BIOQUIMICA

INFORME Nº1

DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

Nombre: Mendoza Bustamante Jeiner.

I. INTRODUCIÓN.
La α-amilasa es una enzima proteica que se encuentra en la saliva humana y
cataliza la degradación del almidón, que es un polisacárido de reserva vegetal. El
almidón está formado por dos tipos de moléculas: la amilosa y la amilopectina,
ambos polisacáridos de glucosa. La amilosa se conforma por cadenas lineales de
glucosas unidas por enlaces α- C1-C4, mientras que la amilopectina tiene,
además de estos últimos enlaces, uniones C1 con C6, formando cadenas
ramificadas. La α-amilasa rompe uniones C1-C4, tanto en la amilasa como en la
amilopectina, dejando dextrinas lineales y ramificadas (oligosacáridos) como
productos.

Para medir la actividad enzimática de la α-amilasa, se utilizará un test

colorimétrico que detecta el almidón. Para ello se contará con una solución de
iodo/ioduro de potasio (I 2 /IK), ya que el almidón en presencia de esta solución
adquiere una coloración azulada característica. Esto tiene una explicación física:
el iodo se coloca en el interior de la hélice que forma la amilosa (en las regiones
hidrofóbicas), formando un complejo de color azul.

Cuando la α-amilasa actúa, degrada la amilosa, se desintegra la hélice y por tanto

en presencia de I 2 /IK ya no dará una coloración azul. Por lo tanto, en este TP
mediremos la desaparición de sustrato (evidenciada por el test colorimétrico)
para determinar la actividad de la enzima. Además, analizaremos cómo afectan
las distintas condiciones en que actúa la enzima (pH, temperatura, concentración
de NaCl), así como los efectos que pueden causar diferentes pretratamientos
(proteinasa, calor).

La dilución óptima nos indicará cuánto debemos diluir la saliva para que se logre
el efecto acromático dentro del rango propuesto (2-8 minutos).

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II. OBJETIVOS:

a. Generales:
- Reconocer la conformación del sistema enzimático: Enzima-Coenzima-
sustrato, y observar el proceso de la actividad enzimática.

b. Específicos:
- Reconocer el NaCl como cofactor de la amilasa salival.
- Demostrar la presencia de azucares reductores a través de la utilización
del reactivo de Benedict.
- Demostrar la formación de productos como consecuencias de la
actividad enzimática de la amilasa salival.

III. MARCO TEÓRICO.

Enzimas.

Las enzimas son importantes proteínas cuya función es acelerar la velocidad de

las reacciones químicas que se producen en el organismo y que son necesarias
para mantener su actividad biológica, lo cual realizan al disminuir la energía de
activación

Las reacciones catalizadas por enzimas ocurren a velocidades 1010 a 1014 veces
más rápidas que las no catalizadas. Por ejemplo, la ureasa acelera la hidrólisis
de la urea en la orina por un factor de 1014. Este factor significa que una reacción
catalizada que toma I segundo en producirse podría tomar un tiempo de 3
millones de años sin estar catalizada

Propiedades de las enzimas.

Las propiedades de los enzimas derivan del hecho de ser proteínas y de actuar
como catalizadores. En la conformación suelen ir asociados en cambios en la
actividad catalítica. Los factores que influyen de manera más directa sobre la
actividad de un enzima son: pH.

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Sustrato.

El sustrato también puede ser una especie química que se considera como
objeto de la acción de uno o más reactivos; por ejemplo, un compuesto
transformado por la acción de un catalizador. La bioquímica sostiene que
un sustrato es una molécula sobre la cual actúa una enzima.

Las enzimas catalizan reacciones químicas que involucran sustrato(s). El

sustrato se une al sitio activo de la enzima, y se forma un complejo enzima-
sustrato. Por acción de la enzima, el sustrato se transforma en producto, se libera
del sitio activo y queda libre para recibir otro sustrato.

Cofactores.

Un cofactor es un componente no proteico, termoestable y de baja masa

molecular, necesaria para la acción de una enzima. El cofactor se une a una
estructura proteica, denominada apoenzima, y el complejo apoenzima-
cofactor recibe el nombre de holo-enzima.

IV. MATERIALES

 Gradilla.
 6 tubos de ensayo.
 Pipetas.
 Incubadora para ¨Baño María¨
 Cocina eléctrica.

Reactivos a utilizar.
 Solución de almidón pH 6.6 al 1%
 Cloruro de sodio solución 0.1 M

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V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL.

ETAPA A:

SISTEMA
COMPONENTES I II
- Solución Almidón 5ml 5ml
1% pH 6.6
- solución de cloruro 1ml 1ml
de sodio 0.1M
- Agua destilada 4ml 3ml

Colocamos los tubos al baño maría de agua a 37oc por 5minutos, luego agregamos 1ml
de enzima al tubo II, sin retirar del baño maría, dejándole seguir con el baño maría a 37oc
durante 30 minutos.

Fig. Nº 1

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ETAPA B:

De cada uno de los tubos de incubación (de la etapa A) transferir 0.1ml. de sus
correspondientes del cuadro siguiente (etapa B), inmediatamente de cumplidos los 30
minutos de incubación.

SISTEMA
COMPONENTES I II
- De los tubos I y II: 1ml 1ml
De la Etapa A
- Ácido clorhídrico 1ml 1ml
0.05 N
- Solución yodada 0.5ml 0.5ml

Fig. Nº 2

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ETAPA C:

SISTEMA
COMPONENTES I II
- De los tubos I y II: 1ml 1ml
De la Etapa A
- Benedict 1ml 1ml

Hervimos por 10 minutos para luego observar los resultados.

Fig. Nº 3

[NOMBRE DEL AUTOR] 6

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VI. CUESTIONARIO.

1. ¿Cómo demuestra usted la presencia del sustrato en los tubos de ensayo?

La Alfa amilasa actuó sobre el almidón(sustrato) se dice que sufrirá una

reacción el sustrato al unirse en un sitio activo con la enzima, en los tubos de
ensayo si se demuestra donde cada uno de los tubos cambiaron de color.

2. ¿Cómo demuestra usted si se ha producido o no reacción enzimática en

el experimento realizado?

Si se demuestra que se ha dado reacción enzimática porque los tubos de las

muestras de su color original tras dichos pasos realizados en el laboratorio
como productos finales se obtuvo colores diferentes.
También por el cambio de temperatura, y al mismo tiempo hay una reacción
de catalizador

3. ¿Cómo demuestra usted los productos de la reacción enzimática en el

experimento realizado?

Como las reacciones catalizadas por enzimas son saturables, la velocidad de

catálisis no muestra un comportamiento lento lineal en una gráfica al aumentar
la concentración de sustrato.

4. ¿Qué diferencia y/o semejanza encontró entre los experimentos 4 y5 para

determinar la actividad enzimática?
La diferencia que encontramos entre los experimentos con Ácido clorhídrico
no cambio de color, solución yodada cambio de color a rojo intenso o rojo
oscuro.

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VII. CONCLUCIONES.

- La amilasa degrada el almidón, según los factores y medios en donde se da la

actividad enzimática.

- La práctica nos ayudó para comprender la acción de las secreciones de las

glándulas salivales, que llevan a cabo la degradación de polisacáridos a
monosacáridos; por consiguiente, reafirmar el concepto de digestión química.

- Esto fue posible gracias a que con los reactivos de benedict y solución yodada
que cambian de coloración.

VIII. REFERENCIAS.

- Cornejo Garcia Jesus. Biologia 2. Primera edición. 2006. Editorial Umbral.

- 2006 Audesirck, Biología 1, sexta edición, pp 328.
- https://revistas.unal.edu.co/index.
- www.bdigital.unal.edu.
- Apuntes hechos en clase.

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