UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIAL

PRACTICA 3

ESTERELIZACION Y MEDIOS DE CULTIVO

RESUMEN / PALABRAS CLAVE

1. OBJETIVOS
 Conocer los fundamentos de esterilización de materiales y medios de cultivo.
 Preparar medios de cultivo sólido, semisólido, líquido

2. TEORÍA
2.1. Esterilización. (Definición y Tipos)
2.2. Medio de cultivo
2.3. Clasificación de medios de cultivo.
2.4. Estados del medio de cultivo.

3. PARTE EXPERIMENTAL
3.1. Material y Equipos
 Matraz Erlenmeyer
 Varilla de vidrio
 Frascos autoclavables
 Tubos de ensayo
 Tapones para tubos. (o gasa, algodón)
 Balanza
 Mechero
 Autoclave
 Pipeta
 Caja Petri
 Asa de cultivo
 Hisopos
3.2. Sustancias y reactivos
 Medios de cultivo
 Agua destilada

3.3. Procedimiento
A) Esterilización de materiales
3.3.1. Lavar el material de vidrio con detergente líquido, enjuagar con
abundante agua de la llave y al final con agua destilada.
3.3.2. Secar el material.
3.3.3. Colocar un tapón a los objetos de vidrio.
3.3.4. Introducir los hisopos en un tubo y tapar con algodón.
3.3.5. Introducir el material en el autoclave.
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B) Preparación de medios de cultivo.

3.3.6. SÓLIDO. (No autoclavar)
3.3.7. Calcular la cantidad necesaria para preparar 760 ml de medio de cultivo.
(XLD Agar). (40 ml de medio de cultivo por persona). (Tomar en cuenta
que 55.4g se necesitan para 1 litro de agua destilada).
3.3.8. Pesar la cantidad necesaria. (Realizar esto lo más rápido posible)
3.3.9. Colocar 100ml de agua destilada y suspender el Agar, luego añadir el
resto de agua y diluir.
3.3.10. Etiquetar 2 cajas Petri.
3.3.11. Colocar 20ml en cada una de las cajas Petri.
3.3.12. Sellar la caja Petri y guardarla en la gaveta.
3.3.13. LIQUIDO (AUTOCLAVE)
3.3.14. Calcular la cantidad necesaria para preparar 12 ml de medio de cultivo.
(Agua peptonada). (12 ml de medio de cultivo por persona). (Tomar en
cuenta que 40 g se necesitan para 1 litro de agua destilada).
3.3.15. Pesar la cantidad necesaria. (Realizar esto lo más rápido posible)
3.3.16. Colocar 100ml de agua destilada y suspender el líquido, luego añadir el
resto de agua y diluir.
3.3.17. Calentar hasta que clarifique.
3.3.18. Colocar en el autoclave en un frasco autoclavable y comenzar el
autoclavado, realizarlo hasta que la temperatura sea estable.
3.3.19. Dejar salir la presión y esperar que el autoclave se enfrié. Abrir con
cuidado.
3.3.20. Colocar 12 ml de medio de cultivo en 2 tubos de ensayo, taponarlos y
etiquetarlos.
3.3.21. SÓLIDOS.
3.3.22. .Calcular la cantidad necesaria para preparar 360 ml de Brolacin Agar y
760 ml de M-HPC. (40 ml cada persona por cada medio). (tome en cuenta
que 52,44 g y 6 g por 1 Litro es necesario respectivamente)
3.3.23. Pesar la cantidad necesaria. (Realizar esto lo más rápido posible)
3.3.24. Colocar 100 ml de agua destilada y luego el medio, luego aforar a los
respectivos volúmenes.
3.3.25. Repetir desde 3.3.18.
3.3.26. Colocar 20 ml en cada una de las cajas Petri.
3.3.27. SEMISOLIDOS.
3.3.28. Repetir desde 3.3.15.
3.3.29. Colocar 20 ml del caldo Lauril en un matraz de 50ml y calcular la
cantidad necesaria de agar-agar para obtener un medio semisólido. (a 1
litro de medio se agregan 2,0 g de agar-agar)
3.3.30. Tapar el matraz y calentar hasta disolver totalmente
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3.3.31. Colocar 10ml en 2 tubos de 16x150.Tapar cada uno de los tubos con
algodón y etiquetarlos
C) Disposición de los medios de cultivo preparados.
3.3.32. Medio sólido sin autoclave.
3.3.33. Dejar solidificar en las cajas Petri.
3.3.34. Hisopar la superficie (celulares monedas manos o piso) que desee para
comprobar la existencia de microorganismos.
3.3.35. Realizar la siembra sobre el cultivo.
3.3.36. Medio sólido con autoclave.
3.3.37. Repetir desde 3.3.32.
3.3.38. Medio líquido.
3.3.39. Con un asa, inocular el medio líquido, sumergiéndola y moviéndola en el
medio.
3.3.40. Medio semisólido.
3.3.41. Con un asa de cultivo pinchar el medio semisólido hasta la mitad.

1. DATOS
4.1 Datos Experimentales.
Tabla 4.1-1
Preparación de medios de cultivo
Medio de cultivo Observación
Líquido

Semisólido
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Sólido

Sólido sin Auto clavar

2. RESULTADOS
Tabla 5-1
Crecimiento microbiano.
Medio de cultivo Desarrollo Observación
Líquido

Semisólido
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Sólido

Sólido sin
autoclavar

+ = Desarrollo microbiano
-. = No hubo desarrollo.

3. DISCUSIÓN
4. CONCLUSIONES
5. CUESTIONARIO.
5.1.¿Qué es una sustancia termolábil? y ¿Cómo se esteriliza?
5.2.¿Qué significa termo resistencia en Microbiología?
5.3.¿Qué tipo de indicadores se utilizan para verificar el proceso de esterilización?
5.4.¿Qué es una espora bacteriana?
5.5. Llenar el siguiente cuadro:
PROCESO O EQUIPO Y TIPO DE MECANISMO
MÉTODO CONDICIONES MATERIAL DE MUERTE
CELULAR

Tindalización
Pasteurización
Filtración
Radiaciones
Gases
Esterilización
seco

5.6. ¿Qué es el agar? Menciona la forma de obtención, así como su uso.

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5.7.Investiga la fórmula y preparación de los medios de cultivo indicados en el siguiente cuadro y

completa la información del mismo.
MEDIO DE CULTIVO COMPUESTO (S) QUE LO TIPO DE CARACTERÍSTICAS
TIPO DE MEDIO DE HACEN SELECTIVO O MICROORGANISMOS QUE COLONIALES DE LOS
CULTIVO (Selectivo, DIFERENCIAL CRECEN EN EL MEDIO MICROORGANISMOS QUE
diferencial etc) CRECEN

Agar CASOY o caseína soya

Caldo Tioglicolato

Agar Sabouraud

Agar eosina azul de

metileno (EMB)
Macconkey Agar
Agar cetrimida
Agar sangre
Tripticasa soya agar TSA
Agar Nutritivo

6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
6.1. Bibliografía.

7. ANEXOS
7.1.Medios de cultivo.
7.2.Crecimiento en los diferentes medios de cultivo.