REACCIONES BIOQUIMICAS DE ESCHERICHIA COLI

PRUEBA SIM ( PRUEBA DE SULFURO, INDOL Y MOVILIDAD])

Este medio se utiliza para comprobar la motilidad, la formación de H2S y la producción de indol
por parte de la bacteria. Se siembra por picadura
La motilidad se pone de manifiesto por la turbidez difusa del medio de cultivo alrededor del canal
de la picadura. La no motilidad se caracteriza por el crecimiento producido exclusivamente a lo
largo de la línea de inoculación.
La producción de H2S se reconoce por el ennegrecimiento de la zona de crecimiento o del medio
debido a la presencia del tiosulfato sódico. Para la demostración del indol se usa el Reactivo de
Kovac, que manifiesta la degradación del triptófano por la enzima triptofanasa en indol, que se
combina con el aldehído presente en el reactivo de Kovacs, para producir un color rojo.

PRUEBA SIM PARA Escherichia Coli

Indol positivo H2S (negativo) Movilidad (+)

Presencia de
turbidez difusa
en el medio

ROJO DE METILO/ VOGES – PROSKAUER

Prueba de rojo de metilo (RM): Identifica especies de bacterias que producen ácidos a partir de
glucosa. Detecta la fermentación ácido-mixta. Se acumulan ácidos (acético, fórmico, etc.),
relativamente fuertes y bajan el pH del medio hasta 4-5. Dicho cambio de pH se detecta
añadiendo un indicador (rojo de metilo) al cultivo.
99% de positividad para cepas de E. coli.
Prueba de Voges – Proskauer (VP): En esta prueba se detecta la producción de acetil-
metilcarbinol (acetoína), el cual se convierte a diacetilo en presencia de KOH y O2 atmosférico.
El diacetilo es convertido posteriormente en un complejo rojo en presencia de α-naftol y
creatinina. La producción de acetoína es una vía alternativa del metabolismo del ácido pirúvico,
donde se producen cantidades pequeñas de ácidos mixtos que pueden ser insuficientes para dar
una prueba RM positiva. Por este motivo, la mayoría de las especies de la familia
Enterobacteriaceae son VP positivo y RM negativo y viceversa. Esta prueba es negativa para
cepas de E. coli.)
 MIO MEDIO
Movilidad Esta prueba determina la movilidad de los bacilos fermentadores.95% de positividad
para cepas de E. coli.
Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas alla de la linea de siembra.
Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra
Ornitina decarboxilasa 5% de positividad para Ornitina.
Resultado positivo: color púrpura
Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color vialáceo en la
superficie del modelo.
Prueba indol 98% de positividad para esta prueba en E. coli.
Resultado positivo: color rojo.
Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento

CITRATO DE SIMMONS
Esta prueba determina la capacidad de un microorganismo de utilizar el citrato de sodio
como única fuente de carbono para el metabolismo y crecimiento. El metabolismo del
citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a través del
ciclo del ácido tricarboxílico..
Positivo: crecimiento bacteriano con un intenso color azul en el pico de flauta
Negativo: ausencia de crecimiento y permanencia del color verde del medio de cultivo

1% de positividad para cepas de E. coli.

 TSI
Superficie alcalina/profundidad ácida (pico rojo/fondo amarrillo): el microorganismo solamente
fermenta la glucosa
Superficie ácida/profundidad ácida (pico amarillo/fondo amarrillo): el microorganismo
fermenta la glucosa, lactosa y/o sacarosa
Superficie alcalina/profundida alcalina (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo no es
fermentador de azucares.
La presencia de burbujas o la ruptura del medio de cultivo indican que el microorganismo
produce gas.

El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce H2S

LIA
El color del pico es púrpura al igual que el color de la base del tubo (todo el medio es de color
púrpura), esto nos indica que no hubo cambio en el medio, por lo tanto la descarboxilacion de la
lisina es positivo. La producción de sulfuro de hidrógeno, se visualiza por el ennegrecimiento del
medio debido a la formación de sulfuro de hierro.
Es negativo en la producción de ácido sulfhídrico y positivo en la lisina descarbosilaxa en E.
Coli.
 UREASA
Los microorganismos que hidrolizan la urea a través de la enzima ureasa, liberan amoníaco lo
cual produce un cambio de color rojo en el medio. El agar urea de Christensen permite la
detección de menores cantidades de amoníaco para aquellos microorganismos que producen
menores cantidades de ureasa se evalúan con este método.

1% de positividad para esta prueba de hidrolisis de urea en E. coli.

Prueba de Ureasa: su resultado es Negativo ( color amarillo).

PRUEBA DE FENILALANINA DESAMINASA

La determinación de la enzima fenilalanina desaminasa es útil para diferenciar inicialmente a las
especies de: Proteus, Morganella y Providencia de otros bacilos gram negativos.
Positivo: desarrollo de color verde pálido a intenso en el pico de flauta y en el líquido de
condensación
Negativo: sin cambio de color. El medio permanece amarillo debido al color del reactivo
0% de positividad para cepas de E. coli.

MOELLER MEDIO BASE PARA DECARBOXILASAS

Muchas especies bacterianas poseen enzimas que tienen la capacidad de descarboxilar o de
hidrolizar aminoácidos específicos entre ellos la arginina, lisina, ornitina en pruebas específicas,
liberando animas de reacción alcalina y CO2.
17% de positividad para Arginina.
90% de positividad para Lisina.
65% de positividad para Ornitina.
Resultado positivo: tubo prueba: color púrpura o violeta y tubo control: color amarillo.
Resultado negativo: tubo prueba y tubo control: color amarillo.
Resultado inválido: tubo control púrpura o violeta.
 Arginina
deshidrolasa (-)

Ornitina Lisina
descarboxilasa (+) descarboxilasa (+)

PRUEBA DE GELATINASA
Determina la producción de la enzima gelatinasa, la cual produce la hidrólisis de la gelatina.
Positivo: la gelatina se mantiene liquida al sacarla de la nevera, negativo: la gelatina se
solidifica
E. coli es negativa para esta
prueba

PRUEBA DE FERMENTACIÓN DE CARBOHIDRATOS:

Uso del caldo de base púrpura de bromocresol conteniendo un determinado sustrato a una
concentración del 1% para la determinación de la fermentación de carbohidratos y alcoholes
para especies de la familia Enterobacteriaceae.
 D-Sorbitol 94% de positividad. D-Adonitol 5% de positividad.
Lactosa 95% de positividad. L-Arabinosa 99% de positividad.
Sacarosa 50% de positividad. Maltosa 96% de positividad.
D-Manitol 98% de positividad.
Positivo: el medio se ve amarillo, igual a la producción de ácidos a partir de la fermentación,
igual a la utilización de carbohidratos. Puede haber una producción de gases (acumulación de
gases en el tubo de Durham)
Negativo El medio se me rojo (pH se quedó igual o aumentó). Se producen sustancias alcalinas.
LA bacteria utilizo peptonas.

CALDO ROJO DE FENOL CON DULCITOL

Para identificación bioquímica de microorganismos en base a su capacidad de fermentar el
dulcitol.El dulcitol es el carbohidrato de prueba y su fermentación se manifiesta por un cambio de
color del indicador rojo de fenol, que vira de rojo a amarillo

Escherichia coli Positivo +, en la fermentación de dulcitol

CALDO DE ROJO FENOL CON ADONITOL Ó FERMENTACIÓN DE CARBOHIDRATOS

Adonitol Escherichia coli crece en caldo de rojo fenol con Adonitol .Se incubaron
aeróbicamente durante 24 horas a 35 grados. C. El crecimiento y un cambio de color
amarillo era indicativa como positivo para fermentación de adonitol. La burbuja en el tubo
Durham era indicativa de la producción de gas

D-Adonitol 5% de positividad
microoganismos de E. Coli.

KLIGLER HIERRO AGAR

Superficie alcalina/profundidad ácida (pico rojo/fondo amarrillo): el microorganismo solamente

fermenta la glucosa
Superficie ácida/profundidad ácida (pico amarillo/fondo amarrillo): el microorganismo fermenta
la glucosa y lactosa
Superficie alcalina/profundidad alcalina (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo no es
fermentador de azucares.
La presencia de burbujas o la ruptura del medio de cultivo indican que el microorganismo
produce gas.
el ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce H2S

CALDO BÁSICO ROJO DE FENOL Y CARBOHIDRATOS

Se pueden utilizar principalmente rafinosa .Esta prueba determina la capacidad de un
organismo de fermentar (degradar) un carbohidrato especifico incorporado a un medio
basico. Las bacterias que fermentan un hidrato de carbono son por lo general
anaerobios facultativos. Este proceso se detecta observando cambios de color en
indicadores de pH a medida que se forman productos ácidos
Acido: color amarillo
Alcalino: color rojo

FERMENTACIÓN DE RAMINOSA
Fermentación de carbohidratos, con medio de cultivo base rojo de fenol y el
carbohidrato manitol
*tubo Durham
Determina si la bacteria puede usar ese carbohidrato específico.
Positivo. Amarillo puede haber producción de gases (tubo Durham)
Negativo. El medio se ve rojo
80% positivo para E.coli

Escherichia coli es 80%

(+) en fermentación de
raminosa
presencia de lactosa y ausencia de glucosa. Por lo tanto, se requiere que las bacterias
hayan sido crecidas en un medio con lactosa como el Agar TSI o el Agar MacConkey.
Positivo: observación de color amarillo en la suspensión.
Negativo: la suspensión permanece sin cambio de color.

Escherichia Coli es positiva para esta prueba