Microscopía de Las Células

MICROSCOPÍA DE LAS CÉLULAS 5 DE MAYO DEL 2016
Microscopía de las células

I. Objetivos:
- Identificar y caracterizar las partes del microscopio óptico.
- Observar y caracterizar la célula mediante el microscopio.
II. Marco teórico:
El estudio de las ciencias biológicas siempre ha estado acompañado del uso del
microscopio, el cual fue invento de Zaccharias Jannsen y quien le puso el nombre
fue Giovanni Faber. Su uso contribuyó en la formulación de la teoría celular.
Hooke, quien es considerado el descubridor de la célula, en 1665 publicó su obra
“Micrographia or some physiological descriptions of minute bodies made by
magnifying glasses” en la cual describe las observaciones que realizó usando un
microscopio cuyas lentes eran obtenidas por fusión de hilos de vidrio y las cuales
se encontraban sujetas a un armazón de plomo.
Él estudió las células de la superficie de una hoja, y las paredes celulares del
corcho, consideradas por primera vez como unidad del organismo. El
microscopio óptico está formado por tres sistemas fundamentales:
 El sistema mecánico, que es el sostén de los sistemas complementarios
y que permite el ajuste del punto focal y la muestra
 El sistema óptico, que permite magnificar a diferentes grados la muestra
observada.
 El sistema de iluminación, que permite iluminar y concentrar los haces
luminosos en el punto de interés, así como regular la intensidad de la
iluminación.
Hay dos tipos distintos de células: las procariotas y las eucariotas. Las células
procarióticas carecen de núcleos limitados por membrana y de la mayoría de los
organelos que se encuentran en las células eucarióticas. Las células eucariotas
poseen una membrana citoplasmática, núcleo envuelto por una membrana y
organelos como mitocondrias, aparto de Golgi, retículo endoplasmático liso y
rugoso, ribosomas, lisosomas, centriolos, cloroplastos y vacuolas.
- Lugol: Este producto se emplea frecuentemente como desinfectante y
antiséptico, para la desinfección de agua en emergencias y como un
reactivo para la prueba del yodo en análisis médicos y de laboratorio.
- Alcohol acetona: disolvente orgánico que se utiliza como lavado para
eliminar colorante no fijado.
- Alcohol isopropílico: alcohol incoloro, inflamable, con un olor intenso y
muy miscible con el agua.
- Aceite de inmersión: Medio de microscopia para minimizar la difracción
de la luz cuando se utilizan objetivos de inmersión, destinados a la
observación de estructuras celulares.
- Cubreobjetos: sirve para que no se contamine ni malogre los objetivos,
se limpian con alcohol isopropílico.
UNIVESIDAD CATÓLICA DE SANTA MARÍA 1

- Catáfilo: es el lugar donde se encuentran las células vegetales en la

cebolla.
III. Introducción:
La célula es la unidad morfológica y funcional presente en todos los seres vivos
y es el elemento de menor tamaño que es considerable como vivo. Estas células
se dividen según la presencia o no de núcleo diferenciado en:
- Procariotas - Eucariotas
También se dividen en vegetales y animales presentando diferencias en el límite

celular y en la presencia o no de algunos organelos.
- Célula Animal. Las células de - Célula Vegetal. Estas células

los integrantes del reino forman parte de los tejidos y
Animal pueden ser órganos vegetales. La
geométricas, como las células presencia de los cloroplastos,
planas del epitelio; esféricas, de grandes vacuolas y de una
como los glóbulos rojos; pared celular que protege la
estrelladas, como las células membrana celular. La pared
nerviosas, o alargadas, como celular de las células
las células musculares. vegetales es rígida, lo que
determina las formas
geométricas que
encontramos en los tejidos
vegetales, como el hexagonal
observado en las células de la
cubierta de la tela de la
cebolla.
Los organismos vivos están compuestos de células, los organismos pueden ser
unicelulares o pluricelulares. La mayoría de las células no son visibles a simple
vista. Para observar y estudiar las células y los tejidos, se usan diferentes tipos
de microscopios, ya que son importantes para diferenciar los tipos de células
existen: las células animales, las cuales las observaremos el epitelio bucal y los
protozoarios, las células vegetales, las cuales las observaremos en la epidermis
de las cebolla (lugol y azul de metileno) y las células bacterianas.
En el microscopio podemos observar células muertas o vivas, en los últimos años
se avanzó mucho en el conocimiento de las características internas de las
células, gracias al uso de los colorantes, que proporcionan una claridad
suficiente para hacer visibles las estructuras celulares.
La observación de la células requiere de la luz, para obtener resultados finos,
además se pueden observar células vivas manteniéndolas en el medio adecuado
por eso necesitamos usar colorantes vitales que no dañan a las células y nos

permitan visualizar algunas de sus estructuras, entre estos colorantes están el

azul de metileno, el verde jano, el rojo neutro, etc.
IV. Materiales y métodos:
Materiales:
- Microscopio óptico
- Aceite de inmersión
- Pipetas Pasteur
- Pizeta con etanol y agua destilada
- Algodón
- Portaobjetos
- Cubreobjetos
- Hisopillos
- Muestra de agua estancada
- Azul de Metileno
- Lugol
- Cristal de Violeta
- Alcohol acetona
- Safranina
Métodos
1. Identifique las partes del microscopio y verifique su funcionamiento.

- Oculares: sirven para hacer la observación y son los por los cuales hay
que mirar los objetos, normalmente poseen un aumento de 10X. No
deben tocarse con los dedos o limpiarse, para esto el encargado del
equipo deberá hacerlo tomando los cuidados necesarios para no rayarlos
o mancharlos.
- Tornillo de la caja de prismas: se afloja y con esto se consigue que la
misma se pueda girar, con la finalidad de permitir a otras personas
observar sin mover el microscopio.
- Brazo del microscopio: sirve para transportarlo y soportar algunas
piezas.
- Platina: es una placa metálica con una perforación central sobre ella se
coloca la preparación que se va a observar.
- Tornillos del Carro: se utilizan para mover la preparación de derecha a
izquierda y de adelante hacia atrás.
- Revólver: se encuentra en la parte inferior del tubo óptico y en él se
encuentran los lentes objetivos.
- Objetivos: es el que controla la amplificación posible y la resolución de la
imagen; se clasifican en lente bajo poder (generalmente 4X), lente
mediano poder (generalmente 10X), lente alto poder (generalmente 40X),
lente inmersión en aceite, 100X).
- Condensador: se encuentra debajo de la platina y su función es la de
soportar las lentes que recogen los rayos luminosos.
- Base: sirve para darle estabilidad al instrumento.
- Fuente de luz: generalmente un sistema de iluminación de 6V con una
bombilla halógena o de luz de criptón.
- Tornillos macro y micrométrico: su función es hacer subir la platina
hasta alcanzar la distancia de trabajo o distancia de enfoque, pero se

diferencian en la magnitud en la que ambas funcionan; el macrométrico

se utiliza exclusivamente con la lente de bajo poder, pues mueve en forma
apreciable la platina, mientras que el Micrométrico se utiliza en cualquier
amplificación.

2. Observaciones de muestras en el microscopio óptico.

 Antes de iniciar las observaciones revisar que el cable de conexión a la
energía eléctrica se encuentre en buen estado; comprobar que el
microscopio se encuentre limpio y se encuentre fijas sus partes.
 Conectar el cable a la alimentación eléctrica. Colocar la muestra en la
platina.
 Poner la muestra a la distancia focal apropiada para el alumno; se logra
observando por los oculares y manipulando el tornillo macrométrico y
cuando se tiene localizada la imagen se afina el enfoque con el tornillo
micrométrico.
 Se debe realizar el enfoque personal de oculares: una vez enfocada la
muestra se realiza el enfoque de cada uno de los oculares, para ello se
cierra el ojo izquierdo y se ajusta el enfoque del ojo derecho con el
micrométrico, después se procede a realizar lo mismo con el ojo derecho.
 Observar las distintas partes de la preparación moviendo la platina, con
ayuda del carro.
 Observar la muestra con objetivo 4X, 10X, 40X y 100X.
2.1. OBSERVACIÓN DE CÉLULAS ANIMALES

2.1.1. Observación de células del epitelio bucal
1. Con la ayuda de un palillo raspar la pared interna de la boca.
2. En un portaobjetos coloca una gota de agua y extiende la muestra
tomada.
3. Fija la muestra y coloca una gota de azul de metileno de 4 a 5 min.
4. Lava para quitar el exceso de colorante, y observa al microscopio
con el objetivo de 10X o 40 X.
2.1.2. Observación de protozoarios
1. En un portaobjetos limpio y seco coloca una gota de agua
estancada, cubre con el cubreobjetos y observa en el microscopio,
retira el exceso de agua con el papel filtro.
2. Observa primero con el objetivo seco débil (10X) y por último con
el seco fuerte (40X)

2.2. OBSERVACIÓN DE CÉLULAS VEGETALES

2.2.1. Observación de la epidermis de la cebolla (lugol):
1. Con la ayuda del bisturí corta un fragmento de cebolla y
desprende la epidermis, que es la tela delgada y
transparente de la superficie.
2. Coloca una gota de lugol sobre el portaobjetos y sobre ella
extiende la epidermis
3. Cubre la muestra y obsérvala al microscopio con el objetivo
de 10X o 40X
2.2.2. Observación dela epidermis de la cebolla (azul de metileno)
1. Separamos una de las capas internas de la cebolla,
desprendiendo con la pinza la membrana adherida por la
cara inferior cóncava de una de sus capas, llevándola al
vidrio de reloj para humedecerla con un poco de agua
destilada y evitando que se enrosque.
2. Añadir un poco de azul de metileno en el vidrio de reloj, con
la muestra de cebolla previamente escurrida del agua
destilada.
3. Se deja durante 2 minutos para que la muestra se tiña y
después se enjuaga con un poco de agua destilada, para
retirar el exceso de tinción.
2.3. OBSERVACIÓN DE LAS CÉLULAS BACTERIANAS
2.3.1. Coloración de Gram (Bacterias)
1. Realizar el frotis con la bacteria Escherichia coli a partir de
cultivos líquidos o sólidos.
2. Fijar con calor (mechero), pasar 3 veces la lámina sobre el
mechero.
3. Agregar cristal violeta en cantidad suficiente para cubrir el
frote (2 a 3 gotas) y dejar actuar 1 minuto.
4. Lavar con el mínimo de agua para eliminar el exceso de
colorante.
5. Agregar lugol en cantidad suficiente para cubrir el frote (2 a
3 gotas) y dejar actuar por 1 minuto.
6. Lavar con el mínimo de agua para eliminar el exceso de
mordente.
7. Decolorar con alcohol acetona hasta que el efluente salga
incoloro.
8. Lavar con agua para eliminar el exceso de disolvente.
9. Agregar safranina en cantidad suficiente hasta cubrir el frotis
(2 o 3 gotas) y dejar actuar 1 minuto.
10. Lavar con agua para eliminar el exceso del colorante de
contraste.
11. Dejar secar la preparación a temperatura ambiente.
12. Observar al microscopio con los objetivos de 10X, 40X y
100X.

V. Resultados:
2.1.1. Logramos diferenciar las células animales, estas eran amorfas y en

su interior se observaban unos puntos oscuros que eran el núcleo;
alrededor de ellos veíamos el citoplasma y se alcanzaba a diferenciar un
poco la membrana célula. Cuando cambiamos el objetivo a 40x pudimos
observar su núcleo. El azul de metileno hacia más fácil la observación de
las células en el microscopio.

2.1.2. En las muestras de agua estancada observadas, tuvimos pequeños

inconvenientes, lo que pudimos ver son microorganismos que no nos
servían para nuestra investigación, pero normalmente lo que se
observa en el agua estancada son las euglenas y los flagelados.
También sabemos que los protozoos son los animales más sencillos
ya que están formados por una sola célula y mediante esa única célula
realizan todas las funciones vitales. Además, sabemos que los
flagelados viven como parásitos de plantas y de animales.

2.2.1. El lugol reacciona con la celulosa y le da color, esto hace que la

pared celular se note más y el núcleo adopte un color amarillo.
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UNIVESIDAD CATÓLICA DE SANTA MARÍA
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2.2.2. Observamos las células vegetales y su forma hexaédrica (en

celdas) y alargadas. En 4x logramos diferenciar la membrana y el
citoplasma; en 10x vimos en las celdas que tenían más proporción de azul
de metileno uno diminutos puntos (núcleo).
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2.3.1. En la muestra obtenida, se puede observar la coloración roja de la

membrana de las bacterias Escherichia coli, por lo tanto se determina que se
trata de una bacteria Gram- negativa. Además, también se puede notar
microorganismos con ligera coloración violeta. Y por último, microorganismos
que no poseen ninguna coloración, pues perdieron la coloración azul antes
el agente decolorante (alcohol acetona).
VI. Discusiones:
- En la estructura aunque no se pueda observar en su totalidad, es la
típica celula vegetal. En la parte exterior se ve la pared celular lo que le
da una forma definida a la celula luego se encuentra la membrana
celular y la siguiente es una capa irregular, granular que constituye el
citoplasma.
- Salió como debió salir sin usar el mechero, sin ese percance salió muy
bien
- Como la mayoría de organismos procariotas, la E. Coli está rodeada por
una pared celular bacteriana rígida, compuesta de polisacáridos y
péptidos. Dentro de la pared, se encuentra la membrana plasmática, que
es una bicapa de fosfolípidos y proteínas asociadas. Mientras que la
pared celular es porosa y puede ser penetrada por una variedad de
moléculas. Por lo tanto, al momento de aplicar el agente decolorante
(alcohol acetona) y posteriormente la safranina, la pared celular adquirió
una coloración rojiza.
VII. Conclusiones:
- Al usar el microscopio debemos observar cuidadosamente la imagen y
también interpretar correctamente lo que se ve con este instrumento.
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- Gracias al descubrimiento del ahora el ser humano puede observar

pequeños microorganismos con los que sin darse cuenta convive día a
día con ellos.
- Utilizando el lugol a comparación del Azul de metileno es mejor, porque
con el azul de metileno es cierto que podemos observar la estructura de
las células pero con el lugol tenemos una mejor visión además que con
el lugol se observa el núcleo de dichas células.
- Las células epiteliales vivas deberían haber estado unidas, pero como se
encontraban muertas estaban desprendidas.
- Las bacterias causan infecciones y enfermedades, algunas son
beneficiosas para la agricultura, salud, etc. Para poder observar dichas
bacterias se utiliza la tinción Gram.
- La bacteria E. Coli, al igual que la mayoría de microorganismos
procariotas, posee una pared fina de peptidoglicano y dos membranas
lipídicas que rodean a esta. Indicando que se trata de una bacteria Gram
(-)
- La celula vegetal es del tipo eucariota, se diferencian de las demás por
la presencia de una pared celular rígida, la cual hace que tenga una
forma constante.
VIII. Bibliografía:
- Curtis, H. & Barnes, S. 2000. Biología. Editorial panamericana
- http://www.profesorenlinea.cl/Ciencias/Celula.htm
- http://www.forest.ula.ve/~rubenhg/celula/
- http://portalacademico.cch.unam.mx/alumno/biologia1/unidad1/teoriacelu
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- Villee, C. 2008, 8 ed. Biología. Editorial interamericana McGRAW-HILL
- López, N. 2016. Biología General.
- http://practibiofuentezuelas20144esoa1.blogspot.pe/2015/01/celulas-
animales-mucosa-bucal.html
- https://es.scribd.com/doc/56871263/Practica-No-1-Observacion-
microscopica-de-protozoarios
- https://www.google.com.pe/search?q=epidermis+de+la+cebolla+con+lug
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KEwisyPHn-
8LMAhUHMyYKHUuQAh4QsAQIGQ#tbm=isch&q=epidermis+dela+cebo
lla+con+lugol&imgdii=r9G9UMdra0y_pM%3A%3Br9G9UMdra0y_pM%3
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DRyYKHbK8CmEQ_AUIBigB#imgrc=EBn3vLrDjSTRQM%3A
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1
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- https://www.google.es/search?q=microscopio+de+fluorescencia&biw=16
00&bih=775&tbm=isch&tbo=u&source=univ&sa=X&sqi=2&ved=0ahUKE
wi51cvzkLjMAhULKyYKHfrEAacQsAQIIg#imgrc=S4Tb2xNAdsX02M%3A
IX. Cuestionario:
1. Describir los diferentes tipos de microscopio existentes:
Microscopio simple.- Es el que utiliza sólo una lente,

es decir, es una lupa, su aumento depende del tipo de
lente y la graduación que esta posea, pero el aumento
que se puede lograr con este microscopio para poder
observar objetos pequeños es muy poco.
Microscopio óptico.- Este tipo de microscopio es
evolución del anterior, en él hay varias lentes
superpuestas que se encuentran graduadas y
colocadas de tal manera que el aumento de tamaño al ver los objetos puede
superar las dos mil veces el tamaño real del objeto. Por su relativa sencillez y
costo no tan elevado, es el que se utiliza en instituciones educativas (como
secundarias y preparatorias), para la instrucción de los alumnos, así como en
hospitales cuando no se requiere de un mayor aumento para observar un objeto
dado.
1
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Microscopio de campo o microscopio claro

compuesto.- Es el más común para usos médicos
y en la química industrial. Consiste en dos sistemas
de lentes, el objetivo y el ocular, están montados en
extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo
está compuesto de varias lentes que crea una
imagen aumentada de aquello que se observa, las
lentes del microscopio están dispuestas de tal forma
que el objetivo se encuentra en el punto focal del
ocular, el aumento de la imagen depende de las
longitudes focales de los sistemas de lentes,
además poseen por lo general una “cabeza”
giratoria para que los sistemas de lentes cambien dependiendo de la graduación
necesaria para poder observar el objeto que se pretende estudiar.
Microscopio electrónico.- Este tienen un aumento mucho mayor que todos los
microscopios ópticos, pues estos microscopios electrónicos pueden llegar a
aumentar el tamaño de un objeto, hasta un millón de veces (o más), llegando a
tener una resolución de 0.1 nanómetros. Este tipo se divide en otros subtipos,
como el microscopio electrónico de transmisión, en de barrido, el microscopio
electrónico de transmisión y de barrido y otros más.
Microscopio digital.- Entre los microscopios electrónicos modernos, se

encuentran los digitales, que poseen cámaras y pantallas del tipo LCD o están
conectados a una computadora, para poder hacer las observaciones mediante
la computadora y registrarlas en una unidad de disco duro o memoria, haciendo
las observaciones en la pantalla LCD o en el monitor de la computadora
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directamente, ya que estos microscopios carecen de ocular para ver los objetos
de manera directa. El tipo triocular de los microscopios digitales tienen la
posibilidad de montar una cámara, que será un microscopio USB.
Microscopio de fluorescencia.- En este tipo, la lente que comúnmente es de

vidrio es remplazada por lentes de cuarzo, mientras que la iluminación es
efectuada por medio de lámparas de mercurio, no utiliza filtros y se observa
usando placas fotográficas.
Microscopio estéreo: también llamado

"microscopio de disección", utilice dos objetivos y
dos oculares que permiten ver un espécimen bajo
ángulos por los ojos humanos formando una visión
óptica de tercera dimensión.
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La cámara de microscopio es un aparato de video digital

instalado en los microscopios livianos y equipados con USB o
un cable AV. Las cámaras de microscopio digitales son
habitualmente buenas con microscopios trioculares.
2. Hacer un cuadro con las diferencias entre células procariotas y

eucariotas:
Diferencias
Células Procariotas Células eucariotas
Poseen un núcleo
No poseen un núcleo celular
celular delimitado por
delimitado por una membrana
una membrana
Forman parte de los
Generales Son las células más simples tejidos de organismos
multicelulares
Poseen múltiples
( - )
orgánulos
De 10 a 100
Tamaño De 0,3 a 0,5 micrómetros
micrómetros
Presencia de envoltura
Material nuclear Ausencia de envoltura nuclear
nuclear
Dividido por un sistema
Organización sencilla en sistema de membranas que
Citoplasma de membranas forman
compartimientos
Se realiza en los
Se realiza por la presencia de
diferentes
Metabolismo complejos enzimáticos asociados
compartimientos
a la membrana citoplasmática
celulares.
Presente en la célula de
Presente en la mayoría de las
Pared celular células
los hongos y los
vegetales
Núcleo Ausente Presente
Se dispone en una sola molécula Se organiza en varios
ADN circular cromosomas lineales
Uno o más nucleólos,
Nucleólos No hay nucleólos
formados por proteínas
Se reproduce por
Reproducción Se reproduce por fisión binaria
mitosis
Ribosomas y Los únicos orgánulos son las
ribosomas, no hay orgánulos
Hay ribosomas y
orgánulos membranosos
orgánulos membranosos
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Enzimas y Se encuentran en los repliegues

Se encuentran en las
mitocondrias, lisosomas
pigmentos de la membrana plasmática
y cloroplastos
¿Quiénes lo Las bacterias, las cianobacterias y
Los animales , las
plantas, los hongos, los
poseen? las arqueas
protozoarios y las algas
3. Describir en fundamento de tinción diferencial de Gram:

El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células
bacterianas (tanto gram positivas como gram negativas) a través de la
pared bacteriana. El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en
equilibrio con KI (yoduro de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales están
presente para solubilizar el yodo, y actúan de mordiente, haciendo que el
cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula
bacteriana. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en
solución acuosa con el cristal violeta..
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la
decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta.
Los organismos gram positivos no se decoloran, mientras que los gram
negativos sí lo hacen.
Para poner de manifiesto las células gram negativas se utiliza una
coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo,
como la safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las
células gram negativas son rojas, mientras que las gram positivas
permanecen violetas.
La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la técnica. Sirve para
hacer una tinción de contraste que pone de manifiesto las bacterias gram
negativas. Al término del protocolo, las gram positivas se verán azul-
violáceas y las gram negativas, se verán rosas (si no se hizo la tinción de
contraste) o rojas (si se usó, por ejemplo, safranina).
Algunos microorganismos retienen el colorante violeta, aún después de
tratarlos con un decolorante, y el color no se modifica al añadir éste; otros
pierden con facilidad el primer tinte, y toman el segundo. Los que fijan el
violeta, se califican de gram positivos, y los que pierden la primera
coloración y retienen la segunda, de gram negativos. Basándonos pues,
en la reacción gram, podemos clasificar a los microorganismos en uno de
los dos grupos. Los colorantes de p-rosanilina son los que mejores
resultados dan en la coloración gram. Los representantes más usados de
este grupo son violeta de metilo y violeta cristal o de genciana. En
realidad, violeta de metilo es el nombre atribuido al compuesto tetrametil-
p-rosanilina.
El matiz de color de la p-rosanilina se intensifica al aumentar el número
de grupos metilo en la molécula; por consiguiente, de los tres grupos, el
tono más oscuro es lahexametil-p-rosanilina (violeta cristal), y el tinte más
ligero, la tetrametil-p-rosanilina (violeta de metilo). Los nombres violeta de
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metilo 3R, 2R, R, B, 2B, 3B, etc., se refieren al número de grupos metilo
contenidos. La letra R indica matices rojos, y la letra B, tonos azules. El
violeta de cristal contiene seis grupos metilo, y se considera como el mejor
colorante primario para teñir por el método de Gram.
4. Nombrar y describir ejemplos de microorganismos indicadores

de la calidad ambiental:
Mesófilos aerobios (o cuenta total):
Esta determinación indica el grado de contaminación de una muestra y
las condiciones que han favorecido o reducido la carga microbiana. Desde
luego, no se aplica a alimentos fermentados, y puede dar escasa
información sobre el manejo del alimento cuando éste es poco favorable
para el desarrollo microbiano por su pH ó aw, por ejemplo. Este grupo es
un indicador importante en alimentos frescos, refrigerados y congelados,
en lácteos y en alimentos listos para consumir (RTE por sus siglas en
inglés: ready to eat).
Se lleva a cabo a partir de diluciones decimales de la muestra, que se
inoculan en placas vertidas de agar triptona glucosa extracto o agar
cuenta estándar. Las placas se incuban en condiciones de aerobiosis, a
35 °C durante 24 a 48 horas. Es importante aplicar las reglas para el
recuento, de la NOM-092-SSA1-1994. Bienes y Servicios. Método para la
cuenta de Bacterias Aerobias en Placa.
Cuenta de hongos y levaduras:
Los hongos y las levaduras se encuentran ampliamente distribuidos en el
ambiente, por lo que son frecuentes en la microbiota habitual de muchos
alimentos; se dispersan fácilmente por el aire y el polvo. Ciertas especies
de hongos y levaduras son útiles en la elaboración de algunos alimentos,
sin embargo también pueden ser causantes de la descomposición.
Debido a su crecimiento lento y a su baja competitividad, los hongos y
levaduras se manifiestan en los alimentos donde las condiciones no
favorecen el crecimiento bacteriano, por ejemplo: pH ácido, baja
humedad, alto contenido en sales o carbohidratos, baja temperatura de
almacenamiento, presencia de antibióticos u otros antibacterianos. Como
grupo indicador son útiles para evidenciar grado general de
contaminación en alimentos con estas características o cuando los
mesófilos aerobios no son útiles, como en alimentos fermentados.
También son indicadores del riesgo de desarrollo de hongos toxigénicos
en alimentos como frutos secos, especias, cereales y otros granos, y sus
derivados.
Se lleva a cabo a partir de diluciones decimales de la muestra, que se
inoculan en placas vertidas de papa dextrosa agar (PDA) y agar extracto
de malta
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(AEM) acidificados con ácido tartárico, para favorecer a los hongos y

levaduras e inhibir bacterias (NOM-111-SSA1-1994. Bienes y Servicios.
Método para la cuenta de mohos y levaduras en alimentos)
En algunos casos, se utilizan antibióticos para hacer más selectivo el
medio de cultivo.
Cuenta de coliformes totales:
Las bacterias del grupo coliforme se definen como: bacilos cortos,
Gramnegativos, anaerobios facultativos, no esporulados, que fermentan
la lactosa a 35 °C, en menos de 48 h, con producción de ácido y gas.
Incluye los géneros: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella y Citrobacter.
Durante mucho tiempo se consideraron evidencia de contaminación fecal,
pero se ha demostrado que muchos de ellos pueden vivir e incluso crecer
en el suelo, el agua y otros ambientes. Actualmente se consideran un
excelente indicador de la eficiencia de los procesos de sanitización y
desinfección, así como de calidad sanitaria en agua, vegetales y diversos
productos procesados.
Su determinación se basa generalmente en la capacidad de fermentar
lactosa.
Se pueden utilizar los métodos del número más probable (NMP ó MPN
por sus siglas en inglés) que es un método estadístico en tres etapas y
permite el hallazgo de cantidades muy bajas de coliformes. También se
pueden detectar por cuenta en placa utilizando agar bilis-rojo violeta
(ABRV ó RVBA por sus siglas en inglés) en el cual las colonias
fermentadoras de lactosa causan el vire del indicador; pueden detectarse
por filtración en membrana (Millipore) e incubación en medios adecuados,
por métodos rápidos como Petrifilm y reacciones cromogénicas o
fluorogénicas.
Coliformes fecales
Dentro del grupo coliforme, los de origen fecal son capaces de fermentar
la lactosa también a 44.5 °C; se consideran el indicador más adecuado de
contaminación con heces de animales y humanos, por ejemplo en
pescados y mariscos, carnes, leche, alimentos RTE, entre otros.
La determinación se hace a partir de la segunda etapa (confirmativa) del
método de NMP, cultivando en caldo lactosado con incubación a 44.5 °C.
Generalmente se combinan las determinaciones, según se requiere.
E. coli
Se considera indicador de contaminación fecal reciente, humana o animal
en productos como agua embotellada, leche y jugos, alimentos infantiles,
y alimentos procesados, en general.
Se caracteriza por ser coliforme termotolerante (fermenta lactosa a
44.5°C) que produce indol a partir de triptofano y produce β-
glucuronidasa, características que se usan para su identificación en
laboratorio, generalmente en la etapa final del NMP o de alguno de los
otros métodos, incluyendo Petrifilm.
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0
Enterococos
Los estreptococos de origen fecal o enterococos también son un indicador
de contaminación fecal, debido a su abundancia en el tracto digestivo de
animales y humanos; aunque se encuentran en cantidades menores por
un orden de magnitud, en comparación con E. coli, tienen algunas
ventajas como su mayor supervivencia. Se consideran indicadores en
alimentos procesados, como lácteos y cárnicos, en los cuales E. coli
puede no sobrevivir.
Se determinan mediante métodos sencillos generalmente con tecnologías
de sustratos específicos.
Cl. perfringens
Esta bacteria Grampositiva, esporulada, anerobia, reudtora de sulfitos
también se encuentra ampliamente distribuida en la naturaleza y es
habitante usual del tracto intestinal de muchos animales. Las esporas de
Cl. perfringens son muy resistentes a los desifectantes, siempre están
presentes en aguas negras pero no se multiplican en el sedimento por lo
que se le considera un buen indicador cuando se sospecha de
contaminación con protozoarios o virus, que generalmente no tienen
relación con el hallazgo de coliformes o enterococos.
Son buenos indicadores en trabajos de seguimiento o para relacionarlos
con contaminación fecal en peritajes; también se considera un indicador
útil en aguas tropicales, donde la supervivencia de otros como E. coli y
Enterococcus puede disminuir.
La determinación de Clostridium pefringens como indicador, se hace por
cuenta en placas vertidas de agar triptona-sulfito-cicloserina (TSC) con
yema de huevo, incubadas en anaerobiosis (Gas-Pack o similar).
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MICROSCOPÍA DE LAS CÉLULAS 5 DE MAYO DEL 2016

Microscopía de las células

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2.1. OBSERVACIÓN DE CÉLULAS ANIMALES

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2.2. OBSERVACIÓN DE CÉLULAS VEGETALES

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2.1.1. Logramos diferenciar las células animales, estas eran amorfas y en

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2.1.2. En las muestras de agua estancada observadas, tuvimos pequeños

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