UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE
AGRONOMIA

Practica: N ° 01 Determinacion amilolítica de la alfa amilasa

Alumno: Sergio Alonso Chavez Arevalo
Docente: Carlos Alberto León Torres
Fecha de la practica: 19/04/2018
Fecha de la presentación de informe: 25/04/2018
Grupo: mesa 1

2018
I Titulo

DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD AMILOLITICA DE LA ALFA AMILASA

II Introducción
Las enzimas son catalizadores de eficiencia y especifidad extraordinarias. En el proceso
de la reacción que catalizan. Estas aceleran la aproximación de una reacción a su
equilibrio, sin cambiar la posición de ese equilibrio.
Es decir, las enzimas como catalizadores biológicos son tan efectivas que la mayor parte
de las reacciones que ellas catalizan no se efectuarían en su ausencia dentro de un
tiempo razonable; sin que se dieran extremos de temperatura, presión o pH. Las
reacciones catalizadas por enzimas (reacciones enzimáticas) son de 10³ a 10⁷ más
rápidas que las reacciones correspondientes no catalizadas.
Por otra parte, las enzimas son muy especificas para los reactantes o sustratos sobre los
cuales actúan. La eficiencia de las enzimas no solo ahorra energía para la célula viva.
Si no también evita la formación de subproductos del metabolismo potencialmente
Tóxicos. James B. Summer cristalizó por primera vez la enzima conocida como Ureasa
en 1926 y dejó establecido que dicha entidad es una proteína. Se ha seguido en nuestros
días ciertas moléculas de RNA presentan actividad enzimática.
Las reacciones enzimáticas pueden estar medidas controlando el sustrato no
transformado ó determinando los productos formados después de un tiempo
determinados después de un tiempo determinado de incubación en condiciones
especificas de pH, temperatura, etc.

II Material
Reactivos: solución de almidon al 1% pH 6,9, solución de NaCl 0,1 M.
HCl 0,05 N. solución yodada, reactivo de Benedict cuantitativo y solución
de alfa amilasa 1%.
Instrumentos:
 6 tubos de ensayo 13 x 100mm.
 1 gradilla.
 1 piseta. 2 pipetas de 5 ml.
 2 pipetas de 5 ml.
 1 pipeta de 10ml.
III Procedimiento:
SISTEMAS DE INCUBACIÓN
1.- Marcamos con: (1A_1B) nuestros 2 primeros tubos y colocamos
respectivamente: solución de almidón bufferado al 1% 5ml_5ml, cloruro de
sodio 0.1M 1ml_1ml y agua destilada 4ml_3ml.
2.-Las agregamos con las pipetas 5ml, 2ml y 10 ml respectivamente.
3.-Colocar ambos sistemas de reacción en baño maria a 37° C por 5 minutos.
4.-Agregamos al tubo 2A alfa amilasa.
4.-Por ultimo sometemos a incubación a 37° C por 15 minutos.
DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD AMILOLITICA
1.- Marcamos (2A_2B) nuestros 2 segundos tubos y colocamos
respectivamente: HCL 0.05N 5ml_5ml.
2.-Del tubo 1A y 2A transferimos 0.5ml y 0.5ml a nuestros tubos 1B y 2B.
3.-Solución yodada (IK y IO₄K) 0.5ml_0.5ml a nuestros tubos 1B y 2B.
4.-Mezclamos uniformemente, los contenidos de los sistemas de reacción.
DETERMINACION DE LOS PRODUCTOS DE LA REACCIÓN (azucares
reductores)
1.- Marcamos (1C_2C) nuestros 2 terceros tubos y del tubo 1A y 2A
transferimos 1ml y 1ml a nuestros tubos y 5ml de benedict cualitativo la cual
tornara ambos tubos un color celeste luego de mezclar los contenidos de los
sistemas de reacción y someterlo a incubación por 10minutos notamos un
cambio de color en el tuvo 1C a color rojizo demostrando que hubo
degradación a cu2+ y el I2 se mantuvo color celeste.

IV Resultados
 Sistemas de incubación notamos nuestros tubos de ensayo 1A y 2A un color
Trasparente
 En la determinación de la actividad amilolítica luego de transferir de los tubos 1A
y 2A a los tubos 1B y 2B notamos el cambio de color de los tubos 1B_2B color
negruzco y ámbar respectivamente hubo transformación del producto a sustrato.

 Luego de tomar 1 ml de tubo 1A y 2A a los tubos 1C y 2C se le

adiciona 5 ml de benedic (Cu³⁺) color celeste la cual transformara a (Cu²⁺),
poniendo 10minutos a incubación los tubos 1C_2C al sacar de incubación se notó el
cambio de color de nuestro tubo 2C a un color rojizo lo que significo la
transformación a Cu²⁺ en cambio en el 1C se mantuvo celeste.

V Discusión
Todos en el mundo de la bioquímica cuando respecte al tema de enzimas nos vamos a regir a
base de la formula general o ecuación acción amilasa E+S = E/S E+P la cual es de
importancia cumplirla para la optima producción.
En bioquímica, un sustrato es una molécula sobre la que actúa una enzima. Las
enzimas catalizan reacciones químicas que involucran al sustrato o los sustratos. El
sustrato se une al sitio activo de la enzima, y se forma un complejo enzima-
sustrato. El sustrato por acción de la enzima es transformado en producto y es
liberado del sitio activo, quedando libre para recibir otro sustrato.
VI Conclusiones

1. Nuestros tubos 1A y 2A nos sirvieron como base para hacer reaccionar nuestros
tubos 1B _2B y 1C_2C notamos la presencia de enzimas.
2. Al agregar determinadas cantidades de los tubos 1A y 2A a nuestros tubos 1B_2B
notamos el cambio de color a negro y ámbar así notamos que hubo contacto de
todo el producto fue transformado en enzima sustrato, ya que en el tubo 1B no hubo
presencia de glucosa y en 2B si hubo glucosa
3. Al agregar determinadas cantidades de los tubos 1A y 2A a nuestros tubos 1C y 2C
y llevar a incubación notamos el cambio del tubo 2C a un color rojizo mientras el
1C se mantuvo.

VII Referencias
BIBLIOGRAFIA
1.- Horton, R.; Moran, I,.;Ochs, R; Rawn. D. y Gray Serimgeour.1993. Bioquímica.
Editorial Prentice Hall. México.
2.-Bohinski, Robert. 1991. Bioquímica. 5° Edición. Editorial Addison – Wesley liberoamericana.
Argentina.
Pag web:
3.-Descripción general sustratos. (2014). Cymit Quimica.com .España Barcelona Europa.
recuperado de: https://www.cymitquimica.com/es/productos-quimicos/sustratos/