FACULTAD DE QUÍMICA
Laboratorio de Biología Celular
PRÁCTICA 2
El Microscopio, uso y técnicas de tinción.
INTRODUCCIÓN
Sistema mecánico.
a) Base o pie. Plancha en la que descansa todo el aparato, debe mantener la mayor
estabilidad posible.
b) Columna o brazo. Articulada por una charnela a la parte posterior de la base, en
algunos aparatos se inclina a voluntad y en otros es fijo ya que tiene la inclinación
apropiada ya calculada.
c) Tubo del microscopio. Colocado en el extremo del brazo que queda en sentido
opuesto a la base. En los microscopios modernos este tubo realiza un giro de 360°
pudiendo ser monoculares o binoculares, presentan una capa de interferencia
capaz de dividir la luz entre los dos oculares sin que se pierda luminosidad. En el
interior se encuentran varias lentes que contribuyen con el sistema óptico para
formar las imágenes.
d) Revolver. Pieza giratoria colocada en el extremo inferior del tubo del microscopio,
en el que se atornillan los diferentes lentes objetivos que.
e) Platina. Placa firme y sólida con un orificio central. Se usa para colocar sobre ella
las preparaciones que se van a observar.
f) Tornillo para enfocar. Se localiza en la parte inferior del brazo, hay de dos tipos:
1. Macrométrico. Realiza un deslizamiento amplio y rápido.
2. Micrométrico. En algunos se encuentra en el tornillo Macrométrico.
Técnicas de tinción
Los colorantes más usados son: azul de metileno, cristal violeta, safranina, estos son
catiónicos y se combinan fuertemente con componentes celulares cargados
negativamente, como los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos.
Algunos colorantes teñirán mejor solo después de que la célula haya sido tratada con otra
sustancia química, que no es un colorante por sí mismo. El mordiente se combina con un
constituyente celular y lo altera de manera que ahora sí podrá atacar el colorante.
La tinción de Gram
METODOLOGÍA
Se realizaron diferentes tipos de tinciones; una tinción simple, una tinción diferencial
(tinción de Gram) y una Tinción de bacterias del suelo
Tinción de Gram
durante 1 minuto, se lavó con agua (5 segundos aprox.) Y se dejó secar para
posteriormente llevarlo a observación al microscopio.
Enfoque de un espécimen
Se subió hasta tope el condensador, enseguida se colocó la preparación en la
platina para ser vista en el objetivo de menor aumento, se cerró el diafragma del
condensador y se centró la iluminación. Una vez enfocado el espécimen se fue
subiendo de aumento para obtener una mejor resolución de la imagen, esto se
hizo con la ayuda del tornillo micrométrico.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Fueron observadas 4 tipos de muestras en el microscopio, Según la manipulación que se
le dio a cada muestra se observaron diferentes modalidades de tinción.
Tinción con cristal violeta Se utilizó un solo colorante, por lo que todas las estructuras
En esta tinción fueron empleados varios colorantes combinados los cuales tienen afinidad
por ciertas partes en la célula, la tinción de Gram se basa en colocar como colorante
primario cristal violeta, el cual tiene afinidad con el peptidoglicano de la pared bacteriana.
Posteriormente, al colocar yodo, este sirve como mordiente e impide la salida del cristal
violeta por la formación de un complejo cristal violeta-yodo que satura los espacios del
peptidoglicano de la pared bacteriana. La razón por la cual adicionar una mezcla de
alcohol-acetona, es porque esta deshidrata la pared bacteriana y cierra los poros de la
misma, también destruye la membrana externa de las bacterias Gram negativas debido a
que esta es soluble a la acción de solventes orgánicos, como la mezcla de alcohol-
acetona. Las bacterias Gram positivas, al contener una gran cantidad de peptidoglicano,
retienen con mayor fuerza este complejo, mientras que las Gram negativas no lo pueden
retener por tener menos cantidad de peptidoglicano. Por último, se coloca safranina
porque esta funciona como un colorante secundario o de contra tinción y sirve para teñir
las bacterias que no pudieron retener el complejo cristal violeta-yodo. Las bacterias Gram-
positivas y Gram-negativas tiñen de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en
la estructura de su pared celular
CONCLUSIÓN
BIBLIOGRAFÍA
Beveridge TJ, Graham LL. Surface layers of bacteria. Microbiol Rev. 1991; 55:
684-705. 15.
Coico R. Gram staining. Curr Protoc Immunol. 2001. Appendix 3: p. Appendix 3O.
http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf