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CAPÍTULO UNO 1A CLASIFICACIÓN DE MÉTODOS


ANALÍTICOS

Introducción Los métodos analíticos se clasifican con frecuencia en


clásicos o instrumentales. Los clásicos, a veces llama-
dos métodos de química húmeda, precedieron a los
métodos instrumentales por un siglo o más.

1A.1 Métodos clásicos


En la época temprana de la química la mayor parte de
los análisis se ejecutaban separando los componen-
tes de interés, los analitos, que se encontraban en una
muestra mediante precipitación, extracción o desti-
lación. En el caso de los análisis cualitativos, los com-
ponentes separados se trataban después con reactivos
que originaban productos que se podían identificar
por su color, por sus temperaturas de ebullición o de
fusión, sus solubilidades en una serie de disolventes,
sus olores, sus actividades ópticas o por sus índices de
refracción. En el caso de los análisis cuantitativos, la
a química analítica trata de los métodos

L
cantidad de analito se determinaba mediante medicio-
para determinar la composición química nes gravimétricas o volumétricas.
de muestras de materia. Un método En las mediciones gravimétricas se determinaba la
masa del analito o de algún compuesto producido a
cualitativo proporciona información relacionada
partir de él. En los procedimientos volumétricos, tam-
con la identidad de la especie atómica o molecular bién llamados titulométricos, se medía el volumen o la
o de los grupos funcionales que están en la masa de un reactivo estándar necesario para reaccio-
muestra. En cambio, un método cuantitativo nar por completo con el analito.
Estos métodos clásicos para separar y determinar
proporciona información numérica como la
analitos se usan todavía en muchos laboratorios. Sin
cantidad relativa de uno o más de estos embargo, el grado de su aplicación general está dis-
componentes. minuyendo con el paso del tiempo y con el surgimiento
de métodos instrumentales para reemplazarlos.

1A.2 Métodos instrumentales


A principios del siglo XX, los científicos empezaron a
explotar fenómenos distintos de los usados en los mé-
todos clásicos para resolver problemas analíticos. Por
tanto, la medición de propiedades físicas del anali-
to, tales como conductividad, potencial de electrodo,
absorción de la luz o emisión de la luz, relación masa/
carga y fluorescencia empezaron a usarse en el análisis
cuantitativo. Además, técnicas cromatográficas y elec-
troforéticas muy efectivas empezaron a reemplazar la
destilación, la extracción y la precipitación para la se-
A lo largo de todo el libro este logotipo indica paración de componentes de mezclas complejas antes
una oportunidad para estudiar en línea. Visite de su determinación cualitativa o cuantitativa. Estos
el sitio de red http://latinoamerica.cengage.com /skoog métodos más recientes para separar y determinar es-
para revisar clases interactivas, simulaciones guiadas pecies químicas se conocen como métodos instrumen-
y ejercicios. tales de análisis.
1
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2 Capítulo 1 Introducción

Muchos de los fenómenos sobre los que se apoyan radiación electromagnética de una región selecciona-
los métodos instrumentales se han conocido desde ha- da del espectro; la aplicación de una cantidad eléctrica,
ce un siglo o más. Sin embargo, su aplicación por parte como voltaje, corriente o carga; o tal vez formas in-
de la mayoría de los científicos se retrasó por la caren- trínsecas más tenues del mismo analito.
cia de instrumentos confiables y sencillos. De hecho, Observe que las primeras seis entradas de la tabla
el desarrollo de los modernos métodos instrumentales 1.1 se relacionan con interacciones del analito con la
de análisis es paralelo al desarrollo de la electrónica y radiación electromagnética. En la primera propiedad,
la industria de la computación. el analito produce la energía radiante; las siguientes
cinco propiedades se relacionan con cambios en la ra-
diación electromagnética provocados por su interac-
ción con la muestra. Luego siguen cuatro propiedades
1B TIPOS DE MÉTODOS eléctricas. Para finalizar, se agrupan cinco propieda-
INSTRUMENTALES des diversas: masa, relación masa-carga, velocidad de
reacción, características térmicas y radiactividad.
Considere primero algunas características químicas y La segunda columna de la tabla 1.1 lista los méto-
físicas que son útiles en el análisis cualitativo o cuanti- dos instrumentales que se basan en las propiedades
tativo. En la tabla 1.1 se enlista la mayor parte de las físicas y químicas. Dése cuenta de que no siempre es fá-
propiedades características que se usan en la actua- cil elegir el método óptimo de entre las técnicas ins-
lidad en el análisis instrumental. La mayor parte de trumentales disponibles y sus equivalentes clásicos.
ellas requiere una fuente de energía para estimular una Algunas técnicas instrumentales son más sensibles que
respuesta que se puede medir en un analito. Por ejem- las técnicas clásicas, pero otras no. Con ciertas combi-
plo, en la emisión atómica se requiere un aumento de naciones de elementos o de compuestos, un método
temperatura del analito para producir primero átomos instrumental puede ser más selectivo, pero con otras
de analito gaseosos y luego para excitarlos y llevarlos a un método gravimétrico o volumétrico podría sufrir
estados de energía superiores. Entonces, los átomos menos interferencia. Igualmente difíciles de plantear
en estado excitado emiten radiación electromagnética son las generalizaciones con base en la exactitud, la
característica, la cual es medida por un instrumento. conveniencia o el tiempo necesario. No siempre es
Las fuentes de energía pueden tomar la forma de un cierto que los procedimientos instrumentales emplean
cambio térmico rápido como en el ejemplo anterior; la aparatos más complicados o más costosos.

TABLA 1.1 Propiedades químicas y físicas usadas en los métodos instrumentales

Propiedades características Métodos instrumentales

Emisión de radiación Espectroscopia de emisión (rayos X, UV, luz visible, de electrones, de Auger);
fluorescencia, fosforescencia y luminiscencia (rayos X, UV y luz visible)
Absorción de radiación Espectrofotometría y fotometría (rayos X, UV, luz visible, IR); espectroscopia fotoacústica;
resonancia magnética nuclear y espectroscopia de resonancia de espín electrónico
Dispersión de radiación Turbidimetría; nefelometría; espectroscopia Raman
Refracción de radiación Refractrometría; interferometría
Difracción de radiación Métodos de rayos X y difracción electrónica
Rotación de radiación Polarimetría; dispersión óptica rotatoria; dicroísmo circular
Potencial eléctrico Potenciometría; cronopotenciometría
Carga eléctrica Coulombimetría
Corriente eléctrica Amperometría; polarografía
Resistencia eléctrica Conductometría
Masa Gravimetría (microbalanza de cristal de cuarzo)
Razón masa/carga Espectrometría de masas
Velocidad de reacción Métodos cinéticos
Características térmicas Gravimetría térmica y titulometría; calorimetría de barrido diferencial; análisis térmicos
diferenciales; métodos conductimétricos térmicos
Radiactividad Métodos de activación y de dilución de isótopos
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1C Instrumentos para análisis 3

Como ya se mencionó antes, además de la gran can- y la relación de estas intensidades proporciona una
tidad de métodos enlistados en la segunda columna de medida de la concentración del analito.
la tabla 1.1, hay un grupo de procedimientos instru- En general, los instrumentos para análisis químico
mentales que se utilizan para separar y resolver com- constan de sólo unos cuantos elementos básicos, al-
puestos relacionados estrechamente. Muchas de estas gunos de los cuales se enlistan en la tabla 1.2. Con el
técnicas se basan en la cromatografía, la extracción fin de entender las relaciones entre las piezas de estos
mediante disolventes o la electroforesis. Una de las ca- instrumentos y el flujo de información desde las ca-
racterísticas que se mencionan en la tabla 1.1 se suele racterísticas del analito, pasando por todos los com-
usar para completar el análisis después de las separa- ponentes hasta los resultados numéricos o gráficas
ciones cromatográficas. De esta manera, por ejemplo, que produce el instrumento, conviene explorar cómo
la conductividad térmica, la absorción UV e IR, el ín- se puede representar y transformar la información de
dice de refracción y la conductancia eléctrica se usan interés.
con este objetivo.
Este texto trata sobre los principios, las aplicacio- 1C.1 Dominios de los datos
nes y las características de rendimiento de los métodos
instrumentales de la tabla 1.1, así como de los proce- El proceso de medición se vale de una gran diversidad
dimientos de separación electroforética y cromatográ- de dispositivos que convierten la información de una
fica. No se estudian los métodos clásicos porque se forma en otra. Antes de investigar cómo funciona el
supone que el lector ya estudió antes estas técnicas. instrumento, vale la pena entender la manera en que la
información se puede codificar o representar mediante
características físicas y químicas, y en particular por
1C INSTRUMENTOS PARA ANÁLISIS medio de señales eléctricas, como la corriente, el vol-
taje y la carga. Los diversos modos de codificar la in-
Un instrumento para análisis químico convierte la in- formación se llaman dominios de los datos. Con base
formación acerca de las características físicas o quí- en este concepto se desarrolló un esquema de clasifi-
micas de un analito en datos que puede manipular e cación que simplifica en gran medida el análisis de los
interpretar el ser humano. Por tanto, un instrumento sistemas instrumentales y facilita la comprensión del
analítico se puede considerar como un dispositivo de proceso de medición.1 Como se ilustra en el mapa
comunicación entre el sistema motivo de estudio y el del dominio de los datos de la figura 1.2, los domi-
investigador. Para recuperar la información deseada nios de los datos se podrían clasificar en dominios no
del analito, es necesario proporcionar un estímulo, el eléctricos y dominios eléctricos.
cual está casi siempre en la forma de energía electro-
magnética, eléctrica, mecánica o nuclear, como se ilus-
1C.2 Dominios no eléctricos
tra en la figura 1.1. El estímulo extrae una respuesta
del sistema en estudio cuya naturaleza y magnitud es- El proceso de medición empieza y termina en los do-
tán regidas por las leyes fundamentales de la química y minios no eléctricos. La información física y química
la física. La información resultante está contenida en que interesa en un experimento particular reside en
los fenómenos que resultan de la interacción del es- estos dominios de datos. Entre estas características es-
tímulo con el analito. Un ejemplo común es pasar una tán la longitud, la densidad, la composición química, la
banda angosta de longitudes de onda de luz visible a intensidad de la luz, la presión y otras que se propor-
través de una muestra para medir qué tanto es ab- cionan en la primera columna de la tabla 1.1.
sorbida por el analito. La intensidad de la luz se deter- Es posible tomar una medida y hacer que la infor-
mina antes y después de la interacción con la muestra, mación radique del todo en los dominios no eléctricos.
Por ejemplo, la determinación de la masa de un objeto
mediante una balanza mecánica de brazos iguales
compara la masa del objeto, el cual se coloca en uno
Estímulo Respuesta de los platos de la balanza, y los pesos patrones que
se sitúan en el otro. El experimentador codifica di-
Fuente Sistema Información rectamente la información que representa la masa del
de energía en analítica
estudio
objeto en unidades estándar, y él mismo proporciona

FIGURA 1.1 Diagrama de bloques en el que se muestra el


proceso global de una medición con instrumentos. 1 C. G. Enke, Anal. Chem., 1971, 43, p. 69A.
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4 Capítulo 1 Introducción

TABLA 1.2 Algunos ejemplos de partes de instrumentos.

Dominio de Procesador
Fuente los datos de de la señal/
de energía Información Clasificador de Transductor la información Lectura de
Instrumento (estímulo) analítica la información de entrada transducida salida

Fotómetro Lámpara de Haz luminoso Filtro Fotodiodo Corriente Amplificador,


tungsteno atenuado eléctrica digitalizador
pantalla de
diodos emisores
de luz
Espectrómetro Plasma de Radiación UV Monocromador Tubo Corriente Amplificador,
de emisión acoplamiento o visible fotomultiplicador eléctrica digitalizador,
atómica inductivo pantalla digital
Coulombímetro Fuente de Carga requerida Potencial Electrodos Tiempo Amplificador,
corriente para reducir de celda reloj digital
directa u oxidar
el analito
Medidor de pH Muestra/ Actividad del Electrodo Electrodos de Potencial Amplificador,
Electrodo ion hidrógeno de vidrio vidrio y calomel eléctrico digitalizador,
de vidrio pantalla digital
Espectrómetro Fuente Razón Analizador Multiplicador Corriente Amplificador,
de masas de iones masa-carga de masa electrónico eléctrica digitalizador,
sistema
computarizado
Cromatografía de Llama Concentración Columna Electrodos Corriente Electrómetro,
gases con detector de iones contra cromatográfica polarizados eléctrica digitalizador,
de ionización de tiempo sistema
llama computarizado

la información que procesa sumando las masas para


Dominios no eléctricos obtener un número. En otras balanzas mecánicas, la
fuerza gravitacional que actúa sobre una masa se am-
plifica en forma mecánica haciendo uno de los brazos
de la balanza más largo que el otro, lo cual incrementa
de la resolución de la medida.
Dominio ón ala
físico y c i
si sc
La determinación de las dimensiones lineales de un
Po la e objeto mediante una regla y las medidas del volumen
químico
o de una muestra de líquido por medio de un recipiente
Númer
graduado son otros ejemplos de medición efectuada
te En par exclusivamente en dominios no eléctricos. Estas me-
Corrien alelo
didas se relacionan a menudo con métodos analíticos
Anchura del pulso

ital

l En
cia ser clásicos. El surgimiento de los procesadores de seña-
ten
Dig

ie
Ana

Po

les electrónicos baratos, los transductores sensibles y


cia
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óg

pu
rg

los dispositivos que proporcionan las lecturas ocasio-


uen
ico

Ca

to
Fase
Frec

nó el desarrollo de una gran diversidad de instrumen-


tos electrónicos, los cuales reciben la información de
Tiempo los dominios no eléctricos, la procesan en los dominios
Dominios eléctricos
eléctricos y, para finalizar, la presentan en una forma
no electrónica. Los instrumentos electrónicos proce-
FIGURA 1.2 Mapa del dominio de los datos. La mitad san la información y la pasan de un dominio a otro en
superior sombreada del mapa consta de dominios no
eléctricos. La mitad inferior está constituida por domi-
nios eléctricos. Observe que el dominio digital abarca Clases interactivas: aprenda más acerca de los
tanto los dominios eléctricos como los no eléctricos. dominios de los datos.
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1C Instrumentos para análisis 5

forma análoga a la multiplicación de masa en las ba- dominios de los datos que son necesarias para llegar a
lanzas mecánicas de brazos desiguales. Puesto que estos conocer una cantidad relacionada con la intensidad.
dispositivos se encuentran con facilidad en el mercado La intensidad de la fluorescencia es importante en este
y son capaces de procesar con rapidez información contexto porque es proporcional a la concentración de
complicada, los instrumentos que se apoyan exclusiva- la quinina en el agua tónica, la cual es en última ins-
mente en la transferencia de información no eléctrica tancia la información que buscamos. La información
se vuelven obsoletos en un abrir y cerrar de ojos. Sin empieza en la solución del agua tónica como la con-
embargo, la información que se busca inicia en las centración de la quinina. Esta información se extrae
propiedades del analito y termina en un número, y am- de la muestra aplicando un estímulo en la forma de
bas son representaciones no eléctricas. El principal energía electromagnética mediante el rayo láser de la
objetivo de una medición analítica es obtener un resul- figura 1.3. La radiación interactúa con las moléculas
tado numérico final que sea proporcional a la carac- de quinina que están en el agua tónica, con lo cual se
terística física o química del analito que se buscaba. produce una emisión de fluorescencia en una región
del espectro característica de la quinina y de una mag-
nitud que es proporcional a su concentración. La ra-
1C.3 Dominios eléctricos
diación que no se relaciona con la concentración de
Los modos para codificar la información como can- la quinina se elimina del haz luminoso mediante un
tidades eléctricas se pueden subdividir en dominios filtro óptico, como se puede ver en la figura 1.3. La
analógicos, dominios de tiempo y dominio digital, co- intensidad de la emisión de fluorescencia, que es infor-
mo se ilustra en la mitad inferior del mapa circular de mación no eléctrica, se codifica en una señal eléctrica
la figura 1.2. Observe que el dominio digital, además mediante un dispositivo especial que se llama trans-
de estar formado por señales eléctricas, contiene una ductor de entrada. El tipo particular de transductor
representación no eléctrica porque los números que que se utiliza en este experimento es un fototransduc-
aparecen sobre cualquier tipo de pantalla contienen tor, del cual hay numerosos tipos. Algunos se tratan en
información digital. los capítulos 6 y 7. En este ejemplo, el transductor de
Cualquier proceso de medida se puede representar entrada transforma la fluorescencia del agua tónica en
como una serie de conversiones entre dominios. Por una corriente eléctrica I, proporcional a la intensidad
ejemplo, en la figura 1.3 se ilustra la medida de la in- de la radiación. La relación matemática entre la salida
tensidad de la fluorescencia molecular de una mues- eléctrica y la energía radiante de entrada que choca
tra de agua tónica que contiene trazas de quinina, y sobre la superficie se llama función de transferencia del
de manera general, algunas de las conversiones de los transductor.
Fototransductor

Emisión de
fluorescencia I R V
Fuente de energía
Resistor Voltímetro digital
Filtro
óptico
Rayo láser Agua tónica
(analito) a)

Flujo de Intensidad de la
Intensidad Corriente Potencial V Número
información fluorescencia
de la fuente eléctrica I
del analito

b)

Leyes de Función de Ley de Función de


Regido por la química transferencia Ohm transferencia
y la física del transductor V  IR del medidor
c)
FIGURA 1.3 Diagrama de bloques de un fluorímetro en el que se observa a) un diagrama general del instrumento,
b) una representación esquemática del flujo de información a través de varios dominios de datos en el instrumento
y c) las reglas que rigen las transformaciones de los dominios de los datos durante el proceso de medición.
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6 Capítulo 1 Introducción

La corriente proveniente del fototransductor pasa voltaje, corriente, carga o potencia. Estas cantidades
entonces por la resistencia R, la cual, según la ley de son continuas en amplitud y tiempo como se puede ver
Ohm, produce un voltaje o potencial V que es propor- en las señales analógicas características de la figura 1.4.
cional a I, la cual es a su vez proporcional a la inten- Las magnitudes de las cantidades analógicas se pueden
sidad de la fluorescencia. Por último, V se mide con el medir en forma continua, o bien, se pueden muestrear
voltímetro digital para obtener una lectura que es pro- en puntos específicos en el tiempo de acuerdo con las
porcional a la concentración de la quinina contenida necesidades de un experimento particular o método
en la muestra. instrumental como se discute en el capítulo 4. Aunque
Los voltímetros, las pantallas alfanuméricas, los mo- los datos de la figura 1.4 se registran en función del
tores eléctricos, las pantallas de los monitores y muchos tiempo, cualquier variable, como longitud de onda, po-
otros dispositivos que sirven para convertir datos de tencia del campo magnético o temperatura podría ser
los dominios eléctricos en datos de los dominios no la variable independiente en circunstancias determi-
eléctricos se llaman transductores de salida. El voltíme- nadas. La correlación de dos señales analógicas que re-
tro digital del fluorímetro de la figura 1.3 es un trans- sultan de la medición correspondiente de propiedades
ductor complejo que transforma el potencial o voltaje físicas o químicas es importante en una amplia varie-
V en un número que aparece en una pantalla de cris- dad de técnicas instrumentales, como la espectrosco-
tal líquido de modo que lo pueda leer e interpretar el pia de resonancia magnética, la espectroscopia IR y el
usuario del instrumento. Se estudiarán en forma mi- análisis térmico diferencial.
nuciosa los voltímetros digitales y otros diversos cir- Como el ruido de origen eléctrico influye en la mag-
cuitos y señales eléctricos en los capítulos 2 a 4. nitud de las señales eléctricas, las señales analógicas
son especialmente susceptibles a él, que es resultado
Señales del dominio analógico de las interacciones dentro de los circuitos de medición
La información del dominio analógico se codifica co- o de otros dispositivos eléctricos en las cercanías del
mo la magnitud de una de las cantidades eléctricas: sistema de medición. Este ruido indeseable no guarda
Potencial (V)

Corriente (I)

Tiempo Tiempo
a) b)

FIGURA 1.4 Señales analógicas. a) Respuesta del instrumento proveniente de un sistema de detección fotométrica
en un experimento de análisis por inyección de flujo. Una corriente de mezcla de reacción que contiene partículas
de Fe(SCN) 2 rojo pasa por una fuente de luz monocromática y un fototransductor, el cual produce un cambio de
voltaje conforme cambia la concentración de la muestra. b) La respuesta de corriente de un tubo fotomultiplicador
cuando la luz de una fuente pulsante incide en el fotocátodo del instrumento.
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1C Instrumentos para análisis 7

relación con la información de interés, por lo que se El tiempo entre transiciones sucesivas LO a HI se
han ideado métodos para minimizar sus efectos. En el llama periodo, y el tiempo entre una transición LO a
capítulo 5 se estudian las señales, el ruido y el mejo- HI y una HI a LO se llama amplitud del pulso. Apa-
ramiento de la respuesta instrumental. ratos como convertidores de voltaje en frecuencia y de
frecuencia en voltaje se pueden utilizar para transfor-
Información del dominio del tiempo mar señales del dominio del tiempo en señales del do-
La información se almacena en el dominio del tiempo minio analógico y viceversa. Éstos y otros, como los
como la relación temporal de fluctuaciones de señal y convertidores del dominio de los datos, se tratan en
no de amplitudes de señales. En la figura 1.5 se ilustran los capítulos 2 a 4 como parte del estudio de los dis-
tres señales distintas del dominio del tiempo, registra- positivos electrónicos y se hablará de ellos en otros
das como una cantidad analógica contra tiempo. Las contextos a lo largo de todo este libro.
líneas horizontales discontinuas representan un um-
bral arbitrario de la señal analógica que se usa para Información digital
decidir si una señal es HI (está por arriba del umbral) Los datos se codifican en el dominio digital en un es-
o LO (abajo del umbral). Las relaciones de tiempo en- quema de dos niveles. La información se puede repre-
tre las transiciones de la señal desde HI hasta LO o de sentar mediante el estado de una lámpara o un foco, un
LO a HI contienen la información de interés. En el diodo emisor de luz, un conmutador manual o una
caso de instrumentos que generan señales periódicas, señal de nivel lógico, para citar sólo algunos ejemplos.
la cantidad de ciclos de la señal por unidad de tiempo La característica común que poseen estos dispositi-
es la frecuencia y el tiempo requerido por cada ciclo es vos es que cada uno de ellos debe estar en uno de dos
su periodo. Dos ejemplos de sistemas instrumenta- estados únicos. Por ejemplo, las luces y los interrup-
les que producen información codificada en el domi- tores podrían estar sólo en encendido o apagado (ON
nio de la frecuencia son la espectroscopia Raman y OFF), y las señales de nivel lógico podrían ser sólo
(capítulo 18) y el análisis instrumental por activación HI y LO. La definición de lo que significa encendido
de neutrones (capítulo 32). En estos métodos, la fre- y apagado o abierto y cerrado (ON y OFF) para los
cuencia de llegada de los fotones en un detector está interruptores y luces se entiende, pero en el caso de las
directamente relacionada con la intensidad de la emi- señales eléctricas, como en las señales del dominio del
sión desde el analito, la cual es proporcional a su con- tiempo, se debe definir un nivel de señal arbitrario que
centración. distinga entre HI y LO. Esta definición dependería de
las condiciones de un experimento, o de las caracte-
rísticas de los dispositivos electrónicos que se usen. Por
HI
ejemplo, la señal que se representa en la figura 1.5c es
LO un tren de pulsos de un detector nuclear. La tarea de
medición es contar los pulsos durante un tiempo fijo
a)
para obtener una medida de la intensidad de la radia-
ción. La línea discontinua representa un nivel de señal
Señal

HI que no sólo es suficientemente bajo para asegurar que


LO ningún pulso se perderá, sino que es suficientemente
alto para rechazar fluctuaciones aleatorias en la señal
b)
que no estén relacionadas con el fenómeno nuclear de
interés. Si la señal pasa el umbral 14 veces, como en el
caso de la señal de la figura 1.5c, entonces se puede
HI confiar en que ocurrieron 14 fenómenos nucleares.
LO Después de contar los fenómenos, los datos se codifi-
can en el dominio digital mediante señales HI-LO que
Tiempo representan el número 14. En el capítulo 4 se exploran
c) los medios para tomar las decisiones electrónicas HI-
FIGURA 1.5 Señales del dominio del tiempo. Las líneas LO y codificar la información en el dominio digital.
horizontales discontinuas representan umbrales de la Como se muestra mediante el mapa del dominio de
señal. Cuando cada señal está por arriba del umbral, los datos de la figura 1.2, el dominio digital abarca tan-
la señal es HI, y cuando está por abajo del umbral la to métodos de codificación eléctricos como no eléctri-
señal es LO. cos. En el ejemplo apenas mencionado, los fenómenos
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8 Capítulo 1 Introducción

nucleares se acumulan mediante un contador electró- para la señal en la figura 1.6b, se asigna un valor
nico y se muestran en una pantalla digital. Cuando el numérico para cada intervalo sucesivo del tiempo. Por
experimentador lee e interpreta la lectura, el número ejemplo, el intervalo número cero representa 2 0  1, el
que representa la cantidad medida está una vez más en intervalo número uno representa 2 1  2, el segundo in-
el dominio no eléctrico. Cada pieza de datos HI-LO tervalo es 2 2  4, y así sucesivamente como se muestra
que representa un fenómeno nuclear es un bit (dígito en la figura 1.6. Durante cada intervalo sólo se nece-
binario) de información que es la unidad fundamental sita decidir si la señal es HI o LO. Si la señal es HI
de información en el dominio digital. Los bits de infor- durante cualquier intervalo de tiempo dado, entonces
mación que se transmiten a lo largo de un solo canal el valor que le corresponde a dicho intervalo se suma
electrónico o alambre los podría contar un observador al total. Todos los intervalos que son LO contribuyen
o un instrumento electrónico que esté supervisando el con cero al total.
canal. Estos datos acumulados se llaman datos digitales En la figura 1.6b, la señal es HI sólo en el intervalo 0
contados o conteo de datos digitales, lo cual aparece en y en el intervalo 2, de modo que el valor total represen-
el mapa del dominio de los datos de la figura 1.2. Por tado es (1  2 0)  (0  2 1)  (1  2 2)  5. Entonces,
ejemplo, la señal de la figura 1.5a podría representar el en el espacio de sólo tres intervalos se ha representado
número n  8 porque hay ocho pulsos completos en la el número n  5. En el ejemplo del conteo digital de la
señal. De igual manera, la señal de la figura 1.5b podría figura 1.6a, se requirieron cinco intervalos para repre-
corresponder a n  5, y la de la figura 1.5c represen- sentar el mismo número. En este ejemplo limitado, los
taría n  14. Aunque es efectivo, este medio de trans- datos en código binario son casi el doble de eficaces
mitir información no es muy eficaz. que los datos del conteo de series. Un ejemplo más es-
Una manera más eficaz de codificar la información pectacular se podría ver al contar n  10 oscilaciones,
es usar números binarios para representar datos nu- de manera similar a la de la señal de la figura 1.6a. En
méricos y alfanuméricos. Para ver cómo se puede lo- los mismos 10 intervalos, 10 bits HI-LO de informa-
grar este tipo de codificación, considere las señales de ción en el esquema de codificación de series binarias
la figura 1.6. El conteo de los datos digitales de la señal permiten representar los números binarios de 0 hasta
de la figura 1.6a representa el número n  5, como ya 2 10  1  1024 números, es decir, de 0000000000 a
se mencionó. Se controla la señal y se cuenta la canti- 1111111111. La mejora en eficacia es 1024/10, es decir,
dad de oscilaciones completas. El proceso requiere un alrededor de 100 veces. En otras palabras, el esquema
tiempo que es proporcional a la cantidad de ciclos de de conteo en serie requiere 1024 intervalos para repre-
la señal, o bien, en este caso, cinco veces en la longitud sentar el número 1024, pero el esquema de codifica-
de un solo intervalo de tiempo, como se indica en la ción binaria necesita sólo 10 intervalos. Como resultado
figura 1.6. Observe que los intervalos se numeran en de la eficacia de los esquemas de codificación binaria,
forma consecutiva empezando con cero. En un esque- la mayor parte de la información digital se codifica,
ma de codificación binario, como el que se muestra transfiere, procesa y decodifica en la forma binaria.

HI
a) Conteo n=5
LO

Intervalos de tiempo 4 3 2 1 0

Serie HI
b) n=4+1=5
binaria
LO
Tiempo

22 21 20

Datos binarios
c) n=4+1=5
en paralelo

FIGURA 1.6 Diagrama en el que se ilustran tres tipos de información digital: a) conteo de datos
en serie, b) datos codificados en serie binaria y c) datos binarios paralelos. En los tres casos,
los datos representan el número n  5.
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1C Instrumentos para análisis 9

Los datos representados mediante codificación bi- completo de instrumentos que indica o registra canti-
naria sobre una sola línea de transmisión se llaman da- dades físicas o químicas. Un ejemplo es el detector UV
tos codificados en sistema binario en serie o sólo datos (de luz ultravioleta) que se usa a menudo para indicar
en serie. Un ejemplo común de transmisión de datos en o registrar la presencia de analitos extraídos en la cro-
serie es el módem de la computadora, el cual es un matografía de líquidos.
aparato para transmitir información entre computado- El término transductor se refiere de manera especí-
ras mediante la línea telefónica a través de un solo con- fica a aquellos dispositivos que transforman la infor-
ductor (y una conexión común). mación en los dominios no eléctricos en información
Un método más eficaz para codificar datos en el do- en los dominios eléctricos, y a la inversa. Entre los
minio digital se ve en la señal de la figura 1.6c. En este ejemplos están los fotodiodos, fotomultiplicadores y
caso se usan tres focos para representar los tres dígi- otros fotodetectores electrónicos que producen co-
tos binarios: 2 0  1, 2 1  2 y 2 2  4. No obstante, es po- rriente o voltaje proporcionales a la energía radiante
sible utilizar interruptores, alambres, diodos emisores de la radiación electromagnética que incide en sus su-
de luz o cualquier otro de la miríada de dispositivos perficies. Otros ejemplos son los termistores, los me-
electrónicos para codificar la información. En este es- didores de deformación y los transductores del efecto
quema, ON  1 y OFF  0, de modo que el número se Hall (fuerza del campo magnético). Como ya se su-
codifica como se muestra en la figura 1.6 con el pri- girió, la relación matemática entre la salida eléctrica y
mero y el tercer focos en ON y el foco intermedio en la entrada de energía radiante, temperatura, fuerza o
OFF, lo cual representa 4  0  1  5. Este esquema es fuerza de campo magnético se llama función de trans-
muy eficaz porque toda la información deseada está ferencia del transductor.
presente en forma simultánea, igual que aparecen to- El término sensor también es amplio, pero en este
dos los dígitos de la carátula del voltímetro digital de la texto se le reserva para la clase de dispositivos ana-
figura 1.3. La información presentada en esta forma se líticos que tienen la aptitud de supervisar especies
denomina datos digitales en paralelo. La información químicas específicas en forma continua y reversible.
se transmite dentro de los instrumentos analíticos y las Hay numerosos ejemplos de sensores en todo el texto,
computadoras mediante el envío de datos en paralelo. sin olvidar el electrodo de vidrio y otros electrodos
Como los datos viajan cortas distancias dentro de tales selectivos de iones, los cuales se estudian en el capítulo
dispositivos, es barato y eficaz usar la transferencia de 23; el electrodo de oxígeno de Clark, que se estudia en
información en paralelo. La economía de las distancias el capítulo 25; y los sensores de fibra óptica (optrodos),
cortas contrasta con la situación en la que los datos que se detallan en el capítulo 14. Los sensores constan
tienen que ser transportados a largas distancias de ins- de un transductor acoplado a una fase de reconoci-
trumento a instrumento o de computadora a compu- miento químicamente selectiva, como se ilustra en la
tadora. En estos casos, la comunicación se realiza en figura 1.7. Por ejemplo, los optrodos están constituidos
serie usando módems u otros esquemas de transmisión por un fototransductor acoplado con una fibra óptica
de datos en serie más rápidos y más complejos. Estas cuyo extremo opuesto al transductor está cubierto con
ideas se estudian con más detalle en el capítulo 4. una sustancia que responde de manera específica a una
característica física o química de un analito.
Un sensor que es muy interesante e instructivo está
1C.4 Detectores, transductores y sensores
hecho de una microbalanza de cristal de cuarzo (MCQ).
Los términos detectores, transductores y sensores se Este instrumento se basa en las características pie-
usan casi siempre como sinónimos, pero de hecho tie- zoeléctricas del cuarzo. Cuando el cuarzo se deforma
nen diferentes significados. El más general de los tres de manera mecánica, se produce una diferencia de po-
términos, el de detector, se refiere a un dispositivo tencial en su superficie. Además, cuando se aplica un
mecánico, eléctrico o químico que identifica, registra voltaje en las caras de un cristal de cuarzo, éste se de-
o indica un cambio en una de las variables de su entor- forma. Un cristal conectado a cierto circuito eléctrico
no, como presión, temperatura, carga eléctrica, radia- oscila a una frecuencia que es característica de la masa
ción electromagnética, radiación nuclear, partículas y de la forma del cristal y que es sorprendentemente
o moléculas. Se ha llegado a tal grado que con este tér- constante siempre que la masa del cristal también lo
mino se denomina a todos los instrumentos, es decir, sea. Esta propiedad de algunos materiales cristali-
todos son detectores. En el contexto del análisis nos se llama efecto piezoeléctrico y constituye la base
instrumental se usa el término detector en el sentido de la MCQ. Además, la frecuencia constante carac-
general en el cual justamente se le ha definido, y se terística del cristal de cuarzo es la base de los relojes
usará sistema de detección para referirse al conjunto modernos de alta precisión, las bases de tiempo, los
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10 Capítulo 1 Introducción

Fase de reconocimiento
molecular Transductor

Enzimas
Anticuerpos Electrodo
Receptores Semiconductor
Sustancia química,
Polímeros Dispositivo MCQ Salida
masa, luz, calor, sonido,
Organelos Fototransductor eléctrica
presión, señal eléctrica
Microbios Transductor sónico
Células Termistor
Tejidos

FIGURA 1.7 Sensor químico. El sensor consta de un elemento de reconocimiento molecular y un


transductor. Es posible una gran diversidad de elementos de reconocimiento. Se ilustran algunos
elementos de reconocimiento selectivo que son útiles en particular con los biosensores. La fase
de reconocimiento convierte la información de interés en características detectables, como otro
compuesto químico, masa, luz o calor. El transductor convierte la característica en una señal
eléctrica que se puede medir.

contadores, temporizadores y medidores de frecuen- rencia entre un transductor y un sensor. En la MCQ,


cia, que a su vez forman parte de muchos sistemas el transductor es el cristal de cuarzo y la segunda fase
instrumentales analíticos muy exactos y precisos. selectiva es la cubierta de polímero. La combinación
Si un cristal de cuarzo se reviste con un polímero del transductor y la fase selectiva constituye el sensor.
que adsorbe en forma selectiva ciertas moléculas, la
masa del cristal se incrementa si las moléculas están
presentes, como consecuencia disminuye la frecuen- 1C.5 Instrumentos de lectura
cia de resonancia del cristal de cuarzo. Cuando las mo-
Un instrumento de lectura es un transductor que
léculas se retiran de la superficie el cristal recupera
transforma la información de un dominio eléctrico en
su frecuencia original. Esta relación entre el cambio de
una forma que puede entender un ser humano. Por lo
frecuencia del cristal f y el cambio de masa del cristal
regular, la señal transducida toma la forma de un re-
M está dada por
sultado alfanumérico o la salida gráfica de un tubo de
Cf2 ¢M rayos catódicos, una serie de números de una pantalla
¢f 
A digital, la posición de una manecilla en un medidor
de escalas y, a veces, el oscurecimiento de una placa
donde M es la masa del cristal, A es el área de la su-
fotográfica o un trazo en una tira de papel registra-
perficie, f es la frecuencia de oscilación y C es una cons-
dor. En algunos ejemplos, el instrumento de lectura se
tante de proporcionalidad. Esta relación indica que es
puede acomodar para dar en forma directa la concen-
posible medir cambios pequeñísimos en la masa del
tración del analito.
cristal si se puede medir con precisión su frecuencia.
Como se puede ver, es posible medir cambios de fre-
cuencia de una parte en 10 7 con facilidad mediante
1C.6 Computadoras en instrumentos
instrumentos baratos. El límite de detección para un
sensor piezoeléctrico de este tipo está calculado en La mayoría de los instrumentos analíticos modernos
alrededor de 1 pg, es decir, 10 –12 g. Estos sensores se contienen o están conectados a uno o más dispositi-
usan para detectar diversos analitos en fase gaseosa, vos electrónicos complejos y a convertidores del do-
como formaldehído, cloruro de hidrógeno, sulfuro de minio de los datos, como amplificadores operacionales,
hidrógeno y benceno. También se han propuesto como circuitos integrados, convertidores de datos analógicos
sensores para agentes químicos usados en la guerra, en digitales y de digitales en analógicos, contadores,
como el gas mostaza y el fosgeno. microprocesadores y computadoras. Para apreciar el
El sensor piezoeléctrico de masa es un ejemplo ex- alcance y las limitaciones de dichos instrumentos, los
celente de un transductor que convierte una propie- investigadores necesitan tener por lo menos un cono-
dad del analito, la masa en este caso, en un cambio en cimiento cualitativo de cómo funcionan y de qué es lo
una cantidad eléctrica, la frecuencia de resonancia del que pueden hacer. En los capítulos 3 y 4 se proporcio-
cristal de cuarzo. Este ejemplo también ilustra la dife- na una breve introducción a este importante tema.
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1D Calibración de métodos instrumentales 11

1D CALIBRACIÓN DE MÉTODOS darizado necesario para alcanzar la equivalencia quí-


INSTRUMENTALES mica se puede relacionar con la cantidad de analito
presente. Por tanto, la titulación es un tipo de com-
Una parte muy importante de todos los procedimien- paración química.3
tos analíticos es la calibración y estandarización del
proceso. La calibración determina la relación entre la 1D.2 Calibración de un estándar externo
respuesta analítica y la concentración del analito. Por
Un estándar o patrón externo se prepara por separa-
lo regular, se determina mediante el uso de normas
do de la muestra. En cambio, un estándar interno se
químicas.
añade a la muestra. Los estándares externos se usan
Casi todos los métodos analíticos requieren algún
para calibrar instrumentos y procedimientos cuando
tipo de calibración según normas químicas. Los méto-
no hay efectos de interferencia de la matriz de compo-
dos gravimétricos y algunos métodos coulombimétricos
nentes sobre la disolución del analito. Se prepara una
(capítulo 24) están entre los pocos métodos absolu-
serie de tales estándares externos que contienen el
tos que no se basan en la calibración de acuerdo con
analito en concentraciones conocidas. Lo ideal es usar
normas químicas. En esta sección se describen varios
tres o más de las disoluciones en el proceso de calibra-
tipos de procedimientos de calibración.
ción. No obstante, se puede confiar en calibraciones de
dos puntos en algunos análisis de rutina.
1D.1 Comparación con estándares La calibración se consigue al obtener la señal de
respuesta (absorbancia, altura del pico, área del pico)
En esta sección se describen dos tipos de métodos de
en función de la concentración conocida del analito.
comparación, la técnica de comparación directa y el
Una curva de calibración se prepara con una gráfica de
procedimiento de titulación.
los datos o ajustándoles una ecuación matemática acep-
Comparación directa table, como la ecuación de la recta dada por la pen-
diente y la ordenada al origen que se usa en el método
Algunos procedimientos analíticos requieren la com-
de los mínimos cuadrados lineales. El paso siguiente es
paración de una propiedad del analito (o del producto
la etapa de predicción, en la que se obtiene la señal de
de una reacción con el analito) con estándares o pa-
respuesta para la muestra y se usa para predecir la con-
trones tales que la propiedad que se está probando
centración desconocida del analito, cx, a partir de la
concuerde de manera muy cercana con la del están-
curva de calibración o de la ecuación de mejor ajuste.
dar. Por ejemplo, en los primeros colorímetros, el co-
La concentración del analito en la muestra original
lor producido como resultado de una reacción química
se calcula luego mediante cx aplicando los factores de
de un analito se comparaba con el color producido por
dilución convenientes tomados de los pasos que se si-
la reacción de estándares. Si la concentración del es-
guieron para preparar la muestra.
tándar se variaba por dilución, por ejemplo, era posi-
ble obtener una coincidencia de color casi exacta. La Método de los mínimos cuadrados
concentración del analito era entonces igual a la con- Una curva de calibración característica se muestra
centración del estándar después de la dilución. Tal en la figura 1.8 para la determinación del isooctano en
procedimiento se llama comparación nula o método de una muestra de hidrocarburo. En este caso, se inyec-
isomación.2 tó una serie de estándares de isooctano en un cro-
matógrafo de gases, y se obtuvo el área del pico de
Titulaciones
isooctano en función de la concentración. La ordena-
Están entre las más precisas de todos los procedimien- da es la variable dependiente, el área del pico, y la ab-
tos analíticos. En una titulación, el analito reacciona cisa es la variable independiente, el porcentaje molar
con un reactivo estandarizado, el titulante, en una (% mol) de isooctano. Como es lo característico y casi
reacción de estequiometría conocida. Por lo regular, siempre deseable, la gráfica se aproxima a una recta.
la cantidad de titulante varía hasta que se alcanza la Observe que debido a los errores indeterminados en el
equivalencia química, según lo indica el cambio del
color del indicador químico o el cambio en una res- Clases interactivas: aprenda más sobre
puesta del instrumento. La cantidad de reactivo estan- calibración.

2 Véase, por ejemplo, H. V. Malmstadt y J. D. Winefordner, Anal. Chim. 3Véase D. A. Skoog, D. M. West, F. J. Holler y S. R. Crouch, Fundamen-
Acta, 1960, 20, p. 283; L. Ramaley y C. G. Enke, Anal. Chem., 1965, 37, p. tals of Analytical Chemistry, 8a. ed., Belmont, CA: Brooks/Cole, 2004,
1073. caps. 13-17.
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12 Capítulo 1 Introducción

relación lineal entre la respuesta medida y y la con-


centración x del analito estándar. La relación matemá-
tica que representa esta suposición se llama modelo de
Residuo =
yi – (mxi + b) regresión, y se podría representar con

y  mx  b

donde b es la ordenada al origen o intersección con el


5.0 eje y, es decir, el valor de y cuando x es cero, y m es la
pendiente de la recta (véase la figura 1.8). También se
supone que cualquier desviación de los puntos de la
línea recta surge de un error en la medición. Es decir, se
4.0 supone que no hay error en los valores x de los puntos
y, área del pico, unidades arbitrarias

(concentraciones). Ambas suposiciones son aceptables


para muchos métodos analíticos, pero es necesario
tener en cuenta que siempre que haya una incertidum-
3.0
bre importante en los datos x, el análisis básico lineal
de los mínimos cuadrados podría no dar la mejor recta.
En tal caso, sería necesario un análisis de correlación
2.0 complejo. Además, el análisis de mínimos cuadrados
podría no ser aceptable cuando la incertidumbre en
los valores y varía de manera significativa con respecto
a x. En este caso, se necesitarían aplicar diferentes fac-
1.0 tores de ponderación a los puntos y ejecutar un análi-
sis ponderado de mínimos cuadrados.5
En los casos en que los datos no se ajustan a un
modelo lineal, entonces se puede recurrir a los méto-
0
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 dos de regresión no lineal.6 Algunos de éstos utilizan
x, Concentración de isooctano, % mol modelos polinomiales o procedimientos de regresión
múltiple. Incluso hay programas para computadora
FIGURA 1.8 Curva de calibración para determinar que encuentran un modelo que describe un conjunto
isooctano en una muestra de hidrocarburo. El residuo es de datos experimentales a partir de un conjunto de
la diferencia entre un punto de información experimental
ecuaciones internas o definidas por el usuario.7
yi y el que se calcula con el modelo de regresión, mxi  b,
La pendiente m y la ordenada al origen b de la rec-
como se muestra en el inserto.
ta de mínimos cuadrados se determinan con las ecua-
ciones a1.34 y a1.35 del apéndice 1. Para determinar
proceso de medición, no todos los datos están en la una concentración desconocida cx a partir de la recta
recta. Por tanto, el investigador debe tratar de trazar de mínimos cuadrados, se obtiene el valor de la res-
la “mejor” línea recta que pase por los datos. El análi- puesta del instrumento yc para la incógnita, y la pen-
sis de regresión proporciona los medios para obtener diente y la ordenada al origen se usan para calcular la
en forma objetiva dicha recta, y también para especi- concentración desconocida cx como se muestra en
ficar la incertidumbre asociada con el uso posterior. la ecuación 1.1.
Esta incertidumbre se relaciona con los residuos que
yc  b
se muestran en la figura 1.8, los cuales son una medi- cx  (1.1)
da de qué tan lejos de la recta de mejor ajuste quedan m
los datos. El método de los mínimos cuadrados (véase La desviación estándar en la concentración sc se
apéndice 1, sección a1D) se aplica con frecuencia para puede determinar a partir del error estándar de la esti-
obtener la ecuación de dicha recta.4
El método de los mínimos cuadrados se basa en dos 5 Véase P. R. Bevington y D. K. Robinson, Data Reduction and Error

suposiciones. La primera es que hay en realidad una Analysis for the Physical Sciences, 3a. ed., Nueva York: McGraw-Hill,
2002.
6 J. L. Devore, Probability and Statistics for Engineering and the Sciences,

4 Véase S. R. Crouch y F. J. Holler, Applications of Microsoft ® Excel in 6a. ed., Pacific Grove, CA: Duxbury Press at Brooks/Cole, 2004.
Analytical Chemistry, Belmont, CA: Brooks/Cole, 2004, cap. 4. 7 Véase por ejemplo, TableCurve, Systat Software, Point Richmond, CA.
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1D Calibración de métodos instrumentales 13

mación sy, también llamada desviación estándar con res- los patrones están preparados de manera incorrecta,
pecto a la regresión, como se ve en la ecuación 1.2: habrá un error. La exactitud con la que se preparen los
patrones depende de la exactitud de las técnicas gravi-
sy
1 1 1yc  y2 2 métricas y volumétricas y del equipo usado. La forma
sc  C M   (1.2)
m N m2Sxx química de los patrones debe ser idéntica a la del ana-
lito en la muestra; el estado de oxidación, la isomeri-
donde M es la cantidad de resultados reproducidos, N
zación o la complejación del analito pueden alterar la
es la cantidad de puntos en la curva de calibración
respuesta. Una vez preparados, la concentración de los
(número de patrones o estándares), yc es la respuesta
patrones puede cambiar debido a la descomposición,
media para la incógnita, y y es el valor medio de y pa-
la volatilización o la adsorción en las paredes del con-
ra los resultados de la calibración. La cantidad Sxx es la
tenedor. La contaminación de los patrones también
suma de las desviaciones al cuadrado de los valores de
puede dar como resultado concentraciones del analito
x con respecto a la media según se obtienen con la
más elevadas que las esperadas. Un error sistemáti-
ecuación a1.31 del apéndice 1.
co se puede presentar si hay algún sesgo en el modelo
de calibración. Por ejemplo, puede haber errores si la
Errores en la calibración del patrón externo función de calibración se obtiene sin usar suficientes
Cuando se usan patrones o estándares externos, se su- patrones para lograr estimaciones estadísticas buenas
pone que se obtendrán las mismas respuestas cuando de los parámetros.
la misma concentración del analito esté presente en la Los errores aleatorios también influyen en la exac-
muestra y en el patrón. Por tanto, la relación funcional titud de los resultados obtenidos a partir de las curvas
de calibración entre la respuesta y la concentración del de calibración, como se ilustra en la figura 1.9. La incer-
analito se debe aplicar también a la muestra. En una tidumbre en la concentración del analito sc obtenida a
determinación no suele utilizarse la respuesta original partir de una curva de calibración es inferior cuando
que da el instrumento, sino que se corrige la respuesta la respuesta es cercana al valor medio y. El punto x, y
original analítica con la medición de un blanco. Un representa el centroide de la recta de regresión. Ob-
blanco ideal es idéntico a la muestra pero sin el analito. serve que las mediciones hechas cerca del centro de la
En la práctica, con muestras complejas, se requiere curva tendrán menos incertidumbre en la concentra-
muchísimo tiempo para preparar un blanco ideal (y a ción del analito que las hechas en los extremos.
veces es imposible hacerlo), por lo que se debe buscar
un término medio. A menudo un blanco real es un Calibración de variables múltiples
blanco disolvente que contiene el mismo solvente en el
El procedimiento de mínimos cuadrados que se descri-
cual está disuelta la muestra, o un blanco reactivo, que
bió es un ejemplo de un procedimiento de calibración
contiene el disolvente más todos los reactivos que se
univariado o de una sola variable porque sólo se utili-
usan en la preparación de la muestra.
za una respuesta por muestra. El proceso de relacionar
Aun con las correcciones del blanco, varios factores
múltiples respuestas de instrumentos para un analito
pueden ocasionar que falle la suposición elemental del
o una mezcla de analitos se conoce como calibración
método del patrón externo. Los efectos de la matriz,
multivariada o de variables múltiples. Los métodos9 de
debido a las especies extrañas en la muestra que no es-
este tipo de calibración han sido muy aceptados en los
tán presentes en los patrones o el blanco, pueden oca-
años recientes porque hay nuevos instrumentos que
sionar que las concentraciones del mismo analito en la
proporcionan respuestas multidimensionales (absor-
muestra y en los patrones proporcionen respuestas dis-
bancia de varias muestras a diferentes longitudes de
tintas.8 Las diferencias en las variables experimentales
onda, espectros de masa de componentes separados
cuando se miden blanco, muestra y patrón también
por cromatografía, etc.). Los métodos de la calibración
pueden invalidar la función de calibración establecida.
de variables múltiples son muy eficaces. Se pueden usar
Aun cuando la suposición básica es válida, los errores
para determinar en forma simultánea muchos com-
pueden ocurrir debido a la contaminación durante el
ponentes de mezclas y pueden proporcionar medidas
muestreo o en las etapas de preparación de la muestra.
Además, se pueden presentar errores sistemáti-
cos durante el proceso de calibración. Por ejemplo, si 9Un análisis más amplio se encuentra en K. R. Beebe, R. J. Pell y M. B.
Seasholtz, Chemometrics: A Practical Guide, Nueva York: Wiley, 1998,
8 La matriz incluye el analito y otros constituyentes, los cuales se denomi- cap. 5; H. Martens y T. Naes, Multivariate Calibration, Nueva York: Wiley,
nan concomitantes. 1989.
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14 Capítulo 1 Introducción

12.5

10

7.5 sr
Respuesta

Centroide, x, y

2.5 sc'

sc
0
1 3 5 7 9
Concentración

FIGURA 1.9 Efecto de la incertidumbre de la curva de calibración. Las líneas discontinuas muestran los límites
de confianza para la concentración determinada a partir de la recta de regresión. Observe que las incertidumbres
se incrementan en los extremos de la gráfica. Por lo regular se calcula la incertidumbre en la concentración
del analito sólo a partir de la desviación estándar de la respuesta. La incertidumbre de la curva de calibración
aumenta de manera notable la incertidumbre en la concentración del analito desde sc a sc .

redundantes para mejorar la precisión, porque al repe- tra es casi idéntica después de cada adición, y la úni-
tir las medidas N veces se obtiene una mejora 1N en ca diferencia es la concentración del analito, o bien, la
la precisión del valor medio (véase apéndice 1, sección concentración de dicho reactivo en los casos en que se
a1B.1). También se pueden utilizar para detectar la añade un exceso de un reactivo analítico. Todos los
presencia de interferencias que podrían no ser identi- otros constituyentes de la mezcla de reacción deben
ficadas en una calibración de una sola variable. ser idénticos porque los patrones están preparados
en alícuotas de la muestra.
1D.3 Métodos de adición estándar Suponga que varias alícuotas Vx de la solución de-
sconocida cuya concentración es cx se vierten en ma-
Estos métodos son particularmente útiles para ana- traces de volumen Vt. A cada uno de ellos se le añade
lizar muestras complejas en las cuales la posibilidad de un volumen variable Vs de una solución patrón o es-
que se presenten efectos de matriz es importante. Un tándar del analito que tiene una concentración cono-
método de adición estándar puede adoptar varias for- cida cs. Luego se añaden reactivos adecuados y cada
mas.10 En una de las más comunes se añaden uno o más solución se diluye a cierto volumen. Se efectúan enton-
incrementos de una solución patrón a alícuotas de la ces las mediciones instrumentales en cada una de las
muestra con volúmenes idénticos. A este proceso se le disoluciones y se corrigen por alguna respuesta blanco
llama adición de muestras. Luego cada disolución se para tener una respuesta neta S del instrumento. Si la
diluye a un volumen fijo antes de tomar la medida. Ob- respuesta del instrumento corregida por el blanco es
serve que cuando la cantidad de muestra es limitada, proporcional a la concentración, como se supone que
las adiciones se realizan mediante introducciones su- debe ser en el método de la adición estándar, se puede
cesivas de incrementos del patrón a un único volumen escribir
medido de la incógnita. Las medidas se toman en la
kVscs kVxcx
muestra original y en la muestra a la que se le añadió S  (1.3)
Vt Vt
el patrón después de cada adición. En la mayor parte
de las versiones de este método, la matriz de la mues- donde k es una constante de proporcionalidad. Una
gráfica de S en función de Vs es una recta de la forma
10 Véase M. Bader, J. Chem. Educ., 1980, 57, p. 703. S  mVs  b
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1D Calibración de métodos instrumentales 15

1.2

1.0

m = 0.03820
0.8

S, absorbancia
0.6
(Vs)0 = –6.31 mL
(calculada o extrapolada)
0.4

b = 0.2412
0.2

0.0
–10.0 0.0 10.0 20.0
Vs, mL

FIGURA 1.10 Gráfica de calibración para el método de la adición estándar. La concentración


de la disolución incógnita se podría calcular a partir de la pendiente m y de la ordenada b, o
bien, se podría calcular mediante extrapolación, como se explica en el texto.

donde la pendiente m y la ordenada al origen b se ob- sy 1 10  y2 2


tienen a partir de sV   (1.5)
mC N m2Sxx
kcs
m Como lo muestra la línea discontinua de la figura 1.10,
Vt
la diferencia entre el volumen del patrón añadido en el
y origen (cero) y el valor del volumen en la intersección
kVxcx de la recta con el eje de las x, o abcisa (Vs)0, es el volu-
b men del reactivo estándar o patrón equivalente a la
Vt
cantidad de analito en la muestra. Además, la abcisa
La gráfica de tal adición estándar se ilustra en la figu- corresponde a la respuesta cero del instrumento, de
ra 1.10. modo que se tiene
Se puede ejecutar un análisis de mínimos cuadrados kVscs kVxcx
(apéndice 1, sección a1D) para determinar m y b; cx se S  0 (1.6)
Vt Vt
obtiene de la relación de estas dos cantidades y los va-
lores conocidos de cs, Vx, y Vs. Por tanto, Al despejar cx, de la ecuación 1.6 se obtiene
1Vs 2 0cs
b kVxcx /Vt Vxcx cx   (1.7)
  Vx
m kcs /Vt cs
La desviación estándar de la concentración sc es en-
o bien, tonces
bcs
sc  sV a b
cx  (1.4) cs
mVx (1.8)
Vx
La desviación estándar de la concentración se pue-
de obtener calculando primero la desviación estándar
EJEMPLO 1.1
en el volumen sV y luego aplicando la relación entre vo-
lumen y concentración. La desviación estándar del Se sacan con una pipeta alícuotas de 10 ml de una
volumen se determina a partir de la ecuación 1.2 con muestra de agua natural y se vacían en matraces volu-
algunas modificaciones. Como se extrapoló la curva de métricos de 50.00 ml. Se añadieron exactamente 0.00,
calibración para el eje de las x en el método de la adi- 5.00, 10.00, 15.00 y 20.00 ml de una disolución estándar
ción estándar, el valor de y para la incógnita es 0 y no que contiene 11.1 ppm de Fe 3 a cada uno, seguido de
está el término 1/M. Por tanto, la ecuación para sV se un exceso del ion tiocianato para obtener el complejo
transforma en rojo Fe(SCN) 2. Después de la dilución a un cierto
SKOOG_CAP_01_4tas 3/25/08 5:50 AM Page 16

16 Capítulo 1 Introducción

volumen, la respuesta del instrumento S para cada una 0.2412  11 .1


cx   7 .01 ppm Fe3
de las cinco disoluciones medidas con un colorímetro 0.0382  10.00
fueron 0.240, 0.437, 0.621, 0.809 y 1.009, respectiva-
mente. a) ¿Cuál era la concentración de Fe 3 en la Este valor se puede obtener mediante extra-
muestra de agua? b) Calcule la desviación estándar de polación gráfica como también se ilustra en la figu-
la concentración de Fe 3. ra. El valor extrapolado representa el volumen de
reactivo que corresponde a la respuesta cero del
Solución instrumento, que en este caso es de – 6.31 mL. La
concentración desconocida del analito en la diso-
a) En este problema, cs  11.1 ppm, Vx  10.00 mL,
lución original se calcula entonces con la ecuación
y Vt  50.00 mL. La gráfica de los datos se ilustra
1.7 como sigue:
en la figura 1.10, y en ella se demuestra que hay
una relación entre la respuesta del instrumento y 1Vs 2 0cs 6 .31 mL  11 .1 ppm
la cantidad añadida de hierro. cx   
Vx 10.00 mL
Para obtener la ecuación de la recta de la figu-
ra 1.10 (S  mVs  b), se sigue el procedimiento  7 .01 ppm Fe3
que se ilustra en el ejemplo a1.11 del apéndice 1. El
resultado, que se proporciona en la hoja de cálcu- b) La desviación estándar de la concentración se
lo de la figura 1.11, es m  0.0382 y b  0.2412 por puede determinar a partir de la desviación están-
tanto dar en la intersección del volumen (ecuación 1.5)
y de la ecuación 1.8 como se muestra en la hoja
S  0.0382Vs  0.2412 de cálculo de la figura 1.11. El resultado es sc 
A partir de la ecuación 1.4 o de acuerdo con la 0.11 ppm. Por tanto, la concentración de Fe en la
hoja de cálculo se obtiene incógnita es 7.01  0.16 ppm.

A B C D E F G H I J
1 Determinación de Fe en agua natural mediante colorimetría con adiciones múltiples
2 Concentración del patrón, c s 11.10 ppm
3 Volumen de la incógnita usada,Vx 10.00 mL 1.2
4 Volumen del patrón añadido Señal, I
5 0.00 0.240
6 5.00 0.437 y = 0.0382x + 0.2412
7 10.00 0.621 1.0
R 2 = 0.9998
8 15.00 0.809
9 20.00 1.009
10
0.8
Señal de la emisión, I

11 Ecuación de regresión
12 Pendiente 0.0382
13 Ordenada al origen 0.2412
14 Intersección del volumen -6.31414
0.6
15 Concentración de la incógnita 7.01 ppm
16 Análisis del error
17 Error estándar en y 0.004858
18 N 5
0.4
19 S xx 250
20 y con barra 0.6232
21 Desviación estándar del volumen 0.143011
22 Desviación estándar en c 0.16 0.2
23 Documentación de la hoja de cálculo
24 Celda B12=PENDIENTE(B5:B9,A5:A9)
25 Celda B13=INTERSECCIÓN(B5:B9,A5:A9)
26 Celda B14=-B13/B12 0.0
27 Celda B15=-B14*B2/B3 -10.00 -5.00 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00
28 Celda B17=ERROR.TÍPICO(B5:B9,A5:A9) Volumen de la solución patrón, ml
29 Celda B18=CONTAR(B5:B9)
30 Celda B19=DESVIAR2(A5:A9)
31 Celda B20=PROMEDIO(B5:B9)
32 Celda B21=(B17/B12)*RAÍZ(1/B18+((0-B20)^2)/((B12^2)*B19))
33 Celda B22=B21*B2/B3

FIGURA 1.11 Hoja de cálculo para el ejemplo 1.1 de adición estándar.


SKOOG_CAP_01_4tas 3/25/08 5:50 AM Page 17

1E Elección de un método analítico 17

Con el objetivo de ahorrar tiempo o muestra, se La principal dificultad al aplicar el método del pa-
puede ejecutar un análisis de adición estándar usando trón interno es la de hallar la sustancia adecuada que
sólo dos incrementos de la muestra. En este caso, se sirva como patrón interno y agregarla en muestras y pa-
haría una sola adición de Vs mL de estándar o patrón a trones en una manera que se pueda repetir. El patrón
una de las dos muestras, y se escribiría interno debe proporcionar una señal que sea similar en
casi todo a la señal del analito, pero suficientemente
kVxcx
S1  distinta de modo que el instrumento distinga entre las
Vt dos. Se tiene que saber que el patrón interno está au-
kVxcx kVscs sente en la matriz de la muestra de modo que la única
S2   fuente del patrón es la cantidad que se añade. Por
Vt Vt
ejemplo, el litio es un buen patrón interno para deter-
donde S1 y S2 son las señales que resultan de la muestra
minar el sodio o el potasio en el suero de la sangre por-
diluida y de la muestra diluida más el patrón, respec-
que el comportamiento químico del litio es similar a
tivamente. Al dividir la segunda ecuación entre la pri-
ambos analitos, pero no es natural que esté presente
mera y reacomodar términos se tiene,
en la sangre.
S1csVs Un ejemplo de la determinación de sodio en la san-
cx 
1S2  S1 2Vx gre mediante espectrometría de llama usando litio co-
mo un patrón interno se muestra en la figura 1.12. En
El método de una sola adición es un poco más peli- la parte superior se muestra la curva de calibración
groso porque presupone una relación lineal y no pro- normal de la intensidad de sodio contra su concentra-
porciona ninguna verificación de ella. El método de ción en ppm. Aunque se observa una gráfica casi lineal,
adiciones múltiples por lo menos proporciona una ve- se puede ver un poco de dispersión. La gráfica inferior
rificación de la hipótesis de linealidad. muestra la razón entre la intensidad del sodio y la del
litio en función de la concentración de sodio en ppm.
1D.4 Método del patrón interno Observe la mejora en la curva de calibración cuando se
usa el patrón interno.
Un patrón interno es una sustancia que se añade en
Al ejecutar cualquier método nuevo de patrón inter-
cantidad constante a todas las muestras, blancos y pa-
no, se debe comprobar que los cambios en la concen-
trones de calibración al efectuar un análisis. De otra
tración del analito no afectan la intensidad de la señal
manera podría ser un constituyente principal de mues-
que resulta del patrón interno y que éste no anula ni
tras y patrones, presente en cantidad suficiente de tal
intensifica la señal del analito.
modo que se pueda suponer que su concentración es la
misma en todos los casos. Entonces, la calibración re-
quiere hacer una gráfica del cociente de la señal del 1E ELECCIÓN DE UN MÉTODO
analito entre la señal del patrón interno en función ANALÍTICO
de la concentración del analito en los patrones. Esta En la columna 2 de la tabla 1.1 se ve que en la actua-
relación de las muestras se usa luego para obtener las lidad existe una gran cantidad de herramientas para
concentraciones del analito a partir de una curva de realizar análisis químicos. De hecho, hay tantas que
calibración. elegir entre ellas que a menudo es muy difícil. En esta
Si se elige y se usa en forma apropiada un patrón sección se describe en forma resumida cómo efectuar
interno, se pueden compensar varios tipos de errores, dicha elección.
tanto aleatorios como sistemáticos. Por consiguiente,
si el analito y las señales del patrón interno responden 1E.1 Definición del problema
en forma proporcional a las fluctuaciones aleatorias
Para elegir de manera inteligente un método analítico,
instrumentales y del método, el cociente de estas seña-
es esencial definir con claridad la naturaleza del pro-
les es independiente de dichas fluctuaciones. Si las dos
blema analítico. Esta definición requiere respuestas a
señales están influenciadas en la misma manera por
las siguientes preguntas:
los efectos de la matriz, también ocurre una compen-
sación de estos efectos. En los casos en que el patrón 1. ¿Qué exactitud se requiere?
interno es un constituyente principal de las muestras 2. ¿Cuánta muestra se tiene?
y los patrones, también puede haber compensación de 3. ¿Cuál es el intervalo de concentración del analito?
los errores que surgen al preparar la muestra, diluirla 4. ¿Qué componentes de la muestra podrían causar
y limpiarla. interferencia?
SKOOG_CAP_01_4tas 3/25/08 5:50 AM Page 18

18 Capítulo 1 Introducción

A B C D E F G H I J K
1 Método del patrón interno por espectrometría de llama
2 1000 ppm de Li añadido como patrón interno 12
3 Conc. de Na, ppm I Na I Li I Na/ILi
4 0.10 0.11 86 0.001279 10
y = 0.947x + 0.422
5 0.50 0.52 80 0.0065
8 R 2 = 0.9816
6 1.00 1.8 128 0.014063
7 5.00 5.9 91 0.064835

I Na
8 10.00 9.5 73 0.130137 6
9 Incógnita 4.4 95 0.046316
4
10 Ecuación de regresión
11 Pendiente 0.012975
2
12 Ordenada al origen 0.000285
13 Concentración de la incógnita 3.54759 0
14 Análisis del error 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00
15 Error estándar en Y 0.000556
Na conc., ppm
16 N 5
17 S xx 71.148
18 y con barra (relación promedio) 0.043363
19 M 1 0.14
20 Desviación estándar en c 0.046925 0.12
21 Documentación y = 0.013x + 0.0003
22 Celda D4=B4/C4 0.1
R 2 = 0.9999
23 Celda B11=PENDIENTE(D4:D8,A4:A8) I Na/I Li 0.08
24 Celda B12=INTERSECCIÓN(D4:D8,A4:A8)
25 Celda B13=(D9-B12)/B11 0.06
26 Celda B15=ERROR.TÍPICO(D4:D8,A4:A8) 0.04
27 Celda B16=CONTAR(A4:A8)
28 Celda B17=DESVIAR2(A4:A8) 0.02
29 Celda B18=PROMEDIO(D4:D8) 0
30 Celda B19=ingrese el número de réplicas 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00
31 Celda B20=B15/B11*RAÍZ(1/B19+1/B16+((D9-B18)^2)/((B11^2)*B17))
Na conc., ppm
32
33

FIGURA 1.12 Hoja de cálculo en la que se ilustra el método del patrón interno
para la determinación espectrométrica a la llama de sodio.

5. ¿Cuáles son las propiedades físicas y químicas de la Por otro lado, si sólo se analizan pocas muestras, un
matriz de la muestra? método más sencillo que requiera más tiempo pero
6. ¿Cuántas muestras se analizarán? con poco o ningún trabaja preliminar es la elección
más sabia.
Responder a las preguntas es muy importante porque
Luego de responder a estas seis preguntas se puede
determina cuánto tiempo y atención se requiere para
escoger un método, siempre que se conozcan las ca-
el análisis. Las respuestas a las preguntas 2 y 3 deter-
racterísticas de manipulación de los diferentes instru-
minan qué tan sensible debe ser el método y qué tan
mentos que se muestran en la tabla 1.1.
amplio debe ser el intervalo de las concentraciones
para poder acomodarlo. La respuesta a la pregunta 4
determina la selectividad que se necesita del método.
1E.2 Características de desempeño
Las respuestas a la pregunta 5 son importantes porque
de los instrumentos
algunos métodos analíticos de la tabla 1.1 se aplican a
las soluciones, casi siempre acuosas, del analito. Otros En la tabla 1.3 se proporciona una lista de los criterios
métodos son más fáciles de aplicar a gases, y otros mé- de desempeño cuantitativos de varios instrumentos que
todos son más adecuados para el análisis directo de se utilizan para decidir si un método instrumental es
sólidos. adecuado para resolver un problema analítico. Estas
La cantidad de muestras por analizar, que es la pre- características se expresan en términos numéricos que
gunta 6, también es una importante consideración eco- se llaman parámetros de calidad, los cuales permiten
nómica. Si la cantidad es grande, se gasta tiempo y reducir la elección de instrumentos para un problema
dinero en la instrumentación, desarrollo del método analítico dado a sólo unos pocos. La elección entre es-
y calibración. Además, se debe escoger un método que tos pocos se basa después en los criterios cualitativos
requiera el menor tiempo de operación por muestra. de desempeño de la tabla 1.4.
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1E Elección de un método analítico 19

TABLA 1.3 Criterios numéricos para elegir métodos TABLA 1.5 Parámetros de calidad de la precisión de los
analíticos. métodos analíticos.

Criterio Parámetros de calidad Términos Definición*

1. Precisión Desviación estándar absoluta,


a 1xi  x2
N
2
desviación estándar relativa,
i1
coeficiente de variación, Desviación estándar absoluta, s s
varianza R N1
2. Sesgo Error sistemático absoluto, s
Desviación estándar RSD 
error sistemático relativo relativa (RSD) x
3. Sensibilidad Sensibilidad de calibración, Error estándar de sm  s/ 1N
sensibilidad analítica la media, sm
4. Límite de detección Blanco más tres veces la s
desviación estándar del blanco Coeficiente de variación (CV) CV   100%
x
5. Intervalo Límite de cuantificación de la Varianza s2
dinámico concentración (LOQ) a límite
de la linealidad de la *xi  valor numérico de la medida i-ésima
concentración (LOL) N

6. Selectividad Coeficiente de selectividad a xi


i1
x  media de N medidas =

N

TABLA 1.4 Otras características que se deben donde m es la media de la población para la concen-
considerar en la elección del método. tración de un analito en una muestra y t es el valor ver-
dadero.
1. Velocidad
Para determinar el sesgo se necesita analizar uno o
2. Facilidad y conveniencia
más materiales de referencia estándar cuya concentra-
3. Habilidades que requiere el operador
ción de analito se conozca. Las fuentes de tales mate-
4. Costo y disponibilidad del equipo
riales se tratan en la sección a1A.2 del apéndice 1. Los
5. Costo por muestra
resultados de dichos análisis contendrán errores tanto
sistemáticos como aleatorios, pero si se repiten las
En esta sección se definen cada uno de los seis pa-
mediciones una cantidad suficiente de veces, se pue-
rámetros de calidad que aparecen en la tabla 1.3. Estos
de determinar el valor medio con cierto grado dado de
parámetros se usan a lo largo de todo el libro en el es-
confianza. Como se ilustra en la sección a1B.1 del
tudio de los diferentes instrumentos y métodos instru-
apéndice 1, la media de 20 o 30 análisis repetidos se
mentales.
puede tomar como un buen cálculo de la medio de la
Precisión población m de la ecuación 1.9. Cualquier diferencia
entre esta media y la concentración de analito cono-
Como se ve en la sección a1A.1 del apéndice 1, la pre-
cida del material de referencia estándar se puede atri-
cisión de los datos analíticos es el grado de concor-
buir al sesgo.
dancia entre los datos que se obtuvieron de la misma
Si la ejecución de 20 análisis repetidos sobre un pa-
manera. La precisión proporciona una medida del
trón es impráctico, la probable presencia o ausencia de
error aleatorio o indeterminado de un análisis. Entre
sesgo se puede evaluar como se ilustra en el ejemplo
los parámetros de calidad de la precisión se encuentra
a1.10 del apéndice 1. Por lo regular, al aplicar un mé-
la desviación estándar absoluta, la desviación estándar
todo analítico se pretende identificar el origen del ses-
relativa, el error estándar de la media, el coeficiente de
go y eliminarlo o corregirlo mediante el uso de blancos
variación y la varianza. Estos términos se definen en la
y la calibración de los instrumentos.
tabla 1.5.
Sensibilidad
Sesgo
Hay un acuerdo general de que la sensibilidad de un
Como se puede ver en la sección a1A.2 del apéndice 1,
instrumento o método es una medida de su aptitud
el sesgo es una medida del error sistemático o deter-
para discriminar entre pequeñas diferencias de con-
minado del método analítico. El sesgo  se define me-
centración del analito. Hay dos factores que limitan la
diante la ecuación
sensibilidad: la pendiente de la curva de calibración y
mt (1.9) la reproducibilidad o precisión del dispositivo de medi-
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20 Capítulo 1 Introducción

ción. De los dos métodos que tienen igual precisión, el un nivel de confianza conocido. Este límite depende de
que tiene la curva de calibración con mayor pendien- la relación entre la magnitud de la señal analítica y el
te será la más sensible. Un corolario de este enuncia- tamaño de las fluctuaciones estadísticas en la señal
do es que si dos métodos tienen curvas de calibración blanco. Es decir, a menos que la señal analítica sea
con pendientes iguales, el que muestre la mejor preci- mayor que el blanco por algunos múltiplos de k de la
sión será el más sensible. variación en el blanco debida a errores aleatorios, es
La definición cuantitativa de sensibilidad que acep- imposible detectar la señal analítica con certeza. Por
ta la Unión Internacional de Química Pura y Aplicada consiguiente, a medida que se alcanza el límite de
(IUPAC, por sus siglas en inglés) es la sensibilidad de detección, la señal analítica y su desviación estándar se
la calibración, la cual es la pendiente de la curva de ca- aproximan a la señal del blanco Sbl y su desviación es-
libración en la concentración de interés. La mayoría de tándar sbl. La mínima señal analítica distinguible Sm se
las curvas de calibración que se usan en química ana- toma luego como la suma de la media de la señal
lítica son lineales y se podrían representar mediante la blanco Sbl más un múltiplo k de la desviación estándar
ecuación del blanco. Es decir,
S  mc  Sbl (1.10) Sm  Sbl  ksbl (1.12)
donde S es la señal medida, c es la concentración del En forma experimental, Sm se puede determinar
analito, Sbl es la señal del instrumento para un blanco tomando 20 o 30 mediciones del blanco, de preferencia
y m es la pendiente de la recta. La cantidad Sbl es la in- a lo largo de un lapso grande. Los datos resultantes se
tersección de la recta con el eje de las y. Con estas cur- tratan estadísticamente para obtener Sbl y sbl. Para fi-
vas, la sensibilidad de calibración es independiente de nalizar, la pendiente de la ecuación 1.10 se usa para
la concentración c e igual a m; como parámetro de cali- convertir Sm en cm, lo cual se define como el límite de
dad tiene el inconveniente de que no considera la pre- detección. El límite de detección está dado por
cisión de las medidas individuales.
Mandel y Stiehler 11 reconocieron la necesidad de Sm  Sbl
incluir la precisión en un enunciado matemático signi- cm  (1.13)
m
ficativo de la sensibilidad, y propusieron la siguiente
definición de sensibilidad analítica g: Como lo dice Ingle,12 se han utilizado numerosas op-
ciones basadas correcta o incorrectamente en las esta-
g  m/sS (1.11) dísticas t y z (sección a1B.2, apéndice 1) para determinar
un valor de k en la ecuación 1.12. Kaiser13 argumenta
En este caso, m es otra vez la pendiente de la curva de
que un valor razonable para la constante es k  3.
calibración y sS es la desviación estándar de la medida.
Señala que es erróneo suponer una distribución rigu-
La sensibilidad analítica ofrece la ventaja de ser re-
rosamente normal de los resultados a partir de las
lativamente insensible a los factores de amplificación.
mediciones del blanco y que cuando k  3 el nivel de
Por ejemplo, al incrementar la ganancia de un instru-
confianza de la detección será de 95% en la mayoría
mento en un factor de cinco se incrementará cinco
de los casos. Además, razona que se gana poco usando
veces m. Lo común es que este incremento esté acom-
un valor grande de k y, por lo tanto, un mayor nivel de
pañado de un aumento correspondiente en sS, lo que
confianza. Long y Winefordner,14 en un análisis sobre el
deja la sensibilidad analítica más o menos constante.
límite de detección, también recomiendan usar k  3.
La segunda ventaja de la sensibilidad analítica es que
es independiente de las unidades de medición de S.
Una desventaja de la sensibilidad analítica es que a
menudo depende de la concentración porque sS puede EJEMPLO 1.2
variar con ésta.
Un análisis de mínimos cuadrados de los datos de cali-
bración para determinar plomo mediante su espectro
Límites de detección de emisión de llama dio la ecuación
La definición cualitativa más generalmente aceptada
S  1.12cPb  0.312
del límite de detección es que es la concentración o
masa mínima del analito que puede ser detectada con
12 J. D. Ingle Jr., J. Chem. Educ., 1974, 51, p. 100.
13 H. Kaiser, Anal. Chem., 1987, 42, p. 53A.
11 J. Mandel y R. D. Stiehler, J. Res. Natl. Bur. Std., 1964, A53, p. 155. 14 G. L. Long y J. D. Winefordner, Anal. Chem., 1983, 55, p. 712A.
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1E Elección de un método analítico 21

donde cPb es la concentración de plomo en partes por


LOL
millón y S es una medida de la intensidad relativa de la
línea de emisión del plomo. Se obtuvieron los siguien-

Respuesta del instrumento


tes datos repetidos:

Conc., Núm. de Valor medio


ppm Pb repeticiones de S s

10.0 10 11.62 0.15


LOQ
1.00 10 1.12 0.025 cm
0.000 24 0.0296 0.0082
Intervalo dinámico
Calcule a) la sensibilidad de calibración, b) la sensi-
bilidad analítica a 1 y 10 ppm de Pb y c) el límite de
Concentración
detección.
FIGURA 1.13 Intervalo útil de un método analítico.
Solución
LOQ  límite de cuantificación; LOL  límite de linealidad.
a) Por definición, la sensibilidad de calibración es la
pendiente m  1.12. Para que sea muy útil, un método analítico debe te-
b) A 10 ppm de Pb, g  m/sS  1.12/0.15  7.5. ner un intervalo dinámico de por lo menos unos pocos
A 1 ppm de Pb, g  1.12/0.025  45. órdenes de magnitud. Algunas técnicas analíticas, co-
Observe que la sensibilidad analítica depende mo la espectrofotometría de absorción, son lineales en
mucho de la concentración. Por esa razón no se le sólo uno o dos órdenes de magnitud. Otros métodos,
reporta a menudo como la sensibilidad de la ca- como la espectrometría de masa y fluorescencia mo-
libración. lecular, pueden mostrar linealidad en cuatro o cinco
c) Si se aplica la ecuación 1.12 órdenes de magnitud.
S  0.0296  3  0.0082  0.054
Selectividad
Al sustituir este valor en la ecuación 1.13 se tiene Se refiere al grado al cual el método analítico está libre
de la interferencia de otras especies contenidas en la
0 .054  0 .0296
cm   0 .0022 ppm Pb matriz de la muestra. Por desgracia, ningún método
1.12 analítico está libre de interferencias de otras especies,
y con frecuencia se deben tomar medidas para mini-
mizar los efectos de estas interferencias.
Intervalo dinámico
Por ejemplo, considere una muestra que contiene
En la figura 1.13 se ilustra la definición de intervalo un analito A así como especies B y C que tal vez inter-
dinámico de un método analítico, el cual se extiende fieran. Si cA, cB y cC son las concentraciones de las tres
desde la concentración mínima a la cual se pueden efec- especies y mA, mB y mC son sus sensibilidades de cali-
tuar mediciones cuantitativas (límite de cuantificación, bración, entonces la señal total del instrumento estará
LC, o LOQ por sus siglas en inglés) hasta la concen- dada por una versión modificada de la ecuación 1.10.
tración a la cual la curva de calibración se desvía de la Es decir,
linealidad por una cantidad especificada (límite de li-
nealidad o LOL por sus siglas en inglés). Casi siempre, S  mAcA  mBcB  mCcC  Sbl (1.14)
una desviación de 5% de la linealidad se considera
como el límite superior. Las desviaciones de la lineali- Defínase ahora el coeficiente de selectividad para A
dad son comunes a altas concentraciones debido a las con respecto a B, kB,A, como
respuestas no ideales de los detectores o a efectos de
kB,A  mB/mA (1.15)
químicos. En general, se considera que el límite inferior
de las medidas cuantitativas es igual a 10 veces la des- El coeficiente de selectividad da entonces la re-
viación estándar de las medidas repetitivas realizadas spuesta del método para la especie B en relación con
sobre un blanco, es decir, 10sbl. En este punto, la des- A. Un coeficiente similar para A con respecto a C es
viación estándar es de casi 30% y disminuye con rapi-
dez a medida que las concentraciones son mayores. kC,A  mC/mA (1.16)
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22 Capítulo 1 Introducción

Al sustituir estas relaciones en la ecuación 1.14 se en una solución que tiene una concentración de K de
tiene 3.00  103 M si la concentración de Na+ es a) 2.00
 102 M; b) 2.00  103 M; c) 2.00  104 M. Suponga
S  mA(cA + kB,AcB + kC,AcC) + Sbl (1.17)
que Sbl es casi cero para una serie de blancos.
Los coeficientes de selectividad varían de cero, Solución
cuando no hay interferencia, a valores mucho más
grandes que la unidad. Observe que un coeficiente es a) Al sustituir datos en la ecuación 1.17 se tiene
negativo cuando la interferencia causa una reducción S  mK 1cK  kNa,K cNa 2  0
de la intensidad de la señal de salida del analito. Por
ejemplo, si la presencia del interferente B ocasiona S/mK  3.00  10 3  0.052  2.00  10 2
una reducción en S en la ecuación 1.14, mB llevará un  4.04  10 3
signo negativo, al igual que kB,A.
Si el Na+ no estuviera presente
Los coeficientes de selectividad son parámetros de
calidad útiles para describir la selectividad de los mé- S/mK  3.00  10 3
todos analíticos. Pero no se usan mucho, excepto para
El error relativo en cK sería idéntico al error re-
caracterizar el rendimiento de los electrodos selectivos
lativo en S/mK (véase sección a, apéndice 1). Por
de iones (véase capítulo 23). En el ejemplo 1.3 se ilus-
tanto,
tra el uso de los coeficientes de selectividad cuando se
dispone de ellos. 4.04  10 3  3.00  10 3
Erel   100%
3.00  10 3
 35%
EJEMPLO 1.3
Si se procede de la misma manera, se tiene
El coeficiente de selectividad de un electrodo selec-
b) Erel  3.5%
tivo de iones para K+ con respecto a Na es de 0.052.
c) Erel  0.35%
Calcule el error relativo en la determinación de K

PREGUNTAS Y PROBLEMAS

**Las respuestas de los problemas marcados con un asterisco se proporcionan al final del
libro.

Los problemas que contengan este símbolo se resuelven mejor con hojas de cálculo.

1.1 ¿Qué es un transductor en un instrumento analítico?

1.2 ¿Cuál es el procesador de información en un instrumento para medir visualmente


el color de una solución?

1.3 ¿Cuál es el detector en un espectrógrafo en el cual las líneas del espectro se


registran en fotografías?

1.4 ¿Cuál es el transductor en un detector de humo?

1.5 ¿Qué es un dominio de los datos?

1.6 Mencione las señales eléctricas que se consideran analógicas. ¿Cómo es la


información codificada en una señal analógica?

1.7 Mencione cuatro transductores de salida y describa cómo se utilizan.

1.8 ¿Qué es un parámetro de calidad?

*1.9 Una muestra de 25.0 ml que contiene Cu 2+ dio una señal en el instrumento de
23.6 unidades (corregida por un blanco). Cuando se añadieron exactamente
SKOOG_CAP_01_4tas 3/25/08 5:50 AM Page 23

Preguntas y problemas 23

0.500 ml de Cu(NO3)2 0.0287 M a la solución, la señal aumentó a 37.9 unidades.


Calcule la concentración molar de Cu 2+ si se supone que la señal fue
directamente proporcional a la concentración del analito.
*1.10 Los datos de la tabla siguiente se obtuvieron durante una determinación
colorimétrica de glucosa en suero sanguíneo.
Concentración Absorbancia,
de glucosa, mM A

0.0 0.002
2.0 0.150
4.0 0.294
6.0 0.434
8.0 0.570
10.0 0.704

a) Si se supone que hay una relación lineal, determine la estimación de mínimos


cuadrados de la pendiente y la ordenada al origen.
b) Mediante la función ESTIMACIÓN LINEAL de Excel determine la
desviación estándar de la pendiente y la ordenada al origen.15 ¿Cuál es el
error estándar de la estimación?
c) Calcule los intervalos de confianza de 95% para la pendiente y la ordenada al
origen.
d) Una muestra de suero tuvo una absorbancia de 0.350. Calcule la
concentración de glucosa y su desviación estándar.
1.11 Se midieron exactamente alícuotas de 5.00 ml de una disolución que contiene
fenobarbital en matraces volumétricos y se hicieron básicas con KOH. Después
se vaciaron en cada matraz los siguientes volúmenes de una solución patrón que
contiene 2.000 mg/mL de fenobarbital: 0.000, 0.500, 1.00, 1.50 y 2.00 ml y la mezcla
se diluyó a cierto volumen. La fluorescencia de cada una de estas soluciones se
midió con un fluorímetro, que dio los valores de 3.26, 480, 6.41, 8.02 y 9.56,
respectivamente.
a) Grafique los datos.
*b) Con la gráfica de a) calcule la concentración de fenobarbital en la incógnita.
*c) Deduzca la ecuación de mínimos cuadrados para los datos.
*d) Determine la concentración de fenobarbital a partir de la ecuación de c).
e) Calcule la desviación estándar de la concentración que obtuvo en d).

Problema de reto
1.12 a) Utilice un buscador para localizar la página de la IUPAC en la red y localice
el Compendium of Analytical Nomenclature. ¿De qué año es la última edición
publicada? ¿Quiénes fueron los autores?
b) Busque la definición de sesgo que recomienda el Compendium. ¿Esta
definición y la simbología son distintos de los que se usan en este capítulo?
Explique.
c) Busque la definición de límite de detección que se recomienda en el
Compendium. ¿Esta definición y la simbología son diferentes de los de este
capítulo? Explique.

Véase S. R. Crouch y F. J. Holler, Applications of Microsoft ® Excel in Analytical Chemistry, Belmont, CA: Brooks/
15

Cole, 2004, cap. 4.


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24 Capítulo 1 Introducción

d) ¿Cuáles son las diferencias entre sensibilidad de calibración y sensibilidad


analítica?
e) Los siguientes datos de calibración de obtuvieron mediante un método
instrumental para determinar las especies X en solución acuosa
Señal
Conc. X, Núm. de analítica Desviación
ppm repeticiones media estándar

0.00 25 0.031 0.0079


2.00 5 0.173 0.0094
6.00 5 0.422 0.0084
10.00 5 0.702 0.0084
14.00 5 0.956 0.0085
18.00 5 1.248 0.0110

i) Calcule la sensibilidad de calibración.


ii) Determine la sensibilidad analítica en cada concentración del analito
iii) Determine el coeficiente de variación de la media de cada uno de los
conjuntos de repetición.
iv) ¿Cuál es el límite de detección para el método?