot skeletal,
jantung, ginjal, dan jaringan kulit. Marker laki-laki RPS4Y1 diditeksi, sesuai perkiraan,
hanya pada sampel dari donor laki-laki, yang berdasar pada empat replika setiap sampwl,
menghasilkan skor “observasi” untuk sel perempuan pada 43% dari sampel laki-laki yang
dianalisa dan skorm“observasi sporadis” pada satu sampel laki-laki (data tidak ditunjukan).
Hal ini mungkin dijelaskan dari regulasi XIST pada sel kanker, yang ekspresi panjang,
eskpresi non-coding transkripsi dideskripsiikan berubah [21]. Sayangnya, kami tidak dapat
ambil kembali informasi pada sampel yang positif dideskripsikan sebagai kanker.
3.2 Analisis campuran
Selanjutnya, set dari darah:darah campuran (n=7, empat replika masing-masingnya) dengan
variasi kontribusi dari material laki-laki dan perempuan dianalisa menggunakan Sex-Cell-
typer multipleksus untuk mengkonfirmasi deteksi dari kedua marker jenis kelamin dalam hal
campuran laki-laki perempuan dan untuk mengukur drop-out dari dua spesifik marker ketika
rasio laki-laki dan perempuan tidak seimbang. Ilustrasi elektroferogram disajikan pada
Gambar 2 dan menunjukan deteksi dari marker laki-laki RPS4Y1 di setiap campuran
mengandung RNA laki-laki, dan deteksi marker perempuan XIST pada sampel mengandung
RNA perempuan. Sebagaimana terlihat dari variasi tinggi sinyal marker laki-laki dan
perempuan, input sampel tidak sejalan dengan puncak tinggi. Hal ini cocok penggunaan dari
33 siklus amplifikasi dan telah dideskripsikan sebelumnya di Ref. [41].

3.3. Sampel Terdegradasi


Pemeriksaan penanda jenis kelamin pada sampel yang terdegradasi dinilai pada satu set
jaringan organ yang diekshumasi [17] . Menggunakan Sex- Organtyper multiplex, jenis
kelamin dinilai benar pada skor “observe” 80% dari sampel; dua sisa sampel dengan hasil
skor “sporadically observe”.Hal ini termasuk juga penentuan jenis kelamin positif pada

9
sampel kulit yang telah dikubur hingga waktu 40 tahun, menunjukkan bahwa penanda jenis
kelamin dapat dengan baik diterapkan pada sampel terdegradasi. Sekali lagi, tidak ada
penilaian positif yang salah terjadi (Tabel 3 ).
3.4. Aplikasi dalam Kasus Kerja
Nilai tambah dari RNA sebagai penanda spesifik jenis kelamin pada kasus kerja forensik
menjadi jelas ketika diterapkan pada sampel dengan atau tanpa penanda seks, kombinasi
penanda mRNA yang terdeteksi dapat menyebabkan asumsi yang salah. Baru-baru ini,
deteksi penanda mukosa vagina, biasanya berkaitan dengan adanya bahan sel perempuan,
telah dijelaskan dalam darah yang kadaluwarsa, sampel darah mimisan dan mukosa hidung,
tanpa memandang jenis kelamin donor [15] . Misalnya, ketika menganalisis sampel mimisan
donor laki-laki, darah, air liur, mukosa vagina dan penanda sekresi menstruasi adalah
terdeteksi, seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 3 A. Marker mukosa hidung sebelumnya
telah dikembangkan dan dimasukkan dalam versi terbaru Cell-typer Multiplex [15] untuk
membantu dalam membedakan sampel mimisan dari campuran darah, air liur dan vagina
mukosa ( Gambar 3 B). Penambahan penanda seks dilakukan untuk memastikanpendonor
adalah laki-laki dari ( Gambar 3 C). Dengan demikian, penambahan penanda RNA jenis
kelamin tertentu dalam penentuan jenis kelamin menggunakan sampel mimisan dari donor
laki-laki lebih baik daripada campuran sel dari donor pria dan wanita.

Gambar. 2. Hasil dari darah: analisis campuran darah menggunakan Sex-Cell-typer

10
multipleks. Serangkaian sampel dengan berbagai rasio kontribusi pria: wanita (M: F)
dianalisis untuk menilai kecocokan penanda untuk mendeteksi kedua penanda secara
bersamaan. Disorot dalam cahaya biru adalah penanda seks pria RPS4Y1 dan sampel laki-
laki. Tanda wanita XIST dan sampel wanita ditunjukkan dengan sorotan merah jambu. *
HK = housekeeping. Hanya sampah untuk penanda RNA yang merespons yang ditampilkan.
(Untuk interpretasi referensi untuk mewarnai legenda tokoh ini, pembaca mengacu pada versi
web artikel ini.)

Tabel 3
XIST dan hasil profil RPS4Y1 setelah menganalisis jaringan organ manusia yang digali
(n=10, yang telah terkubur antara 4 hingga 40 tahun). Untuk tiga sampel waktu pemakaman
yang tepat tidak diketahui (# tahun terkubur ditandai dengan "-"). Interpretasi dari penanda
jenis kelamin dilakukan dengan menggunakan pedoman "x = n / 2" dan empat PCR ulangan
per mencicipi. Diindikasikan per sampel adalah “(secara sporadis) mengamati” scoring
untuk penanda target. Tidak ada penanda non target yang terdeteksi pada organ non target.

4. Kesimpulan
Penelitian ini menjelaskan penggabungan RNA penanda spesifik-seks dalam profil mRNA
multipleks yang digunakan di forensik saat ini secara berkesinambungan mengidentifikasi
jenis kelamin donor dan sel jenis bahan dalam pembuktian. Penggunaan penanda seks
spesifik telah dijelaskan oleh berbagai penelitian, sebagian besar dalam dunia medis, tetapi
yang terbaru untuk forensik [18,22,23] . Sex-Cell-typer dan Sex-Organtyper multipleks
berhasil diterapkan pada sampel donor yang tunggal, campuran dan sampel yang
terdegradasi. Hasil yang diperoleh tidak ada yang false positive, kecuali pada penanda XIST
dalam sampel biopsi yang kemungkinan tumor. Jadi, ketika bahan sel diturunkan dari

11
seorang individu yang membawa sel kanker di jaringan yang ditargetkan, data mengenai
penanda perempuan harus ditafsirkan dengan hati-hati, selama RNA non-coding, seperti
XIST, diketahui memilikinya ekspresi gen yang tidak diregulasi dalam sel tumor. Kami
menyadari, bagaimanapun status kesehatan individu yang terlibat dalam kejahatan sering
tidak diketahui. Selain itu, sindrom-sindrom tertentu seperti Klinefelter (misalnya 47, XXY)
dan Triple X syndrome (47, XXX) akan mengarah pada inaktivasi beberapa kromosom X dan
menyebabkan peningkatan ekspresi XIST, sementara wanita dengan sindrom Tuner (45, X)
tidak akan menunjukkan ekspresi XIST karena tidak ada inaktivasi X-kromosom yang terjadi
[42,43] . Sindrom karena inaktivasi X-kromosom miring (pilihan non-acak mengenai X
yang tidak aktif) tidak diharapkan berpengaruh dalam deteksi penanda XIST [44].
Penggabungan penanda RNA spesifik-seks memberikan informasi tumpang tindih pertama
dalam profil DNA dan RNA.

Ucapan terima kasih


Para penulis berterima kasih kepada semua relawan yang menyumbang dalam penelitian ini.
Kami berterima kasih kepada Demi Wiskerke untuk bantuan teknis. TS dan MvdB menerima
dukungan finansial dari Union Seventh Framework Programme (FP7 / 2007-2013) di bawah
persetujuan 285487 (EUROFORGEN-NoE).

12