Gutierrez Moreno, Meliza PDF

Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
i
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
DEDICATORIA
A Dios.
Por haberme permitido llegar hasta este punto y
N
IÓ
darme día a día la fortaleza para salir adelante
AC
y no desmayar en el largo camino de mi vida.
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
A mis padres Ausberto y Percila.
ÁT
Porque creyeron en mi y porque me sacaron adelante, dándome ejemplos
RM
dignos de superación y entrega, porque en gran parte gracias a ustedes, hoy

FO
IN
puedo ver alcanzada mi meta, ya que siempre estuvieron impulsándome en

DE
los momentos más difíciles de mi carrera, y porque el orgullo que sienten por
AS
mi, fue lo que me hizo ir hasta el final. Va por ustedes, por lo que valen,
EM
porque admiro su fortaleza y por lo que han hecho de mí.

ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
A mis hermanos Luis Alberto y Luís enrique.

DI
Por darme su apoyo siempre, por depositar en mí, la
confianza y la paciencia, gracias a ustedes.
ii
AGRADECIMIENTOS
N
IÓ
A la Dra. Icela Rodríguez Haro y el Dr. Marco
AC
Salazar castillo docentes de la Universidad
IC
UN
Nacional de Trujillo, por haber contribuido de
M
manera determinante tanto en la elaboración de
CO
esta investigación como en mi formación
Y
A
académica.
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
A Nereyda, por apoyarnos mutuamente en

nuestra formación profesional, gracias
N
IO
por compartir buenos y malos momentos,

CC
por ser confidentes, compañeras y amigas

RE
DI
iii
AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE

TRUJILLO QUE OTORGAN EL TITULO PROFESIONAL DE
BIÓLOGO – MICROBIÓLOGO
N
IÓ
AC
Dr. Orlando Velásquez Benítez
IC
UN
RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
M
CO
Dra. Vilma Julia Méndez Gil
Y
A
VICERRECTORA ACADÉMICA
IC
ÁT
RM
Dr. Pedro Lavalle Dios

FO
SECRETARIO GENERAL DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

IN
DE
Dr. Hermes Escalante Añorga

AS
EM
DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ST
SI
Dr. César Augusto Jara Campos

DE
SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

N
IO
CC
Ms. C. Pedro Arnaldo Alvarado Salinas

RE
DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE

DI
MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
iv
PRESENTACIÓN
Señores miembros del jurado:
N
IÓ
AC
En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados
IC
y Títulos de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y Parasitología de la
UN
M
Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a
CO
vuestra consideración y criterio el presente trabajo de tesis titulado:
Y
A
IC
“Efecto del extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L.
ÁT
RM
“romero” sobre la viabilidad de Streptococcus β-hemolítico in vitro”, con el cual

FO
pretendo obtener el Título Profesional de Biólogo Microbiólogo.

IN
DE
Esperando que los miembros del jurado se sirvan calificar este trabajo según su
AS
EM
criterio establecido.
ST
SI
DE
Trujillo, Marzo del 2013

N
IO
CC
RE
Br. Melissa Noemí Gutiérrez Moreno

DI
AUTOR
v
MIEMBROS DEL JURADO
Los suscritos, miembros del jurado, declaran que la presente tesis ha sido
ejecutada en concordancia con las normas de la Escuela Académico Profesional de
Microbiología y Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Dr. Marco Salazar Castillo
Y
PRESIDENTE
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
Dra. Icela Rodríguez Haro

EM
SECRETARIA
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
Ms. C. Anibal Quintana Díaz

DI
VOCAL
vi
APROBACIÓN
Los profesores que suscriben, miembros del Jurado Examinador,
declaran que el presente Informe de Tesis titulado: “Efecto del extracto
N
hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero” sobre la
IÓ
AC
viabilidad de Streptococcus β-hemolítico in vitro”, ha cumplido con los
IC
requisitos formales y fundamentales, siendo APROBADO por UNANIMIDAD.
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
Dr. Marco Salazar Castillo
RM
PRESIDENTE
FO
IN
DE
AS
EM
ST

SI
SECRETARIA
DE
N
IO
CC
RE
DI
Ms. C. Anibal Quintana Díaz

VOCAL
vii
DEL ASESOR
La que suscribe, profesora asesora de tesis titulada: “Efecto del extracto
hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero” sobre la viabilidad
N
de Streptococcus β-hemolítico in vitro”.
IÓ
AC
IC
UN
CERTIFICA:
M
CO
Y
Que ésta ha sido desarrollada, de acuerdo al reglamento establecido por la
A
IC
Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, estando en
ÁT
conformidad con su correspondiente proyecto, y que el informe ha sido redactado
RM
acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.

FO
IN
DE
Por lo tanto, autorizo a la Bachiller Melissa Noemí Gutiérrez Moreno, continuar

AS
con el trámite del reglamento correspondiente.

EM
ST
SI
Trujillo, Marzo del 2013

DE
N
IO
CC
RE
DI

ASESORA
viii
INDICE
Pág.
DEDICATORIA ii
N
IÓ
AGRADECIMIENTOS iii
AC
AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO iv
IC
UN
PRESENTACIÓN v
M
MIEMBROS DEL JURADO vi
CO
APROBACIÓN vii
Y
A
DEL ASESOR viii
IC
ÁT
ÍNDICE ix
RM
RESUMEN xi
FO
ABSTRACT xii
IN
DE
I. INTRODUCCIÓN 1
AS
EM
OBJETIVOS 8
ST
II. MATERIAL Y MÉTODOS 9

SI
2.1. MATERIAL DE ESTUDIO 9

DE
2.2.1 MÉTODO 9
N
IO
2.2.2 Preparación de la muestra de ensayo 9

CC
2.2.3 Ensayo microbiológico 10

RE
2.2.4 Análisis estadístico 12

DI
III. RESULTADOS 13
IV. DISCUSIÓN 17
V. CONCLUSIÓN 21
ix
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 22
ANEXOS 29
Anexo 1. Rosmarinus officinalis L. “romero” 30
Anexo 2. Proceso de obtención de extracto hidroalcohólico
N
de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero” 31
IÓ
AC
Anexo 3. Cultivo de Streptococcus beta-hemolítico
IC
en Agar Sangre 32
UN
Anexo 4. Coloración Gram de Streptococcus β-hemolítico 33
M
CO
Anexo 5. Crecimiento de Streptococcus β-hemolítico
Y
en Caldo Infusión cerebro- Corazón (BHI) 34
A
IC
Anexo 6. Halo de inhibición de crecimiento de Streptococcus β-hemolítico por
ÁT
Penicilina (control positivo de inhibición) 35
RM
Anexo 7. Promedio del halo de inhibición (mm) de diez cultivos de

FO
IN
Streptococcus β-hemolítico frente a un grupo control positivo:

DE
penicilina 36
AS
Anexo 8. Análisis de Varianza unidireccional (ANOVA) del efecto del extracto

EM
hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero” sobre

ST
la sensibilidad de Streptococcus β-hemolítico “in vitro” 37

SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
x
RESUMEN
Se determinó el efecto del extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus
officinalis L. “romero” sobre la viabilidad de Streptococcus β-hemolítico “in vitro”. Se
utilizaron hojas de Rosmarinus officinalis recolectados en el Caserío de Jesús María del
N
IÓ
distrito de Simbal, Departamento de La Libertad y cultivos aislados de secreciones
AC
faríngeas de los estudiantes del VII ciclo de Microbiología y Parasitología de la
IC
UN
Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo.
M
Se trabajó con cuatro concentraciones (250; 500; 750 y 1000 mg/mL) de
CO
extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis y como control de
Y
A
inhibición: penicilina. Para evaluar el efecto del extracto sobre el microorganismo se
IC
ÁT
utilizó el método de Kirby Bauer modificado, sembrando un inóculo estandarizado con
RM
el patrón de turbiedad 0,5 del Nefelómetro de McFarland en placas con Agar Mueller
FO
Hinton por la técnica de siembra en superficie.

IN
Se encontró que el promedio de los halos de inhibición de los cultivos de

DE
Streptococcus β-hemolítico obtenidos con las diferentes concentraciones ensayadas

AS
EM
varía de 22,3 a 37,3 mm. A medida que aumenta la concentración del extracto
ST
hidroalcohólico de Rosmarinus officinalis L. “romero” en el rango de 250 a 1000

SI
mg/mL, se obtiene un mayor diámetro de halo de inhibición de Streptococcus β-

DE
hemolítico.
N
IO
Palabras clave: Streptococcus β-hemolítico, Rosmarinus officinalis, Actividad

CC
antimicrobiana.
RE
DI
xi
ABSTRACT
The effect of hydroalcoholic extract of leaves of Rosmarinus officinalis L. "romero"
about the viability of Streptococcus β-hemolítico "in vitro". Were used Rosmarinus
officinalis leaves collected in the village of Jesus Maria district Simbal, Department of
N
IÓ
La Libertad and pharyngeal cultures of students of VII cycle of Microbiology and
AC
Parasitology, Faculty of Biological Sciences, National University of Trujillo.
IC
UN
We worked with four concentrations (250, 500, 750 and 1000 mg / mL) of
M
hydroalcoholic extract of leaves of Rosmarinus officinalis and as inhibition control:
CO
penicillin. To evaluate the effect of the extract on the microorganism used the modified
Y
A
Kirby Bauer method, planting a standardized inoculum pattern Nephelometer turbidity
IC
ÁT
of 0.5 McFarland on Mueller Hinton agar plates by surface plating technique.
RM
It was found that the average inhibition halos crops β-hemolytic Streptococcus
FO
obtained with the different concentrations tested varies from 22.3 to 37.3 mm. With
IN
increasing concentration of the hydroalcoholic extract of Rosmarinus officinalis L.

DE
"romero" in the range of 250 to 1000 mg / mL, yields a higher inhibition zone diameter
AS
EM
of Streptococcus β-hemolítico.
ST
Keywords: Streptococcus β-hemolítico, Rosmarinus officinalis, antimicrobial

SI
activity.
DE
N
IO
CC
RE
DI
xii
I. INTRODUCCION
Las Infecciones Respiratorias Agudas (IRA) es el conjunto de infecciones del
aparato respiratorio causados por microorganismos virales, bacterianos y otros; con un
periodo inferior a 15 días, se encuentra entre las enfermedades más comunes del ser
N
IÓ
humano, representan la principal causa de morbilidad en el mundo y la causa más
AC
frecuente de utilización de servicios de salud que cualquier otro tipo de enfermedad
IC
UN
infecciosa en todos los países. Afecta fundamentalmente a niños en edad escolar, y es
M
más prevalente en climas fríos o templados y en los periodos de invierno 1, 2.
CO
Y
A
Las IRA se clasifican en infecciones del tracto respiratorio inferior (neumonía,
IC
ÁT
bronquiolitis aguda, y bronquitis) y en infecciones de las vías aéreas superiores
RM
(resfriado, sinusitis aguda, epiglotitis, laringitis aguda, otitis media aguda,

FO
laringotraqueobronquitis, y faringitis estreptococócica y no estreptococócica). Dentro de

IN
los organismos con mayor frecuencia responsables de las IRA, cuyo hábitat es el tracto
DE
respiratorio superior están los estafilococos, estreptococos, bacilos diftéricos y cocos

AS
Gram Negativos 3,4.

EM
ST
SI
Una de las IRA más frecuentes que afectan a las vías aéreas superiores es la
DE
Faringitis, que es una inflamación y/o infección de la faringe y/o el área periamigdalar.
N
IO
Las bacterias responsables de este cuadro clínico son principalmente: Estreptococos (A,
CC
C y G), Mycobacterium pneumoniae, Staphylococcus aureus, Corynebacterium

RE
diphteriae, Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae tipo b. Los signos y

DI
síntomas de una Faringitis Aguda infecciosa y no infecciosa se confunden, por eso es
necesario diferenciar entre una causa viral y bacteriana. Si tenemos en cuenta la
cantidad de microorganismos que pueden producir Faringitis, llegamos a la conclusión
1
de que el papel del Laboratorio de Microbiología en una Faringitis Aguda es detectar la
Faringitis Estreptocócica cuyo microorganismo patógeno es del género Streptococcus.
Los miembros del género Streptococcus son cocos grampositivos de
N
IÓ
aproximadamente 0,5 a 1,0 mm de diámetro que por lo general crecen en pares o
AC
cadenas de longitud variable y son ampliamente distribuidos en la naturaleza. Los
IC
UN
Streptococcus son inmóviles y negativos para las pruebas de catalasa y oxidasa, y
M
además son aerobios facultativos, existiendo algunas especies anaerobios obligados 5,6.
CO
Y
A
Tienen variables y complejos requerimientos nutricionales. La mayor parte de
IC
ÁT
los Streptococcus requieren para su aislamiento medios sólidos enriquecidos con sangre
RM
o suero. La diferenciación de las especies que componen este género se utilizan tres
FO
patrones hemolíticos: hemólisis completa (β), hemólisis incompleta (α) y

IN
ausencia de hemólisis (γ). De considerable importancia es la hemólisis tipo beta, que

DE
exhibe Streptococcus pyogenes y muchos otros Streptococcus patógenos humanos.

AS
EM
Además se clasifican en cinco grupos antigénicos; actualmente se pueden reconocer

ST
varios serogrupos clasificados de la A hasta la H y de K a V 7.

SI
DE
El género Streptococcus son causa de las enfermedades más difundidas y de

N
IO
mayor morbilidad en los seres humanos; pueden desencadenar tres tipos de

CC
complicaciones: supurativas, no supurativas y mediadas por toxinas; este ubicuo

RE
organismo es la causa bacteriana más frecuente de Faringitis Aguda y también da lugar

DI
1,7
a una gran variedad de infecciones cutáneas y sistémicas . La puerta de ingreso
determina el cuadro clínico principal como: infecciones localizadas (faringitis aguda,
escarlatina, erisipela, celulitis) o infecciones sistémicas primarias, las cuáles son
2
propensas a desencadenar en complicaciones más serias como Fascitis Necrosante
(gangrena estreptococócica), Fiebre Reumática (FR) y Glomerulonefritis Difusa Aguda
Postestreptocócica (GNDA) 8,9.
N
IÓ
El hombre es el reservorio natural de los estreptococos betahemolíticos grupo A
AC
y es transmitido de persona a persona por vía respiratoria. La infección más frecuente
IC
UN
que produce es la Faringitis Estreptococócica, su periodo de incubación varía de 2 a 4
M
días y la mayoría de los casos se ven en niños en edad escolar (de 5 a 15 años de edad)
CO
10,11
con una frecuencia de 15 – 30% y en adultos con una frecuencia de 5 – 10% . La
Y
A
Faringitis Estreptococócica se caracteriza por un fuerte dolor de garganta, inflamación
IC
ÁT
de amígdalas, secreciones en las amígdalas, ablandamiento de los nódulos linfáticos
RM
cervicales, fiebre no muy elevada; también puede producir infecciones en el oído

FO
interno (otitis), en las glándulas mamarias (mastitis), y en las capas superficiales de la

IN
piel (impétigo). También se han observado casos frecuentes de faringitis debidos a

DE
Streptococcus del grupo B, C y G 12,13.

AS
EM
ST
El tratamiento de la faringitis producida por Streptococcus del grupo A es

SI
ampliamente conocido, siendo el antibiótico de elección la penicilina, también se

DE
14,15
recomienda el uso de la eritromicina . Estudios realizados demuestran que el
N
IO
Streptococcus grupo A sigue siendo sensible a la penicilina, aunque en pacientes con

CC
alergia a la penicilina es preferible la administración de macrólidos. No obstante, el

RE
tratamiento estándar con penicilina presenta un 30% de fracasos; por lo que, en los
DI
últimos años, se ha examinado fuertes alternativas de tratamiento, siendo una de ellas la
búsqueda de plantas con efecto antimicrobiano 16,17,18.
3
Para elegir el régimen de tratamiento de la Faringitis Estreptococócica es
necesario considerar varios aspectos como: efectividad, espectro antimicrobiano, costo
y la posible generación de tolerancias o resistencias bacterianas . Este último aspecto
debe ser altamente considerado porque se ha observado que en los últimos 15 años, la
N
IÓ
resistencia microbiana a múltiples drogas van en un franco aumento tornándose en un
AC
problema mundial de salud pública. Este aumento de resistencia es mayor en bacterias,
IC
UN
aunque actualmente ocurre también en virus, hongos y protozoarios. La resistencia
M
bacteriana se torna una amenaza en los tratamientos de infecciones comunes, debido al
CO
uso inapropiado o excesivo de antibióticos generando la aparición de cepas resistentes a
Y
A
la mayoría de antibióticos 19,20.
IC
ÁT
RM
La resistencia bacteriana es un tema importante en el estudio de los antibióticos,

FO
porque su comprobación implica el fracaso de la terapia antibiótica. Las infecciones

IN
causadas por las bacterias multirresistentes generan una amplia morbilidad y

DE
mortalidad, así mismo causan un mayor costo por mayor estancia hospitalaria y
AS
EM
complicaciones, lo que hace necesario la búsqueda de nuevas opciones o alternativas

ST
21
terapéuticas para dichas infecciones . Esta situación, así como la aparición de efectos
SI
indeseables de ciertos antibióticos, ha llevado a los científicos a investigar nuevas

DE
sustancias antimicrobianas a partir de plantas consideradas popularmente medicinales 22.

N
IO
La organización Mundial de la Salud estima que casi el 80% de todos los habitantes de
CC
la tierra, confían en alternativas tradicionales para resolver sus principales necesidades

RE
de salud 23.
DI
Las propiedades curativas de ciertas especies de plantas se atribuyen a la
presencia de una sustancia química en sus tejidos denominada: “principio activo”, que
4
son sustancias que ejercen una acción farmacológica beneficiosa o perjudicial sobre el
organismo vivo, el cual se halla equilibrado por la presencia de sustancias
complementarias, que van a potenciarse entre sí, de forma que no se acumulen en el
organismo y no tengan efectos colaterales. Un gran porcentaje de estos principios
N
IÓ
activos están presentes en extractos y en aceites esenciales que pueden obtenerse a partir
AC
de hojas, bulbos, rizomas y frutos; los cuales contienen diferentes componentes como:
IC
UN
alcaloides, esteroides, terpenoides, flavonoides, gomas, resinas y taninos, etc. que
M
pueden ser letales para las células microbianas (bacterias, levaduras y mohos) o
CO
simplemente servir como inhibidores de sus actividades metabólicas. Y que pueden
Y
A
encontrase distribuidas por toda la anatomía de la planta o en algunas partes en
IC
ÁT
particular el jugo, el látex, las secreciones, etc.24, 25.
RM
FO
La flora peruana es muy rica en especies a las que la medicina tradicional

IN
atribuye eficaces propiedades terapéuticas, las que sin embargo aún no son investigadas
DE
convenientemente, como es el caso de Rosmarinus oficinalis L. 26.

AS
EM
ST
La especie vegetal Rosmarinus oficinalis L. perteneciente a la familia

SI
Lamiaceae, y conocida popularmente como romero, es una especie común en la

DE
Península Ibérica, y en general, en toda la cuenca mediterránea. Se cría en todo tipo de

N
IO
suelos, preferiblemente los áridos, secos y algo arenosos y permeables, adaptándose

CC
muy bien en los suelos pobres. Se desarrolla preferentemente en un clima cálido y

RE
relativamente seco. En el Perú crece en Costa, Sierra y Selva hasta los 3,500 msnm,
DI
formando parte del sotobosque, en laderas de tierras bajas y en lugares secos. Puede
medir de 50 a 150 cm de altura y es perenne, frondoso y muy ramificado. Los principios
activos se encuentran en las hojas que pueden llegar a medir 3 cm de largo y 4mm de
5
ancho, son pequeñas y muy abundantes y presentan forma linear. Las flores bilabiadas
son de color azul violeta pálido, rosa o blanco con cáliz verde o algo rojizo y el fruto es
una tetraquenio de color pardo.
N
IÓ
Esta planta es muy usada en la medicina tradicional, rica en principios activos
AC
que ejercen su acción sobre numerosos órganos como: analgésico, antidiarreico,
IC
UN
antirreumática, sudorífico, cicatrizante, tónico, estimulante, colagogo, estomacal. El
M
romero es carminativo, digestivo y antiespasmódico, y tiene propiedades
CO
27
hepatoprotectoras entre otras . Es aperitiva, espasmolítica, carminativa, antiséptica,
Y
A
fungiestática, emenagoga, expectorante, estimulante el sistema nervioso (aceite
IC
ÁT
esencial). Colerética, y diurética (ácidos fenólicos y flavonoides). En uso externo, el
RM
aceite esencial es antiinflamatorio, cicatrizante y estimulante del cuero cabelludo;

FO
asimismo, es rubefaciente 28.

IN
DE
Actualmente existe un renovado interés por los productos naturales como

AS
EM
fuentes de molécula con actividad antimicrobiana, han verificado que el extracto

ST
etanólico y el aceite esencial de hojas de Rosmarinus officinalis L. tiene actividad

SI
antimicrobiana contra algunas bacterias de interés alimentario como Escherichia coli,

DE
Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium, Shigella sonnei, Listeria

N
IO
monocytogenes, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus cereus y Lactobacillus plantarum

CC
29
, también se ha evaluado la eficiencia antibacteriana de un extracto etanólico de
RE
Rosmarinus officinalis L. que contiene altas concentraciones de polifenoles

DI
antioxidantes, en dos modelos de infección en piel de ratón: superficial y subcutáneo
contra la bacteria patógena Staphylococcus aureus demostrando su acción
bacteriostática 30.
6
Estudios previos informan que el extracto de hoja de R. officinalis presenta
actividad antimicrobiana contra bacterias Gram positivas: Leuconostoc mesenteroides,
Lysteria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans y Bacillus
cereus; y también actividad antifúngica contra Penicillium roqueforti y Botrytis cinerea
N
31
IÓ
. Por otro lado, se ha demostrado el potencial de los extractos de romero sobre aislados
AC
clínicos de Pseudomonas aeruginosa provenientes de pacientes con fibrosis quística 32.
IC
Las plantas medicinales han constituido desde tiempos remotos un recurso para
UN
M
cubrir las necesidades terapéuticas. Hoy en día su estudio se ha convertido en un hecho
CO
científico universal, que trasciende no solo en beneficio de la salud sino del sistema
Y
productivo y económico de los países. Es ampliamente conocida la utilización empírica
A
IC
de las plantas como agentes de la salud en múltiples culturas del mundo transmitidas a
ÁT
RM
través de generaciones. Este saber tradicional se ha ido perfeccionando a lo largo del

FO
tiempo, tamizado por el rigor científico de ensayos químicos, farmacológicos,

IN
toxicológicos y clínicos que busca los principios activos para explicar en forma racional
DE
el uso terapéutico de una planta y que permite además la vigencia de su empleo 33.
AS
EM
ST
Por tal razón, considerando que los productos naturales constituyen una
SI
alternativa para combatir diversas enfermedades infecciosas, y dado que nuestro país
DE
posee una variada riqueza de plantas medicinales, entre ellas Rosmarinus officinalis L.
N
IO
“romero”, la presente investigación tuvo como objetivo conocer el Efecto del extracto
CC
hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero” sobre la viabilidad de

RE
Streptococcus β-hemolítico “in vitro” y así contribuir al uso de esta planta como una
DI
alternativa en el tratamiento de Faringitis estreptococócica en fitoterapia por su fácil
adquisición y bajo costo en nuestro medio.
7
OBJETIVOS
 OBJETIVO GENERAL
- Determinar el efecto de la concentración del extracto hidroalcohólico de
N
IÓ
Rosmarinus officinalis L. “romero” sobre la sensibilidad de Streptococcus β-
AC
hemolítico “in vitro”
IC
UN
M
 OBJETIVOS ESPECÍFICOS
CO
Y
A
IC
- Determinar si las concentraciones de 250, 500, 750 y 1000 mg/mL del
ÁT
extracto hidroalcohólico de Rosmarinus officinalis L. “romero”, afecta la
RM
sensibilidad de Streptococcus β-hemolítico.

FO
IN
DE
- Determinar si el diámetro del halo de inhibición está en relación directa a la
concentración del extracto hidroalcohólico de “romero”.

AS
EM
ST
- Determinar si las concentraciones del extracto hidroalcohólico de “romero”

SI
tienen mejor actividad antibacteriana que la Penicilina para Streptococcus β-

DE
hemolítico.
N
IO
CC
- Determinar mediante análisis estadísticos las diferencias significativas entre

RE
las diferentes concentraciones del extracto hidroalcohólico de “romero”.

DI
8
II. MATERIAL Y MÉTODOS
2.1. MATERIAL DE ESTUDIO
N
IÓ
Hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero” procedente del Caserío de
AC
Jesús María, distrito de Simbal, Provincia de Trujillo, Departamento de La
IC
UN
Libertad- Perú. La identificación se realizó en el Herbarium Truxillense de
M
la Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo – Perú (Anexo 1).
CO
Y
A
Diez cultivos de Streptococcus β- hemolítico aislados de secreciones
IC
ÁT
faríngeas de los estudiantes del VII Ciclo de Microbiología y Parasitología
RM
de la facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de

FO
Trujillo.
IN
DE
2.2. MÉTODOS
AS
2.2.1 Preparación de la muestra de ensayo

EM
2.2.1.1 Tratamiento y obtención del extracto

ST
Las hojas seleccionadas fueron lavadas con agua destilada y

SI
DE
secadas bajo sombra durante 2 días. Se continuó con el secado en

N
estufa a 40ºC por 24 horas y luego se pulverizó en un molino de

IO
CC
cuchillas hasta obtener un polvo fino por tamizaje.

RE
Posteriormente se hizo la obtención del extracto alcohólico al

DI
100% por el Método de Maceración 34 (Anexo 2).
A 30.0 g. de polvo fino se maceró con 300 mL de alcohol al 100%
durante una semana, luego se reflujó por dos horas; posteriormente,
se filtró y luego se concentró por pervaporación obteniéndose el

9
extracto hidroalcohólico de “romero” seco a partir del cual se
obtuvieron las concentraciones estudiadas (Anexo 2).
2.2.1.2 Preparación de las diluciones para la realización del Método de
N
IÓ
Difusión en Agar.
AC
A partir de extracto seco, se preparó las diluciones en Agua
IC
destilada al 250, 500, 750 y 1000 mg/mL luego se tapó
UN
M
herméticamente y se conservó en refrigeración (4-7ºC) hasta
CO
realizar las pruebas.
Y
A
2.2.2 Ensayo microbiológico
IC
ÁT
RM
2.2.2.1 Aislamiento del cultivo de Streptococcus β-hemolítico.

FO
Se realizó hisopados faríngeos a los estudiantes del VII Ciclo de

IN
Microbiología y Parasitología de la Facultad de Ciencias

DE
Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo. Se sembró en

AS
EM
Agar Sangre al 5% y se incubó 37ºC por 24 horas. Luego se

ST
identificaron las colonias por la β-hemólisis en Agar Sangre 35 y se

SI
36
evaluó la pureza de los cultivos mediante coloración Gram ,
DE
posteriormente se sembró en tubos de ensayo conteniendo Caldo

N
IO
Infusión Cerebro - Corazón (BHI), se incubó a 37ºC por 24 horas

CC
(Anexo 3, 4 y 5).
RE
2.2.2.2 Preparación y estandarización del inóculo de Streptococcus β-

DI
hemolítico.
Los cultivos de Streptococcus β-hemolítico se sembraron en medio
Tioglicolato y Agar Sangre y con las colonias se prepararon
10
suspensiones en 10 mL de Solución Salina Fisiológica Estéril hasta
alcanzar la densidad similar a la turbidéz del tubo Nº 0,5 del
Nefelómetro de Mac Farland (1,5 x 108 cel/mL).
N
2.2.2.3 Sensibilidad antibiótica de Streptococcus β-hemolítico.
IÓ
AC
La prueba de sensibilidad antibiótica se determinó a los 10 cultivos
IC
de Streptococcus β-hemolítico utilizando como control positivo de
UN
M
inhibición: Penicilina.
CO
La evaluación se realizó mediante el método de difusión de Kirby
Y
Bauer modificado. Se sembró el inóculo de Streptococcus β-
A
IC
hemolítico en placas con Agar Müeller Hinton Modificado por
ÁT
RM
siembra en superficie. Se secaron las placas a estufa por 10 minutos

FO
aproximadamente, posteriormente se hizo un pocillo de 6 mm de

IN
diámetro en cada placa, y se agregaron 0.2 mL de las

DE
concentraciones indicadas (250, 500, 750 y 1000 mg/mL) del

AS
extracto hidroalcohólico previamente preparado además del grupo

EM
control, luego las placas se incubaron a 37ºC por 24 horas y se

ST
SI
realizó la lectura. El ensayo se realizó por triplicado para cada

DE
cultivo.
N
IO
CC
2.2.2.4 Medición de los halos de inhibición

RE
Se realizó la medición de los halos de inhibición del crecimiento

DI
bacteriano en milímetros (mm).
11
2.3. Análisis estadístico
Los resultados obtenidos se analizaron mediante el programa SPSS 14 donde las
pruebas estadísticas usadas fueron el análisis de Varianza unidireccional
(ANOVA) para observar las diferencias significativas entre las diferentes
N
concentraciones 37 (Anexo 4).
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
12
VI. RESULTADOS
Los diámetros de los halos de inhibición de los diez cultivos de
Streptococcus β-hemolítico frente a las concentraciones estudiadas (250, 500, 750 y
N
IÓ
1000 mg/mL) del extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L.
AC
“romero”, se presentan en la tabla 1 y se observa que varían de 22,3 a 37,3 mm.
IC
UN
M
CO
En la figura 1 muestra los diámetros promedios de halos de inhibición de
crecimiento de Streptococcus β-hemolítico a diferentes concentraciones de extracto
Y
A
IC
hidroalcohólico de hojas de R. officinalis y se observa que a medida que aumenta la
ÁT
concentración del extracto hidroalcohólico de hojas de “romero”, aumenta el
RM
diámetro de los halos de inhibición de los cultivos de Streptococcus β-hemolítico.

FO
IN
DE
En la figura 2 se observa los halos de inhibición de crecimiento de

AS
Streptococcus β-hemolítico por diferentes concentraciones de extracto

EM
hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero”.

ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
13
Tabla 1: Promedio del halo de inhibición (mm) de diez cultivos de
Streptococcus β-hemolítico frente a cuatro concentraciones de
extracto hidroalcohólico de “romero” y un grupo control positivo:
penicilina.
N
IÓ
AC
IC
UN
N° Cultivos Concentraciones de "romero" (mg/mL)
M
CO
250 500 750 1000
Y
Promedio de halos de inhibición (mm)
A
1 23,00 28,67
IC 30,67 35,67
ÁT
RM
2 23,33 28,33 30,00 35,33

FO
3 23,67 29,00 30,33 35,67

IN
4 25,33 28,00 30,67 37,33

DE
5 24,00 29,67 31,00 35,67

AS
EM
6 22,67 28,33 31,00 34,67

ST
7 22,33 28,67 31,00 36,00

SI
8 23,67 27,33 30,0 35,67

DE
9 24,67 29,00 31,00 34,00

N
IO
10 24,33 29,33 31,00 35,67

CC
23,70 28,63 30,67 35,57

RE
DI
14
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
a: p< 0,05
N
Fig. 1. Diámetros promedios de halos de inhibición de crecimiento de Streptococcus β-

IO
CC
hemolítico a diferentes concentraciones de extracto hidroalcohólico de hojas de

RE
Rosmarinus officinalis L. “romero”.

DI
15
1 2
3
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
3 4
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
Fig. 2 Halo de inhibición de crecimiento de Streptococcus β-hemolítico por diferentes

DE
concentraciones de extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis

N
IO
L. “romero”.
CC
1. 250 mg/mL 2. 500 mg/mL 3. 750 mg/mL 4. 1000 mg/mL

RE
DI
16
V. DISCUSIÓN
La utilización de sustancias naturales en el tratamiento de diferentes
enfermedades, incluidas las de etiología infecciosa, constituye en la actualidad un
desafío en la medicina y se ofrece como una alternativa, especialmente en aquellas
N
IÓ
dolencias para las que no existe un remedio adecuado. Sin duda el reino vegetal es el
AC
que ofrece mayor variedad de sustancias potencialmente útiles aplicables a las
IC
UN
enfermedades humanas, en concreto a aquellas producidas por microorganismos. Es por
M
eso, que la población está cada vez más interesada en este tipo de “terapias alternativas”
CO
38
.
Y
A
IC
ÁT
Las plantas medicinales elaboran en su metabolismo una serie de sustancias
RM
FO
denominadas principios activos, que son en general metabolitos secundarios, cuya

IN
función en el vegetal no es del todo bien conocida y no son esenciales en el desarrollo

DE
de la planta. Son relativamente estables por lo que la mayor parte de ellos se puede
AS
encontrar en la planta fresca como en la planta desecada 39.

EM
ST
En relación al efecto del extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus

SI
DE
officinalis L. “romero” sobre la viabilidad de Streptococcus β-hemolítico “in vitro” (fig.

N
2), se puede observar que hay inhibición del crecimiento de Streptococcus β-hemolítico
IO
CC
en todas las concentraciones empleadas (250, 500, 750 y 1000 mg/mL) de extracto
RE
hidroalcohólico de R. officinalis, esto concuerda con lo reportado por Mangena y

DI
Muyima que demostraron que Streptococcus pyogenes fue el más afectado por los
aceites esenciales de Rosmarinus Officinalis 40.
17
Así mismo, se han demostrado que el extracto de Rosmarinus officinalis
presenta actividad antimicrobiana contra bacterias Gram positivas: Leuconostoc
mesenteroides, Lysteria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Streptococcus
mutans y Bacillus cereus; y también actividad antifúngica contra Penicillium
N
IÓ
roqueforti y Botrytis cinerea. Se han realizado estudios de la eficacia de un extracto
AC
etanólico de “romero” contra Staphylococcus aureus en dos modelos de infección en
IC
piel de ratón, como por ejemplo en infecciones producidas por heridas quirúrgicas. Los
UN
M
resultados evidenciaron la acción bacteriostática del extracto de Rosmarinus officinalis
CO
que contiene 4.6% de polifenoles activos contra la bacteria patógenas Staphylococcus
Y
aureus en la infección presente en la piel de ratón.
A
IC
ÁT
RM
En la figura 1 y 2 se puede apreciar que hay inhibición del crecimiento de

FO
Streptococcus β-hemolítico en todas las concentraciones empleadas, encontrándose que

IN
a medida que aumentan las concentraciones del extracto hidroalcohólico de hojas de R.

DE
officinalis en el rango de 250 a 1000 mg/mL aumenta el halo de inhibición de

AS
crecimiento de Streptococcus β-hemolítico, demostrándose el efecto antimicrobiano

EM
sobre la sensibilidad de dicha bacteria.

ST
SI
DE
En el Anexo 2, las diferentes concentraciones del extracto hidroalcohólico de

N
hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero”, presentaron halos de inhibición de

IO
CC
Streptococcus β-hemolítico de mayor diámetro que los obtenidos con la penicilina.

RE
Mientras que en la figura 3 se observa que a diferentes concentraciones del extracto

DI
hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero” presentaron halos de
inhibición de Streptococcus β-hemolítico de mayor diámetro que los obtenidos con
18
penicilina, lo cual indicaría que dicho extracto podría ser utilizado en el tratamiento de
infecciones por dicha bacteria.
En el anexo 3 se observa las colonias típicas de Streptococcus β-hemolítico,
N
IÓ
siendo su principal factor de virulencia la proteína M, que hace posible la multiplicación
AC
de los estreptococos en el huésped: el complejo de peptidoglucano y polisacáridos C
IC
UN
produce toxicidad celular y las hemolisinas, estreptolisinas O y S destruye la membrana
M
de los eritrocitos y otras células.
CO
Y
A
Según los resultados de este estudio demuestran que los principios activos de
IC
ÁT
Rosmarinus officinalis L. “romero” tiene actividad bactericida frente a Streptococcus β-
RM
hemolítico por la presencia de taninos los cuales son sustancias complejas que se
FO
presentan como mezcla de polifenoles difíciles de separar. Los taninos pueden ser
IN
41
tóxicos a hongos filamentosos, levaduras y bacterias . Por lo tanto, existen tres
DE
hipótesis en cuanto a su mecanismo de acción: la inhibición de enzimas de

AS
EM
microorganismos, ligándose como sustratos a esas enzimas; a través de su acción sobre

ST
la membrana celular, modificando su metabolismo, y por la complementación de los

SI
taninos con los iones metálicos, disminuyendo estos iones esenciales para el
DE
metabolismo de los microorganismos. Además los taninos precipitan proteínas

N
IO
formando una capa protectora sobre la mucosa y piel inflamada disminuyendo así el
CC
proceso inflamatorio. Además, el carnosol y ácido ursólico, serían los responsables del
RE
mencionado efecto antimicrobiano 42.

DI
En el Anexo 4 nos muestra que existe diferencia significativa entre el grupo
experimental y el grupo control siendo todas las concentraciones de “romero” a
19
excepción de 250 mg/mL más efectivas que la penicilina; y la concentración 1000
mg/mL tiene más efecto antimicrobiano contra Streptococcus β-hemolítico. Según el
análisis estadístico se encuentra que hay diferencia significativa entre las
concentraciones del extracto hidroalcohólico de Rosmarinus officinalis y el halo de
N
inhibición de crecimiento de Streptococcus β-hemolítico, lo que demuestra que el
IÓ
AC
crecimiento de Streptococcus β-hemolítico es dependiente de la concentración de
IC
extracto hidroalcohólico de hojas de R. officinalis con una certeza del 95%.
UN
M
CO
En la figura 2 se puede evidenciar el mayor halo de inhibición se observa a la
Y
concentración de 1000 mg/mL con respecto al grupo control positivo, esto se debería a
A
IC
que la concentración empleada en el extracto hidroalcohólico de “romero” es mayor que
ÁT
RM
la contenida en la penicilina, se debe a que en los antibióticos existen principios activos

FO
puros y en el extracto de “romero” están los principios activos antibacterianos con otras
IN
sustancias que pueden interferir con los principios activos disminuyendo su efecto, esto
DE
no sucede con los antibióticos que si se hallan en estado puro 43.

AS
EM
Es necesario hacer notar que el efecto antimicrobiano de dicho extracto se

ST
SI
produce a concentraciones mayores a la del antibiótico patrón, por lo que se sugiere;

DE
evaluar la toxicidad de este extracto mediante un estudio “in vivo” acerca del efecto del
N
extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero” sobre

IO
CC
Streptococcus β-hemolítico.
RE
DI
20
VI. CONCLUSIONES
- El extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero”
afecta la viabilidad de Streptococcus β-hemolítico.
N
IÓ
-
AC
El diámetro del halo de inhibición está en relación directa a la concentración
IC
del extracto hidroalcohólico de “romero”.
UN
M
CO
- Las concentraciones ensayadas de extracto hidroalcohólico de “romero”
Y
(500, 750 y 1000 mg/mL) presentaron halos de inhibición de Streptococcus
A
IC
β-hemolítico de mayor diámetro que los obtenidos con penicilina, a
ÁT
excepción de 250 mg/mL.
RM
FO
-
IN
Existe diferencia significativa entre las concentraciones del extracto

DE
hidroalcohólico de R. officinalis y el halo de inhibición de crecimiento de

AS
Streptococcus β-hemolítico
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
21
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Barberán J, Giménez M, Aguilar L y Prieto J. Evidencia científica y concepción
global del tratamiento empírico de la infección de vías respiratorias bajas en la
N
comunidad. Rev Esp Quimioterap 2004; 17 (4): 317-324.
IÓ
AC
IC
2. Carmona Hernández JC. Infección Respiratoria Aguda en la relación con la
UN
contaminación atmosférica y otros factores ambientales. Arch Med Manizales 2009;
M
CO
9 (1):69-79.
Y
A
IC
3. Díez O, Batista N, Bordes A, Lecuona M y Lara M. Diagnóstico microbiológico de
ÁT
las infecciones del tracto respiratorio superior. Enferm Infecc Microbiol Clin 2007;
RM
25 (6): 387-393.
FO
IN
DE
4. Madigan M, Martinko J y Parker J. Brock. Biología de los microorganismos. 10ma

AS
ed. Madrid: Prentice Hall; 2003.

EM
ST
5. Brooks G, Butel J, Morse S. Microbiología Médica de Jawetz, Melnick y Adelberg.

SI
17º ed. México: Manual Moderno; 2002.

DE
N
IO
6. Murray P, Kobayashi G, Pfaller M, Rosental K. Microbiología Médica. 2º ed.

CC
RE
Madrid: HarcoutBrace; 1997.

DI
7. Chávez C, Requelme L, Natividad J, Luján V, Otiniano G, Benites C et al.
Frecuencia y susceptibilidad antimicrobiana de Streptococcus beta-hemolítico del
22
grupo B aislados de pacientes con faringitis aguda de dos hospitales de la ciudad de
Chepén, Perú. Rev Med Vallejiana 2008: 5 (2).
8. Koneman E, Allen S, Dowell V, Janda W, Sommers H, Winn C. Diagnóstico
Microbiológico. 3ª ed. Buenos Aires: Médica Panamericana; 2004.
N
IÓ
AC
9. Mims C, Playfair J, Roitt J, Wakelin D, Williams R. Microbiología Médica.
IC
Madrid: Moshy/Doyma Libros. 1995.
UN
M
CO
10. Cofré F, RodríguezJ. Faringoamigdalitis Aguda. Rev. Ped. Elec. [en línea] 2005; 2
Y
(3): 24-28.
A
IC
ÁT
RM
11. Joklik, W, Willer, H, Amos D. Microbiología. 18ª ed. Buenos Aires: Médica
FO
Panamericana S.A; 1987.

IN
DE
12. Vandepitte J, Engbaek K, Piot P, Heuck C. Métodos básicos de laboratorio en

AS
bacteriología clínica. Organización Mundial de la Salud. Ginebra; 1993.

EM
ST
SI
13. Cáceres M, Rivera T, Paniagua M. Estudio Microbiológico y Clínico de la

DE
faringitis en León. Nicaragua:Rev. UNAN-León. 1986;12 (3): 48-51.

N
IO
CC
14. Córdova L, Blanco E, Picciuto A. Infecciones Respiratorias adquiridas en la

RE
comunidad. Rev. Vital academia Biomédica. 2000; 8(2): 34-36.

DI
15. Egmond K, Grimwood K, Carlin J, Chondros P, Hogg G, Barnet P. Streptococal
Pharyngitis in a Pediatric emergencydepartment. Australia: Medical Journal.1996;
165(8): 420- 423.
23
16. Limia A, Jiménez M, Delgado T. Caracterización fenotípica de la resistencia a
eritromicina de cepas del género Streptococcus aislado de muestras clínicas. Rev.
Infectología. 2000; 26 (9): 82-85.
N
IÓ
17. Feder H, Gerber M, Randolph M, Stelmach P, Kaplan E. Once-daily therapy for
AC
Streptococcal pharyngitis with amoxicillin. Pedriatrics1999; 103(1): 47-51.
IC
UN
M
18. Virksvee P. Antibiotics and the development of resistant microorganisms. Can
CO
homeopathy be an alternative? Homeopathy. London 2003; 92 (2): 99-107.
Y
A
IC
19. Goldmann D y Hushins W. Control of Nosocomial antimicrobial-resistant bacteria:
ÁT
RM
A Strategic priority for hospital worldwide. Clin Infect Dis. 1997; 24 (1): 139-145.
FO
IN
20. León Jaramillo E. Resistencia bacteriana a los antibióticos en la Unidad de Cuidados

DE
intensivos, Hospital de caldas, 1992-1994. Rev Colom Med1996; 27(2): 66-68.

AS
EM
21. Heleno B. Conferencia magistral Investigación en plantas medicinales: Desafíos y

ST
SI
Oportunidades. Segundo Simposium Internacional de Plantas Medicinales y

DE
Fitoterapia Americano. Lima-Perú 2004; 9-12.

N
IO
CC
22. Zampini I, Cudmani N, Isla M. Actividad antimicrobiana de plantas medicinales

RE
argentinas sobre bacterias antibiótico-resistentes. Facultad de Bioquímica, Química

DI
y Farmacia. Universidad Nacional de Tucumán. Argentina. Rev Argentina 2007; 41.
24
23. Álvarez M, Isaza G, Echevarry H. Efecto antibacteriano “in vitro” de Austroeupato
riuminulaefolium H.B.K. “salvia amarga” y Ludwigia polygonoides H.B.K. “Clavo
de laguna”. Facultad de Ciencias para la salud. Universidad de Caldas. Colombia.
RevBiosalud 2005; 14: 46-55.
N
IÓ
24. Madaleno I. Etno-farmacología en Iberoamérica, una alternativa a la globalización
AC
IC
de las prácticas de cura. Cuadernos geográficos. Universidad de Granada, España
UN
2007; 61-95.
M
CO
25. Muñoz M. Efecto del extracto etanólico de hojas de Passiflora foetida “Granadilla
Y
A
IC
de culebra” sobre el crecimiento in vitro de Staphylococcu saureus, Salmonella
ÁT
tiphyy Pseudomonas aeruginosa. (Tesis Maestral). Universidad Nacional de
RM
Trujillo; 2010.
FO
26. López M. El romero: Planta aromática con efectos antioxidantes. Ámbito

IN
DE
farmacéutico fitoterapia2008; 27 (7).

AS
EM
27. Estrada Orozco S. Determinación de la actividad antibacteriana in vitro de extractos

ST
de romero (Rosmarinus officinalis) y tomillo (Thymus vulgaris). Escuela Superior

SI
Politécnica de Chimborazo. Riobamba- Ecuador. 2010.

DE
N
IO
28. Muñoz C. Plantas medicinales españolas Rosmarinus officinalis L. (Lamiaceae)

CC
“Romero”. Departamento de Botánica, Facultad de Farmacia, Universidad de

RE
DI
Salamanca, España 2002;21: 105-118.
29. Castaño H, Ciro G, Zapata J, Jiménez S. Actividad bactericida del extracto etanólico
y del aceite esencial de hojas de Rosmarinus officinalis L. sobre algunas bacterias de
25
interés alimentario. Universidad de Antioquia Medellín, Colombia 2010; 17 (2):
149-154.
30. Barni M, Fontanals A, Moreno S. Estudio de la eficacia antibiótica de un extracto
N
IÓ
etanólico de Rosmarinus officinalis L. contra Staphylococcus aureus en dos modelos
AC
de infección en piel de ratón. Boletín Latinoamericano y del Caribe de Plantas
IC
Medicinales y Aromáticas. 2009; 8 (3): 219-233.
UN
M
CO
31. .Klancnik A, Guzej B, Kolar M, Abramovic H y Moz I. In vitro Antimicrobial and
Y
Antioxidant Activity of Commercial Rosemary Extract Formulations. J Food Protec.
A
2009; 72 (8): 1744–1752.
IC
ÁT
RM
32. Mengoni E, Castañeda N, Centron D, Moreno S, Pivetta O, Cafferata E. et al. Uso

FO
potencial de extractos de romero sobre aislados clínicos de P. aeruginosa

IN
provenientes de pacientes con fibrosis quística. Boletín Latinoamericano y del

DE
Caribe de Plantas Medicinales y Aromáticas. 2007; 6 (6): 354-355.

AS
EM
33. Muñoz O, Montes M y Wilkomirsky T. Plantas medicinales de uso en Chile.

ST
SI
Química y Farmacología. Editorial Universitaria S.A. Chile 2004; 15-16.

DE
N
34. Lock O. Investigación Fitoquímica – métodos en el estudio de productos naturales.

IO
CC
3ª ed. Lima: Editorial Pontificia; Universidad Católica Del Perú. 1994.

RE
DI
35. Sacsaquispe C y Velásquez J. Manual de procedimientos para la prueba de
sensibilidad antimicrobiana por el método de disco difusión. Instituto Nacional de
Salud. Ministerio de Salud del Perú; 2002.
26
36. Mac Faddin. Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia
clínica. 3ª ed. Madrid: Editorial Médica Panamericana S.A.; 2003.
N
IÓ
37. Gómez M. Introducción a la metodología de la investigación científica. 1ª ed.
AC
Córdoba: Editorial Brujas; 2006.
IC
UN
M
38. Domingo D y López-Brea M. Plantas con acción antimicrobiana. Rev Esp
CO
Quimioterap. 2003; 16(4): 385-393.
Y
A
IC
39. Villar Del Fresno A. Farmacognesia general. España: Editorial Síntesis; 1999.
ÁT
RM
FO
40. Mangena T y Noyuma N. Comparative evaluation of the antimicrobial activities of

IN
essential oils of Artemisia afra, Pteronia incana and Rosmarinus officinalis on

DE
selected bacteriaand yeast strains. Letters in Applied Microbiology. 1999; 28: 291-
AS
296.
EM
ST
SI
41. Murphy M. Plant products as Antimicrobial Agents Clinical. Microbiology

DE
Reviews. 1999; 12(4): 564-582.

N
IO
CC
42. Bonner J y Galston A. Principios de Fisiología vegetal.5º ed. Madrid: Editorial

RE
Aguilar; 1993: 304-305.

DI
43. Guevara C y Guzmán B. estudio fitoquímico del Extracto Metanólico de
Cheilanthes megriophyla “Cuticuti” y su efecto antibacteriano in vitro sobre
Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermidis.
27
Tesis para optar el Grado de Bachiller en Farmacia y Bioquímica. Universidad
Nacional de Trujillo.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
28
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
ANEXOS ÁT
IC
A
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
29
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
Anexo 1. Rosmarinus officinalis L. “romero”.

IO
CC
RE
DI
30
1 2
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
4
3 ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
Anexo 2. Proceso de obtención de extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus

SI
DE
officinalis L. “romero”.
N
1. Maceración de polvo seco de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero” en

IO
CC
alcohol al 100%.
RE
2. Reflujo por dos horas para la obtención del extracto hidroalcohólico de

DI
“romero”.
3. Secado del extracto hidroalcohólico de “romero”.
4. Extracto seco.
31
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
Anexo 3. Cultivo de Streptococcus beta-hemolítico en Agar Sangre.

SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
32
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
Anexo 4. Coloración Gram de Streptococcus β-hemolítico.

N
IO
CC
RE
DI
33
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
Anexo 5. Crecimiento de Streptococcus β-hemolítico en Caldo Infusión cerebro-

IO
CC
Corazón (BHI).
RE
DI
34
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
Anexo 6. Halo de inhibición de crecimiento de Streptococcus β-hemolítico por

DE
Penicilina (control positivo de inhibición).

N
IO
CC
RE
DI
35
Anexo 7. Promedio del halo de inhibición (mm) de diez cultivos de Streptococcus β-
hemolítico frente a un grupo control positivo: penicilina.
N
IÓ
N° Cultivos de
Streptococcus β-hemolítico
AC
Penicilina
IC
1 27
UN
2 29
M
CO
3 28
Y
4 29
A
IC
5 ÁT 30
6 29
RM
7 27
FO
8 28
IN
9 27
DE
10 27
AS
EM
28,1
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
36
Anexo 8. Análisis de Varianza unidireccional (ANOVA) del efecto del extracto
hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero” sobre la sensibilidad de
Streptococcus β-hemolítico “in vitro”.
N
IÓ
Subconjuntos homogéneos
AC
IC
PROMEDIOS
UN
TRATAMIEN N Subconjunto para alfa = 0.05
TO
M
1 2 3 4
CO
250,00 10 23,7000
10,00 10 28,1000
Y
A
HSD de 500,00 10 28,6300
IC
Tukeya 750,00 10 ÁT 30,6700
1000,00 10 35,5800
RM
Sig. 1,000 ,612 1,000 1,000

250,00 10 23,7000
FO
10,00 10 28,1000
IN
a
Tukey B 500,00 10 28,6300
DE
750,00 10 30,6700
1000,00 10 35,5800
AS
250,00 10 23,7000
EM
10,00 10 28,1000
500,00 10 28,6300
ST
Duncana
750,00 10 30,6700
SI
1000,00 10 35,5800
DE
Sig. 1,000 ,160 1,000 1,000

N
Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.

IO
a. Usa el tamaño muestral de la media armónica = 10,000.

CC
RE
DI
37

Gutierrez Moreno, Meliza PDF

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Gutierrez Moreno, Meliza PDF

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

dignos de superación y entrega, porque en gran parte gracias a ustedes, hoy

puedo ver alcanzada mi meta, ya que siempre estuvieron impulsándome en

porque admiro su fortaleza y por lo que han hecho de mí.

A mis hermanos Luis Alberto y Luís enrique.

Por darme su apoyo siempre, por depositar en mí, la

confianza y la paciencia, gracias a ustedes.

A Nereyda, por apoyarnos mutuamente en

por compartir buenos y malos momentos,

por ser confidentes, compañeras y amigas

AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE

Dr. Pedro Lavalle Dios

SECRETARIO GENERAL DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

Dr. Hermes Escalante Añorga

DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Dr. César Augusto Jara Campos

SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Ms. C. Pedro Arnaldo Alvarado Salinas

DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE

Señores miembros del jurado:

“romero” sobre la viabilidad de Streptococcus β-hemolítico in vitro”, con el cual

pretendo obtener el Título Profesional de Biólogo Microbiólogo.

Trujillo, Marzo del 2013

Br. Melissa Noemí Gutiérrez Moreno

MIEMBROS DEL JURADO

ejecutada en concordancia con las normas de la Escuela Académico Profesional de

Microbiología y Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo.

Dra. Icela Rodríguez Haro

Ms. C. Anibal Quintana Díaz

Los profesores que suscriben, miembros del Jurado Examinador,

declaran que el presente Informe de Tesis titulado: “Efecto del extracto

Dra. Icela Rodríguez Haro

Ms. C. Anibal Quintana Díaz

La que suscribe, profesora asesora de tesis titulada: “Efecto del extracto

hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero” sobre la viabilidad

acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.

Por lo tanto, autorizo a la Bachiller Melissa Noemí Gutiérrez Moreno, continuar

con el trámite del reglamento correspondiente.

Trujillo, Marzo del 2013

Dra. Icela Rodríguez Haro

II. MATERIAL Y MÉTODOS 9

2.1. MATERIAL DE ESTUDIO 9

2.2.2 Preparación de la muestra de ensayo 9

2.2.3 Ensayo microbiológico 10

2.2.4 Análisis estadístico 12

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 22

Anexo 1. Rosmarinus officinalis L. “romero” 30

Anexo 2. Proceso de obtención de extracto hidroalcohólico

Anexo 7. Promedio del halo de inhibición (mm) de diez cultivos de

Streptococcus β-hemolítico frente a un grupo control positivo:

Anexo 8. Análisis de Varianza unidireccional (ANOVA) del efecto del extracto

hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero” sobre

la sensibilidad de Streptococcus β-hemolítico “in vitro” 37

Se determinó el efecto del extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus

officinalis L. “romero” sobre la viabilidad de Streptococcus β-hemolítico “in vitro”. Se

utilizaron hojas de Rosmarinus officinalis recolectados en el Caserío de Jesús María del

Hinton por la técnica de siembra en superficie.

Se encontró que el promedio de los halos de inhibición de los cultivos de

Streptococcus β-hemolítico obtenidos con las diferentes concentraciones ensayadas

hidroalcohólico de Rosmarinus officinalis L. “romero” en el rango de 250 a 1000

mg/mL, se obtiene un mayor diámetro de halo de inhibición de Streptococcus β-

Palabras clave: Streptococcus β-hemolítico, Rosmarinus officinalis, Actividad

The effect of hydroalcoholic extract of leaves of Rosmarinus officinalis L. "romero"