5to Informe de Laboratorio de Microbiologia

AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE
BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM

NEGATIVAS
UNIVERSIDAD NACIONAL JOSE FAUSTINO SANCHEZ
CARRION
FACULTAD: Ingeniería Agraria, Industrias

Alimentarias y Ambiental
ESCUELA: Ingeniería Ambiental
LABORATORIO N° 5: Aislamiento e identificación de

bacterias Gram positivas y Gram negativas.
PROFESOR: Blgo. Huayna Dueñas, Luis Alberto
CURSO: Microbiología Ambiental
ALUMNA:
 Santiago Espinoza, Daveiva Arlette

 Saromo Bardales, Maily Mabel
 Valladares Apolinarion, Billy Aldo
 Villanueva Carrion, Augusto Clemente
 Zevallos Montañez, Jahaira
2017
FECHA DE ENTREGA: 2 de Mayo del 2017
UNIVERSIDAD NACIONAL JOSE FAUSTINO SANCHEZ CARRION
ESCUELA DE FORMACION PROFESIONAL INGENIERIA AMBIENTAL
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INDICE
INDICE ............................................................................................................................................... 1
1. OBJETIVOS .............................................................................................................................. 2
2. FUNDAMENTOS ...................................................................................................................... 3
3. MATERIALES ........................................................................................................................... 4
4. PROCEDIMIENTOS ................................................................................................................ 5
6. RESULTADOS .......................................................................................................................... 8
7. CONCLUSIONES ................................................................................................................... 13
8. CUESTIONARIO .................................................................................................................... 14
9. ANEXOS .................................................................................................................................. 15
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM 1

NEGATIVAS.| LABORATORIO N°5
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1. OBJETIVOS
 Encontrar bacterias si son causantes de infecciones y enfermedades.
 Usar los medios de cultivo como son los agares para sembrar nuestras muestras e
identificar los microorganismos presentes.
 Trabajar en equipo de una forma eficiente.

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2. FUNDAMENTOS
El universo que descubrió Leeuwenhoek estuvo conformado por bacterias y

protozoarios de diversas características. Es por ello que hoy en día sabemos que hay
millones de microorganismos que se encuentran en todos los lugares de nuestro
planeta, en al agua dulce y salada, por tanto viven en el aire, agua y tierra, se les
halla tambien en los alimentos, en el exterior y el interior de los seres vivos. También
causan enfermedades y otros que son beneficiosos para nosotros.
Por eso es de vital importancia conocer sobre estos microorganismos.

Especialmente hablaremos sobre bacterias, tipos, características y diferencias entre
gram negativas y positivas. Las bacterias pertenecen al filum de
las Shizomycophyta, se les llama también microbios o gérmenes. Son de pequeño
tamaño. Casi siempre son unicelulares.
Estan recubiertas por una pared celular de naturaleza quitinosa en su superficie

externa. Poseen prolongaciones filamentosas que les permiten desplazarse otras
tienen flagelos.Para clasificar a las bacterias debemos tener en cuenta su
tamaño, forma, disposición espacial, propiedades. Se encuentran en todos
los lugares de nuestro planeta, en al agua dulce y salada, por tanto viven en el aire,
agua y tierra, y se les halla tambien en los alimentos y en el exterior y el interior de
los seres vivos. Encontramos también bacterias que pueden provocar enfermedades
potencialmente mortales. La enfermedad puede deberse a los efectos tóxicos de los
productos bacterianos o a la invasión de regiones corporales que acostumbran a ser
estériles.

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3. MATERIALES
 Agar Mac Conckey.

 Agar manitol salado.
 Asa de siembra.
 Mechero
 Hisopos estériles.
 Baja lenguas.
 Placas Petri.
 Suero fisiológico.
 Jeringa de 10 ml.
 Ron de quemar.
 Fosforo.

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4. PROCEDIMIENTOS
I. Gram negativo (Agar Mac Conkey)
a) Heces humanas :
1. Esterilizamos las asas de siembra al rojo vivo en un mechero por un
corto tiempo.
2. Enfriar el asa de siembra.
3. Captar una porción de muestra con el asa de siembra.
4. Sembrar con el asa de siembra en forma de estrías en la placa Petri
de agar Mac conckey.
5. Rotular la placa.
6. Llevar a la incubadora por un periodo de 24 horas.
b) Agua residual:
1. Esterilizaos las asas de siembra al rojo vivo en un mechero.
2. Enfriar el asa de siembra.
3. Introducir el asa de siembra en el agua residual.
4. Sembrar con el asa de siembra en forma de estrías en la placa con el
agar mac conkey.
5. Rotula la placa.
6. Llevar a la incubadora por un tiempo de 24 horas.
c) Hamburguesa:
1. Esterilizar la aguja de la jeringa.
2. Absorber el suero fisiológico mediante la jeringa.
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3. Mojar el hisopo con la jeringa llena de suero fisiológico.
4. Introducir el hisopo a la hamburguesa; remover en su interior y
quitar.
5. Sembrar con el hisopo en forma estrías en la placa con agar mac
conckey.
6. Rotular la placa.
II. Gram Positivo (Agar Manitol Salado)
a) Secreción Faríngea:
1. Se extrae de un compañero secreción de las amígdalas con un
hisopo estéril y con la ayuda de un bajalenguas.
2. En seguida se manipula y abre la placa Petri ya cultivada con el Agar
Manitol Salado.
3. Sobre el cultivo se esparce en forma de estrías la secreción
obtenida.
4. Cerrar la placa Petri y rotular poniendo sobre la tapa en la parte
superior el nombre de la muestra biológica, grupo, sub grupo e
iniciales del que realizo la práctica.
5. Finalmente se lo introduce a la Incubadora por 24/h.
b) Heces Humanas :
1. Se esteriliza el aza de siembra al rojo vivo en el mechero por unos
segundos, en seguida se le aparta del mechero dejándolo enfriar.
2. Se extrae con la aza de siembra esterilizada un poco de muestra de
heces humanas.
3. Sobre la placa Petri ya cultivada con el Agar Manitol Salado se
esparce en forma de estrías sectorizadas.
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5. Finalmente se deja reposar en la Incubadora por 24/h.
c) Hamburguesa :
1. Esterilizar la aguja de la jeringa.

2. Absorber el suero fisiológico de la jeringa mediante el hisopo estéril.
3. Mojar el hisopo con la jeringa llena de suero fisiológico.
4. Introducir el hisopo a la hamburguesa; remover en su interior y
quitar.
5. Sembrar con el hisopo en forma estrías sectorizadas en la placa
Petri ya cultivada con el Agar Manitol Salado.

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6. RESULTADOS
 24 Horas después se procede a retirar las placas Petri del equipo para poder
observar y analizar si hay presencia de bacterias, basándonos en la composición de
los agares y las característica de las colonias de bacterias que se han proliferado en
los medios de cultivo.
1. AGAR MAC CONKEY

Es un medio selectivo diferencial utilizado para el aislamiento y diferenciación
de bacilos gram negativo (-) fermentadores y no fermentadores de lactosa. Se
utiliza con frecuencia para el aislamiento de coliformes.
Composición:

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Preparación:
Suspender los ingredientes en el agua destilada. Calentar agitando frecuentemente

y dejar hervir hasta disolver completamente. Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lb
de presión) durante 15 minutos. Se debe evitar el sobrecalentamiento. Enfriar entre
45ºC y 50ºC, colocar 20 ml de medio por cada placa y dejar solidificar.
Colonias típicas:
En este tipo de Agar mayormente proliferan las colonias de los microorganismos

fermentadores de lactosa (coliformes) en agar MacConkey son de color rojo ladrillo,
eventualmente rodeadas de bilis precipitada.
Explicación
Los resultados más relevantes y notorios de proliferación de colonias de bacterias

que pudimos observar en las placas Petri fue en el de la muestra de las heces
humanas, en donde se encontró una alta proliferación de colonias de bacterias sobre
el medio de cultivo donde estas presentaban un color rojo rosado característico de
bacterias fermentadores de lactosa (coliformes) rodeada de un color blanquecino
de fina capa llamada la bilis precipitada.
Ejemplo: se encontró un tipo de entero bacteria

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Bioquímica de dichas entero bacterias:
2. AGAR MANITOL SALADO
El agar sal manitol en una fórmula diseñada por Chapman para la diferenciación de
estafilococos positivos a la coagulasa (por ejemplo, Staphylococcus aureus) de los
estafilococos negativos a la coagulasa. Este agar se utiliza para el aislamiento de
estafilococos a partir de muestras clínicas, de cosméticos3 y de pruebas de límite
microbiano4, 5. El agar sal manitol contiene peptonas y extractos de carne bovina,
que suministran los nutrientes esenciales. Una concentración de cloruro sódico de
7,5% tiene como resultado una inhibición parcial o completa de los organismos
bacterianos diferentes de los estafilococos.

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La fermentación de manitol, indicada por el cambio del indicador de rojo fenol,
facilita la diferenciación de la especie de estafilococos. Los estafilococos positivos a
la coagulasa (por ejemplo, Staphylococcus aureus) producen colonias de color
amarillo y un medio circundante de color amarillo, mientras que los estafilococos
negativos a la coagulasa producen colonias de color rojo y no producen cambio de
color en el indicador de rojo fenol.
Composición:
Procedimiento de análisis
Extender las muestras tan pronto como sea posible después de recibirlas en el
laboratorio. La placa de extensión se utiliza principalmente para aislar los cultivos
puros de las muestras que contienen flora mixta. Si, por el contrario, el material se
cultiva directamente empleando una torunda, hacerla girar en una sección pequeña
cercana al borde, extendiendo luego a partir de esta área inoculada. También debe
inocularse un medio no selectivo tal como el agar Columbia con sangre de carnero
al 5% para proporcionar una indicación de otros organismos presentes en la
muestra. Incubar las placas a 24 – 48 h a 35 ± 2 °C en una atmósfera aerobia.

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Colonias típicas
En este caso se pudo identificar la colonia de bacteria del staphylococcus aureus.
Fig. staphylococcus aureus.
Metabolismo
En cuanto a su forma de obtener energía es tanto a través de la fermentación como de la

respiración. En cuanto a los requerimientos de cultivo, son no exigentes desde el punto de
vista nutricional, creciendo en medios pobres y simples. En su relación con el oxígeno son
aerobios-anaerobios facultativos.

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7. CONCLUSIONES
 Detectar tipos de bacterias encontradas en el procedimiento de siembra.
 Se detectó una serie de microorganismos característicos ya sean Gram positivos o

Gram negativo de cada muestra tomada, gracias a los medios de cultivo (agar
mackonkey y agar manitol salado)
 En el Agar MacConkey se encontró unas colonias de enterobacteria
 En el Agar Manitol Salado se encontró el staphylococcus aureus.

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8. CUESTIONARIO
1. ¿Qué tipo de colonias proliferan en el Agar MacConkey?
En este tipo de Agar mayormente proliferan las colonias de los microorganismos

fermentadores de lactosa (coliformes) en agar MacConkey son de color rojo ladrillo,
eventualmente rodeadas de bilis precipitada.
2. ¿Qué tipo de colonias proliferan en el Agar Manitol Salado?
3. ¿Cuál es el metabolismo del staphylococcus aureus?
En cuanto a su forma de obtener energía es tanto a través de la fermentación como de

la respiración. En cuanto a los requerimientos de cultivo, son no exigentes desde el
punto de vista nutricional, creciendo en medios pobres y simples. En su relación con el
oxígeno son aerobios-anaerobios facultativos.
4. ¿Cómo es la preparación del Agar MacConkey?
Suspender los ingredientes en el agua destilada. Calentar agitando frecuentemente y

dejar hervir hasta disolver completamente. Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lb de
presión) durante 15 minutos. Se debe evitar el sobrecalentamiento. Enfriar entre 45ºC
y 50ºC, colocar 20 ml de medio por cada placa y dejar solidificar.

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9. ANEXOS

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AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE

BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM

FACULTAD: Ingeniería Agraria, Industrias

ESCUELA: Ingeniería Ambiental

LABORATORIO N° 5: Aislamiento e identificación de

PROFESOR: Blgo. Huayna Dueñas, Luis Alberto

CURSO: Microbiología Ambiental

 Santiago Espinoza, Daveiva Arlette

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM 1

 Encontrar bacterias si son causantes de infecciones y enfermedades.

 Trabajar en equipo de una forma eficiente.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM 2

El universo que descubrió Leeuwenhoek estuvo conformado por bacterias y

Por eso es de vital importancia conocer sobre estos microorganismos.

Estan recubiertas por una pared celular de naturaleza quitinosa en su superficie

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM 3

 Agar Mac Conckey.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM 4

I. Gram negativo (Agar Mac Conkey)

II. Gram Positivo (Agar Manitol Salado)

1. Esterilizar la aguja de la jeringa.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM 7

1. AGAR MAC CONKEY

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM 8

Suspender los ingredientes en el agua destilada. Calentar agitando frecuentemente

En este tipo de Agar mayormente proliferan las colonias de los microorganismos

Los resultados más relevantes y notorios de proliferación de colonias de bacterias

Ejemplo: se encontró un tipo de entero bacteria

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM 9

Bioquímica de dichas entero bacterias:

2. AGAR MANITOL SALADO

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM 10

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM 11

En este caso se pudo identificar la colonia de bacteria del staphylococcus aureus.

Fig. staphylococcus aureus.

En cuanto a su forma de obtener energía es tanto a través de la fermentación como de la

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM 12

 Detectar tipos de bacterias encontradas en el procedimiento de siembra.

 Se detectó una serie de microorganismos característicos ya sean Gram positivos o

 En el Agar MacConkey se encontró unas colonias de enterobacteria

 En el Agar Manitol Salado se encontró el staphylococcus aureus.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM 13

1. ¿Qué tipo de colonias proliferan en el Agar MacConkey?

En este tipo de Agar mayormente proliferan las colonias de los microorganismos

2. ¿Qué tipo de colonias proliferan en el Agar Manitol Salado?

3. ¿Cuál es el metabolismo del staphylococcus aureus?

En cuanto a su forma de obtener energía es tanto a través de la fermentación como de

4. ¿Cómo es la preparación del Agar MacConkey?

Suspender los ingredientes en el agua destilada. Calentar agitando frecuentemente y

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM 14

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM 15

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM 16

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