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UNIVERSIDAD PRIVADA DE HUANCAYO

FRANKLIN ROOSEVELT
RESOLUCIÓN N°517-2010-CONAFU

ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS


FARMACÉUTICAS Y BIOQUÍMICA

INFORME FINAL

PRÁCTICAS DE PRIMER NIVEL “C” EN


EL LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA

LUGAR DE PRÁCTICAS : Laboratorio de la UPH – “Franklin Roosevelt”

ASESORA : Q.F. QUISPE QUISPE, Esther Nancy

ESTUDIANTE : CABANA MEZA, Marco Antonio

FECHA DE INICIO : 18 de Febrero del 2016.

FECHA DE TÉRMINO : 17 de Marzo del 2016

CICLO : VIII – Supérate

HUANCAYO- PERÚ
2016
DEDICATORIA

Dedico en primer lugar a Dios quien fue Nuestro


Padre y creador de todas las cosas, el que me ha
dado fortaleza para continuar con mi Carrera
Profesional.

De igual forma, a mi Padre CABANA MELÉNDEZ,


Víctor y a Mí Madre que en Paz descanse MEZA
PUSARI, Lucía; quienes les debo toda mi vida les
agradezco el cariño, el apoyo y su completa
comprensión.

A mí apreciada Asesora Q.F. QUISPE QUISPE,


Esther Nancy, gracias por su tiempo, por su apoyo
así como por la sabiduría que me transmitió en el
desarrollo de la práctica desarrollada.
AGRADECIMIENTO

Le doy gracias a Dios por esta oportunidad que me brinda y por


guiar mis pasos día a día.

A la UNIVERSIDAD FRANKLIN ROOSEVELT por


encaminarme y darme la oportunidad de estudiar y ser un
Profesional de Futuro.

A mi Asesora Q.F. QUISPE QUISPE, Esther Nancy por su


esfuerzo y dedicación, quien con sus conocimientos, su
experiencia, su paciencia y su motivación ha logrado en mí que
pueda terminar el informe de prácticas.

Como no agradecer también a mis Padres quienes son parte de


mi motivación y superación.

A mi Pareja ZARATE ACUÑA, Magaly Evelyn por impulsarme


y apoyarme a seguir con la Carrera Profesional que escogí.

A mis amigas agradecerlas por su amistad, consejos, apoyo,


ánimo y compañía en los momentos más difíciles de mi vida.
INTRODUCCIÓN

Es una disciplina que tiene una sola meta que es entender cómo las sustancias
químicas afectan adversamente a los organismos vivientes. Debido a la
multiplicidad de las sustancias y nuestra limitada comprensión sobre cómo
funciona el organismo humano, a menudo surgen preguntas tal como si algún
efecto adverso ha realmente ocurrido, aun cuando se haya detectado algún
cambio biológico.

Las prácticas de primer nivel C en Toxicología nos ayuda a desarrollar


cualidades, capacidades y habilidades necesarias para el desempeño eficaz y
eficiente en laboratorios de toxicología, ya que en esta fase no sólo se
profundizan los conocimientos teórico-prácticos, sino que lo ponemos en práctica
con los diferentes procedimientos analíticos que nos ayudan a identificar las
diferentes sustancias toxicas que se pueden encontrar en el organismo humano.

Durante el desarrollo de las prácticas de toxicología en el Laboratorio de la


Universidad Privada de Huancayo Franklin Roosevelt pudimos desarrollar los
procedimientos para el análisis toxicológicos para la identificación de tóxicos en
diferentes muestras mediante la técnica de cromatografía de capa fina donde
nos ayuda a reconocer de forma cualitativa al toxico presentando un color
específico para cada toxico, así como también pudimos determinar el dosaje
etílico de forma cualitativa mediante el Método de Conway y el uso del reactivo
de la mezcla sulfocrómica.
OBJETIVOS

 Describir los diferentes tipos de muestra que se utiliza en el laboratorio


de toxicología para el reconocimiento del toxico.
 Realizar la identificación de sustancia toxicas en muestras tomadas a
personas vivas y occisos mediante la técnica de cromatografía de capa
fina.
 Conocer los sistemas de solventes para la identificación de sustancias
toxicas en diferentes muestras biológicas mediante la cromatografía
de capa fina.
 Cuantificar el alcohol presentes en las muestras de sangre.
INDICE
Pág
CAPÍTULO I 1
1.1 TOXICOLOGÍA 2
DEFINICION 2
1.1.1 Tóxico 2
1.1.2 Xenobiótico 2
1.2 Clasificación de los tóxicos 3
1.2.1 En función a su naturaleza 3
1.2.2 Según los usos y aplicaciones del toxico 3
1.2.3 En función de la vía de entrada 3
1.3 Toxicidad 4
A. Fases de intoxicación 4
B. Evaluación de la toxicidad 5
1.3.1 Intoxicación Aguda 5
1.3.2 Intoxicación Crónica 5
1.4 Mecanismos de acción de los tóxicos 6
1.5 Toxicocinetica 7
1.5.1 Vía respiratoria 7
1.5.2 Vía cutánea 8
1.5.3 Vía Digestiva 8
1.5.4 Biotransformación 8
1.5.5 Vías de eliminación 9
1.6 Investigaciones toxicológicas 9
1.7 Clasificación de las intoxicaciones 9
1.7.1 Intoxicaciones accidentales 10
1.7.2 Intoxicaciones por medicamentos 10
1.7.3 Intoxicaciones profesionales 11
1.7.4 Intoxicaciones domésticas 11
1.7.5 Intoxicaciones alimentarias 11
1.7.6 Intoxicaciones ambientales 12
1.7.7 Intoxicaciones por plantas 12
1.7.8 Picaduras y mordeduras de animales 12
1.7.9 Intoxicaciones voluntarias 12
1.7.10 Intoxicaciones sociales 12
1.8 Doping 13
1.8.1 Intoxicaciones suicidas 13
1.8.2 Intoxicaciones intencionadas 13
1.9 Tipos principales de las investigaciones toxicológicas: 13
1.10 Razones por las que se realiza el examen 14
1.10 Medidas de bioseguridad para los servicios forenses 14
1.12 Base legal 15
1.13 Medidas preventivas para el trabajo 15
CAPÍTULO II 20
2.1 MUESTRA PARA EL ANÁLISIS TOXICOLÓGICO QUE CONOCE 21
2.1.1 Selección adecuada y cantidad adecuada 21
2.1.2 Cantidad de muestras de humanos vivos o muertos 21
A. Contenido gástrico 21
B. Sangre 22
C. En individuos vivos: 22
D. En cadáver 22
E. Orina 22
F. Uñas y pelos 23
2.1.3 Tipo y Cantidad requerida 24
A. Saliva 24
B. Meconio 24
C. Humor vítreo 25
D. Vísceras 25
E. Tejido adiposo 26
2.1.4 Cadena de frio 26
2.1.5 Normas para la recogida, preparación y remisión 27
CAPÍTULO III 29
3.1 PROCEDIMIENTOS Y NORMAS DE LA CADENA DE CUSTODIA 30
3.2 La prueba y la cadena de custodia 30
a) Dónde se inicia y dónde concluye 30
b) La importancia de la cadena de custodia en el sistema acusatorio 31
c) Discusión del manejo adecuado de la cadena de custodia 31
d) Inobservancia de reglas de conservación de la cadena custodia y su
consecuencia 32
3.3 Procedimiento de cadena de custodia 33
A. Conocimiento y corroboración de hechos ilícitos 33
B. Preservar el lugar de los hecho 33
C. Reconocimiento, análisis y determinación del lugar de los hechos 34
D. Determinación del lugar de los hechos 34
E. Acopio, empaquetado y rotulado de evidencias física 34
F. Remisión de evidencias físicas al almacén transitorio 34
G. Remisión de las evidencias físicas al laboratorio pertinente o al almacén de
evidencias 35
H. Ingreso y análisis de las evidencias físicas en el laboratorio facultado 35
I. Admisión y protección de las evidencias físicas en el almacén respectivo 35
J. Manipulación de evidencias físicas del origen en asistencia judicial extranjera
35
K. Manipulación de evidencias físicas procedente de investigaciones encubiertas
36
L. Manipulación de evidencias físicas provenientes de video vigilancia 36
M. Manipulación de evidencias físicas provenientes de establecimientos
sanitarios 36
N. Orden judicial para el traslado de evidencias físicas para las diligencias
judiciales 36
O. Destino final de las evidencias físicas 37
P. Procedimiento y registro de cadena de custodia 37
Q. Algunos vicios en la cadena de custodia 37
CAPÍTULO IV 39
4.1 CONOCE LOS MÉTODOS DE EXTRACCIÓN 40
4.1.1 Método de extracción de tóxicos gaseosos 40
a) Microdilución o microdifusión 40
b) Cromatografía de gases 41
4.1.2 Método de extracción de tóxicos volátiles 41
4.1.3 Extracción de tóxicos minerales o inorgánicos: 42
a. Métodos de extracción: 42
4.1.4 Extracción de tóxicos orgánicos 42
a) Extracción con Solvente 43
b) Extracción liquido-liquido (L-L) 43
c) Extracción sólido-líquido 44
d) Extracción en fase sólida 44
e) Extracción (L-L) en medio ácida y alcalina 45
f) Extracción de las drogas ácidas 46
g) Extracción de drogas básicas 46
h) Extracción en fase sólida (SPE) 47
I) Elección del disolvente 47
j) Elección de un método de extracción: 47
j.1 Maceración 48
j.2 Filtración 48
j.3 Medios filtrantes 48
j.4 Soxhlet 49
CAPÍTULO V 50
5.1 TECNICAS INSTRUMENTALES PARA LA IDENTIFICACIÓN DE
SUSTANCIAS TÒXICAS 51
5.1.1 Espectrofotométricas 51
A. Espectrofotometría Ultravioleta-Visible (UV -V): 51
B. Espectrofluorometria 52
C. La espectrometría de infrarrojos 53
D. Espectrometría de absorción atómica: 54
E. La espectrometría de masas 54
5.1.2 Cromatografía 55
A. Cromatografía en Columna (CC) 56
B. Cromatografía en Papel (CP) 57
C. Cromatografía en Capa Fina (CCF) 58
D. Cromatografía de Gases (GLC): 66
D.1 Columnas de relleno 70
D.2 Columnas capilares 70
E Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) 70
5.1.3 Inmunoquìmicas 73
A. Radio inmunoensayo (RIA) 73
B. Radioinmunoensayo (RIA) 75
C. Técnicas de ensayo inmunológico por multiplicación Enzimática (EMIT) 76
D. Inhibición de la hemoaglutinación (IH) 77
5.1.4 Identificación de drogas 81
A. Marihuana 82
B. Cocaína 85
C. Alcohol etílico 89
CONCLUSIONES 92
RECOMENDACIONES 93
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 94
ANEXOS 95
GLOSARIO DE TÉRMINOS 110
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“FRANKLIN ROOSEVELT”
RESOLUCIÓN N°571-2010-CONAFU
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CAPÍTULO I
MARCO TÉORICO

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1.1 TOXICOLOGÍA

DEFINICION

Ciencia que estudia las sustancias químicas y los agentes físicos en cuanto
son capaces de producir alteraciones patológicas a los seres vivos, a la par
que estudia los mecanismos de producción de tales alteraciones y los medios
para contrarrestarlas, así como los procedimientos para detectar, identificar
y determinar tales agentes y valorar su grado de toxicidad.

1.1.1. Tóxico

Sustancia que puede producir algún efecto nocivo sobre un ser vivo,
alterando sus equilibrios vitales. Aunque también las sustancias que son
constituyentes de nuestro organismo pueden ser tóxicas a
concentraciones superiores a las fisiológicas, solemos referirnos a los
tóxicos como xenobióticos o compuestos extraños que proceden del
exterior. Cualquier sustancia, ya sea endógena o exógena (xenobiótico)
puede actuar como tóxico. “Toda sustancia es tóxica, no hay nada que
no sea tóxico. Sólo la dosis diferencia un tóxico de un medicamento".

1.1.2. Xenobiótico

En sentido estricto, cualquier sustancia exógena que interactúa con un


organismo y que no es uno de sus componentes naturales.

1.1.3. Exposición

Situación en la cual una sustancia puede incidir, por cualquier vía, sobre
una población, organismo, órgano, tejido o célula diana. Concentración,
cantidad o intensidad de un determinado agente físico, químico o
biológico, que incide sobre una población, organismo, órgano o célula
diana; usualmente se expresa en términos cuantitativos de
concentración, duración y frecuencia (para agentes químicos y
microbiológicos) o de intensidad (para agentes físicos.

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1.2 Clasificación de los tóxicos

La clasificación de los tóxicos de forma precisa no es tarea fácil y se puede


realizar siguiendo varios caminos: en función de sus efectos, de su
naturaleza, de los usos del toxico, de su estructura química, de su grado de
toxicidad, etc. Vamos a señalar algunas clasificaciones a efectos prácticos.

1.2.1 En función a su naturaleza

Se puede clasificar como tóxicos químicos y físicos. Los tóxicos pueden


ser de origen animal, mineral, vegetal y sintético. Casi siempre se tiende
a limitar el concepto de tóxicos al efecto de sustancias químicas sin tener
en cuenta los efectos tóxicos de elementos físicos, tales como los Rayos
X, ultravioleta, el efecto nocivo del ruido etc. Nosotros también nos
vamos a limitar a las sustancias químicas porque creemos que
profesionalmente no nos corresponde entrar en la Toxicología física.

1.2.2 Según los usos y aplicaciones del toxico

 Medicamentos: medicamentos propiamente dichos, desinfectantes,


etc.
 Productos domésticos: detergentes, disolventes, pulimentos, etc.
 Productos industriales: gases, sustancias volátiles, metales, aniones.
 Productos agrícolas: plaguicidas. Pesticidas, insecticidas, fertilizantes.
 Rodenticidas, herbicidas.
 Productos alimentarios.

1.2.3 En función de la vía de entrada

Los efectos sistémicos de los tóxicos requieren que estos se absorban


y distribuyan por el organismo hasta los lugares donde ejercerán su
acción. Para que esta tenga lugar habrá de pasar por varias fases, así,
como cualquier otra sustancia química medicamentosa, deberá
absorberse, distribuirse, fijarse y eliminarse.

Las principales vías de absorción del toxico pueden ser:

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 Por ingestión: a través del tracto gastrointestinal. En la mayoría


de las intoxicaciones agudas es la principal vía de absorción.
 Por inhalación: a través de la vía respiratoria. Esta vía es la
principal en las intoxicaciones por gases.
 Por vía tópica: a través de la piel. Esta vía, junto con la
inhalatoria, son las que con más frecuencias se implican en
intoxicaciones industriales, mientras que las intoxicaciones
accidentales y suicidas suceden con mayor frecuencia por la vía
oral.
 Por la vía ocular, no son frecuentes. Constituyen un porcentaje
menor de intoxicaciones que el resto de las vías de absorción.
 Por vía parenteral. Es la más peligrosa, dada su rapidez de
acción.
 Vía rectal. Es muy infrecuente y generalmente se debe a errores
de medicación, intra y extrahospitalaria. En ocasiones, en el
tráfico de drogas.
 Vía vaginal. Es más frecuente aunque la recta y también puede
darse en el tráfico de drogas.

1.3 Toxicidad

Se define como toxicidad a la capacidad potencial de una substancia de


producir un efecto nocivo sobre un organismo vivo. Así existen substancias
de diferente toxicidad.

A. Fases de intoxicación

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B. Evaluación de la toxicidad
Dosis letal (DL):
Dosis precisa para producir la muerte tras una sola absorción,
es decir, originar una intoxicación aguda letal. Se calcula por
experimentación con animales.
DL mínima: que mata a un solo individuo
DL- 50: media letal para el 50%
DL- 100: que mata a todos los individuos
Otros parámetros de evaluación:
Coeficiente de acción tóxica aguda
Coeficiente de acción tóxica crónica
Potencial de toxicidad (pT).

1.3.1 Intoxicación Aguda

Es aquella secundaria a una exposición aguda, vale decir a una


exposición única o a exposiciones repetidas frente a un tóxico, ocurridas
en un lapso no superior a 24 horas; este tipo de intoxicación se
caracteriza generalmente por una gran riqueza de síntomas y signos,
mucha de las veces alarmantes y que pueden poner en peligro la vida
del afectado. El comienzo de la sintomatología aparece habitualmente
durante o a poco tiempo de haber finalizado la exposición, por lo cual no
es difícil establecer una relación causa efecto entre la exposición a la
sustancia y el cuadro clínico.

1.3.2 Intoxicación Crónica

Es aquella que resulta de la exposición repetida a lo largo del tiempo,


generalmente a bajas dosis de una sustancia determinada;
generalmente se expresa como un cuadro clínico insidioso, con
sintomatología inespecífica como: Cefaleas, sensación de debilidad,
mareos, etc. síntomas que pueden ser mal interpretados si no se cuenta
con el antecedente de exposición y por lo general se hace difícil
establecer la relación causa efecto.

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Las sustancias tóxicas pueden ser clasificadas desde distintos puntos de


vista:

 Según su estado físico: sólidos, líquidos y gaseosos.


 Según su composición química: Fosforados, clorados,
aromáticos, alcoholes, etc
 Según el órgano afectado: Hepatotóxico, ototóxico, nefrotóxico,
neurotóxico.
 Según su efecto: cancerígeno, teratogénico, mutagénico, etc.
 Según su mecanismo de acción: Metahemoglobinizante, inhibidor
de enzimas, bloqueador del transporte de oxígeno, etc.

1.4 Mecanismos de acción de los tóxicos

Los tóxicos pueden provocar daño al organismo mediante diversos


mecanismos como:

 Desplazamiento del oxígeno: Este mecanismo de toxicidad es propio


de algunos gases como metano, propano y butano.
 Interferencia en el transporte del oxígeno o acción sobre la
hemoglobina: Es el caso del monóxido de carbono que tiene una
afinidad por la hemoglobina de 210 veces más que el oxígeno. La
unión del monóxido a la hemoglobina da lugar a la molécula de
carboxihemoglobina que es incapaz de fijar oxígeno. La
determinación de la tasa de carboxihemoglobina en sangre se usa
como herramienta de diagnóstico precoz de sobreexposición a
monóxido de carbono.
 Interferencia con la utilización del oxígeno y almacenamiento de
energía: Algunos tóxicos como el cianuro y el ácido sulfhídrico
bloquean el paso de electrones en diferentes lugares de la cadena
respiratoria. Otras sustancias como el dinitrofenol no bloquean el paso
de electrones al oxígeno, pero impiden el almacenamiento de la
energía liberada en forma de ATP.

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 Acción sobre las enzimas: Los tóxicos pueden inhibir o activar


enzimas produciendo una alteración del funcionamiento de diversos
sitemas.
 Ejemplos de tóxicos que producen inhibición enzimática son los
plaguicidas organofosforados y carbamatos, cuiyo mecanismo de
acción reside fundamentalmente en la inhibición irreversible de la
acetilcolinesterasa.
 Algunos tóxicos pueden producir estimulación enzimática como es el
caso del hexaclorobenceno que produce una activación de la delta-
ala-sintetasa, lo que se traduce en un aumento de la concentración
hepática del ácido delta aminolevulínico. Otro ejemplo lo constituye
el DDT capaz de estimular las enzimas microsomales.
 Acción directa sobre receptores: La muscarina presente en algunos
hongos actúa directamente sobre receptores colinérgicos

1.5 Toxicocinética

Vías de absorción

1.5.1 Vía respiratoria

 Rápida y completa
 Suelen ser muy agudas y graves.
 Al no pasar el tóxico por el hígado, los mecanismos de defensa y
metabolización no son eficaces.
 No se puede hacer tratamiento neutralizante, o que disminuya la
absorción.
 La toxicidad dependerá de: frecuencia y volumen respiratorios del sujeto.
 Tamaño de la partícula:
 Las partículas mientras más pequeñas sean tendrán una mayor
posibilidad de llegar al área de absorción e ingresar al organismo.

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1.5.2 Vía cutánea

Liposolubilidad: como veremos más adelante las sustancias


liposolubles se absorben más fácilmente.
Temperatura: a mayor temperatura mayor absorción cutánea.
Relativamente impermeable a las soluciones acuosas y a la mayoría de
los iones.
Diferentes velocidades de absorción según región anatómica.
Tóxicos que pueden absorberse por piel y causar intoxicación aguda:
Organofosforados, Anilinas, Derivados halogenados de los
hidrocarburos, Derivados nitrados del benceno, Sales de talio.

1.5.3 Vía Digestiva

La vía digestiva es una vía de absorción de innegable importancia dado


que está estructurada con ese propósito para la absorción alimentaria
Ruta más frecuente en las intoxicaciones accidentales o con fines
suicidas.

Diversos compartimentos con particulares características histológicas,


bioquímicas y físico – químicas.

El lugar de absorción más importante es el estómago e intestino delgado.

1.5.4 Biotransformación

Se llama biotransformación a los cambios metabólicos que sufre una


sustancia extraña al organismo (xenobiótico) que ocurren con el objeto de
deshacerse de ella, transformándola en una sustancia menos tóxica o
facilitando su eliminación. Este proceso de biotransformación ocurre
principalmente en el hígado, órgano que se encuentra ubicado
estratégicamente en el aparato circulatorio con este efecto.

Los principales cambios que ocurren en xenobiótico durante el proceso de


biotransformación son debidos a:

 Oxidación.

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 Reducción.

1.5.5 Vías de eliminación

 Vía aérea.
 Vía urinaria.
 Tracto gastrointestinal y bilis.
 Saliva.
 Vía cutánea.
 Leche.
 Pelos y uñas.

La vía de eliminación más importante la constituye la vía urinaria mediante


los riñones. Cada riñón cuenta con alrededor de un millón de nefronas que
son las unidades funcionales básicas de este órgano.

1.6 Investigaciones toxicológicas

La investigación toxicológica es el conjunto de procesos analíticos que tienen


por objeto el aislamiento, identificación y determinación cuantitativa y
cualitativa de los tóxicos, tanto en personas vivas como en cadáveres con el
fin de permitir el diagnóstico de la intoxicación.

1.7 Clasificación de las intoxicaciones

Atendiendo a su evolución y según la rapidez con que se instaura el proceso


toxico, las intoxicaciones se pueden clasificar como sobreagudas, agudas,
subagudas y crónicas.

Las intoxicaciones sobreagudas son aquellas en las cuales la acción del


producto toxico se produce con gran rapidez, ocasionado con frecuencia la
muerte en pocos minutos u horas.

Las intoxicaciones agudas van a dar lugar a síntomas visibles y


generalmente graves, pudiendo producir la muerte en pocos días. En las
intoxicaciones agudas se recibe una sola dosis del toxico. Generalmente

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coincide con dosis intravenosa u oral ya que son exposiciones de corta


duración.

Se denomina subagudas si la intoxicación tiene lugar en el transcurso de


varios días o semanas.

Las crónicas son debidas generalmente a pequeñas cantidades de una


sustancia toxica durante mucho tiempo, con una lenta acumulación en el
organismo.

1.7.1 Intoxicaciones accidentales

Estas intoxicaciones tiene una gran importancia por la forma suceder,


generalmente y en los casos de adultos, suelen ser personas que están
desprevenidas, confiadas y en contacto con el toxico puede ser elevado.
En el caso de los niños las intoxicaciones accidentales se produce
principalmente desde la edad en la que comienza a deambular hasta los
cinco o siete años y las sustancias intoxicantes generalmente son, en este
caso, medicamentos y productos domésticos. Salvo excepción, no
revisten gravedad por que le niño siempre esta con alguien y en casa,
detestan el sabor.

1.7.2 Intoxicaciones por medicamentos

Cada vez más frecuentes las intoxicaciones accidentales por


medicamentos debido a errores terapéuticos, pudiendo ser muy variadas
las condiciones en las que pueden producirse: medicamento no
identificados, acumulo de medicamentos, errores en las dosificaciones,
idiosincrasia del individuo, etc.

El re envasado en dosis unitaria, de los blíster de la industria, y en los


distintos hospitales, se presta a errores de medicación, por su gran
similitud de envase y tipografía y como todos los errores de medicación,
podría conducir a algún caso de toxicidad.

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1.7.3 Intoxicaciones profesionales

Son las que sufren los trabajadores en el ejercicio de su profesión y se


deben a la presencia de elementos químicos en el lugar de trabajo, o a la
existencia de los mismos en el material que se manipula. Un ejemplo
clásico pero muy explicativo podría ser la típica confusión del labrador que
queriendo ingerir una sustancia refrescante según la etiqueta de la botella,
ingiere un plaguicida que se colocó en la misma para evitar tirarlo al ser
un resto. En estos casos hay que complementar el tratamiento específico
con medidas profilácticas con el fin de evitar la repetición de las
intoxicaciones.

1.7.4 Intoxicaciones domésticas

Lo normal es que las intoxicaciones por productos domésticos tanto en el


niño como en el adulto se produzca de forma accidental por ingestión,
contacto inhalación, aunque también se encuentran casos de
intoxicaciones en adultos con fines suicidas. Como posible tóxicos se
incluyen los medicamentos, los detergentes, lejías, productos para la
limpieza y material de saneamiento, pinturas, combustibles, cerillas,
productos cosméticos etc.

1.7.5 Intoxicaciones alimentarias

Intoxicación por contaminación bacteriana de los alimentos. La más


importante es la causada por el Clostridium Botulinum. Los alimentos
sospechosos deberán hervirse a presión durante quince minutos. Otras
toxinas contaminantes son las elaboradas por estafilococos, salmonellas u
otros organismos. Este tipo de intoxicaciones no afectan directamente ya
que su diagnóstico y tratamiento sigue otro camino a su entrada por
urgencias del hospital.

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1.7.6 Intoxicaciones ambientales

Engloba las intoxicaciones no profesionales y que son ocasionadas por la


contaminación de aire, agua o suelo. Este tipo de intoxicaciones no las
vamos a tratar aquí por no tener carácter de intoxicación aguda.

1.7.7 Intoxicaciones por plantas

Las plantas pueden ocasionar daño tanto al hombre como a los animales
herbívoros. La mayoría de las intoxicaciones están relacionadas con niños
pequeños que pueden estar en contacto con las plantas tanto en casa como
en el patio del colegio, etc. Los adulto y adolescentes pueden verse
afectados por plantas toxicas con las que han experimentado, por pensar
que tenían propiedades curativas, placenteras, alucinógenas o de otro tipo.
En estos casos raramente se ocasionan serios problemas.

1.7.8 Picaduras y mordeduras de animales

Las intoxicaciones más frecuentes por los animales suelen ser: mordeduras
de víboras, picaduras de arácnidos e insectos y picaduras o contacto con
animales acuáticos. Todas estas intoxicaciones accidentales acuáticas.
Todas estas intoxicaciones accidentales suelen traer aparejado toda un
aserie de problemas de diagnóstico, prevención y tratamiento, (eliminación
de veneno, utilización de sueros específicos, cuidados complementarios,
etc.)

1.7.9 Intoxicaciones voluntarias

Dentro de las intoxicaciones voluntarias englobamos las intoxicaciones


sociales, el doping y las intoxicaciones suicidas.

1.7.10 Intoxicaciones sociales

Las distintas costumbres sociales llevan al mal uso y abuso de muchas


sustancias que pueden ocasionar intoxicaciones agudas o crónicas.
Como ejemplos podríamos mencionar tóxicos que influyen sobre grandes
masas de población como el alcohol, el tabaco, la marihuana.

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1.8 Doping

El uso perjudicial por parte de los deportistas, con el deseo de aumentar su


rendimiento pude llegar a ocasionar daños severos.

1.8.1 Intoxicaciones suicidas

Las sustancias empleadas con fines suicidas son muy diferentes y varían
según las épocas, las actividades del suicida y otros factores. A través de
la historia de la toxicología se han utilizado veneno de distintos tipos: setas
venenosas, cicuta, almendras amargas, arsénico, plomo, fosforo,
cianuros, siendo frecuentes en las últimas décadas los avenamientos con
hipnóticos, principalmente barbitúricos.

1.8.2 Intoxicaciones intencionadas

Las intoxicaciones intencionadas implican la premeditación y la intención


de causar perjuicios o muerte. En estos casos interviene la medicina legal
ya que las indicaciones de los médicos forenses son imprescindibles en
este tipo de intoxicaciones.

1.9 Tipos principales de las investigaciones toxicológicas:

 Investigaciones preclínicas de toxicidad:


 Investigación de toxicidad aguda.
 Investigación de toxicidad sub aguda y crónica.
 Análisis de sangre general y clínico
 Evaluación del estado funcional del hígado y riñones
 Investigación pato histológica de los órganos internos,
 Investigación del efecto irritante local, efecto cutáneo y resurtivo
Investigaciones para revelar alergias, inmunotoxicidad, embriotoxicidad
y el efecto teratogénico.
 Investigación del efecto mutagénico y cancero génico de las
preparaciones.

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1.10 Razones por las que se realiza el examen

Este examen puede emplearse para evaluar posibles sobredosis o


intoxicación accidental o intencional, como cuando existe la necesidad de
evaluar el tipo y cantidad de droga legal o ilegal utilizada por una persona.
Este examen puede emplearse para determinar la causa de toxicidad
aguda por drogas, para vigilar la farmacodependencia y para determinar la
presencia de sustancias en el cuerpo (para propósitos médicos y/o legales).
Ver también: Primeros auxilios en caso de drogadicción. Si el examen se
utiliza como detección sistemática o examen para drogas existe una
cantidad finita de tiempo después de la ingestión durante la cual se puede
detectar la droga o cualquiera de sus metabolitos:

 Cocaína - 2 a 4 días y desde 10 hasta 22 días si el consumo es


excesivo.
 Anfetaminas - 24 a 48 horas.
 Heroína - 1 a 2 días.
 Morfina -1 a 2 días.
 Fenciclidina (CFC) - 1 a 8 días.
 Alcohol - 3 a 10 horas.
 Benzodiacepinas hasta 6 semanas con un alto nivel de consumo.
 Hidromorfona 1 a 2 días.
 Tetrahidrocannabinol (THC) 6 a 11 semanas con consumo excesivo.
 Metadona 2 a 3 días.
 Barbitúricos hasta 6 semanas.

1.11 Medidas de bioseguridad para los servicios forenses

1.11.1 Finalidad

a) Difundir conceptos y principios básicos de bioseguridad para el trabajo,


a fin de implementar medidas que permitan prevenir accidentes por
riesgo de exposición a contaminantes, al personal y al público que
asiste a los servicios.

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b) Establecer la conducta a seguir dentro de las instalaciones de atención


del trabajo operativo, que permitan prevenir y/o hacer frente a un
accidente por exposición a elementos contaminantes.

1.12 Base legal

Constitución política del Perú de 1993


Decreto Legislativo N° 052 “Ley Orgánica del Ministerio Publico”
Resolución de la Fiscalía de la Nación N° 1356-2001 que aprueba el
“Reglamento y la estructura de los órganos administrativos de la fiscalía
de la Nación”
Ley N° 26410 Ley del Consejo Nacional del Ambiente
Decreto Supremo N° 258-75-SA, que establece valores límites para
agentes químicos en el ambiente de trabajo

1.13 Medidas preventivas para el trabajo

 Toda área de trabajo Clínico Asistencial de laboratorio o relacionado con


exámenes complementarios, contara con instrucciones escritas y
difundidas sobre el manejo de peritados (usuarios), restos humanos con
sospecha de tuberculosis, HIV, Hepatitis y muestras biológicas de los
mismos
 Cada sección de trabajo debe tener expuestas las normas básicas de
bioseguridad específicas del área.

1.13.1 Actividades restringidas

 Prohibición de fumar
 Prohibición de comer
 Prohibición de beber
 Prohibición de guardar alimentos y/o bebidas en refrigeradores donde se
encuentre sangre y otros materiales potencialmente infecciosos, y en los
frigoríficos de los laboratorios.
 Prohibición de realizar reuniones o celebraciones dentro de las áreas
de trabajo no destinadas para este fin.

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 Prohibición de no mantener abrochados batas y vestidos


 Prohibición de llevar el pelo suelto
 Prohibición de llevar pulseras, colgantes, mangas anchas ni prendas
sueltas que pueden engancharse en montajes, equipos o maquinas.
 Prohibición de retirarse sin lavarse las manos antes de dejar los
ambientes de trabajo.
 Prohibición de dejar objetos personales en las superficies de trabajo.

1.13.2 Obligaciones para el trabajo

 Llevar equipos de protección individual determinados para su área de


trabajo
 Llevar la ropa específica para el trabajo (mandil, mandilón, gorro, botas,
mascarillas, etc.)
 No trabajar solo.
 En el caso del personal que trabaja en los laboratorios, no efectuar
pipeteos con la bota.
 Etiquetar adecuadamente los frascos y recipientes a los que se haya
transvasado algún producto, almacenado una muestra o donde se hayan
preparado mezclas, identificado su contenido, a quien pertenece y la
información sobre su peligrosidad (reproducir el etiquetado original)
 No tocar con las manos desnudas productos bilógicos u otros
contaminantes.
 Desechar agujas u otros objetos corto punzante en contenedores rígidos
apropiados para este fin.
 Considerar a todos los residuos biológicos como potencialmente
infecciosos.
 Limpieza diarias: los ambientes de trabajo deben ser higienizado por el
personal de limpieza, con agua y detergente neutros, utilizando
utensilios de limpieza que al tiempo de facilitar la tarea protejan al
trabajador, debiendo ser supervisado por el jefe encargado

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1.13.3 Lavado de manos

 Entre diferentes tareas y procedimiento, antes de realizar exámenes en


la consulta externa
 Luego de manipular sangre, fluidos corporales, secreciones,
excreciones, materiales e instrumentos contaminados, tanto se hayan
usado o no guantes.
 Inmediatamente después de retirar los guantes del contacto con
usuarios o cadáveres.

1.13.4 Usos de artículos y equipamiento para el cuidado personal

a) Uso de guantes
Utilizar según especificación técnica para el tipo de trabajo
especializado.
Usar guantes limpios, no necesariamente estériles, previo al
contacto con sangre, fluidos corporales, secreciones, excreciones,
mucosas y materiales contaminadas.
Cambiar los guantes entre diferentes procedimientos en el mismo
paciente luego del contacto con materiales que puedan contener
alta concentración de microorganismos.
b) Protección ocular y tapaboca
Los lentes: deben ser amplios y ajustados al rostro para cumplir
eficazmente con la protección para todos los casos.
El tapaboca: debe ser de materiales impermeable frente a
aerosoles o salpicaduras, por lo que debe ser amplio, cubriendo
nariz y toda la mucosa bucal (uso de respiradores en sal de
necropsias, exhumaciones y realizaciones de bacilosopias), en el
caso de toxicología debe contarse con máscaras con filtro contra
gases.

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c) Protección corporal
Debe utilizar mandiles blancos, con el distintivo siendo una
exigencia multifactorial en la prestación de servicios por parte de
los integrantes del equipo de trabajadores.
Las batas con abertura posterior ser semipermeables, de manga
larga y hasta el tercio medio de la pierna.
Se deben lavar las manos posteriormente a la manipulación y/o uso
de mandiles, batas, mandilones o delantales.
Luego de su utilización, serán depositadas en los contenedores
respectivos para su limpieza.

1.12.5 Manejos de residuos

a. Residuos líquidos
Como (sangre, heces, orina, secreciones y otros líquidos
corporales) deben desecharse por el sistema de drenajes normal.
Esto es posible cuando los efluentes son vertidos a la red
sanitaria, si el establecimiento no cuenta con esta conexión deben
ser tratados previamente.
Debe tenerse especial cuidado cuando se desechan los líquidos,
para evitar manchas en las paredes, sanitarias, mobiliarias y
pisos.
Usar guantes de goma, resistentes, anticorte, para la
manipulación. El uso de guantes no invalida el lavado de manos,
de acuerdo a técnicas de lavado de manos,

b. Residuos solidos
Deben colocarse en bolsas de polietileno de 120 micras,
identificadas adecuadamente según su color, en el caso de
residuos contaminados se deberán eliminarse en la bolsa roja. La
no disponibilidad de bolsas color rojo, obliga a colocar rotulo de
color, bien legible, indicado residuos sólidos contaminados, las

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bolsas deben estar en contenedores resistentes de fácil lavado y


con tapa.
El contenedor debe ubicarse en un lugar, lo más próximo posible
donde se genera el residuo.

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CAPÍTULO II

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2.1 MUESTRA PARA EL ANÁLISIS TOXICOLÓGICO QUE CONOCE

2.1.1 Selección adecuada y cantidad adecuada

Principales muestras para el análisis toxicológico:

Contenido gástrico.
Sangre.
Orina.
Humor Vítreo.
Hígado.
Otros tejidos y fluidos Biológicos Envasado y conservación de las
muestras.
Almacenamiento de las muestras.
Descomposición química y biológica.
Contaminación.
Interferencias causadas por la putrefacción.
Contaminación procedentes de los envase Normas para la
recogida, preparación y remisión de las muestras.
Muestras procedentes de sujeto vivo muestras.
Muestras procedentes de Autopsia.
Muestra procedente de una exhumación.
Muestras procedentes del lugar del hecho.

2.1.2 Cantidad de muestras de humanos vivos o muertos

A. Contenido gástrico
 Vómito, aspirado gástrico y lavados estomacales (el primer
lavado).
 Un volumen aproximado 20mL.
 Puede ser necesario procedimientos de homogenización,
filtración y/o centrifugación.
 No representa grado de intoxicación.

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B. Sangre
 Es una de la muestras más útiles y la más utilizada para la
identificación especialmente para el análisis cuantitativo.
 La sangre total y el plasma son las más representativas.

C. En individuos vivos:
Extraer por punción venosa y recolectar en tubos de vidrios o plástico
con tapan a rosca que asegure un cierre hermético perfecto. Se utiliza el
anticoagulante EDTA-fluoruro, en proporción de nueve partes de sangre
y una parte de anticoagulante.
 La sangre se extrae de una vena, usualmente de la parte interior
del codo o del dorso de la mano. El sitio de punción se limpia con
un antiséptico y luego se coloca una banda elástica alrededor del
antebrazo con el fin de ejercer presión y hacer que las venas se
llenen de sangre.
 Luego, se introduce una aguja en la vena y se recoge la sangre
en un frasco hermético o en una jeringa. Durante el
procedimiento, se retira la banda para restablecer la circulación y,
una vez que se ha recogido la sangre, se retira la aguja y se cubre
el sitio de punción para detener cualquier sangrado.
 En los bebés o niños pequeños, el área se limpia con un
antiséptico y se punza con una aguja o lanceta puntiaguda.

D. En cadáver
Extraer por punción de las cavidades cardíacas. Colocar en el tubo que
contiene solución saturada de Fluoruro de Sodio en la proporción de 0,1
mL por 10 mL de sangre, para inhibir el desarrollo de la mayoría de las
especies bacterianas productoras de etanol. Asegurar que el tubo quede
bien cerrado, sin cámara de aire. Rotular.

E. Orina
Ensayos preliminares en el screenig de tóxicos.

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 Para drogas de abuso.


 La concentración de un toxico puede llegar a ser 100 veces mayor
que en la sangre.
 Se debe tomar antes del tratamiento.
 Como mínimo 20 mL a 50mL.
Precauciones
Las muestras de orina deben ser remitidas en recipientes de vidrio
o plástico con tapa a rosca que aseguren un cierre hermético
perfecto y sin ningún tipo de conservantes.
La muestra se mantiene en heladera a 4°C, conservando su
aptitud para los análisis por un plazo de dos semanas. Para
plazos mayores, es conveniente que se mantenga en freezer.

F. Uñas y pelos

Las muestras de uñas y pelos adquieren su real significancia para los


casos post-mortem donde los fenómenos putrefactivos se encuentran
muy avanzados, o bien para el caso de exhumaciones de larga data.

F.1. Uñas

 Cortar del extremo distal libre de todas las uñas de manos y


pies posibles y colocando los mismos en sobres de papel de
tamaño adecuado (pequeño).
 Colocarlas en un sobre de papel de tamaño pequeño,
debidamente rotulado e identificado para las uñas de las
manos y otro diferente para la uña de los pies.
 No requiere del agregado de preservantes y/o conservantes,
como tampoco requiere de cadena de frío.

F.2 Pelos

 Tóxicos minerales.
 Detección para drogas de abuso.

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 Refleja el estado promedio de los elementos minerales del


organismo durante su crecimiento.

2.1.3 Tipo y Cantidad requerida

La toma de muestra se realiza por el corte del pelo al ras de la piel. Pelo
Peri craneal (occipital/parietal) de preferencia o pelo pubiano: 1 a 2 g, en
la práctica resulta adecuado un mechón, pelo axilar: todo y de ambas
axila.

Acondicionamiento

 Disponer de láminas de cartón de tamaño adecuado según la


longitud del pelo (ej.: 5cm x 5cm o 10cm x 10cm), sobres de papel
nuevo, hilo de algodón blanco y abrochadura.
 Envolver un extremo de los pelos con papel blanco, con el fin de
protegerlo del broche metálico.
 Abrochar el pelo a la lámina de cartón tratando de ubicarlo en el
centro de la misma.
 Marcar con claridad en el cartón el extremo Proximal (nacimiento
del pelo) y el extremo Distal punta del pelo).
 Colocar una tapa de lámina de cartón idéntica a la primera; hacer
perforaciones y unir fuertemente ambas láminas con hilo blanco de
algodón (porque se encuentra libre de químicos y/o fibras sintéticas
que pudieran contaminar la muestra).
 Rotular y colocar en un sobre de papel nuevo de tamaño adecuado
y rotular nuevamente
A. Saliva.

Correlación de los análisis séricos con drogas de abuso y psicofármacos.

B. Meconio

Meconio: Líquido amniótico, moco, lanugo, bilis y células que se han


desprendido de la piel y el tracto intestinal.

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Identificación de drogas durante la gestación.

C. Humor vítreo

Es una muestra muy adecuada para la investigación de alcoholemia


cuando no se dispone de sangre, o la misma se encuentra muy degradada
como consecuencia de fenómenos putrefactivos.

Precauciones

 Obtener todo el humor vítreo de ambos ojos, por punción con aguja
o jeringa estéril.
 Colocar en tubos de vidrio o plástico de capacidad adecuada,
provistos de tapa que aseguren un cierre hermético perfecto y sin
ningún tipo de conservantes.
 Se deben llenar los tubos hasta el tope de su capacidad, sin que
quede cámara de aire, esto evita pérdidas importantes e
irreparables de tóxicos volátiles (particularmente etanol).
 Rotular y almacenar inmediatamente en heladera a 4ºC hasta su
envío al Laboratorio de Toxicología Forense. Periodo máximo de
dos semanas.
D. Vísceras

Hígado

 Niveles de tóxicos superiores a los de la sangre


 Especialmente útil cuando no se puede disponer de sangre
 Evitar contaminación por bilis
 Evitar añadir conservantes

Cantidad requerida para:

 Cerebro: 100g mínimo.


 Hígado, Riñón, Bazo, Corazón y Pulmón: 50g mínimo.
 Vesícula Biliar y Estomago con sus respectivos contenidos: todo.

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Precauciones

Las muestras deben colocarse en recipientes escrupulosamente limpios


sin ningún tipo de conservante. Se prefiere que sean de vidrio color
caramelo, en caso contrario puede recolectarse en recipientes de vidrio
incoloro o plásticos con cierre hermético perfecto. En lo posible colocar
cada víscera en un frasco individual. De no ser posible, resulta adecuado
agruparlos según el siguiente detalle:

 Recipiente 1: cerebro
 Recipiente 2: hígado, riñón y bazo
 Recipiente 3: pulmón, corazón
 Recipiente 4: estómago y su contenido
 Recipiente 5: vesícula biliar y su contenido
 Recipiente 6: tejido adiposo
 Rotular cada recipiente y en lo posible almacenar en freezer a
menos de 20ºC,
E. Tejido adiposo
 Recolectar Tejido Adiposo Subcutáneo y/o Visceral,
aproximadamente 50 a 100 g. La muestra se debe recolectar de
rutina en todas las autopsias, y es mandatoria en las
exhumaciones, sin importar el tiempo de defunción.

2.1.4 Cadena de frio

Se define como cadena de frio a la serie de elementos y actividades


necesarios para garantizar la calidad de las muestras obtenidas desde el
laboratorio hasta el procedimiento y remisión del resultado. Este término
fue utilizado por primera vez alrededor de 1908, se define como el
conjunto de etapas sucesivas de la preservación especialmente de las
muestras, la refrigeradora es uno de los métodos más importantes para la
conservación de las muestras.

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2.1.5 Normas para la recogida, p preparación y remisión

Instituto Nacional de Toxicología y Ciencias Forenses, de acuerdo con la


Ley Orgánica 19/2003, de 23 de diciembre, de modificación de la Ley
Orgánica 6/1985, de 1 de julio, del Poder Judicial, y el Real Decreto
862/1998, de 8 de mayo, por el que se aprueba el Reglamento del Instituto
de Toxicología, se configura como un órgano técnico cuya misión es
auxiliar a la Administración de Justicia.

a) Las muestras destinadas al análisis toxicológico no se conservarán en


formol. No se utilizarán los tubos con gel activador de la coagulación
ante la posibilidad de que contengan tolueno.
b) Los frascos destinados a contener sangre no deben tener restos de
agua para evitar la hemólisis.
c) A las muestras de sangre se añadirá un agente conservante,
preferentemente fluoruro sódico, excepto cuando haya de
determinarse flúor o sodio. A los restantes tipos de muestras biológicas
no se les adicionará ningún conservante.
d) Para el estudio de tóxicos volátiles, monóxido de carbono, gases
anestésicos, hidrocarburos volátiles, los envases de las muestras de
sangre deberán llenarse al máximo para evitar en lo posible la cámara
de aire.
e) Para la determinación de alcohol etílico en sangre en sujetos vivos, la
extracción se llevará a cabo con jeringa desechable, no empleándose
alcohol o desinfectantes con fracciones volátiles en la desinfección de
la piel.
f) El envío se realizará en condiciones de refrigeración.
g) Todas las muestras objeto de análisis, se empaquetaran por separado
con la finalidad de evitar una posible contaminación.
h) Para el análisis de metales y metaloides en intoxicaciones crónicas o
agudas, se utilizarán recipientes primarios que no contengan
sustancias quelantes como el EDTA.

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i) Todas las muestras objeto de estudio histopatológico deben ser


remitidas en formol tamponado al 4 %. Únicamente se enviarán en
fresco aquellas muestras que deban ser objeto de otro tipo de análisis
previo, como estudios criminalísticas y de vitalidad en heridas. 2. Para
una fijación adecuada, las piezas deben quedar cubiertas totalmente
por formol, colocando el fijador antes que la muestra para permitir la
fijación de la parte inferior de la misma. La proporción adecuada es:
Volumen de la muestra/Volumen de formol = 1/3. 3. Como recipientes
se recomienda la utilización de envases de plástico de boca ancha
adecuados al tamaño de la muestra, para los encéfalos contenedores
de 3 litros y para corazones envases de 2 litros. 4. Las muestras en
formol se mantendrán a temperatura ambiente.

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CAPÍTULO III
PROCEDIMIENTOS Y
NORMAS DE LA
CADENA DE CUSTODIA

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3.1 PROCEDIMIENTOS Y NORMAS DE LA CADENA DE CUSTODIA

La cadena de custodia

Es la aplicación de un conjunto de reglas y métodos con la finalidad de


asegurar, embalar y proteger cada elemento probatorio hallado en el lugar
de los hechos, para evitar su alteración, suplantación, destrucción,
contaminación, lo que afectaría seriamente la investigación de los hechos
ilícitos suscitados.

3.2. La prueba y la cadena de custodia

Es muy fundamental el manejo adecuado de la escena del crimen con la


finalidad de recoger las evidencias físicas halladas, ya que cualquier
descuido puede ser revertido la prueba, cada evidencia física debe recibir un
tratamiento diferente, pero la técnica para todos ellos debe ser la misma,
siempre enfocándose en ello, y tiene razón el profesor José Reyes que dice,
"es ahí donde se revelan todo tipo de pruebas. Los peritos científicos, pueden
ser: peritos médicos, legales, fotometrístas, laboratoristas, toxicólogos,
antropólogos, grafólogos, armeros y otros".

a) Dónde se inicia y dónde concluye

Las evidencias físicas, se obtienen en principio en el lugar de los hechos


o la escena del crimen, es por ello éste el lugar donde inicia la cadena de
custodia. Esto comienza, cuando el personal facultado para ello, de
realizar las primeras investigaciones, embala y rotula las evidencias
físicas halladas tales como puede ser (huellas, rastros, manchas,
residuos, armas, instrumentos, dinero, documentos, grabaciones en audio
y video, entre otros), y concluye con su preservación y resguardo
adecuado. Por ello el autor Juventino Montiel recomienda de la siguiente
manera, "… es, por eso, que el personal abocado a la investigación debe
elegir los lugares que va a pisar y tocar, al fin de que no borren o alteren
las huellas que ya existen, sobre todo una impresión dactilar, marca o
indicio, que tuviera peligro de destruirse o modificarse., deberá ser

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protegido adecuadamente y a la brevedad posible deberá ser levantado


con las técnicas propias para tal fin, una vez que sé allá fijado el lugar de
los hechos. Y al concluir la inspección del lugar, quedará a consideración
del Ministerio Público si se sellan las puertas y ventanas para su
preservación ya que en lo futuro podrían surgir otras diligencias."

b) La importancia de la cadena de custodia en el sistema acusatorio.

Cabe preguntarse cómo se está aplicando el manejo de la cadena


custodia en los distritos judiciales donde ha entrado progresivamente la
vigencia del Nuevo Código Procesal Penal, entonces la respuesta seria
que aunque hay cambios normativos todavía no hay cambios en la
práctica que digamos, el problema también radica en la precariedad de la
consagración legal, también falta de capacitación adecuada del personal
que intervienen en la investigación, especialmente en la Policía Nacional,
la cadena de custodia en el sistema acusatorio en donde de alguna forma
este procedimiento toma mayor preponderancia, aunque no es
completamente suficiente la consagración legal, sino también la
capacitación adecuada del personal que intervienen en las primeras
investigaciones del hecho ilícito con relevancia penal, si partimos de la
idea que dicho procedimiento se reviste de características muy expeditas
y de gran relevancia dentro del desarrollo del proceso penal.

c) Discusión del manejo adecuado de la cadena de custodia

Como es sabido en nuestro medio no existe estudio minucioso sobre este


tema, por ello su manejo inadecuado, como también su poco importancia
que se ha tenido hasta hoy día, por los operadores judiciales, más aun,
se podría decirse que se toma como un simple procedimiento de rutina
restándole la importancia que se debe tener realmente la cadena de
custodia dentro el proceso penal.

Cuán importante es la cadena de custodia, esto también tiene que ven


con el debido proceso y es una pieza fundamental que se compone de
importantes elementos con los que se busca un instrumento probatorio

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eficaz y confiable que de total validez a una determinada decisión judicial.


Por ello es muy fundamental aplicar adecuadamente el procedimiento a
seguir en la interpretación de mensajes explícitos e implícitos en el lugar
de los hechos, su protección adecuada de cualquier agente externo que
pudiera alterarla o modificar, de la utilización de todas las herramientas
técnicas y científicas como lo es la antropología forense, la antropometría,
la arqueología, y otras disciplinas científicas que contribuyen al encuentro
de respuestas a los interrogantes que surgen alrededor de una
investigación de un hecho ilícito con relevancia penal, pero para que todos
estos elementos cumplan su función es necesario que todos aquellos que
tienen contacto con las evidencias físicas estén debidamente capacitados
para su recolección y llevarlas a buen puerto en un correcto proceso de
custodia y su resguardo respectivo.

d) Inobservancia de reglas de conservación de la cadena custodia y su


consecuencia

Inobservancia de reglas de conservación de la cadena custodia, esto


quiere decir la manipulación incorrecta que puede ser voluntaria o
involuntaria de las evidencias físicas, esto es transgresión de las
formalidades establecidas, debe acarrear sanciones respectivas, porque
su mal manejo afecta el bien desarrollo del proceso penal, como también
podía afectar los derechos fundamentales de la persona.

Cual seria las consecuencias su mal manejo de la cadena custodia, para


ello tiene que verse con grado de validez de la prueba que puede
proporcionar al proceso, como también y su eficacia que pueda brindar a
la misma. Para que tenga la cualidad de validez debe cumplir las
formalidades establecido para ello, esto con la finalidad de garantizar la
contradicción y la publicidad, para que no sea excluido como
consecuencia de haberse declarado prueba prohibida.

Por ello la recomendación es que las evidencias físicas sean obtenidas


respetando los derechos constitucionales, para que pueda tener la

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eficacia, con ello se pueda demostrar la comisión del hecho ilícito con
relevancia penal, ello también para facilitar al juzgador y causar
convicción.

Por ello muchos dicen el quebrantamiento de la cadena custodia se


estaría afectando a la eficacia probatoria, en consecuencia el juzgador
causaría dudas y perjudicar el proceso penal. De misma podemos afirmar,
"es de suma importancia una correcta administración del escenario, ya
que en el pasado se ha atribuido a desórdenes en el procesamiento de
los indicios el que algunos casos no se hayan resuelto satisfactoriamente;
o que la pureza de la evidencia haya sido cuestionada válidamente en
estrados judiciales por parte de la defensa técnica del imputado".

3.3 Procedimiento de cadena de custodia

A. Conocimiento y corroboración de hechos ilícitos

Esto es el conjunto de diligencias que se realizan con el fin de verificar


como ocurrieron los hechos ilícitos, para poder recopilar más cantidad
posible de información, para ser utilizado dentro el proceso penal, esto es
se recibe las primeras informaciones con los funcionarios que llegaron al
lugar de los hechos, esto concluye con el aseguramiento del lugar.

B. Preservar el lugar de los hechos

Es el conjunto de diligencias que se anticipa con la posibilidad de


garantizar el aseguramiento o protección de la escena del crimen, o donde
se cometieron posibles hechos ilícitos, con el objetivo de impedir la
pérdida o la posible alteración de los elementos probatorios o evidencias
físicas hallados. Esto es realizado por los primeros funcionarios que llegan
al lugar de los hechos y concluye con la entrega a los funcionarios
competentes para su resguardo.

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C. Reconocimiento, análisis y determinación del lugar de los hechos

Esto pertenece a las diligencias metodológicas lo que tiene que ver con el
tratamiento de del lugar de los hechos ilícitos, con el propósito de que las
investigaciones sean eficientes, que las evidencias físicas sean útil para
el proceso judicial, aplicable para los funcionarios que intervienen en la
investigaciones, esto concluye con la fijación del lugar de los hechos del
comisión del delito.

D. Determinación del lugar de los hechos

Esto son diligencias que se realizan con el propósito de describir


pormenorizadamente el lugar de los hechos ilícitos y posible ubicación de
evidencias físicos, utilizando métodos adecuados. Esto debe ser realizado
por el personal facultado para ello, comienza con la conclusión del
procedimiento de observación, análisis y valoración del lugar de la
comisión de hechos ilícitos y concluye con la preparación de los informes
respectivos y entrega de dichos elementos para su resguardo.

E. Acopio, empaquetado y rotulado de evidencias físicas

Son las diligencias realizadas para el acopio, empacado y rotulado de


manera correcta los elementos materiales hallados en el lugar de los
hechos, para ser remitidos para su resguardo pertinente, para garantizar
su originalidad, que no sea alterado, sea el mismo acuerdo a su tipo, esto
es realizado por los funcionarios facultados para este labor, que se inicia
con el procedimiento de fijación del lugar de los hechos, en su defecto con
la documentación de la evidencias físicas.

F. Remisión de evidencias físicas al almacén transitorio

Son las diligencias realizadas por los funcionarios competentes, con el


propósito de almacenar transitoriamente las evidencias físicas halladas en
el lugar de los hechos, hasta su remisión al almacén correspondiente para
su resguardo definitivo. Se inicia al finalizar el acopio, empacado y

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rotulado de las evidencias físicas y concluye con el almacenamiento


definitivo.

G. Remisión de las evidencias físicas al laboratorio pertinente o al


almacén de evidencias

Son las diligencias realizadas para permitir su envío las evidencias


físicas, ya sea al laboratorio o el almacén correspondiente, esto es por
los funcionarios facultados para ello, que intervienen en el lugar de los
hechos y concluye con la recepción de los mismos ya sea por el
laboratorio o el almacén respectivo.

H. Ingreso y análisis de las evidencias físicas en el laboratorio


facultado

Son las diligencias realizadas por los laboratorios facultados para ello,
quienes lo reciben las evidencias físicas hallados o recogidos con dicho
propósito, con la finalidad de hacer estudio respectivo, para que pueda
ser utilizado dentro del proceso judicial. Esto se inicia con la recepción
de evidencias físicas y concluye con la entrega del informe pericial.

I. Admisión y protección de las evidencias físicas en el almacén


respectivo

Son conjunto de operaciones realizadas con la finalidad de garantizar


admisión, protección y resguardo de la evidencias físicas en óptimas
condiciones de seguridad y preservación adecuada, por los funcionarios
facultados. Se inicia con la recepción de las evidencias físicas y concluye
con su almacenamiento respectivo.

J. Manipulación de evidencias físicas del origen en asistencia judicial


extranjera

Son las diligencias realizadas con el propósito de garantizar la cadena


de custodia de evidencias físicas acuerdo a los convenios ya sea
bilaterales o multilaterales, lo que tiene que ver con la cooperación

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judicial celebrado entre los países, se inicia cuando algún Estado


extranjero solicita las evidencias y concluye con la entrega de las
mismas.

K. Manipulación de evidencias físicas procedente de investigaciones


encubiertas

Esto son las evidencias físicas acopiada en las investigaciones


encubiertas por el personal facultado para ello, se inicia con el acopio y
concluye con la remisión de dichos materiales a dependencia
correspondiente.

L. Manipulación de evidencias físicas provenientes de video vigilancia

Son labores realizadas con la finalidad de garantizar la originalidad de


evidencias físicas que tienen origen el video vigilancia, realizado por el
personal facultado para ello, se inicia con la entrega de los mismos y
concluye con la remisión a la dependencia correspondiente.

M. Manipulación de evidencias físicas provenientes de


establecimientos sanitarios

Son las evidencias físicas halladas como consecuencia de


intervenciones médicas a las personas que podría tener relación de
algún hecho ilícito penal, se inicia con la atención medica en las
personas y concluye con la entrega de dichos elementos a los
funcionarios correspondientes.

N. Orden judicial para el traslado de evidencias físicas para las


diligencias judiciales

Son las diligencias realizadas por la autoridad competente que requiere


para cumplir diligencias judiciales, la realización de nuevos análisis o su
custodia en otro laboratorio o almacén facultado para ello, se inicia con
la solicitud de autoridad judicial su traslado y concluye con la realización
de la diligencia programada.

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O. Destino final de las evidencias físicas

Son conjunto de operaciones que se realiza, con el propósito de su


resguardo definitivo ordenado por la autoridad competente de las
evidencias físicas, en el lugar determinado para ello.

P. Procedimiento y registro de cadena de custodia

Son conjunto de operaciones que se realiza para registrar las


características específicas de las evidencias físicas, tales como lugar de
los hechos, la fecha y la hora, medidas, peso, tamaño, color, especie,
estado, entre otros datos y de las diferentes operaciones realizadas con
dicho propósito, esto es cumpliendo todos los requisitos especificados en
los formatos de cadena de custodia, con la finalidad de identificar y
mantener su originalidad de los materiales.

Q. Algunos vicios en la cadena de custodia

Algunos vicios que podría suscitar en la práctica diaria de la cadena


custodia, según Monzón Soto, Blanca

 .Envoltura de plástico o de papel mal cerradas.


 Bolsas con cierre de seguridad: descripción errónea, no lacradas y
falta de individualización.
 En el proceso de lacrado: inexistencia de cinta adhesiva, firmas y
sello de la autoridad judicial, Ministerio Público o policial.
 En el trámite de recepción de indicios para su análisis en el
laboratorio forense: Inexistencia de libros consecutivos.
 Acta de apertura: Inexistencia detallada de embalajes y su
contenido; Ausencia de testigos de apertura.
 Falta de embalaje interno.
 Embalaje externo: inexistencia de lacrado, sellado o el lacrado
presenta rupturas o alteraciones.
 Falta de cierre con cinta adhesiva en cada una de las aberturas del
recipiente (sobres, cajas, bolsas).

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 Omisión de escribir encima de la cinta el nombre de la persona


responsable del levantamiento.
 El nombre de la persona responsable del levantamiento presenta
alteraciones, borraduras, tachaduras o cualquier situación que
produzca ilegibilidad de las letras o el nombre.
 Cadena de custodia del embalaje externo.
 En la hoja de cadena de custodia no aparece el nombre del
funcionario de la Fiscalía que recibió la evidencia procedente del
Laboratorio Forense.
 No documentación en el sitio: falta de descripción detallada de las
evidencias forenses, ubicación, lugar, hora, quién la recolectó,
donde se envía entre otros.
 Estos vicios enumerados podría producir alguna ruptura a la
cadena de custodia, el cual causaría alguna contrariedad en su
sustitución, destrucción, adulteración, contaminación en la
estructura corporal de la evidencia física, por dichos considerandos
se convertiría en una prueba ilegal, el cual violaría el debido
proceso.

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CAPÍTULO IV
MÉTODOS DE
EXTRACCIÓN

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4.1 CONOCE LOS MÉTODOS DE EXTRACCIÓN

Desde el punto de vista analítico los tóxicos se dividen en:

Tóxicos gaseosos
Tóxicos volátiles
Tóxicos inorgánicos o minerales
Tóxicos orgánicos

4.1.1 Método de extracción de tóxicos gaseosos

Las técnicas son:

 Destilación simple.
 Destilación fraccionada.
 Destilación directa al vacío.
 Destilación por arrastre de vapor.
 Micro difusión.
 Técnica de espacio de cabeza (head space).
 Cromatografía de gases.
a) Microdilución o microdifusión

La microdifusión es un método de aislamiento del o los analitos. Se basa


en la liberación de un compuesto volátil (por ejemplo cianuro de
hidrógeno a partir de sales de cianuro) de una muestra mediante un
reactivo liberador colocado en el compartimiento exterior de la cámara
de Conway Este método permite identificar los tóxicos volátiles y ofrece
algunas ventajas sobre la destilación. El principal beneficio es que se
requiere poca cantidad de muestra y no necesita purificación previa de
la muestra ni otros tratamientos especiales. El compuesto volátil que se
libera es atrapado por el reactivo fijador (por ejemplo solución del
hidróxido de sodio en el caso de cianuro de hidrógeno) colocado en el
compartimiento interno.

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b) Cromatografía de gases

Se basa en las diferente velocidad con que se mueven los solutos, a


través de un medio poroso arrastrados por un disolvente en movimiento.

Ventajas e inconvenientes

 Costos.
 Personal especializado.
 Técnica muy sensible, fiable y rentable para determinaciones
cualitativas (casi la totalidad de los tóxicos) y cuantitativas.
 Posibilidad de derivación (obtener un compuesto intermedio a
partir de una no volátil).

4.1.2 Método de extracción de tóxicos volátiles

Se denominan tóxicos volátiles a todas aquellas sustancias que


independientemente de su estado físico pueden separarse del material
que las contiene a través de los siguientes métodos: destilación simple
destilación por arrastre con vapor, micro difusión, espacio cabeza
Comprenden, entre otros, compuestos tales como alcoholes primarios,
aldehídos, cetonas, fenoles y solventes orgánicos como éter, cloroformo,
tetracloruro de carbono, etc.

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Es necesario tener en cuenta que los tóxicos volátiles al ingresar al


organismo pueden sufrir una serie de modificaciones en su estructura de
manera tal que, dichas sustancias pueden convertirse en metabolitos
atóxicos o bien aumentar notablemente su toxicidad. Aquellos que se
volatilizan por debajo de los 100 oC por lo cual son arrastrado por el
vapor de agua cuando esta destila (alcohol etílico, alcohol metílico,
benceno, fenoles, etc.)

4.1.3 Extracción de tóxicos minerales o inorgánicos:

Estos tóxicos se encuentran en el organismo firmemente unidos a la


albumina, lípidos o glúcidos, siendo requisitos de destrucción de la
materia orgánica para poder realizar sus análisis.

a. Métodos de extracción:

Mineralización:

Proceso por el cual se produce la destrucción de la materia orgánica


y la consiguiente liberación del toxico.

 Destrucción oxidativa por vía húmeda de la materia orgánica


empleando ácido nítrico- agua oxigenada, etc.
 Destrucción de materia orgánica por vía seca (calcinación)
 Formación de complejos y posteriormente se separa con
disolvente orgánico.

Cromatografía en capa fina

Es la más utilizada.

4.1.4 Extracción de tóxicos orgánicos

Esta extracción se realiza previa purificación de la muestra ya que la


muestra (sangre, hígado, pulmón, cerebro) a analizar contiene un gran
número de sustancias como proteínas y lípidos que van a interferir en el
análisis para estos se debe hacer un tratamiento con agentes

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precipitantes de proteínas (desproteinizantes) tenemos al sulfato de


amonio o tungsteno de amonio.

a) Extracción con Solvente

La extracción líquido-líquido de drogas y otros tóxicos lipofílicos a


partir de la muestra con un solvente orgánico apropiado, inmiscible
con el agua, normalmente a un pH controlado, es ampliamente usada
en toxicología analítica. Los tóxicos orgánicos fijos pueden tener
carácter ácido (barbitúrico, hidantoína, primidona, salicilatos), neutro
(meprobamato) o básico (benzodiacepinas, anorexígenos, alcaloides,
neurolépticos, antidepresivos). El procedimiento permite la extracción
del analito de su matriz original y lo transfiere a una fase orgánica fácil
de manejar y evitando las interferencias. Esto se conoce como
proceso de extracción o de aislamiento, donde se trata de concentrar
el analito para que esté dentro del rango de sensibilidad con que opera
el sistema de identificación y de estabilizar el analito dado que en su
matriz original puede degradarse química o enzimáticamente. Con
muestras líquidas se pueden realizar dos tipos de extracciones:

b) Extracción liquido-liquido (L-L)

La extracción líquido-líquido, también conocida extracción de


solvente, es un proceso químico empleado para separar componentes
en solución mediante su distribución en dos fases líquidas inmiscibles.
En ampollas de decantación, en tubos o mediante columnas de
extracción rellenas con sustancias inertes, por ejemplo tierras de
diatomeas.

Disolventes- quedan siempre en la capa inferior.

 Cloroformo
 Cloruro de metileno
 Tetracloruro de carbono

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Disolventes - quedan siempre en la capa superior.

 Éter etílico
 Acetato de etilo
 Tolueno
 Benceno y Hexano

c) Extracción sólido-líquido

Para la extracción en continuo donde la sustancia a extraer se


encuentra en estado sólido y el extractor en un estado líquido se
emplea el SOXHLET.

d) Extracción en fase sólida

Esta técnica se aplica pasando una disolución que contiene analito(s)


sobre una fase sólida (o estacionaria) que lo(s) adsorbe
específicamente. Se utiliza columnas con un adsorbente sólido.
Puede ser de fase normal, fase reversa, intercambio iónico,
copoliméricas (poseen un componente hidrófobo y otro de intercambio
iónico) que permiten a través de sus diferentes grupos sustituyentes
en el adsorbente de la columna, hacer una buena separación y un
aislamiento del o los analitos en estudio, concentrarlos y dejar
retenidos los compuestos no deseados en la columna. Para efectuar
una adecuada extracción se debe tener en cuenta:

 El pH en que la droga no se encuentra ionizada para favorecer


su solubilidad en el solvente orgánico. Por ejemplo: drogas
ácidas a pH ácido, drogas básicas a pH básico.
 El solvente o mezcla de solventes adecuados. Por ejemplo:
cloroformo: isopropanol (para morfina); cloroformo en caliente
(para estricnina).

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e) Extracción (L-L) en medio ácida y alcalina

Extracción de drogas ácidas en ampollas de decantación

Se toma el pH de la muestra de acuerdo con su valor se acidifica con


solución de ácido sulfúrico o clorhídrico hasta pH 2-3. No se debe usar
ácido concentrado porque destruye la mayoría de las moléculas de
los analitos a investigar. Se agrega cloruro de sodio (droga sólida)
para evitar la formación de emulsiones por aumento de la fuerza iónica
de la fase acuosa y reduce así la solubilidad de la droga en agua. Por
último adicionar el solvente orgánico como por ejemplo éter etílico. Se
agita durante cierto tiempo y se dejan separar las dos fases en la
ampolla separando posteriormente la fase orgánica. Repetir dos o tres
veces la extracción de la solución acuosa que queda en la ampolla
adicionando nuevas porciones del solvente orgánico. Se reúnen los
extractos y se desecan con cantidad suficiente de sulfato de sodio
anhidro. El extracto se separa en dos porciones las cuales se
evaporan a fin de concentrar el analito y así aplicar un método de
investigación, como por ejemplo, CCD y/o barrido al ultravioleta (UV).

Extracción de drogas básicas en ampollas de decantación.

Se toma el pH de la muestra y de acuerdo con su valor se alcaliniza


con amoníaco hasta pH 9, se agrega cloruro de sodio (droga sólida) y
por último el solvente orgánico cloroformo o cloroformo: isopropanol
(9:1). Se agita durante cierto tiempo y se dejan separar las dos fases
en la ampolla y luego se separa la fase orgánica. Repetir dos o tres
veces la extracción de la solución acuosa que queda en la ampolla
adicionando nuevas porciones del solvente orgánico. Se reúnen los
extractos, se desecan con sulfato de sodio anhidro y se filtra por papel.
El extracto se separa en dos porciones y se procede de igual manera
que en el punto anterior.

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Desventajas de la extracción en ampolla de decantación

Se necesitan volúmenes de muestras grandes (25 mL) e importantes


volúmenes de solvente (50 mL). Muchas veces son inevitables las
emulsiones con la consiguiente pérdida del analito, si no se logra
romper la emulsión. Para favorecer su ruptura, cuando ésta se forma,
se recomienda centrifugar o aplicar golpe de frío o calor. Otra
desventaja es el tiempo necesario para efectuar la extracción (entre 2
y 5 horas).

f) Extracción de las drogas ácidas

Se toma el pH de la muestra y de acuerdo a su valor se acidifica la


muestra con sulfúrico al 10% o clorhídrico al 25% hasta pH 2-3. Se
carga la columna con un volumen de la muestra, se espera 15 minutos
para que la muestra penetre en la columna y la impregne. Se diluye
con un solvente adecuado como cloroformo, diclorometano, éter
etílico, etc. El diluido se separa en dos cápsulas de porcelana para
CCD y UV (barrido). Se evapora a sequedad. Este contendrá los
tóxicos orgánicos fijos de carácter ácido o neutro.

g) Extracción de drogas básicas

Se toma el pH de la muestra y de acuerdo a su valor se alcaliniza la


muestra con amoníaco hasta pH 9-10. Se carga la columna con un
volumen de la misma, se espera 15 minutos para que la muestra
penetre en la columna y la impregne. Se diluye con un solvente
adecuado (cloroformo, o cloroformo: isopropanol 9:1). El diluido se
separa en dos cápsulas de porcelana. Se evaporan los extractos, que
contendrán los tóxicos orgánicos fijos de carácter básico, a sequedad
y se procede luego a su investigación.

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Desventajas de la extracción mediante columnas de extracción


con soporte inerte

Las drogas de carácter ácidos débiles o bases débiles o neutras


aparecerán en ambos eluatos, por lo que para salvar este
inconveniente se efectúan extracciones secuenciales entre pH 2-3 y
pH-9-10.

h) Extracción en fase sólida (SPE)

La extracción en fase sólida es aplicable a todo tipo de muestra ya


sea líquida o sólida que se pueda ser disuelta. El fenómeno físico que
ocurre es la adsorción del analito sobre la fase estacionaria y posterior
elución con un solvente apropiado. Estas columnas están rellenas con
sílicas modificadas. En sus grupos silanoles se agregan sustituyentes
capaces de interactuar con el analito por intercambio catiónico,
aniónico o debido a un determinado grado de hidrofobicidad,
permitiendo así la separación de drogas ácidas, neutras y alcalinas.

i) Elección del disolvente


 Debe disolver los metabolitos de interés.
 Fácil de eliminar.
 No reaccionar con la muestra.
 No ser muy tóxico ni muy fácilmente inflamable.

j) Elección de un método de extracción:


 Determinación analítica que se precisa.
 Tipo de muestra.
 Posibilidades de laboratorio.
 Naturaleza del tóxico: conocido o desconocido.

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j.1. Maceración

Consiste en remojar la muestra, debidamente fragmentada por un


disolvente hasta que éste entre en contacto con los tejidos e
ingresar en las estructuras celulares y extraer los tóxicos.

El objeto principal de este paso es el de aumentar la superficie de


contacto de un solvente adecuado con el material a extraer para
facilitar la mejor y mayor disolución de tóxicos.

j.2. Filtración

La filtración es la separación de uno o más elementos sólidos de


un elemento fluido, mediante el paso de la mezcla a través de un
elemento poroso filtrante, llamado filtro. Elimina las partículas en
suspensión. La eficacia del proceso depende del tamaño de poro
del filtro, el aparato de filtración y el procedimiento utilizado. Se
suele utilizar filtros de celulosa de 0.45um.

j.3. Medios filtrantes.

Entre los principales criterios de selección del material de medio


filtrante se pueden destacar:

 Compatibilidad y resistencia química con la mezcla.


 Permeabilidad al fluido y resistencia a las presiones de
filtración.
 Capacidad en la retención de sólidos.
 Adaptación al equipo de filtración y mantenimiento.
 Relación vida útil y coste.

Tipos de filtros

 Material de fabricación. Los filtros pueden ser fabricados de


multitud de materiales, en función del destino de su uso. Hay
Filtros fabricados en celulosa, textiles, fibras metálicas,
polipropileno, poliéster, arenas y minerales, etc.

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 Propiedades de filtrado: Una catalogación muy importante de


los Filtros o elementos filtrantes es el tamaño máximo de las
partículas que permiten pasar, definido por el tamaño del poro.
 Caudal de Filtrado. Cada filtro posee, en función de su
porosidad y superficie, un Caudal máximo de filtrado, por
encima del cual el elemento filtrante (filtro) estaría impidiendo
el paso de forma significativa del fluido a filtrar.
 Elemento a filtrar: En el mercado existen Filtros para Agua,
filtros de Aceite, de Aire, gasolinas y combustibles, de gases,
etc.
 Forma: Los Filtros pueden ser planos, redondos, Filtros de
manga, de cartucho, de bolsa, etc.

j.4. Soxhlet

El soxhlet es una metodología extractiva que permite separar


componentes que se hallan presentes en mezclas sólidas,
basados en las diferencias de distribución de sus componentes
individuales en dos fases que se contactan íntimamente a través
de una gran área de superficie. Consiste en lavados sucesivos de
una mezcla sólida con un determinado solvente. Como ventaja se
señala que es posible extraer componentes de baja solubilidad en
el solvente pero debido a las repetidas y múltiples extracciones
que se realizan se logra extraerlo.

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CAPÍTULO V
TÉCNICAS INSTRUMENTALES
PARA LA IDENTIFICACIÓN DE
SUSTANCIAS TÓXICAS

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5.1. TÉCNICAS INSTRUMENTALES PARA LA IDENTIFICACIÓN DE


SUSTANCIAS TÓXICAS

5.1.1 Espectrofotométricas

La espectrofotometría es la medición de la cantidad de energía radiante


que absorbe o transmite un sistema químico en función de la longitud de
onda; es el método de análisis óptico. El espectrofotómetro es un
instrumento que permite comparar la radiación absorbida o transmitida
por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una
que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.

A. Espectrofotometría Ultravioleta-Visible (UV -V):

La espectroscopia ultravioleta-visible o espectrofotometría ultravioleta-


visible (UV/VIS) es una espectroscopia de emisión de fotones y una
espectrofotometría. Utiliza radiación electromagnética (luz) de las
regiones visible, ultravioleta cercana (UV) e infrarroja cercana (NIR) del
espectro electromagnético, es decir, una longitud de onda entre 380nm
y 780nm. La radiación absorbida por las moléculas desde esta región del
espectro provoca transiciones electrónicas que pueden ser
cuantificadas.

La espectroscopia UV-visible se utiliza para identificar algunos grupos


funcionales de moléculas, y además, para determinar el contenido y
fuerza de una sustancia. Se utiliza de manera general en la
determinación cuantitativa de los componentes de soluciones de iones
de metales de transición y compuestos orgánicos altamente conjugados.
Se utiliza extensivamente en laboratorios de química y bioquímica para
determinar pequeñas cantidades de cierta sustancia, como las trazas de
metales en aleaciones o la concentración de cierto medicamento que
puede llegar a ciertas partes del cuerpo.

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B. Espectrofluorometria

La espectroscopia de fluorescencia, también llamada espectrofotometría


o fluometría; es un tipo de espectroscopia electromagnética, la cual
analiza la fluorescencia de una muestra. Esto involucra el uso de un haz
de luz comúnmente de luz ultravioleta, que excita a los electrones en las
moléculas de ciertos componentes y causa entonces la emisión de luz;
típicamente, pero no necesariamente, luz visible. Su técnica
complementaria es el espectro de absorción. El equipamiento que mide
la fluorescencia es llamado fluorómetro o fluorómetro.

Las moléculas tienen varios estados referidos a los niveles de energía.


La espectroscopia de fluorescencia se preocupa fundamentalmente de
estados electrónicos y vibratorios. Generalmente las especies
estudiadas poseen un estado fundamental electrónico o estado
estacionario (un bajo estado electrónico) de interés, y un estado
electrónico excitado de una energía superior. Dentro de cada uno de
estos estados electrónicos hay varios estados vibratorios. En
espectroscopia de fluorescencia, las especies son las primeras en ser
excitadas mediante la absorción de un fotón, desde su de estado
electrónico fundamental, a uno de los diversos estados vibratorios en el
estado electrónico excitado. Las colisiones con otras moléculas causan
a la molécula excitada la perdida de energía vibratoria hasta que alcanza
el menor estado vibratorio del estado electrónico excitado. Este proceso
es a menudo visualizado con el diagrama de Jablonski.

La molécula luego vuelve a declinar a uno de los varios niveles de


vibración del estado electrónico fundamental emitiendo un fotón en el
proceso. Como las moléculas pueden decaer en cualquiera de los varios
niveles vibratorios en el estado fundamental, los fotones emitidos
tendrán entonces diferentes energías, y de este modo diferentes
frecuencias. Por tanto, por el análisis de las diferentes frecuencias de luz
emitidas en la espectroscopia de fluorescencia junto con sus

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intensidades relativas, la estructura de los diferentes niveles vibratorios


puede ser determinada. Para especies atómicas, el proceso es similar,
sin embargo desde especies atómicas no se poseen niveles vibratorios
de energía, los fotones emitidos están con frecuencia con la misma
longitud de onda que la radiación incidente.

C. La espectrometría de infrarrojos

Es un tipo de espectrometría de absorción que utiliza la región infrarroja


del espectro electromagnético. Como las demás técnicas
espectroscópicas, puede ser utilizada para identificar un compuesto o
investigar la composición de una muestra. La espectrometría infrarroja
se basa en el hecho de que los enlaces químicos de las sustancias
tienen frecuencias de vibración específicas, que corresponden a los
niveles de energía de la molécula. Estas frecuencias dependen de la
forma de la superficie de energía potencial de la molécula, la geometría
molecular, las masas atómicas y, posiblemente, el acoplamiento
vibracionales.

Si la molécula recibe luz con la misma energía de esa vibración,


entonces la luz será absorbida si se dan ciertas condiciones. Para que
una vibración aparezca en el espectro infrarrojo, la molécula debe
someterse a un cambio en su momento dipolar durante la vibración. En
particular, una aproximación de Born-Oppenheimer y aproximaciones
armónicas; es decir, cuando el miltoniano molecular correspondiente al
estado electrónico estándar puede ser aproximado por un oscilador
armónico cuántico en las cercanías de la geometría molecular de
equilibrio, las frecuencias vibracionales de resonancia son determinadas
por los modos normales correspondientes a la superficie de energía
potencial del estado electrónico estándar. No obstante, las frecuencias
de resonancia pueden estar, en una primera aproximación, en relación
con la longitud del enlace y las masas de los átomos en cada extremo

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del mismo. Los enlaces pueden vibrar de seis maneras: estiramiento


simétrico, estiramiento asimétrico, tijeras, rotación, giro y wag.

D. Espectrometría de absorción atómica:

En química analítica, la espectrometría de absorción atómica es una


técnica para determinar la concentración de un elemento metálico
determinado en una muestra. Puede utilizarse para analizar la
concentración de más de 62 metales diferentes en una solución. Aunque
la espectrometría de absorción atómica data del siglo XIX, la forma
moderna fue desarrollada en gran medida durante la década de los 50
por un equipo de químicos de Australia, dirigidos por Alan Walsh. La
técnica hace uso de la espectrometría de absorción para evaluar la
concentración de un analito en una muestra. Se basa en gran medida en
la ley de Beer-Lambert.

La espectrometría de absorción atómica también puede ser llevada a


cabo mediante láser, principalmente un láser de diodo, ya que sus
propiedades son apropiadas para la espectrometría de absorción láser.
La técnica se denomina espectrometría de absorción atómica por láser
de diodo (DLAAS o DLAS), o bien, espectrometría de absorción por
modulación de longitud de onda.

E. La espectrometría de masas.

La Espectrometría de Masas es una poderosa técnica micro analítica


usada para identificar compuestos desconocidos, para cuantificar
compuestos conocidos, y para elucidar la estructura y propiedades
químicas de moléculas. La detección de compuestos puede ser llevada
a cabo con cantidades realmente pequeñas (algunos polos) de muestra
y obtener información característica como el peso y algunas veces la
estructura del analito.

En todos los casos, alguna forma de energía es transferida a las


moléculas a analizar para afectar la ionización. En la técnica clásica de

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impacto electrónico (electrón ionización EI), algunas de las moléculas


ionizadas del analito “explotan” en una variedad de fragmentos
ionizados, el patrón de fragmentación resultante así como los iones
residuales constituyen el espectro de masas. En principio, el espectro de
masas de cada compuesto es único y puede ser usado como se “huella
química” para caracterizar el analito.

La espectrometría de masas es una técnica analítica de gran potencial


que nos permite elucidar estructuras químicas. La técnica se basa en la
medición de la relación masa/carga de especies moleculares. Las
determinaciones requieren de la generación de especies cargadas
eléctricamente, lo cual se logra por diferentes metodologías como
pueden ser el impacto electrónico, el bombardeo de átomos rápidos
(FAB), y la generación de iones enlazados. La medición de la relación
masa/carga nos permite también saber el peso molecular exacto de la
molécula. Es de gran ayuda para la industria farmacéutica,
cosmetológica y de alimentos.

5.1.2 Cromatografía

La cromatografía es una técnica de separación extraordinariamente


versátil que presenta distintas variantes. En toda separación
cromatográfica hay dos fases (sólida, líquida o gas) una móvil y otra
estacionaria, que se mueven una con respecto de la otra manteniendo
un contacto íntimo. La muestra se introduce en la fase móvil y los
componentes de la muestra se distribuyen entre la fase estacionaria y la
móvil. Los componentes de la mezcla a separar invierten un tiempo
diferente en recorrer cada una de las fases, con lo que se produce la
separación. Si un componente está la mayor parte del tiempo en la fase
móvil el producto se mueve rápidamente, mientras que si se encuentra
la mayor parte en la fase estacionaria, el producto queda retenido y su
salida es mucho más lenta.

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TIPO FASE ESTACIONARIA FASE MÓVIL


Líquido-sólido Sólido inerte como gel de sílice o Disolventes
alúmina
Intercambio Resina cambiadora soluciones
iónico acuosas
Líquido-líquido Líquido adsorbido en un soporte Líquido
sólido
Gas-líquido Película de líquido adsorbida Gas
sobre un soporte sólido

La más utilizada en química orgánica es cromatografía líquido-sólido en sus


dos variantes: cromatografía en columna (CC) y cromatografía de capa fina
(TLC)

A. Cromatografía en Columna (CC)

Se emplea para la separación de mezclas o purificación de sustancias a


escala preparativa. Como fase estacionaria se usa, generalmente, gel
de sílice o alúmina dentro de una columna. La elección del disolvente es
crucial para una buena separación. Dicho disolvente pasa a través de la
columna por efecto de la gravedad o bien por aplicación de presión
(cromatografía flash). La columna se prepara mezclando el soporte con
disolvente y se rellena la columna poniendo en el fondo de ésta un poco
de algodón o lana de vidrio, para evitar que la sílica o la alúmina queden
retenidas en la columna y del disolvente se enrasada hasta el nivel del
soporte. A continuación se introduce la muestra por la parte superior de
la columna y se eluye con el disolvente elegido, recogiéndose por lo
general en tubos de ensayo

La cromatografía en columna es quizás el método más general, utilizado


para la separación, a la vez que para la purificación, de diferentes
compuestos orgánicos que se encuentren en estado sólido o líquido. En
la cromatografía de columna las moléculas de una mezcla son

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separadas en base a la afinidad de las moléculas por la fase estacionaria


o por la fase móvil. Si una molécula A tiene más afinidad por la fase
estacionaria que la B, B bajará más rápido que A.

B. Cromatografía en Papel (CP)

La cromatografía en papel es un proceso muy utilizado en los


laboratorios para realizar unos análisis cualitativos ya que pese a no ser
una técnica muy potente no requiere de ningún tipo de equipamiento.

La fase estacionaria: Está constituida simplemente por una tira de papel


filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeñas gotas
de la solución y evaporando el disolvente. Luego el disolvente empleado
como fase móvil se hace ascender por capilaridad. Esto es, se coloca la
tira de papel verticalmente y con la muestra del lado de abajo dentro de
un recipiente que contiene fase móvil en el fondo.

Después de unos minutos cuando el disolvente deja de ascender o ha


llegado al extremo se retira el papel y se seca. Si el disolvente elegido
fue adecuado y las sustancias tienen color propio se verán las manchas
de distinto color separadas. Cuando los componentes no tienen color
propio el papel se somete a procesos de revelado. Hay varios factores
de los cuales depende una cromatografía eficaz:

 La elección del disolvente y la del papel de filtro.


 En la cromatografía sobre papel, las interacciones del soluto con
el papel hacen que los compuestos se desplacen a velocidades
diferentes.
 El cronograma final puede ser comparado con otros de mezclas
conocidas a fin de identificar los componentes de la muestra. La
cromatografía en papel de dos dimensiones consiste en
desarrollar el cronograma en un disolvente, girar el papel 90º y
desarrollar el cronograma en un disolvente diferente.
 Es útil para separar mezclas complejas de compuestos similares.

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C. Cromatografía en Capa Fina (CCF)

La cromatografía de capa fina es un procedimiento que se utiliza para


separar moléculas relativamente pequeñas. Al igual que otras
cromatografías, consiste de una fase estacionaria y una fase móvil y el
principio es el mismo: la sustancia de interés se adherirá a la fase
estacionaria o se moverá con la fase móvil, viajando una distancia que
es inversamente proporcional a la afinidad por la fase estacionaria.

La fase estacionaria o también llamada, absorbente, se encuentra


colocada uniformemente, formando una finísima capa de un espesor en
torno a 0.1 mm, sobre un soporte o placa de vidrio o metal. La mezcla
que deseamos analizar se colocará a una corta distancia del borde
inferior de la mencionada placa, la cual introduciremos en una cubeta o
recipiente que contendrá la fase móvil, o también llamado, eluyente. Hay
adsorbentes que contienen un indicador de fluorescencia para facilitar la
identificación de muestras. Si no se usa indicador y los componentes no
son coloridos, se requerirán otras técnicas de revelado.

C.1 Adsorbente

Tiene un agregado de CaCO3 (yeso) o almidón (10-15 %,


preferentemente 12 %) que permite que el adsorbente se adhiera al
soporte. La granulometría es menor de 10 a 40 mm de diámetro
aproximadamente (en general 5 a 10).

Es primordial el espesor de adsorbente en la placa. Una capa


irregular ocasionará recorridos más rápidos en zonas más delgadas
o más lentos en zonas de mayor espesor resultando inadecuada
para su interpretación.

C.2 Soportes:

Los soportes pueden ser de:

 Silicagel G 60 F 254

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 Silicagel G H 60
 Silicagel GP F 254
 H: sin aglutinante
 F: con fluorescencia
 G: con aglutinante
 P: preparativa
 254: fluorescencia a 254 nm
 S: resiste acido

C.3 Solventes

La mezcla de solventes o disolventes que conformará la Fase móvil


(FM) deberá ser tal que los componentes de la muestra no corran
con el frente del solvente, ni queden retenidos en el lugar de siembra.
Es fundamental el uso de solventes anhidros y miscibles. Los
solventes más usados.

C.4 Saturación de la cuba

La cuba cromatográfica en la mayoría de los casos deberá estar


saturada con el o los solventes antes de introducir la placa, de lo
contrario, el solvente en vez de ascender por capilaridad
continuamente, tenderá a evaporarse de la capa de adsorbente para
equilibrar al líquido con su presión de vapor. Eso implicaría un
ascenso no homogéneo del frente de solvente. Cuando se utiliza una
mezcla de solventes, el problema se agrava, ya que las volatilidades
relativas de los solventes pueden ser distintas (el más volátil se
evaporará más).

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C.5 Sistemas de Fase Móvil

C.6 Etapas del procedimiento

Siembra

Se disuelve (o suspende) la muestra en un solvente adecuado


preferentemente volátil, y la siembra se efectúa con un capilar
cargado con la disolución o suspensión, a 1,5 – 2,0 cm del borde
inferior y de los bordes laterales de la placa. Se hace un toque, se
evapora el solvente, se hace otro toque en el mismo lugar, así
sucesivamente hasta lograr la concentración deseada. Se debe
cuidar que las siembras no superen los 2 ó 3 mm de diámetro. Las
siembras de las distintas muestras y testigos deben estar separadas
una de otros 1,0 cm por lo menos.

Desarrollo

La placa sembrada se introduce en la cuba previamente saturada


con el solvente (al menos 15 min. de saturación) de modo que el
solvente toque la placa, pero no la zona de siembra.

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La cuba se tapa y se deja que el solvente ascienda por capilaridad,


hasta 2 cm como máximo antes del borde superior. En este momento
se retira la placa y se deja secar.

Revelado

Una vez desarrollada la placa, la simple observación a la luz


ultravioleta (254 nm y 366 nm) de la placa puede revelar la presencia
de compuestos fluorescentes, como por ejemplo quinina. Pero para
completar la identificación de cualquier sustancia es necesario el uso
de varios reveladores aumentando la capacidad de resolución para
la mayoría de los compuestos presentes en las muestras.

Si las sustancias presentes en la muestra son coloreadas


(raramente), las manchas serán visibles. De lo contrario hay que
revelarlas. Los colores obtenidos de un compuesto particular pueden
variar, dependiendo de la concentración, la presencia de otras
sustancias eluídas, de la duración e intensidad del revelado, y del
tipo de sílica usada.

Algunos compuestos pueden mostrar una graduación o incluso un


cambio en el color desde el borde de la mancha hacia el centro
(normalmente un efecto de la concentración), mientras que la
intensidad o incluso la naturaleza del color obtenido puede variar con
el tiempo.

Si la placa es preparativa no pueden usarse reveladores destructivos


o si se los usa hacerlo en un extremo de la placa.

Evaluación

La evaluación se hace calculando los Rf (Factores de Retención) que


son característicos para cada compuesto en condiciones constantes
(adsorbente, grosor de la capa, temperatura, solventes, altura de
desarrollo, es decir en idénticos sistemas cromatográficos)

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El Rf toma valores entre 0 - 1 y puede ser usado para la identificación


de los componentes de una muestra, siempre y cuando se trate de
sistemas cromatográficos idénticos.

El número de manchas reveladas nos indica el grado de pureza o


complejidad de la muestra. Si variando los solventes de desarrollo
aparece una única mancha en todos los casos es muy probable que
la muestra contenga una única sustancia.

Reveladores

 Luz UV: cuando las sustancias son capaces de absorber


radiaciones en esas frecuencias, se observará fluorescencia.
 Vapores de I2: es un revelador universal. Se coloca la placa
en una cuba que tenga I2 sublimado. Este es volátil y se fija
por uniones dipolo inducido a las zonas donde están los
compuestos dando manchas marrones o amarillentas. La
ventaja de este método es que quitada la placa de la cámara
de yodo (o del contacto con los vapores) comienza a
decolorarse por la volatilización del yodo, y permite aplicar
posteriormente un nuevo revelador.
 H2SO4 y calor: este método es destructivo. Se rocía la placa
con ácido sulfúrico concentrado (hasta 50 %) y se coloca en
estufa por unos minutos (110-120 ºC). Aparecerán manchas
marrones, pardas o rojizas opacas.

Reveladores de sustancias extraíbles en medio alcalino-neutro

A. Dragendorff: Los alcaloides terciarios dan manchas


amarillas, naranjas, rojo-naranja o marrón-naranja. Este
reactivo puede ser aplicado sobre la placa ya tratada con
ninhidrina- FPN.
B. FPN: Las fenotiazinas dan manchas rojas o marrón rojizo
mientras que las dibenzazepinas dan manchas azules.
Puede ser utilizado sobre la placa ya tratada con ninhidrina.

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C. Ninhidrina: Aspersionar la placa y luego calentar a 100°C


por 5 min. Se observan puntos violetas o rosados debido a
la presencia de aminas primarias. Las aminas secundarias
dan color amarillo.

D. Mandelin: Este reactivo posee ácido concentrado por lo que


se recomienda no aspersionarlo sobre la placa. Exponer la
misma a los vapores. Diferentes colores pueden ser
obtenidos según la sustancia presente, ver monografía
específica.

E. Marquis: Este reactivo posee ácido concentrado por lo que


se recomienda no aspersionarlo sobre la placa. Exponer la
misma a los vapores. Los alcaloides relacionados con la
morfina dan manchas negras o violetas, ver monografía
específica.

F. Lodoplatínico-acidificado: Las aminas terciarias y


compuestos de amonio cuaternario dan manchas violetas,
azul violáceo, verde-violáceo, gris-violáceo o marrón-
violáceo. Las aminas primarias y secundarias dan colores
más tenues. Esta solución puede ser usada sobre la placa
que ha sido aspersionada con Ninhidrina, FPN y
Draggendorf. Algunos autores recomiendan iodoplatinato
neutro que es más estable y que da reacciones similares
con muchas drogas básicas; éste es aspersionado
posteriormente con ácido sulfúrico (500 mL/L) qué facilita las
reacciones del iodoplatinato neutro con los compuestos
como la cafeína y fenazona (diclofenazona).

G. Secuencia propuesta para extractos alcalinos

 Vapores de Formaldehído

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 Mandelin.
 Fluorescencia a 366 nm.
 Dragendorff.

H. Testigos recomendados:
 Anfetaminas
 Antidepresivos tricíclicos
 Cafeína
 Cocaína
 Diazepam
 Estricnina
 Nicotina
 Paracetamol
 Propoxifeno

Estos testigos servirían de comparación de Rf y como control de los


reactivos.

Reveladores de sustancias extraíbles en medio ácido

A. Nitrato mercurioso: Da manchas blancas con un centro gris en


un fondo más oscuro, con barbitúricos y compuestos
relacionados como la glutetimida.
B. Van Urk: Aspersionar la placa con el reactivo y calentar 100°C
por 5 min. El meprobamato y las sulfonamidas dan manchas
amarillas. Manchas rosadas o violetas son dadas por otros
compuestos, por ej. fenazona.
C. Permanganato de potasio ácido: Manchas amarillo-marrones
con fondo violeta revelan la presencia de sustancias con enlaces
alifáticos no saturados, ejemplo secobarbital. Se lo puede utilizar
como revelado secuencial y aspersionar a continuación del
nitrato mercúrico.

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D. Cloruro férrico: Los fenoles dan manchas azules o violetas. Con


esta solución se puede aspersionar una placa que ya fue tratada
con el reactivo Van Urk.
E. Nitrato mercúrico: Este reactivo es útil para revelar la presencia
de barbitúricos los cuales dan manchas blancas, a veces
rodeadas de un halo negruzco.
F. Cromatografía secuencial para plaguicidas

Testigos: Parathion, carbaryl (carbamatos), gamexane, aldrin,


dieldrin.

Solventes de corrida

 Para organofosforados/carbamatos:
 Hexano:Acetona.
 Para organoclorados: Ciclohexano:Cloroformo
 Para fosforados, carbamatos y clorados: Hexano:
Ciclohexano: Cloroformo: Acetona.

Revelado

 Limpiar el aspersor c/alcohol.


 Agregar difenilamina en alcohol al 1%.
 Exponer la placa a luz ultravioleta 10 minutos.
 Los organoclorados revelan verdes y grises al UV, se
observa aumento de fluorescencia para piretrinas.
 KOH 10 N (no mojar mucho la placa para no romper el
cromatofolio). Los carbamatos aumentan la fluorescencia,
los organofosforados dan color amarillo.
 Lavar con alcohol el aspersor. Colocar 4-nitro-benceno-
diazonio-tetrafluor-borato al 1% en mezcla de
etanol:etilenglicol (8:2). El carbaryl da color azul. El
propoxur, un carbamato, da color rojo. El malathion da
color violáceo.

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 Cloruro de paladio en ClH al 10% V/V (0,5 en 100 mL).


Los organofosforados dan color amarillo.
D. Cromatografía de Gases (GLC):

La cromatografía de gases es una técnica cromatográfica en la que la


muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna
cromatográfica. La elución se produce por el flujo de una fase móvil de
gas inerte. A diferencia de los otros tipos de cromatografía, la fase móvil
no interactúa con las moléculas del analito; su única función es la de
transportar el analito a través de la columna. La cromatografía de gases
presenta limitaciones en tres casos:

 Compuestos poco volátiles, generalmente los de peso molecular


superior a 300 uma.
 Compuestos sensibles a una elevación de la temperatura incluso
moderada (determinados compuestos de interés biológico).
 Compuestos que se encuentran en forma iónica (puesto que son
en general poco volátiles)
Por esta razón, la cromatografía de gases se emplea cuando los
componentes de la mezcla problema son volátiles o semivolátiles y
térmicamente estables a temperaturas de hasta 350-400ºC. En
cambio, cuando los compuestos a analizar son poco volátiles y/o
termolábiles, la técnica separativa adecuada suele ser la
cromatografía líquida de alta resolución (HPLC).

A menudo la cromatografía de gases se emplea para confirmar de


la presencia o ausencia de un compuesto en una muestra
determinada.

Aplicaciones

 Medioambientales: Análisis de pesticidas y herbicidas,


análisis de hidrocarburos, semivolátiles y volátiles, análisis
del aire.

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 Alimentos y aromas: fragancias y aromas, aceites,


bebidas, ácidos orgánicos, azúcares, FAMES, ésteres
metílicos, triglicéridos, alcoholes.
 Química Industrial: alcoholes, ácidos orgánicos, aminas,
aldehídos y cetonas, ésteres y glicoles, hidrocarburos,
disolventes, anilinas, gases inorgánicos.
 Biociencia: drogas, fármacos, alcoholes y contaminantes
en sangre, disolventes residuales.
 Derivadas del petróleo: gas natural, gases permanentes,
gas de refinería, gasolinas, gasóleos, parafinas.

Existen dos tipos de cromatografía de gases (GC): la cromatografía


gas-sólido (GSC) y la cromatografía gas-líquido (GLC), siendo esta
última la que se utiliza más ampliamente, y que se puede llamar
simplemente cromatografía de gases (GC). En la GSC la fase
estacionaria es sólida y la retención de los analitos en ella se
produce mediante el proceso de adsorción. Precisamente este
proceso de adsorción, que no es lineal, es el que ha provocado que
este tipo de cromatografía tenga aplicación limitada, ya que la
retención del analito sobre la superficie es semipermanente y se
obtienen picos de elución con colas. Su única aplicación es la
separación de especies gaseosas de bajo peso molecular. La GLC
utiliza como fase estacionaria moléculas de líquido inmovilizadas
sobre la superficie de un sólido inerte.

La GC se lleva a cabo en un cromatógrafo de líquidos. Éste consta


de diversos componentes como el gas portador, el sistema de
inyección de muestra, la columna (generalmente dentro de un
horno), y el detector.

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Gas portador

El gas portador cumple básicamente dos propósitos: Transportar


los componentes de la muestra, y crear una matriz adecuada para
el detector. Un gas portador debe reunir ciertas condiciones:

 Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la


muestra como con la fase estacionaria)
 Debe ser capaz de minimizar la difusión gaseosa
 Fácilmente disponible y puro
 Económico
 Adecuado al detector a utilizar.

El gas portador debe ser un gas inerte, para prevenir su reacción


con el analito o la columna. Generalmente se emplean gases como
el helio, argón, nitrógeno, hidrógeno o dióxido de carbono, y la
elección de este gas en ocasiones depende del tipo de detector
empleado. El almacenaje del gas puede ser en balas normales o
empleando un generador, especialmente en el caso del nitrógeno
y del hidrógeno. Luego tenemos un sistema de manómetros y
reguladores de flujo para garantizar un flujo estable y un sistema
de deshidratación del gas, como puede ser un tamiz molecular.

La pureza de los gases es sumamente importante, se requieren


niveles 4.5 o mayores es decir 99.995 % de pureza. Sin embargo,
debido al cuidado que se debe tener con la fase activa de la
columna, se hace completamente necesario la instalación de
trampas a la entrada del Gas carrier, estas trampas obviamente
tienen una capacidad limitada, pero son importantísimas al
momento de usar el Cromatógrafo. Estas trampas evitan el ingreso
de Hidrocarburos, agua, CO entre otros.

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Sistema de inyección de muestra

La inyección de muestra es un apartado crítico, ya que se debe


inyectar una cantidad adecuada, y debe introducirse de tal forma
(como un "tapón de vapor") que sea rápida para evitar el
ensanchamiento de las bandas de salida; este efecto se da con
cantidades elevadas de analito.

El método más utilizado emplea un micro jeringa (de capacidades


de varios micro litros) para introducir el analito en una cámara de
vaporización instantánea. Esta cámara está a 50 °C por encima del
punto de ebullición del componente menos volátil, y está sellada
por una junta de goma de silicona septa o septum.

Inyector de muestra para un GC

Si es necesaria una reproducibilidad del tamaño de muestra


inyectado se puede usar una válvula de seis vías o válvula de
inyección, donde la cantidad a inyectar es constante y determinada
por el tamaño del bucle de dicha válvula.

Columnas y sistemas de control de temperatura

En GC se emplean dos tipos de columnas: las empaquetadas o de


relleno y las tubulares abiertas o capilares. Estas últimas son más
comunes en la actualidad (2005) debido a su mayor rapidez y
eficiencia. La longitud de estas columnas es variable, de 2 a 60
metros, y están construidas en acero inoxidable, vidrio, sílice
fundida o teflón. Debido a su longitud y a la necesidad de ser
introducidas en un horno, las columnas suelen enrollarse en una
forma helicoidal con longitudes de 10 a 30 cm, dependiendo del
tamaño del horno.

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Columnas y tipos de fases estacionarias

D.1 Columnas de relleno

Las columnas de relleno o empacadas consisten en unos


tubos de vidrio, metal (inerte a ser posible como el acero
inoxidable, níquel, cobre o aluminio) o teflón, de longitud de
2 a 3 metros y un diámetro interno de unos pocos milímetros,
típicamente de 2 a 4. El interior se rellena con un material
sólido, finamente dividido para tener una máxima superficie
de interacción y recubierto con una capa de espesores entre
50 nm y 1 μm. Para que puedan introducirse en el horno, se
enrollan convenientemente.

D.2 Columnas capilares

Las columnas capilares son de dos tipos básicos: las de


pared recubierta (WCOT) y las de soporte recubierto
(SCOT). Las WCOT son simplemente tubos capilares donde
la pared interna se ha recubierto con una finísima capa de
fase estacionaria. Las columnas SCOT tienen en su parte
interna una fina capa de material absorbente como el
empleado en las columnas de relleno (tierra de diatomeas)
donde se ha adherido la fase estacionaria. Las ventajas de
las SCOT frente a las WCOT es la mayor capacidad de
carga de esta última, ya que en su fabricación se emplean
mayores cantidades de fase estacionaria, al ser la superficie
de intercambio mayor. Por orden de eficacia, en primer lugar
están las WCOT, luego las SCOT y por último las columnas
de relleno.

E. Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC)

En la cromatografía líquida, la fase móvil es un líquido que fluye a través


de una columna que contiene a la fase fija. La separación cromatografía

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en HPLC es el resultado de las interacciones específicas entre las


moléculas de la muestra en ambas fases, móvil y estacionaria

A diferencia de la cromatografía de gases, la cromatografía de líquidos


de alto rendimiento (HPLC, de high-performance liquid chromatography)
no está limitada por la volatilidad o la estabilidad térmica de la muestra.

La HPLC es capaz de separar macromoléculas y especies iónicas,


productos naturales lábiles, materiales poliméricos y una gran variedad
de otros grupos polifuncionales de alto peso molecular. Con una fase
móvil líquida interactiva, otro parámetro se encuentra disponible para la
selectividad, en adición a una fase estacionaria activa.

La HPLC ofrece una mayor variedad de fases estacionarias, lo que


permite una mayor gama de estas interacciones selectivas y más
posibilidades para la separación.

La cromatografía líquida es una técnica instrumental utilizada


ampliamente en los laboratorios, por su excelencia cualitativa y
cuantitativa, siendo, por tanto, necesaria su comprensión. Sus distintas
modalidades y las técnicas operativas existentes, junto a los aspectos
prácticos que permitirán realizar análisis cualitativos y cuantitativos,
optimizarlos y cumplir con ellos los protocolos de calidad.

La cromatografía de líquidos de ultra-alta resolución (UHPLC) es una


técnica que permite separar, identificar y cuantificar los componentes de
una mezcla compleja. Se realizan análisis cualitativos y cuantitativos de
polifenoles y carotenos.

Características Cromatografía Líquida de Alta Resolución

 Elevada sensibilidad.
 Elevada aplicabilidad.
 Permite realizar análisis cualitativos exactos.
 Es adecuada para la separación de especies termolábiles y no
volátiles.

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Aplicaciones principales

 Fármacos: Antibióticos, sedantes esteroides, analgésicos


 Bioquímica: Aminoácidos, proteínas, carbohidratos, lípidos.
 Productos de alimentación: Edulcorantes artificiales,
antioxidantes, aflatoxinas, aditivos
 Productos de la industria química: Aromáticos condensados,
tensoactivos, propulsores, colorantes
 Contaminantes: fenoles, Pesticidas, herbicidas, PCB
 Química forense: Drogas, venenos, alcohol en sangre,
narcóticos
 Medicina clínica: Ácidos biliares, metabolitos de drogas,
extractos de orina, estrógenos.

Algunas aplicaciones importantes de la HPLC preparativa

 Separación y purificación de metabolitos.


 Separación y purificación de los metabolitos de las drogas
procedentes de muestras de orina.
 Purificación y separación de enantiómeros.
 Purificación de compuestos naturales.
 Purificación y caracterización de enzimas y proteínas.

Parámetros Cromatografía Líquida de Alta Resolución

 El diámetro interno de una columna de HPLC es un aspecto crítico


que influye en la sensibilidad de la detección y la selectividad de
separación en gradiente de elución.
 Medida de las partículas La mayoría de HPLC tradicionales se
realiza con una fase estacionaria unida al exterior de partículas
esféricas de sílica.
 Tamaño de poro Muchas fases estacionarias son porosas para
proporcionar una mayor superficie.
 Presión del sistema La presión de las bombas es variable según
el modelo y fabricante, pero su rendimiento se mide en su

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capacidad para producir una velocidad de flujo constante y


reproducible.

5.1.3 INMUNOQUÌMICAS

A. Radio inmunoensayo (RIA).

El Radio inmunoensayo (o abreviado RIA del inglés Radio immuno


assay) es un tipo de inmuno ensayo o método radioinmunométrico
que se basa en la formación específica de los complejos Antígeno-
Anticuerpo (Ag-Ac) lo que le dota de una gran especificidad unido a la
sensibilidad de los métodos radiológicos. La técnica ha sido
prácticamente reemplazada por el método ELISA el cual mide la unión
Ag-Ac mediante colorimetrías en lugar de radiometrías. Casi todas las
moléculas pueden ser antigénicas y esto se usa para que los
anticuerpos puedan unirse a esa molécula y marcarla
radiactivamente. Una buena manera de provocar que una molécula
sea antigénica está basada en que un hapteno combinado con un
coadyugante da respuesta inmune. Un coadyuvante muy usado es la
albúmina de suero bovino o BSA, por lo que al conjugar un hapteno
con BSA e introducirlo en otra especie aparecerán anticuerpos contra
el hapteno.

A.1 Tipos de RIA

A.1.1 RIA Directo

El RIA se basa en la competencia existente entre el antígeno


no marcado y una cantidad conocida del antígeno marcado
para formar los complejos AgAc o Ag*Ac. Con estos tres
componentes (Ag, Ag* y Ac) puede realizarse el ensayo en
el que manteniendo constante la cantidad de Ag* y Ac se
observará que a mayor cantidad de Ag menos Ag* queda
unido a la cantidad fija de Ac (y por tanto menos
radiactividad), lo que permitirá relacionar la radiactividad con
la concentración de Ag.

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Se obtienen anticuerpos específicos, para ello se inyectan


en un animal pequeñas cantidades en varias dosis del
antígeno muy purificado. El animal generará anticuerpos que
podrán ser recogidos del plasma sanguíneo. Se marca el
antígeno radiactivamente. El antígeno marcado debe seguir
siendo reconocible por el anticuerpo. Se añaden Ac a una
placa de titulación y quedan unidos al soporte sólido, tras lo
que se agrega el Ag* en cantidad conocida y el Ag de la
muestra problema. Se elimina el antígeno no unido por
decantación y lavado, y se determina la cantidad de marcaje
unido. Se interpola el valor obtenido en la recta de
calibración que debe haberse realizado con anterioridad.

A.1.2 RIA de Inhibición

Usado cuando no se puede marcar el antígeno.

Se inmoviliza una cantidad constante de antígeno en un


soporte sólido. Se suele saturar con BSA, leche en polvo o
caseína para que no se una nada más al soporte. Se añade
una cantidad constante de Anticuerpo marcado y el antígeno
frío a medir (o de calibrado). En este paso se establece una
competencia en la que el Ac se une al Ag fijo al soporte o al
problema.

Se eliminan el anticuerpo no inmovilizado y el antígeno


soluble y se determina la cantidad de anticuerpo marcado
que se ha inmovilizado.

Se construye una curva de calibrado representando la


cantidad de anticuerpo marcado inmovilizado frente a la
concentración de antígeno soluble añadida o bien se
interpola la radiactividad medida en esta curva de calibrado.

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A.1.3 RIA de Sandwich (IRMA)

Se inmoviliza una concentración fija del Ac1 (no marcado) en


un soporte sólido. Tras lo que se satura el soporte. Se añade
la muestra problema (o de calibrado) de Ag. Se añade Ac*2
(marcado) que se una a otro epítopo del Ag. Eliminación del
Ac*2 no unido. Se determina la cantidad de anticuerpo
marcado unido. A partir de una recta patrón se interpola el
valor obtenido para saber la concentración de Ag presente o
bien se realiza la recta de calibrado.

Unión no específica Normalmente se suelen obtener valores


de radiactividad por encima del 0 cuando [Ag]=0, esto se debe
a la unión no específica (NSB). Se suelen usar algunos
pocillos para calcular el NSB que existe (haciendo un blanco
de calibrado). Para ello se añade a un pocillo 1mL de
suero+1mL de Ag*+XmL de Ag+ (1-X)mL de suero y al no
añadir Ac se realiza el mismo proceso y al lavar se mide la
unión no específica.

Técnicas De radioinmunoensayo. RIA En Estas técnicas al


anticuerpo se une un isótopo radiactivo siendo posible la
cuantificación del complejo Ag-Ac A través de la radiactividad
emitida

B. Radioinmunoensayo (RIA)

Esta técnica fue desarrollada por Solomon A. Berson y Rosalyn


Yalow en 1960 para determinar la concentración de insulina en el
plasma sanguíneo. Por ese motivo, R. Yalow recibió el Nobel de
Medicina en 1977 (Berson murió en 1972). Hoy en día, esta
técnica se utiliza para detectar y cuantificar sustancias que se
encuentran en cantidades muy pequeñas y mezcladas con
muchas otras. Es por tanto una técnica muy sensible y muy

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específica. Utilizando anticuerpos de gran afinidad se pueden
detectar hasta picogramos de antígeno.

B.1 Fundamento

Se mezcla una cantidad constante de antígeno marcado


radioactivamente y una cantidad constante de un anticuerpo
para ese antígeno, Se produce la reacción entre antígeno (Ag)
y anticuerpo (Ac), se separa la fracción de antígeno que se ha
unido de la que permanece libre (hay varias formas de hacerlo.
En la figura inferior se utiliza un 2º anticuerpo dirigido contra el
primero), se determina la radioactividad. Si la muestra contiene
además antígeno frío (no marcado), éste competirá con el
marcado para unirse al anticuerpo, y se observará un descenso
en la medida de la radioactividad. Este descenso es
proporcional a la concentración de antígeno frío en la muestra.

C.Técnicas de ensayo inmunológico por multiplicación


Enzimática (EMIT)

La técnica de ensayo inmunológico por multiplicación enzimática


(EMIT) es un análisis sin separación en el cual se emplea una
enzima conjugada al hapteno de interés como marcador en una
reacción enzima-sustrato como sistema de detección. Este tipo de
análisis lo describieron Rubenstein y colaboradores en 1972. Su
principio es que se pueden determinar la cantidad de interacción
entre el hapteno y el anticuerpo utilizando un marcador enzimático.
Se basa en una reacción de enlace competitivo entre el hapteno de
la muestra y el hapteno conjugado con la enzima en un número
limitado de sitios de enlace con el anticuerpo. El enlace del
anticuerpo al hapteno conjugado con la enzima produce inhibición
de la actividad enzimática. Esta inhibición se debe a que el
anticuerpo interfiere estéricamente con el enlace del sustrato al sitio
catalítico de la enzima o el enlace del anticuerpo transforma la
configuración de la enzima. La cantidad de hapteno en la muestra

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determina el número de sitios para anticuerpos disponibles para


enlazar e inactivar el hapteno conjugado con la enzima. A medida
que hay más hapteno hay menos anticuerpo disponible para inhibir
la actividad enzimática, por lo que el cambio de color se observa
directamente proporcional a la cantidad de hapteno presente en la
muestra. Inmunoensayo enzimático homogéneos: en un EMIT, la
reacción inmunológica tiene lugar en un medio líquido; por tanto,
son ensayos homogéneos; la clave de este tipo de metodología
radica en que la actividad del conjugado enzimático está modulada
por la formación de complejo antígeno-anticuerpo; como ninguno
de los inmunorreactivos está inmovilizado en fase sólida, en este
caso no hace falta separar el inmunocomplejo como en el caso de
los inmunoensayos heterogéneos mediante etapas de lavado.

D. Inhibición de la hemoaglutinación (IH)

La inhibición de la hemoaglutinación se basa en la pérdida de la


capacidad hemoaglutinante de un virus al formarse el complejo
antígeno- anticuerpo. Cuando se enfrenta un virus conocido a un
virus problema, estos se unen impidiendo la hemoaglutinación vira
(provocando la HA). Esta técnica es utilizada para tipificar
(identificar) virus con capacidad hemoaglutinante presentes en una
muestra dada (virus influenza, para influenza, etc.), que al unirse a
los anticuerpos específicos, pierden esta propiedad.

Esto se demuestra haciendo reaccionar la mezcla de antígeno con


anticuerpo (suero del paciente) con glóbulo rojo, los que no se unen
y sedimentan formando un botón o punto; en ausencia del
anticuerpo específico se expresa la propiedad hemoaglutinante del
virus, que se visualiza por la formación de una malla de
aglutinación.

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D.1 Determinación de grupo sanguíneo

Los glóbulos rojos tienen un gran número de determinantes


antigénicos.

La valoración más frecuente utilizada en la hemoaglutinación,


por virtud de la cual los anticuerpos aglutinan los glóbulos rojos.
Los anticuerpos IgM, como son pentavalentes, aglutinan a los
glóbulos rojos más fácilmente y a temperaturas más bajas
(18ºC) mientras que los anticuerpos IgG aglutinan mejor a
temperaturas más altas (37ºC). En solución salina anticuerpos
IgG no suelen poder aglutinar.

En tales circunstancias el IgG es un anticuerpo incompleto y


como cubre zonas que permitirían la aglutinación de IgM, los
anticuerpos IgG son llamados frecuentemente anticuerpos
bloqueadores Las personas de grupo sanguíneo A poseen
anticuerpos anti-B y viceversa, los O tienen anticuerpos de los
2 tipos anti-A y anti-B. Pero el tipo AB tiene antígenos A y B
pero no anticuerpos.

D.2 Técnica de visualización microscópica

La microscopía es una de las herramientas más importantes de


la biología celular y molecular, ya que nos ha permitido revelar
las estructuras y formas su celulares, como el núcleo, las
mitocondrias y las membranas citoplasmáticas. Durante los
últimos años, la microscopía ha avanzado mucho,
permitiéndonos no sólo observar imágenes estáticas, sino
también, ver estructuras complejas en pleno movimiento, y así
entender mejor la dinámica celular.

La microscopía electrónica (ME) nos ha permitido ver


estructuras tan pequeñas como los virus. La ME de barrido, nos
ha permitido ver de manera nítida y con gran resolución la

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superficie de células, bacterias, membranas, dándonos una


imagen tridimensional de las mismas. Sin embargo, uno de los
más grandes avances en la microscopía fue el desarrollo de la
crio microscopía electrónica (cryo-EM), la cual – usando
temperaturas extremadamente bajas – permiten ver, de
manera directa, la forma de pequeñas estructuras como los
ribosomas y hasta ciertas proteínas y enzimas. A partir de esta
técnica se desarrolló la tomografía crioelectrónica, que toma
imágenes de la muestra, desde distintos ángulos, para resolver
la estructura tridimensional final. Esto combinado con la
cristalografía de rayos X ha sido muy útiles para el desarrollo
de la biología estructural.

Sin embargo, para usar estas técnicas se debe purificar la


estructura que queremos observar, y las imágenes son
estáticas, no podemos usar la ME in vivo. Fue así que se
desarrollaron técnicas de marcación de moléculas con tintes, y
posteriormente, con moléculas fluorescentes. Usando estas
técnicas se pudo, por ejemplo, determinar la dinámica de la
división celular, marcando con una molécula fluorescente el
ADN y con otro los microtúbulos, y ver en vivo y en directo,
como es su dinámica durante cada una de las fases de la
división celular.

Pero, muchos de los tintes y moléculas fluorescentes son


tóxicas para los organismos vivos, además, pueden perturbar
el funcionamiento mismo de las células, o sea, no es lo mismo
la migración de los cromosomas en la anafase con una
molécula accesoria (la fluorescente) que sin ella.

Así que, en los últimos años, empezaron a desarrollarse las


imágenes de resonancia magnética (MRI) a nivel celular, las
cuales se caracterizaban por una gran penetración en las

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estructuras celulares pero carecían de una buena resolución.


Fue así que aparecieron otras técnicas de imagen ópticas
complementarias a las MRI, las cuales tenían un mayor poder
de resolución espacio-temporal.

Estas nuevas técnicas de imágenes ópticas se valen de la


frecuencia de las vibraciones de los enlaces de las distintas
especies químicas (grupos funcionales) que conforman una
determinada biomolecular. Unas de ellas se basan en la
espectroscopia Reman, la cual mide la dispersión de un fotón
que choca contra un determinado enlace químico. Cada tipo de
enlace desviará el fotón de diferente manera. De esta manera
se obtendrán imágenes a partir de las vibraciones. Cada
biomoleculas tiene enlaces diferentes, y podemos usar estas
técnicas para diferenciar una especie química de otra y así
observar sólo un tipo de biomoléculas.

La primera técnica basada en este principio fue CARS


(Dispersión Reman Coherente Anti-Stokes), la cual usa tres
rayos con diferentes frecuencias, las cuales interactúan con la
muestra generando una señal óptica coherente que permite
visualizar estructuras biológicas, sin embargo presenta algunos
inconvenientes: sufre de una distorsión espectral que no
permite diferenciar fácilmente las vibraciones de la muestra de
la del fondo, limitando su sensibilidad, y no tiene una
dependencia linear con la concentración de las moléculas de la
muestra.

D.3 Investigación microscópica

Daña la complejidad de la muestra que se suelen presentar en


el análisis toxicológico, hay que recurrir a las técnicas más
variadas para poder llegar a un resultado satisfactorio, dentro
de los ensayos preliminares, uno de los que en un momento

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determinado pueden dar una orientación precisa es el


micrográfico. Se puede averiguar si un producto problema está
constituido por productos químicos, naturales, (vegetales o
animales) se estudia la forma de los cristales para identificarlos,
se observan los constituyentes vegetales féculas, tejidos,
semillas, esporas, restos de hongos etc.

En lo que respecta a componentes animales, el microscopio es


un eficaz colaboradores del análisis químico para la
identificación de sustancias de propiedades y reacciones muy
parecidas pero que, sin embargo sus derivados tienen diversos
sistemas de cristalización perfectamente diferencial por
microscopia, siempre y cuando el producto en estudio, este al
100 % de pureza, es decir, sin agentes contaminantes o
adulterantes.

5.1.4 Identificación de drogas

El examen usual para detectar el consumo reciente de drogas es el


análisis de orina que se conoce como control de drogas. También se
puede usar las matrices biológicas sangre o saliva para medirla cantidad
real de drogas al momento de la toma de muestras. En estos momentos
se describen en revistas especializadas innumerables trabajos sobre el
análisis de pelo, pero todavía la comunidad científica no llega al
consenso indispensable para determinar la exactitud, confiabilidad e
interpretación de los resultados. Se requiere mayor investigación para
llegar a establecer datos definitivos que permitan diferenciar claramente
la incorporación interna de la contaminación externa

En los controles de drogas se practican normalmente dos ensayos, uno


inicial o presuntivo, generalmente de carácter inmunológico y una prueba
de confirmación para la identificación de una sustancia específica. En el
caso presente la prueba inicial se hizo con Elisa Test Neogen
metodología de bajo costo y alta sensibilidad y el procedimiento de

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confirmación de la cocaína y sus metabolitos con el sistema
cromatografía de gases acoplada a la espectrometría de masas
(CG/EM). Con nuestra actual tecnología se ha logrado límites de
cuantificación de 0.025 ng / mg pelo y de 0.020 ng / mg de pelo con una
razón señal / ruido sobre 10, para la cocaína y benzoilecgonina,
respectivamente.

A. Marihuana

A.1 Historia

Las reseñas históricas más antiguas del uso de los derivados del
Cannabis remontan al imperio chino, en el Pen-tsao Ching
farmacopea atribuida al emperador Shen Nun en el año 2727 A.C.,
donde hace referencia tanto a sus propiedades medicinales como a
su uso para extraer fibras. En la India las referencias más antiguas
datan del año 2000 A.C., como sustancias utilizadas en ceremonias
religiosas. Desde África del Norte, llega a España para pasar a toda
la Cuenca Mediterránea occidental. Rápidamente se expande por
América Latina de manos de los españoles en la primera mitad del
siglo XVII quienes utilizaron la fibra para suministrar aparejos a la
Armada española. Se intentó su cultivo en Colombia, Perú, México
y Chile, siendo esta la única nación que desarrolló capacidad para
exportar cáñamo a España. Dado que los europeos no tenían
costumbres de utilizar Cannabis como fuente de sustancias
embriagantes, porque se consumía el alcohol, su uso se frecuentó
hacia la mitad del siglo XIX. El consumo se popularizó en el mundo
occidental en los años sesenta, en el ambiente juvenil de esa época.
Desde esa fecha, bajo diferentes nombres (hachís, marihuana,
hierba), su consumo ha ido aumentando en casi todos los países
presentando un problema de toxicomanía a escala mundial.

A.2 Origen botánico

La marihuana, cannabis o cáñamo es una planta herbácea.


Botánicamente sólo se reconoce una sola especie que la Cannabis

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sativa L., con sus variedades Indica y Americana. Es integrante de


la familia Cannabinácea y el género Cannabis. Es una planta anual
dioica (con tallo macho y tallo hembra) típica de zonas templadas;
posee una altura de 1,50 a 1,60 metros, las hojas son palmeadas
con cinco a siete hojas de color verde, alargadas y de bordes
dentados. La superficie de las hojas está cubierta por pelos
secretores cannabinoides De la resina, hojas y flores de la planta, se
elabora una sustancia psicoactiva conocida como THC
(tetrahidrocannabinol). Los dos derivados fundamentales del
cannabis son el hachís y la marihuana.

A.3 Componentes

Los principales compuestos presentes en la Cannabis sativa son los


cannabinoides. Cannabinoides: Son sustancias de naturaleza
fenólica, derivados del difenilo y del benzopireno. A este grupo
pertenecen el principio psicoactivo más importante de la marihuana
el 1-Delta-9-tetrahidrocannabinol (1-∆9 -THC) y contienen otros
cannabinoides relacionados como son: cannabinol, cannabidiol,
ácido cannabidiólico, ácido tetrahidrocannabinol-carboxílico,
cannabigerol y el cannabicromeno. 31 La planta posee además
compuestos como hidratos de carbono, terpenos, azúcares,
aminoácidos y muscarina. Debido a que algunos constituyentes son
inestables, varía la actividad biológica. El ácido cannabidiólico,
compuesto inactivo, pasa gradualmente a cannabidiol, también
inactivo, por descarboxilación. Este por condensación
intramolecular, se transforma en tetrahidrocannabinol activos, y este
por deshidrogenación, en cannabinol.

A.4 Características físico – químicas

Los cannabinoles son moléculas de tres anillos, muy liposolubles,


son de carácter neutro y por tanto no son extraíbles por soluciones

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acuosas ácidas o alcalinas. Son relativamente volátiles al contacto


con el calor. De sabor amargo y olor característico

En estado puro, tiene el aspecto de cristales a bajas temperaturas,


y se torna viscoso y pegajoso al calentarlo. El THC es poco soluble
en el agua, pero se disuelve fácilmente en la mayoría de disolventes
orgánicos cómo el etanol o el hexano. Su fórmula molecular es
C21H30O2. Y su Peso Molecular es 314.5g/mol. Su Punto de
ebullición es 200°C.

A.5 Formas de preparación y consumo

En el ámbito occidental, las preparaciones de la planta más


utilizadas son: Resina o aceite de Cannabis: Es la principal fuente
de los principios activos, contiene de 15 a 30% de THC. Es una pasta
realizada con la resina segregada por la planta hembra. Se la
consume inhalada o también en infusión.

La marihuana: Es la preparación seca y triturada de flores, hojas y


tallos, contiene de un 5 a 10% de THC, generalmente se fuma sola
o mezclada con tabaco. En la forma fumada, los consumidores lo
hacen en cachos (cigarrillos) o mediante pipas. Tras inhalar el humo,
los efectos comienzan a los 5 minutos debido a que los principios
activos se absorben rápidamente a causa de la elevada
liposolubilidad. Los efectos alcanzan su punto máximo entre los 20-
30 minutos y pueden durar tres horas. Hachís: Contiene de 10 a 20%
de THC. Se trata de un exudado resinoso, que es prensado para
adoptar forma de pastillas, se consume como cigarrillo mezclado con
tabaco. La marihuana por vía oral se puede ingerir junto con
pasteles, yogures, bizcochos, etc., o por infusiones, se absorbe más
lentamente, de 1 a 4 horas, y sus efectos pueden durar 8 horas.

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B. Cocaína

B.1 Historia Coca y Cocaína

La coca (Erithroxylon coca) es una planta originaria de Sudamérica


y las culturas precolombinas conocieron y aprovecharon sus
acciones estimulantes. Se utilizaba en forma de infusiones (Mate de
coca) o a través del coqueo que consiste en la maceración salival,
generalmente colocando las hojas debajo de la mejilla. A la llegada
de los españoles los incas hacían uso y cultivaban la coca. Las
tropas de Hernán Cortés y otros conquistadores usaban la coca
aprovechando sus efectos estimulantes para la ejecución de sus
increíbles gestas. En 1573, una ordenanza del Virrey Álvarez de
Toledo legaliza el cultivo y tráfico de las hojas de coca, obligando a
que el 10% de lo recaudado se entregue como diezmo a la iglesia.
En la ciudad de Asunción, a mediados del siglo XVII el consumo de
hojas de coca superaba las 184 toneladas. Con el nombre de “la
yerba de Paraguay ¬ la cocaína llego a Europa en el siglo XVII. En
el siglo XVI el médico sevillano Nicolás Monardes (1580) realizó la
primera descripción técnica de la coca y sus potenciales médicos,
en 1860 Nieman aísla el alcaloide puro, la cocaína a partir de las
hojas de coca y en 1883 Aschenbradt, médico militar, describe su
potencial uso para disminuir la fatiga de los soldados. (19) En el siglo
XIX se utilizó como anestésico local, especialmente en el tratamiento
de heridos de guerra, así como sustituto de la morfina, dando lugar
a la aparición de una multitud de toxicómanos. En las décadas de
los 60 y 70 se combinó su uso con el de la morfina y el de la heroína.
En la década de los 80 se consideró como la droga de moda del
momento y su uso se impulsó mucho al considerar erróneamente
que era una droga menos nociva que la heroína. En la misma época
aparece el derivado llamado crack, producto para fumar que junto
con la pasta de cocaína (se obtiene antes que la cocaína llegue a su

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proceso final), constituyen drogas más adictivas y peligrosas que la


misma cocaína.

B.2 Origen botánico de la cocaína

La cocaína es el principal alcaloide que se encuentra en las hojas de


la coca (Erythoxylon coca). La coca es un arbusto de la familia de
las eritroxiláceas, originaria de la zona tropical de los Andes, cuyo
hábitat cultural son los valles calientes y húmedos entre 600 y 1.500
metros sobre el nivel del mar, sobre todo en Perú, Bolivia, Brasil y
Chile, que aunque es originario de Sudamérica, se ha adaptado a
muy diversas zonas del globo como el norte de África, Taiwán, etc.
Hojas de coca. El arbusto de coca es una planta leñosa de color
pardo rojizo que alcanza unos 120 a 160cm de altura, que posee
flores blancas, los frutos son bayas de color rojizo y hojas verdes de
forma oval lanceolada con el borde entero de unos 4 a 8cm de largo
por 2 a 4cm de ancho. Las hojas presentan un color verde intenso
en el haz y mate en el envés, poseen un nervio central con
ramificaciones que se anastomosan entre sí.

B.3 Componentes de la coca

La planta de coca tiene un contenido de alcaloides entre el 0,1 y


0,8% siendo la cocaína el principal componente utilizado en
terapéutica como anestésico local, sobre las mucosas (ojo, faringe,
etc.). Las hojas de coca son la principal parte utilizada y contienen
aproximadamente 0,5 - 2% de alcaloides totales entre las que
tenemos: • Derivados tropánicos: Cocaína (metil-benzoil ecgonina)
constituyendo el 50-94%; cinamil cocaína (metil-cinamil ecgonina); a
y b truxilinas (estéreo-metilecgonina de los ácidos a y b truxílicos);
tropa cocaína (éster benzoílico de la pseudotropina). • Derivados del
Pirrol: Higrina. • Otras sustancias encontradas en las hojas son:
ácido cocatánico, proteínas, minerales (calcio), vitaminas, ácidos
grasos, aceites esenciales, ceras, salicilato de metilo, acetona y

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alcohol metílico. De los alcaloides contenidos en las hojas de coca;


cocaína, cinalmilcocaína y truxilinas son los más importantes.

B.4 Características físico-químicas de la cocaína

La cocaína de fórmula C17H21O4N, es el principal componente de


las hojas de coca, y desde el punto de vista químico es la
benzoilmetilecgonina. Estructura de la cocaína. La ecgonina es una
base aminoalcohólica relacionada con la atropina, el aminoalcohol
de la atropina, es por tanto un éster del ácido benzoico y una base
nitrogenada. Tiene aspecto de cristales blancos escamosos,
solubles en disolventes

B.5 Formas de presentación y consumo

Las formas de abuso de cocaína son de gran interés toxicológico, ya


que condicionan la farmacocinética, la actividad farmacológica, la
toxicidad y el grado de adicción de la droga. Las formas de
presentación de la droga para su consumo y venta en el mercado
ilícito son las siguientes:

 Hojas de coca: La absorción es muy variable que depende


del contenido de las hojas, de la preparación usada y de la
presentación o ausencia de sustancias alcalinas en la boca
del masticador. Se administra por masticado o infusión oral.
Contiene una concentración de cocaína de 0,5 -1,5% y los
efectos duran de 30 – 60 minutos.
 Pasta de coca: Denominada también sulfato de cocaína,
pasta base o simplemente pasta, es el producto bruto o no
refinado resultante del primer proceso de extracción de la
cocaína a partir de las hojas de coca. Se obtiene por
maceración de las hojas de coca con ácido sulfúrico u otros
productos químicos como álcalis, solventes orgánicos,
amoníaco, etc. Contiene de 40 – 85% de sulfato de cocaína y

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los efectos duran de 5 – 10 minutos. La pasta de coca se


fuma.

 Clorhidrato de cocaína: Es la sal de la cocaína formada con


ácido clorhídrico, se presenta en forma de cristales
escamosos blancos. Se administra por vía internasal o
intravenosa, no se fuma pues se destruye con el calor.
Contiene una concentración de cocaína de 12 – 75%, y los
efectos duran de 30-60 minutos por la vía tópica (ocular,
genital, intranasal) y de 10-20 minutos por vía parenteral
(endovenosa, subcutánea, intramuscular). Es la única sal
utilizada en terapéutica, usado en algunos casos para la
anestesia de mucosas.
 Cocaína base: Se obtiene mezclando el clorhidrato de
cocaína con una solución básica (amoniaco, hidróxido de
sodio, o bicarbonato de sodio), luego se filtra el precipitado o
se disuelve con éter y se deja que este se evapore. Existen
dos formas de consumo: • El free base o base libre proviene
de la extracción del clorhidrato de cocaína con solventes
volátiles (éter) a muy alta temperatura (800°C), y al
evaporarse el éter por el calor, deja como precipitado los
cristales casi puros de cocaína base, muy potente, que se
consume por inhalación.
 El crack: es una forma de cocaína base en la que se ha
suprimido el átomo de cloro dejando la cocaína sola. El crack
se obtiene añadiendo amoníaco a una solución acuosa de
clorhidrato de cocaína en presencia de bicarbonato de sodio
para alcalinizarla, se calienta a 98°C, Se usa inhalando el
humo después de haberla calentado.

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C. Alcohol etílico

El alcohol etílico es la sustancia psicoactiva de mayor consumo en el


mundo y en Colombia. De acuerdo con el informe mundial sobre el
consumo de drogas de la ONU de 2004, se estima que en el mundo
cerca de 2.600 millones de personas lo consumen ya sea en forma
ocasional, habitual, abusiva o adictiva. En Colombia, el programa
presidencial RUMBOS estimó en 2001, que el 89.7% de los estudiantes
universitarios eran consumidores habituales de alcohol etílico. Esta
sustancia también es la más utilizada en Colombia como sustancia de
inicio para el consumo habitual de otras sustancias psicoactivas.

El etanol cuando se consume en forma continuada y frecuente produce


efectos adversos agudos y crónicos en la salud humana. En
consumidores crónicos de alcohol, se han comprobado efectos adversos
nutricionales, neurológicos, hepáticos y teratogénico. En intoxicación
aguda se pueden presentar alteraciones en el sistema nervioso central,
gastrointestinal, endocrino y en el equilibrio ácido básico especialmente.

El consumo de etanol también se ha asociado con la presentación de


varias alteraciones sociales como incremento en los índices de violencia
intrafamiliar, violencia general, actos delictivos y accidentes de tránsito.

Sus altos índices de consumo, su comprobado efecto tóxico sobre la


salud, sus repercusiones negativas sobre los roles sociales del individuo,
unidos al hecho de ser una sustancia legal y socialmente aceptada,
señalan el consumo incontrolado de bebidas alcohólicas como un
verdadero problema de salud pública, sobre el cual es necesario llamar
la atención.

C.1 Aspectos toxicocinéticos

El etanol es una sustancia que se puede administrar de diversas


formas y absorber por múltiples vías. Como sustancia psicoactiva, la
principal y casi exclusiva vía de administración es la oral. El proceso

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de absorción gastrointestinal se inicia inmediatamente después de


su ingestión. La superficie de mayor absorción es la primera porción
del intestino delgado, con aproximadamente 70 por ciento; en el
estómago se absorbe un 20 por ciento y en el Colon un 10 %. Su
absorción por tracto digestivo se realiza en un período de dos a seis
horas y puede ser modificada por varios factores como el
vaciamiento gástrico acelerado y la presencia o ausencia de
alimentos en el estómago

Por vía dérmica también se puede absorber, aunque su absorción


es limitada. La administración por vía endovenosa es utilizada en
forma terapéutica en el tratamiento de la intoxicación por alcohol
metílico o por etilenglicol

Una vez absorbido, los tejidos donde se concentra en mayor


proporción son en su orden: cerebro, sangre, ojo y líquido
cefalorraquídeo. Atraviesa las barreras feto placentaria y
hematoencefálica.

El 98% del etanol absorbido realiza su proceso de biotransformación


en el hígado, con una velocidad de 10 ml/hora, utilizando para ello
tres vías metabólicas: vía de la enzima alcohol deshidrogenasa, vía
del sistema microsomal de oxidación (MEOS) y vía de las catalasas.

El metabolismo del etanol tiene diferencias en los individuos, de


acuerdo a sus características enzimáticas, ya que existen
acetiladores rápidos y acetiladores lentos, lo que va a incidir
directamente en su velocidad de biotransformación. Como ejemplos
de acetiladores lentos están los alcohólicos crónicos, personas con
hepatopatías de diversa etiología, niños lactantes y personas
seniles. La vía de la enzima alcohol deshidrogenasa es la más
utilizada en el individuo normal, mientras que la vía del sistema
microsomal de oxidación posee una mayor actividad en el alcohólico
crónico, esta segunda vía produce una depuración metabólica

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acelerada aumentando la concentración sanguínea de acetaldehído


y acetato.

La velocidad de eliminación del etanol es aproximadamente 100


mg/Kg/hora en un adulto medio de 70 kilos. Como la mayor parte del
etanol absorbido se oxida, la eliminación es pulmonar (50-60%),
entero hepática (25-30%), renal (5-7%) y el resto se elimina en
pequeñas cantidades en sudor, lágrimas, jugo gástrico, saliva y
leche materna.

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CONCLUSIONES

 Se describieron los diferentes tipos de muestra que se utiliza en el


laboratorio de toxicología para el reconocimiento del toxico.
 Se realizaron la identificación de sustancia toxicas en muestras tomadas
a personas vivas y occisos mediante la técnica de cromatografía de capa
fina.
 Se conocieron los sistemas de solventes para la identificación de
sustancias toxicas en diferentes muestras biológicas mediante la
cromatografía de capa fina.
 Se cuantificó el alcohol presente en las muestras de sangre.

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RECOMENDACIONES

 Poner en práctica la bioseguridad desde el ingreso al laboratorio, en el


desarrollo de la práctica hasta la culminación.
 Que se trabaje con mucha precaución, con los materiales adecuados
debido a que se trabaja con sustancias toxicas muchas veces peligrosas.
 Tener un lugar apropiado donde se pueda eliminar el desecho biológico
toxico para que no exista contaminación en el laboratorio de Toxicología.

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ANEXOS

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Muestra de Marihuana y Pasta básica de Cocaína

Reactivos usados en la práctica del laboratorio de toxicología


para identificar drogas y sus adulterantes

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Realizando el sembrado de la muestra en placa de silica gel

Colocando la placa en la cubeta cromatográfica en contacto


con la fase móvil.

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Realizando la medición de pH en muestra de orina en el


laboratorio de toxicología

Identificación de Benzodiacepinas en muestra de orina el resultado


es positivo

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Identificación de drogas y sus adulterantes por medio de los reactivos

Muestra de sangre

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Identificación de dosaje etílico por el método de Conway; muestra de


sangre positivo

Identificación de
dosaje etílico por el
Método de Shefftel
Modificado

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Identificación de compuestos organofosforado; observamos de todo


tipo (Rodenticidas, Carbamatos, Plaquicidas etc.)

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Triturando la muestra (cerebro), para facilitar el proceso en la


Identificación de Plaguicidas en el laboratorio de toxicología

Realizando la filtración de la muestra con la ayuda de una gasa

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Colocando las muestras de alcohol etílico en sangre por


el Método de Conway en el horno a 60° x 15 minutos

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Realizando la lectura con la ayuda del


Espectrofotómetro a 420 nm. de la muestra a analizar

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Realizando la prueba
rápida para ver si la
persona esta con
indicios de tener
alcohol en la sangre

RESULTADOS OBTENIDOS SANIDAD DE LA PNP


LEY N° 27753

Técnica Head space

Técnica Head space

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GLOSARIO DE TÉRMINOS

Alcoholímetro: Aparato usado para apreciar la graduación alcohólica de


un líquido.
Agente Químico: Elemento, sustancia o compuesto químico, natural o
sintético, presente en cualquier situación de exposición.
Agente Toxico: Cualquier sustancia, elemento o compuesto químico que,
absorbido por el organismo, es capaz de producir un daño, aun a bajas
dosis.
Antídoto: Sustancia capaz de contrarrestar o reducir el efecto de una
sustancia potencialmente tóxica mediante una acción química
relativamente específica.
Cromatografía: Es un método físico de separación en el que los
componentes que se han de separar se distribuyen entre dos fases, una
de las cuales está en reposo (fase estacionaria, F.E.) mientras que la otra
(fase móvil, F.M.) se mueve en una dirección definida.
Cadena de frío: Es una cadena de suministro de temperatura controlada.
Una cadena de frío que se mantiene intacta garantiza al consumidor que
el producto de consumo que recibe se ha mantenido dentro de un intervalo
de temperaturas durante la producción, el transporte, el almacenamiento
y la venta.
Cadena de custodia: Es el procedimiento mediante el cual se asegura la
integridad de la muestra desde su toma hasta la emisión del informe.
Concentración: Cantidad de una sustancia, expresada en peso o en
moles (S), por unidad de peso o volumen del medio en que se encuentra.
Concentración letal (CL): Proporción de una sustancia tóxica en un
medio, que causa la muerte después de un cierto período de exposición.
Dosis terapéutica (Dt): Cantidad mínima de sustancia que careciendo de
efectos tóxicos presenta una acción favorable
Dosis tóxica (DT): Cantidad de sustancia capaz de manifestar un efecto
tóxico Dosis tóxica mínima (DTm): cantidad más baja de sustancia capaz
de manifestar un efecto tóxico.

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Dosis letal (DL): Cantidad de sustancia que resulta mortal al ser


administrada Dosis letal mínima (DLm; DL01): cantidad mínima de
sustancia que resulta mortal al ser administrada.
Dosaje etílico: Es la determinación de la concentración de alcohol etílico
en una muestra biológica reportado en gramos por litro de sangre (g/L).
Droga: Cualquier sustancia que cuando es absorbida por organismos
puede modificarles una o más de sus funciones. Forma bruta o extracto
de productos naturales, de aplicación en la industria, las artes o la
farmacia.
Exposición: Situación que hace posible la penetración o absorción de
una sustancia tóxica por un organismo vivo.
Espectrofotometría: Es la medición de la cantidad de energía radiante
que absorbe o transmite un sistema químico en función de la longitud de
onda; es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones
químicas y bioquímicas.
Incautación: Apropiación por parte de la autoridad competente de un
objeto, mercancía o bien propiedad de una persona.
Intoxicación: Proceso patológico, con signos y síntomas clínicos,
causado por una sustancia de origen exógeno o endógeno.
Microscópica: Todo aquello que no se puede ver a simple vista y que
para poder verlo es necesario aumentar la forma de verlo mediante un
microscopio. Según esta definición un cuerpo es microscópico cuando
solo es posible verlo mediante un microscopio.
Moléculas polares: Son uniones covalentes en las que dos o más
átomos comparten electrones hasta tener ambos ocho en su último orbital.
Las polares se dan entre elementos con distinta electronegatividad o
capacidad de atraer electrones, como ocurre por ejemplo en el caso del
H2O (agua). Las no polares se dan entre átomos del mismo elemento, ya
que tienen igual electronegatividad. Un ejemplo de ellas es el O2
(oxígeno).

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Nocivo: Agente que, tras contacto o absorción, puede causar enfermedad


o efectos adversos, bien al tiempo de la exposición o posteriormente, en
la generación presente o las futuras.
Peligro: Posibilidad que tiene una sustancia de provocar un efecto
adverso, una vez dentro del organismo.
Residuos patológicos: Es aquel que posee características infecciosas
que pueden generar enfermedades en la persona.
Riesgo: Frecuencia con la que cabe esperar que se presenten los efectos
indeseables que proceden de la exposición a un agente tóxico
(probabilidad) Toma: cantidad que se ingiere de una sola vez Dosis:
cantidad (g o mg) que se absorbe en 24 h por unidad de peso corporal
(Kg) en una o varias tomas Nivel sin efecto observable (NISEO): Máxima
cantidad de sustancia a la que no se detecta ningún tipo de actividad.
Solventes: es una sustancia en la que se diluye un soluto (un sólido,
líquido o gas químicamente diferente), resultando en una solución;
normalmente es el componente de una solución presente en mayor
cantidad.
Tóxicos gaseosos: Son venenos presentes en el aire que se encuentra
en estado gaseoso ingresan al cuerpo por inhalación los efectos tóxicos
pueden desarrollare muy rápidamente en forma sistémica o local en el
tacto respiratorio.
Tóxicos volátiles: Son aquellas sustancias que independientemente de
su estado físico pueden separarse del material que las contiene a través
de los siguientes métodos: destilación simple, destilación por arrastre con
vapor, entre otros.
Toxicidad: La capacidad intrínseca que posee un agente químico de
producir efecto adverso sobre un órgano.
Toxicología: Disciplina que estudia los efectos nocivos de los agentes
químicos y de los agentes físicos (agentes tóxicos) en los sistemas
biológicos y que establece además, la magnitud del daño en función de la
exposición de los organismos vivos a dichos agentes. Se ocupa de la

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“FRANKLIN ROOSEVELT”
RESOLUCIÓN N°571-2010-CONAFU
OFICINA DE SECRETARÍA ACADÉMICA DE CIENCIAS
FARMACÉUTICAS Y BIOQUÍMICA
Av. Giráldez N°542 - Huancayo

naturaleza y de los mecanismos de las lesiones y de la evaluación de los


Diversos Cambios Biológicos Producidos Por Los Agentes Nocivos.
Toxina: Sustancia venenosa producida por un organismo.
Xenobiótico: Es cualquier producto natural o artificial ajeno al organismo
y que al ingresar le produce efectos dañinos. La definición no incluye
alimentos, pero sí algunos autores incluyen en este rubro a los fármacos
Veneno: Toxina animal utilizada para autodefensa o depredación y
liberada normalmente por mordedura o picadura.
Volatilidad: Capacidad de un compuesto de evaporarse a una
determinada presión y temperatura

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