Konsentrasi Vitamin E

Konsentrasi tokoferol dalam plasma dan hati ditentukan dengan menggunakan metode,
kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC). Sistem kromatografi cair model LC10AT, kolom
tipe C18 digabungkan ke detektor UV-VIS SPD-10A, dengan deteksi pada 292 nm dan laju
aliran 1,0 ml / menit. Sebuah campuran asetonitril: diklorometana: metanol pada rasio 7: 2: 1
digunakan sebagai fase gerak.
Level Vitamin E dalam Plasma
600 l etanol absolut ditambahkan ke 300 l plasma dan dikocok selama 1 menit. Kemudian,
600 l n -heksana ditambahkan, dengan agitasi berikutnya selama 1 menit. Tabung
disentrifugasi selama 10 menit pada 3.000 rpm, 300 l dari fase organik telah dihapus. Alikuot
ini dikeringkan dalam aliran N2 (g) dan tersuspensi dalam 300 l fase gerak, dimana 20 l
disuntikkan ke dalam sistem HPLC. Konsentrasi-tokoferol dihitung menggunakan kurva
kalibrasi yang dibangun menggunakan -tocopherol standar eksternal (Sigma), dan hasilnya
dinyatakan sebagai mol / l plasma.
Level vitamin E dalam Hati
Sampel hati sekitar 200 mg dimaserasi dalam 1 ml etanol absolut dengan Potter. Satu mililiter
n -heksana ditambahkan ke homogenat, dengan agitasi berikutnya selama 1 menit. Langkah
ini diulang dua kali, dan semua 3 fasa heksan bergabung. 300 aliquot dikeringkan dalam
aliran N 2 (g) dan tersuspensi dalam 300 l fase gerak, dimana 20 l disuntikkan ke dalam
sistem HPLC. Konsentrasi of-tokoferol dihitung menggunakan kurva kalibrasi yang dibangun
menggunakan-tokoferol eksternal standar (Sigma), dan hasilnya dinyatakan sebagai nmol / g
hati.
Ektraksi RNA Total
Total RNA ExtractionTotal RNA diisolasi dari 10 mg jaringan pankreas dengan
menggunakan ekstraksi fenol-kloroform metode, seperti yang dijelaskan oleh Chomczynski
dan Sacchi [23], dari 1.0 ml Trizol (Invitrogen, Carlsbad, Calif., AS) sesuai dengan
rekomendasi pabrikan. Integritas total RNA adalah dinilai dengan elektroforesis pada gel
agarose 1%. Total RNA dikuantifikasi dengan spektrofotometer (Nano- Jatuhkan TM 1000
Spectrophotometer, Thermo Scientific) dengan mengukur absorbansi berbeda dengan a
sampel air pada panjang gelombang 260, 280 dan 230 nm, untuk mengevaluasi tingkat
kemurnian. Konsentrasi total RNA diberikan dalam ng / ml, di mana satu unit kepadatan
optik sama dengan 40 g RNA per mililiter solusi