RESUMEN

Staphylococcus aureus es un microorganismo muy patógeno, responsable de un espectro

amplio de manifestaciones clínicas, que van desde infecciones cutáneas superficiales como
forunculosis y foliculitis, hasta infecciones graves como neumonía necrosante, osteomielitis,
bacteriemias y endocarditis. La portación o colonización por este microorganismo se ha
clasificado en tres tipos: portador persistente, portador intermitente y no portador. Por lo
tanto, el objetivo del presente estudio consistió en determinar la prevalencia de S. aureus en
la de nariz y manos de los estudiantes de IV semestre de microbiología en la Universidad
libre de Pereira; en el cual se identificó a través de la prueba de coagulasa ya que esta es la
más acertada para determinar la existencia de Staphylococcus aureus. Obteniendo como
resultados que 5 alumnos eran portadores intermitentes.
PALABRAS CLAVE: Staphylococcus aureus, Prueba de coagulasa, Portador,
Identificación, ASMRF.

ABSTRACT
Staphylococcus aureus is a very pathogenic microorganism, responsible for a broad spectrum
of clinical diseases, ranging from superficial skin infections such as furunculosis and
folliculitis, to infections such as necrotizing pneumonia, osteomyelitis, bacteremia and
endocarditis. Carrying or colonization by this microorganism has been classified into three
types: persistent carrier, intermittent carrier and non-carrier. Therefore, the objective of the
study was to determine the prevalence of S. aureus in the nose and hands of students of the
IV semester of microbiology at the Universidad Libre de Pereira; in which it was identified
through the test of coagulase that is the most successful to determine the existence of
Staphylococcus aureus. Obtaining as results that 5 students were intermittent carriers.
KEYWORD: Staphylococcus aureus, coagulase test, carrier, identification, ASMRF.

INTRODUCCIÓN mucosas de humanos y animales. Se

Staphylococcus aureus es un
microorganismo muy patógeno,
responsable de un espectro amplio de
manifestaciones clínicas, que van desde
infecciones cutáneas superficiales como
forunculosis y foliculitis, hasta infecciones
graves como neumonía necrosante,
osteomielitis, bacteriemias y endocarditis.
Es uno de los seis microorganismos de
mayor importancia en la práctica médica
diaria coloniza normalmente la piel y las
calcula que aproximadamente el 30% de
los individuos sanos están colonizados por
este microorganismo. [1]
Por lo tanto, este es un importante
patógeno humano causante de
enfermedades hospitalarias y de la
comunidad. Su principal nicho ecológico
en humanos lo constituyen las fosas
nasales anteriores, las cuales son fuentes
potenciales de infección y un factor de
riesgo elevado para subsiguientes
infecciones invasivas. [2] Sin embargo,
también se puede portar en otras partes del
cuerpo como la piel, el periné, la
nasofaringe y, con menor frecuencia, el
tracto gastrointestinal, la vagina y las
axilas. [1]
Dicho género tiene una gran capacidad de
adaptación, por lo cual afectan a todas las
especies conocidas de mamíferos,
incluyendo a los roedores comunes de
laboratorio. Es por ello que, gracias a su
fácil propagación, pueden transmitirse de
una especie a otra, siendo frecuentes los
casos humano-animales y viceversa. [3]
Tradicionalmente, la portación o conducir a una infección metastásica y de
colonización por este microorganismo se
ha clasificado en tres tipos: portador
persistente, portador intermitente y no
portador. Son portadores persistentes los
individuos colonizados por una cepa
específica por largos períodos; se calcula
que del 10% al 35% de la población
presenta este patrón de colonización.
Portadores intermitentes son las personas
cuyas cepas colonizadoras cambian con
frecuencia; alrededor del 20% al 75% de la
población pertenece a este grupo. Y,
finalmente, se llama no portadores a
quienes nunca han estado en contacto con
S. aureus; se presume que son entre el 5%
y el 50% de las personas. [1]
La evolución natural de las infecciones por
S. aureus se puede resumir como sigue: en
neonatos, la mayoría de los niños y los
adultos serán colonizados en forma
intermitente por S. aureus, albergarán el
microorganismo en forma preferente en la
nasofaringe, ocasionalmente en la piel y
más raramente en la vagina o en forma
excepcional, en el recto o el área perineal.
Desde estos sitios S. aureus puede
contaminar cualquier sitio de la piel o
mucosas o a otras personas por
transferencia interpersonal. [4]
Cabe resaltar que las mucosas y la piel
ofrecen una barrera mecánica eficiente
contra la invasión local de los tejidos. Si
esta barrera se rompe S. aureus puede
acceder a los tejidos subyacentes y
desarrollar una lesión local característica
como es el absceso. En cualquier
momento, las bacterias pueden sobrepasar
los mecanismos fagocíticos locales y
acceder a los canales linfáticos y al
torrente sanguíneo, dando origen a una
bacteriemia estafilocócica, que puede
mal pronóstico. [4]
Características microbiológicas
El género Staphylococcus está formado
por cocos Gram positivos no móvil, con un
diámetro de 0.5 a 1.5 μm, agrupados como
células únicas, en pares, tétradas, cadenas
cortas o formando racimos de uvas. No
forma esporas y es un anaerobio
facultativo, pero crece mejor en
condiciones aerobias. La mayoría de los
estafilococos producen catalasa (enzima
capaz de desdoblar el peróxido de
hidrógeno en agua y oxígeno libre);
característica que se utiliza para
diferenciar el género Staphylococcus de
los géneros Streptococcus y Enterococcus
que son catalasa negativos. [4][5]
Identificación
La identificación de S. aureus se puede
realizar con el empleo de la tinción de
Gram y pruebas bioquímicas como:
 Prueba de la catalasa: fermentación
de glucosa, que permite diferenciar
al género Staphylococcus del
género Micrococcus, que también
 se considera una catalasa positiva
pero no fermenta la glucosa. [4]
 Prueba de la coagulasa: sigue
siendo la más utilizada. Esta
prueba se emplea para determinar
la existencia de Staphylococcus
aureus, pues dicho
microorganismo tiene la capacidad
de coagular dicha enzima. La
coagulasa es una proteína que
representa un importante factor de
virulencia. Esta prueba puede
hacerse de dos maneras: en
portaobjeto, en la cual la solución
se ha tratado previamente con
ácido etilendinitrilo tetraacético
(EDTA) y plasma de conejo. Por
otra parte, la prueba se puede
realizar en tubo, para lo cual se
inoculan 0.5 ml de una dilución de
plasma de conejo con la colonia
sospechosa. [3]
Tras el descubrimiento de la penicilina en
1928, Staphylococcus aureus adquirió
rápidamente resistencia a este antibiótico
debido a la producción de betalactamasas,
razón por la cual se crearon nuevas
penicilinas (semisintéticas), destacándose
la meticilina a la cual S. aureus con el
tiempo, también desarrolló resistencia. [6]
En los últimos años se ha observado un
considerable aumento de la resistencia
favorecido principalmente por el uso
indiscriminado de antibióticos.
Provocando así la diseminación de cepas
de S. aureus en los hospitales de todo el
mundo, lo que conlleva a uno de los
mayores retos terapéuticos en la actualidad
para la medicina. [4]
Enfermedades transmitidas por
alimentos
Staphylococcus aureus es importante no
solo porque ocasiona infecciones en
diversas partes del organismo humano,
sino porque es una de las principales
bacterias implicadas en enfermedades
transmitidas por alimentos (ETA). Tales
enfermedades son causadas por diversas
acciones, incluyendo la capacidad del
patógeno de producir toxinas. [3]
Los alimentos son de gran importancia
para la adquisición de una ETA, ya que las
personas deben tener contacto directo con
ellos para poder contaminarlos. No
obstante, cabe mencionar que existen
determinadas características
fisicoquímicas, como el pH, el grado de
humedad o la tensión atmosférica, que son
fundamentales para el desarrollo y la
colonización en el ser humano. Así, el
porcentaje de personas portadoras de
Staphylococcus aureus puede abarcar
aproximadamente 20-50% de la población
en general, siendo las manos de los
manipuladores las principales vías de
contaminación. [3]
Se ha sabido que existe una amplia
variedad de alimentos capaces de albergar
al estafilococo, pero cabe destacar que los
más susceptibles son aquellos que tienen
contacto con la piel del animal, tal es el
caso de la leche, el huevo, los productos
cárnicos como el jamón e, incluso la carne
de pollo. [3]
Estructura antigénica
Pared celular
Los estafilococos contienen polisacáridos
y proteínas antigénicos así como otras
sustancias importantes en la estructura de
la pared celular. Tiene 2 componentes
fundamentales.
  Peptidoglicano: da forma y
estabiliza al microorganismo juega
un papel importante en la
patogenia de la infección porque
actúa como endotoxina. [5]
 Ácidos teicoicos: representan el
40% del peso de la pared
bacteriana, son polímeros
específicos de especie están
ligados a los lípidos de la
membrana y actúan como
mediadores de unión entre la
bacteria y superficies mucosas por
medio de uniones específicas a la
fibronectina. [5]
Membrana Citoplasmática
Compuesta por proteínas, lípidos e
hidratos de carbono y funcionan como
barrera osmótica para la célula.
 Proteína A: se usa para una prueba
exclusiva de aglutinación con
anticuerpos monoclonales para la
identificación de Staphylococcus
aureus. [5]
 Coagulasa: proteína unida a la
membrana o libre, la coagulasa
ligada a la pared convierte el
fibrinógeno en fibrina produciendo
la coagulación del plasma. [5]
Cápsula
Algunas cepas de Staphylococcus está
cubierta por una capa de polisacáridos
externos llamados slime o cápsula
mucoide le confiere mayor adherencia y
mayor capacidad antifagocíticos. [5]
Por lo tanto, la patogenicidad de las
infecciones por Staphylococcus aureus se
relaciona por diversos componentes de la
superficie bacteriana. [3]
Factores de patogenicidad
La patogenia provocada por este
microorganismo surge cuando se produce
la combinación de los factores de
virulencia con la disminución de las
defensas del huésped; estas condiciones
propician que Staphylococcus aureus
posea características de virulencia y daño
bastante particulares. Pero la situación se
ve agravada debido a que el patógeno ha
ido desarrollando múltiple resistencia
contra los antibióticos, propiciando que
cada vez sea mucho más difícil el
tratamiento y la curación de las
enfermedades ocasionadas por esta
bacteria. [3]
Producción de toxinas
Staphylococcus aureus es un
microorganismo capaz de producir
componentes superficiales llamados
toxinas y producir enzimas extracelulares.
En general, estos componentes son
capaces de provocar severas
intoxicaciones alimentarias dependiendo
de la cantidad ingerida de alimento. Las
toxinas están divididas de acuerdo con los
efectos biológicos que producen en las
células, así como con su localización
dentro de la célula bacteriana. [3]
  Reactivos:
Solución salina estéril
vial (plasma coagulasa liofilizado)
Agua destilada estéril

 Equipos:
Autoclave
Balanza analítica
Baño maria de laboratorio
Cabina de bioseguridad
Incubadora
Mechero
Plancha de calentamiento
S. aureus contiene un DNA exógeno, Micropipeta (10 - 100 μl)
móvil, constituido por secuencias de Nevera (-80)
inserción, transposones, bacteriófagos e
islas de patogenicidad, que contienen  Instrumentación:
determinantes específicos responsables Asa bacteriológica redonda
del desarrollo de la enfermedad y Escala de McFarland
resistencia a múltiples antibióticos. La Hisopos de laboratorio
presencia de estos elementos móviles Cajas de Petri desechables
confirma la capacidad que tiene S. aureus Frascos tapa rosca (500 ml)
para intercambiar genes por transferencia Tubos tapa rosca
horizontal, tanto con los del mismo género Erlenmeyer
como con otros géneros. [4] Gradilla
Probeta
Este intercambio de los genes es la clave Sharpie o marcador
de S. aureus en la evolución, la peculiar Varilla agitadora
plasticidad genética es una explicación del Tubos eppendorf
éxito de S. aureus para colonizar como Puntas de micropipeta
para el desarrollo de enfermedades en el
humano. [4] METODOLOGÍA
El objetivo del presente estudio consistió Preparación de medios de cultivo.
en determinar la prevalencia de S. aureus Se preparan 500 ml de ASMRF (agar
en la de nariz y manos de los estudiantes
salino manitol rojo de fenol), se lleva a
de IV semestre de microbiología en la
autoclave por 25 min a 121°C a una
Universidad libre de Pereira.
atmósfera de presión. Pasado el tiempo de
MATERIALES autoclavar el ASMRF se sirve en cada caja
Petri (31 ml) y se deja solidificar, por
 Medio de cultivo: último, se somete a prueba de esterilidad
ASMRF por 24 horas. También se preparan 20 ml
Caldo nutritivo de caldo que se sirve en tubos, estos se
llevan a autoclave por 25 min a 121°C a
una atmósfera de presión. Pasado este
tiempo se saca de la autoclave y se
someten a prueba de esterilidad por 24
horas.
Obtención de muestra de fosas nasales.
Se toma un hisopo de laboratorio el cual
previamente fue esterilizado en autoclave,
este se sumerge en solución salina estéril y
se introduce en la fosa nasal al nivel del
tabique realizando un barrido para de esta
manera tomar la muestra.
Obtención de muestra de dedos y uñas.
Se toma un hisopo de laboratorio el cual
previamente fue esterilizado en autoclave,
este se sumerge en solución salina estéril y
se pasa entre las uñas haciendo un barrido,
además de las yemas de los dedos para de
esta forma obtener la muestra.
Inoculación del medio de cultivo.
Los medios de cultivo se inocularon por
una siembra por estría cruzada, donde el
inóculo se disemina con un movimiento
hacia atrás y hacia delante en cada
cuadrante girando la placa a 90°; el asa
debe esterilizarse en cada diseminación
entre cada cuadrante. El propósito de esta
técnica consiste en diluir el inóculo en
forma suficiente en la superficie del agar
para que sea posible obtener unidades
formadoras de colonias (UFC).
Lectura de resultados.
Después de 24 horas de incubación se
sacan las cajas de la incubadora, si se
observa en el agar un color amarillo
(fermentación de manitol), significa que es
un presunto portador de Staphylococcus
aureus.
Preparación del inoculo para prueba de
coagulasa.
Del medio de cultivo sembrado
anteriormente se toman UFC las cuales sean
presuntivas para S. aureus, estas se inoculan
en caldo nutritivo hasta obtener un índice de
turbidez de 0.5 en la escala de McFarland. Se
homogenizan y se usan como inoculo para la
prueba de coagulasa.
Activación del vial.
Se toma un vial con plasma coagulasa
liofilizado, se le añade agua destilada
previamente esterilizada en autoclave, se
homogeniza; cada vial dice la cantidad de
agua estéril que sele debe añadir para su
hidratación ya que esta varía entre casas
comerciales.
Prueba de coagulasa.
Para esta es necesario previamente realizar
la esterilización de tubos eppendorf en
autoclave, una vez listos se debe agregar
100 μl de plasma de conejo y 100 μl del
inoculo de las UFC presuntivas para
portados de S. aureus, se homogenizan y se
lleva a baño maria; es necesario realizar
una observación de 30 minutos, 4 horas y
24 horas, durante estos tiempos se debe
observar la formación de una nube blanca
en el fondo del tubo eppendorf
demostrándonos que es positivo, pero si
esta no se da en ninguno de los tiempos
significa que es negativo.
Procedimiento posterior a la prueba de
coagulasa.
Los tubos eppendorf que mostraron un
resultado positivo son guardados en la
nevera de -80°C para la utilización de estos
en otra práctica.
Procedimientos posteriores al
laboratorio.
El material usado durante la practica fue
descartado y esterilizado como método de
bioseguridad, bajo practicas adecuadas del
programa de manejo de residuos
peligrosos.
DICUCIÓN
S.aureos es un microorganismo patógeno
que puede producir infecciones
nosocomiales, el ser humano puede
contraer una amplia gama de
Staphylococus en los primeros años de
vida, algunos de estos se pueden encontrar
las fosas nasales, trequeas y en la epitelial
debajo de las uñas.
Se a demostrado mediante diferentes
estudio médicos que muchos de los
portadores de S.aureos contraen la bacteria
después de estar en hospitales, estos
lugares se convierten un factor de
virulencia dado que las sepas encontradas
suelen ser resistentes a los antibióticos
(http://www.scielo.org.co/pdf/recis/v14n1
/v14n1a01.pdf).
Esta bacteria se puede encontrar con
frecuencia en los frotis nasales
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