DETECCION DE VIRUS DEL MOSAICO DE LA REMOLACHA EN UNA PLANTA

DE ACELGA

Jaimes, Cindy1. Suarez, Angie2

Universidad de Pamplona, Facultad de Ciencias Básicas, Departamento de Microbiología,

Pamplona, Norte de Santander, Colombia.
E-mail: Lorena.1496@hotmail.com;angie26natalia_1993@hotmail.com

RESUMEN

El propósito de la práctica fue determinar patologías virales causadas por el Virus del
Mosaico de la Remolacha, en una planta de acelga ya infectada, con posible
sintomatología causal de este virus. Se empleó la técnica de filtración por membrana para
obtener las partículas virales y posteriormente a través del método de aspersión e
inyección se infectó plantas sanas, cumplido el tiempo de infección inicial del virus, la
cual hace referencia a los síntomas locales, se obtuvo que las platas analizadas
presentaban la misma sintomatología que la planta inicial, notándose una infección,
sistémica más avanzada en las platas que fueron inoculadas por el método de inyección,
confirmando así que la sintomatología que presentaban las plantas era de origen viral y
no bacteriano o fúngico. Se recomienda mayores estudios para la confirmación del Virus
del Mosaico de la Remolacha en plantas de acelga

Palabras claves: BSBMV, acelga, filtración por membrana, inyección, aspersión.

ABSTRACT

The purpose of the practice was to determine viral pathologies caused by the Beet Mosaic
Virus, in an already infected chard plant, with possible causative symptoms of this virus.
The membrane filtration technique was used to obtain the viral particles and later, through
the method of spraying and injection, healthy plants were infected. Once the initial
infection of the virus was completed, which refers to the local symptoms, it was obtained
that the analyzed plants presented the same symptomatology as the initial plant, noting a
more advanced systemic infection in the plants that were inoculated by the injection
method, confirming that the symptoms presented by the plants were of viral and non-
bacterial or fungal origin. Further studies are recommended for the confirmation of Beet
Mosaic Virus in Swiss chard plants.

Keywords: BSBMV,chard, membrane filtration, injection, aspersion

INTRODUCCIÓN las plantas, siendo ellas el foco

primario de investigación
Según Marilyn Roossinck los
aproximadamente durante 120 años,
primeros huéspedes de virus fueron
según datos teóricos estas primeras
investigaciones sobre virus eran de
naturaleza más ecológica, la mayor
parte del trabajo realizado en
virología vegetal durante los últimos
cincuenta años ha sido molecular
pero en los últimos diez años ha
surgido el subcampo de la ecología
viral a medida que aprendemos más
acerca de los virus en entornos
naturales y cómo facilitan el éxito de
la interacción del huésped con el
medioambiente(Roossinck, 2015)
La acelga es conocida como una
hortaliza de hojas verdes, que
presenta bajo contenido de grasa y
calorías, pero son ricas en proteínas,
calcio y hierro lo cual ayuda al
estreñimiento y también a la
reducción del riesgo de
enfermedades cardiovasculares y la
diabetes, por otro lado presenta
efectos hemostáticos, hipoglucemicos
y antiinflamatorios(Kabir et al., 2018).
Según la clasificación botánica la
acelga pertenece a la familia
Amaranthaceae, las cuales son
susceptibles a las infecciones
transmitidos por Polymyxa betae los
cuales son lo encargados de
transmitir el virus del Mosaico de la
remolacha (BSBMV) y el de la vena
amarilla necrótica de la remolacha
(BNYVV), también es el el agente
causal de la rizomanía con
distribución mundial.
La diferencia de estos virus radica en
la infección de raíz y hojas, ya que el
BNYVV afecta la raíz de la planta,
provocando una raíz enferma y daño
en el sistema vascular, a nivel de
hojas los síntomas no son tan
notorios mientras que el BSBMV va a
infectar principalmente las hojas en
las cuales se puede observar
síntomas bandas venosas de color
amarillo claro, manchas o patrones
de mosaico y trastornos del
crecimiento (Laufer et al., 2018)
BSBMV se identificó por primera vez
en Texas en 1988 como un virus de
remolacha azucarera
morfológicamente similar pero
serológicamente distinto de BNYVV.
Según el comité internacional de
virología, clasifica al virus del
Mosaico de la remolacha dentro del
género Benyvirus y en una nueva
familia llamada Benyviridae, la cual
contiene virus con genomas de ARN
de múltiples partes encapsidados en
partículas rígidas con forma de barra.
Este género presenta un único ORF
en RNA1 que codifica la proteína
asociada a la replicación (que termina
en un dominio RdRp similar a
Sindbis) y en tener un genoma de
ARN multipartito protegido y
poliadenilado. Dentro de este género
encontramos 3 especies como lo son
el virus de la necrosis de la raya del
arroz, el virus de la vena amarilla
necrótica de la remolacha (especie
tipo, BNYVV) y el virus del mosaico
del suelo de la remolacha (BSBMV)
los dos últimos poseen ARN
genómicos suplementarios. RNA3,
RNA4 los cuales presentan ARN
más pequeños, cada uno codificando
una sola proteína con funciones en la
transmisión y el desarrollo de
síntomas(ICTV,2013), la cinética del
virus BSBMV mostrada en un estudio
realizado por Claudio Ratti en el 2009
nos dice que los primeros síntomas
locales aparecen de 5 a 7 días y de
10 a 14 días los síntomas sistémicos,
para determinar la eficacia de la
propagación sistémica viral la
realizaron mediante el promedio de
plantas infectadas sistémicamente
frente al total de plantas inoculadas.
(Ratti et al., 2009)
El objetivo de este estudio fue
identificar el virus del mosaico de la
remolacha en plantas sanas a partir
de una planta de acelga enferma la
cual presentaba sintomatología
característica del virus, a su vez
comprobar si la sintomatología y la
cinética corresponden a las bases
teóricas y por ultimo determinar que
método de transmisión es más
rápido.
MATERIALES Y METODO
El estudio realizado fue descriptivo. En
primer lugar se seleccionó la planta que
presentara síntomas característicos al
virus del mosaico, posteriormente se
seleccionaron 4 plantas sanas del mismo
tamaño, las cuales se dividieron en dos
grupos según su inoculación, un grupo
se inoculo por absorción y el otro por
penetración, pasado el tiempo de
infección se observaron los síntomas
locales y posteriormente los
sintomáticos.
POBLACION Y MUESTRA
Se seleccionaron 5 plantas de acelga,
cultivadas en la ciudad de pamplona las
cuales 4 eran plantas sanas y la sobrante
pertenecía a la planta infectada por el
virus. Estas plantas sanas se clasificaron
en 2 grupos, la planta 1 y 2 se agruparon
en el grupo de absorción y las plantas 3 y
4 en el grupo de inyección.
AISLAMIENTO DEL VIRUS DEL
MOSAICO DE LA REMOLACHA
Para llevar a cabo el aislamiento del
virus, se tomaron las hojas que
presentaban sintomatología
característica del virus la cual se
macero adicionando 1gr de arena
estéril, 100 ml de PBS pH 7 y 1ml de
antibiótico de penicilina, este
macerado se centrifugo a 4000
r.p.m/15 min, se tomó el
sobrenadante y se realizó una
dilución en base 10 usando agua
destilada estéril el cual se filtró,
mediante el equipo de filtración por
membrana usando filtros de 0,45
micras, se toma el filtrado y se
procede a inocular las plantas sanas,
al primer grupo se inoculo 1 ml por
aspersión a cada una y al segundo
grupo se inoculo 1 ml por inyección.
Pasado el tiempo de infección (5-15
días) se observaron síntomas
característicos en las hojas de la
acelga, los cuales se clasificaron en
dos tablas, en la tabla 1 observamos
el porcentaje de positividad en donde
se tomaron todas las hojas que
presentaban sintomatología como el
enrollamiento, amarillamiento y
marchitamiento tomando el número
de hojas como el 100%, para la tabla
2 en donde se determinó el área de
infección de la hoja se tuvieron en
cuenta solo las hojas que
presentaban amarillamiento en donde
se procedió hallar el área de la hoja
multiplicando el ancho y el largo el
cual se tomó como el 100% y
seguidamente se procedió a hallar la
medida de la sintomatología de la
hoja mediante una regla de tres
tomando el 100% el área total de la
hoja.
RESULTADOS Y ANÁLISIS
Se logró observar los síntomas
esperados a partir del día 5 después de
la infección, pero se pudo evidenciar
mayor notoriedad de estos en las plantas
que fueron infectados por el método de
inyección, este resultado concuerda con
(Ratti et al., 2009), el cual reporta la
presencia de síntomas locales desde el
día 5 y desde el día 10 los síntomas
sistémicos, en el cuadro 1 observamos
los síntomas característicos, en la tabla 1
y 2 se muestras los resultados de
porcentaje de positividad y porcentaje de
infección respectivamente

Cuadro 1. Sintomatología inicial y final de las hojas de Acelga. A) el inicio de los síntomas, como
enrollamiento de las hojas. B) las hojas presentan en su totalidad un amarillamiento y el
marchitamiento

Sintomatología
Sintomatología inicial (día cinco) Sintomatología final (día ocho)

a. b.
Sintoma: enrollamiento de las hojas Síntoma: marchitez y
amarillamiento de la hoja

Tabla 1. Porcentaje de positividad de la presencia de síntomas causados por el virus del Mosaico de la
Remolacha en las hojas de acelga analizadas por los diferentes métodos
Método de No. Muestras No. muestras no. muestras
%positividad
infección (hojas por plata) positivas negativas
13 6 5 46.15%
Aspersión
15 7 8 46.6%
10 7 3 70%
Inyección
16 13 3 81.25%

Tabla 2. Porcentaje del área de infección en las hojas que presentaron amarillamiento por los dos diferentes
métodos
 Medida de
Método de No. Área de la hojas % de infección
sintomatología de la
infección planta Positivas en la hoja
hoja
192 cm2 192 cm2 100%
1 240 cm2 240 cm2 100%
216 cm2 84 cm2 38,88%
Aspersión 150 cm2 135 cm2 90%
204 cm2 195 cm2 95.6%
2
192 cm2 72 cm2 37,5%
167 cm2 167 cm2 100%
210 cm2 200 cm2 95.2%
2 2
198 cm 179 cm 90.4%
2 2
174 cm 174 cm 100%
1 234 cm2 198 cm2 84.6%
150 cm2 150 cm2 100%
192 cm2 192 cm2 100%
Inyección 154 cm2 154 cm2 100%
96 cm2 58 cm2 58%
85 cm2 85 cm2 100%
54 cm2 54 cm2 100%
2
80 cm2 80 cm2 100%
2 2
126 cm 86 cm 68.25%
91 cm2 42 cm2 46,15%

Los resultados obtenidos indicaron que el
61% de las hojas pertenecientes a las 4
plantas analizadas, fueron positivas. En
la tabla 2 se observa, que las plantas
infectadas por el método de inyección,
presentan mayor sintomatología en las
hojas como lo es el amarillamiento y
marchitamiento, por consiguiente la
infección se volvió sistémica en menor
tiempo al verse una mayor población de
hojas infectadas con relación a las
infectadas por aspersión en el cual el
porcentaje de positividad en ellas
disminuye drásticamente siendo este
menor al 50%, la inoculación mediante
inyección es más eficiente con relación a
la de aspersión ya que el virus se inyecto
directamente en la vena principal de la
hoja lo cual permitió mayor dispersión del
mismo.
Las plantas infectadas presentaron
sintomatología variada presuntiva de
virosis, como es el amarillamiento de las
hojas, amarilleo y rizado de las hojas,
junto a manchas de color verde pálido u
oscuro, por esto se dificulta asociar una
sintomatología específica con el virus por
caracterización fenotípica, y no se puede
determinar con precisión qué virus es el
causante de esos síntomas. Esto
concuerda con Marhuenda y García los
cuales reportan que lo virus que afectan
a la acelga son el mosaico de la
remolacha, el amarilleo de la remolacha
y el Virus I del Pepino y todos estos
provocan los mismos síntomas, o son
muy similares, lo que puede llevar a
confusiones en la identificación, por lo
que se debe tener cuidado al realizar el
diagnóstico de un virus específico(Pérez
Moreno et al., 2016)
Conclusiones:
Se logró observar la sintomatología
presuntiva del virus del Mosaico de la
Remolacha en la Acelga, lo cual nos
indica que los virus son agentes filtrables
los cuales se pueden transmitir mediante
diferentes maneras, pero se recomienda
mayores estudios para su confirmación.
BIBLIOGRAFIA
ICTV (International Committee on
Taxonomy of Viruses). Taxonomy
history: Beet soil- borne mosaic
virus. 2013
https://data.ictvonline.org/proposa
ls/2013.011a-
dP.A.v1.Benyviridae.pdf
Kabir, M. H., Abd El-Aty, A. M.,
Rahman, M. M., Chung, H. S.,
Lee, H. S., Jeong, J. H., … Shim,
J.-H. (2018). Dissipation kinetics,
pre-harvest residue limits, and
dietary risk assessment of the
systemic fungicide metalaxyl in
Swiss chard grown under
greenhouse conditions.
Regulatory Toxicology and
Pharmacology, 92, 201–206.
https://doi.org/10.1016/J.YRTPH.
2017.12.003
Laufer, M., Mohammad, H., Maiss, E.,
Richert-Pöggeler, K., Dall’Ara,
M., Ratti, C., … Varrelmann, M.
(2018). Biological properties of
Beet soil-borne mosaic virus and
Beet necrotic yellow vein virus
cDNA clones produced by
isothermal in vitro recombination:
Insights for reassortant
appearance. Virology, 518, 25–
33.
https://doi.org/10.1016/J.VIROL.2
018.01.029
Juan Antonio Marhuenda Berenguer y
Juan García Vergara
http://www.publicacionescajamar.es/u
ploads/cultivos-horticolas-al-aire-
libre/13-cultivos-horticolas-al-
aire-libre.pdf
Pérez Moreno, L., Niño Mendoza, G.
H., Mendoza Celedón, B., León
Galván, M. F., Robles
Hernández, L., González Franco,
A. C., … González Franco, A. C.
(2016). Pathogenic viruses
incidence, severity and detection
in lettuce, in the state of
Queretaro, Mexico. Acta
Universitaria, 26(2), 3–11.
https://doi.org/10.15174/au.2016.
842
Ratti, C., Hleibieh, K., Bianchi, L.,
Schirmer, A., Autonell, C. R., &
Gilmer, D. (2009). Beet soil-
borne mosaic virus RNA-3 is
replicated and encapsidated in
the presence of BNYVV RNA-1
and -2 and allows long distance
movement in Beta macrocarpa.
Virology, 385(2), 392–399.
https://doi.org/10.1016/J.VIROL.2
008.12.013
Roossinck, M. J. (2015). Plants,
viruses and the environment:
Ecology and mutualism. Virology,
479–480, 271–277.
https://doi.org/10.1016/J.VIROL.2
015.03.041
ANEXOS

METODO DE ASPERSIÓN: Día 2 hasta el día 9

METODO DE INYECCIÓN : Día 2 hasta el día 9