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---·· ·--'--· ---"----~ -~

. .

Biosf ntesis de nucleotides

Los nude6tidos son necesarios para el crecimiento y la replicad6n celular; Un enzima dav~ para la sf~esis de i'.rn nude6tido es la .
dihidrofolato reductasa (a Ia' derecha). Las celulas que crecen en presence de metotrexato, un inhibidor de la redudase, reaccionan ·
aumentando el ndrnero de copies de! gen de la reductasa Las regiones de color amarillo bn11ante que pueden verse en· tres de los
cromosomas de la mic:rograffa de fluorescenda {a la izquierda), contienen cientos de copias de! gen de la reductasa, debido a que
las celulas se ru!&.r::ran:e.11.presenda.de metatre.~.n.I(l.zquierd3.) Corte<:f<r de Ja Dra, Barbara Trasky del Dr. Joyce H;Jmfin.] ····:
~--. ·- .., ..
-: .. ··

.•· ·.·-· ····:

L os nucle6tidos 'son biomoleculas :fundamentales necesarias .para una serie de


procesos vitales. En primer Ingar,las nucle6tidos so~l~ecursores actiuados de
Los acidos nucleicos, necesarios para la replicaci6n del genonia y la transcripci6n de
CONTENIDO

. ~m. de nova
El anillo de pirimidina se sintetl;z~''
.·;

0 se reconstruye me~j~ht:e.
la infonnaci6n genetica en el RNA. En segundo lugar, un nude6tido de adenina, el
vias de recuperad6n · ''i:
ATP, es la moneda etietgetica: universal. Unnucle6tido de guanina, el GTP, tamhien
actiia como fuente de energfa para un grupo mas selecto de procesosbiologicos, En ~'@ Las bases pCrricas se pueden :::, ;·'
tercer lugar, derivados de nuclc6tidoscomo la UDP-glucosa participan en proces~s sintetizar de nova o se pueden'" ·
recidar mediante vfas de ··
bicsinteticos como la· sintesis de gluc6geno. En cuarto lugar, las nucleotides son recuperad6n
componentes esenciales de las vfas de transducci6n de seiiales. Los nucle6tidos ciclicos
como el AMP ciclico y el G11P ciclicoson segundos mensajeros que transmiten · ~~ Los desoxirribonudeotidos se
sefiales tan.to en el interior de una celula como entre celulas distintas. Ademas, el · sintetizan por reducci6n de
ribonude6tidos mediante un
ATP actUa coma el donador de las grupos fosforilo transferidos por las protefnas mecanismo en el que intervienen
quinasas en una serie d~ vias de se:5.alizaci6ny, en algunas casos, el ATP se segrega radical es
coma moleculasefial.
En este ~pitulo continnarnos el camino iniciado en el-Capitulo 24, donde se
~ uis etapas clave de la biosfntesis
de nude6tidos se regulan
describfa la incorporaci6n a las aminoacidosdel nitr6geno procedente de fuentes mecfiante retroinhibici6n
inorganicas como el nitrogeno gaseoso, Los aminoacidos glicina y aspartato son Ios
~ Alteraciones en el metabolismo
armazones sabre las cuales se ensamblan los sistemas ciclicos presentes en las == de !os nude6tidos pueden
nucleotides. Ademas, durante la formaci6nde nucleotides, el aspartato y Ia cadena provocar diversas patologfas
lateral de la glutamina actUan coma fuentes de grupos NH2.
735
73.6• Tabla 25. l Nornenclatura de las bases, los nude6sidos y IQ? jiucleotidos
CAPITULO 25 · BioSirite'"Sts·<le nudectidos RNA
Ribonucle6tldo
B<tSe. Ri~nucleosido (5 '-monofosfato)
Adenina{A) · Adenosina Adenilato (~).
vfA DE RECUPERAG6N Guanina(G) G~oslii~: ·~a~o(GMP~ .. '.::::
Ribosaactivada (PRPP) +base Uracilo(U) Urldina Uridilato (UMP)
Citidina'.· Citidilato (ChiP)

l
Citosina (C)

DNA
Desoxi:rrih6nude6tido
Nude6tido Desoxirribonucleosido (5'-monofosfato)
Adenina(A)
VIA DE NOVO Guanina(G)
T:rmina(T)
Ribosa activada (PRPP) + arninoacidos
+ATP+COz+... . . Citosina(C) · ·. :. ·

. .
l .. . . ~ .;.Las .vias .de.biosfntesis.de nucleotidos.tienen. enormeirnportancia como puntos
· ,. , . · .. · 'Nucleotide <: · : .. - :i''-';.:~·:.·,,\!(..<.:<:~~-~;&Anter:v~ci?:g[d9p,g??-t~".t~~pt~titj.c-os:~}4u'~):i~srd~::J.s:i
~apnacos·rn:as utilizados
. . ..
. . . .. : ._.. .," ··:····· \;"~:.) ;;:-:.;j·._para.:tratar:elcii)..cir:J?loquean:efap~~aeia:~bicisfnteS?:s:ae·D.udeoi;idos;-concretai:nep.- .
. .: . ;. -i"F.igura.25:.1 NI~ de recuper~_d6n_ y de:~\ - :' :,? ;.~ -te Ias-etapas en Ias ;que se sintetizan.Iosprecursoresdel PNA..: : . . . -.':~ : . . / . . ..
. · · · · nova. En una· via de·recuperaoon, una base · . . · · · . · _ . : · . ", · -, ." . '; · .. : .•
· · · ", ; .vuelve.a iinirse a--una ribosaactvada en forma . . .: ··,:. : · · : . : : -". . . ,. : · ." · ·;: :<" '. ": ';. ": .', · .. :.
: .;: .,.,,~de:.S.'.fosforribosil-J-pirofosfato (PRPP), En·la· ... ··::;-:. :~-~ . Los-nucleotides se.puederi sintetizar.rnediante.vlas.ce.novo o ./· . .' .. :.,
.. -rsfntesisoe novo, la propia base se sintetizaa- ... ~-:;.<i·.< rnediante vfas de recuperacion . . .; . . ..
partir de materiales mas sendllos, entre las que
se-induyen aminoaddos, La sfntesis de nova ' Las vias·de biosfntesis de micle6tidos sen de dos tipos: vias d~ nova yvias de recupe-
requiere la hidr61lsis de ATP. · racum. (Figura 25.1). En Iasvias de ~ova (1~ que parten(de cero), lasbases de los
nucle6tidos se constniyen a partir de compuestos mas sencillos. Una vez ensambla-
do el armaz6n de una base pirimidinica.; a este se le incorpora la ribosa. Por el con-
trario, elarmazon de una base piirica se sintetiza paso a paso directamente sabre una
estructura que contiene ribosa. Estas vfas constan de un reducido mimero de· reac-
ciones elementales que se repiten con variaciones que dan lugar a las disbntos.
imcle6tidos, tal y come podrfa esperarse de aquella.S vias que han _surgido muy pron-
to en la evoluci6n. ·En las vias de recuperaci6n, se rescatin las bases que se han
Bicarbonato form.ado con·anterioridad y se vuelven a ensamblar con una unidad de ribosa.
+ · Lis.vi~ de novo danlugar aia sf:ri.tesis de nbonucle6i:idos. Sin eml;argo,el DNA·.

2A:i
NH~
se construye a p~ de deSoximbonucle6tidos. Coincidiendo con la idea de que en
el ~scurso de ia evoluci6n el RNA prececli6 .al DNA, todos 10s desoxirribonu-
cle6tidos se ~intetizan a·partir de los correspondierites ribonucle6tidos: El ailicar
Carbarnilfosfato · . Aspartato desoxirribosa se genera" mediailte la reci.U:cci6n de la ribosa perteneciente a Un
·\_ . ·. N/~"'-C · . } . nucle6tido- ~itainente foi:mado. Ademas, ~l· grUpo, Iri~tilo que.diferen(:ia: a: la
~13 .51/. tirnina de;l D~A del liracilo del RNA se aii.ade durante la Ultima etapa de la via.
... c2 1 sc .
.. 'N/ . La nomenclatura.de los nucle6tidos y de ius componentes· ~e introducido en ha
Anill~de · el Capitulo 4. Recordemos que un nucle6sido esti fonnado pot una base plirica o
. pirimidina . plr:imidfnica Unida a. un ·azticar y que'11D: nu.cleotido es un ester
. . lt:-
fosfat~ de mi nucle6-
i. PRPP sido. Los nombres de las bases mayoritarias tanto del,RNA coma del DNAy de sus
(una ribosa denvados nucle6sidos y nude6tidos se recogen en la Tabla 25.1 ..
fosfat9).

. . ' ~ .
~V:rR~~~\;,~-;.z:cjR al RNA 25~l ·EI anillo depirirnidina se sintetiza de nova o .se
: ~i- . . l recohstruy~ mediante vfas de recuperaci6n .
. ~~al DNA . En la sfntesis de nova de las pirimidinas, primero se sintetiza el.anillo y posterior-
mente ·se le aii.ade la ribosa fosfato para fo~ar eL nucleotide de pirimidina.
___J:igura;25.2_YJ;_de~p;a_~a;Ia.:Sfnt~.d-e (f,i~25;.2j-:-l,os..,anillos-de7picimidina-se-CGnstruyen-a-partir--de-biGarbonato,.· ---
nudeotidos·de pirimidina, Los atornos C-2 aspartato y .amoniaco .. AUn.qu~ se puede u~ una molecula de ~oniaco que ya
y N-3.del 9hillo de pjrimidina proceden de! . · · · . · · · ·
carbamiltosfato, mientras que los 'demas atomos . . este presente en.disolucion, elamcniaco precede generalmente de la hidrolisis de la
de! anillo proceden de! aspartato.. ', .. . . cadena-lateral d~ la ghrtarnina," -··. . .. . .. . . .. . , · . · ... ·". · :

..... --.--:--~~-. -
... -·~--:. -· ···-···----·--·· ------· ------------....-..~-
·····-------- -·--····-·-···-··- .. :·-···· ···-:--- .. ·-
El bicarbonato.y otros compuestos decarbono oxigenados se activan
par fosforilacion · 25.1 Sfntesis de pirimidlnas
El primer paso de la biosfu.tesis de novo de las pirimidinas es la sfutesis. de ca.rbamil-
fosfato a
partir de bicarbonato y amoniaco mediante un proceso con multiples 'et;l-
pas que requiere la escision de dos moleculas de ATP. Esta reaccion esta catalizada
par la carbamilfdsfato sititetasa (CPS; Secci6n 23.4). El aruilisis de la estructura de la
CPS indica que consta de dos dominios hom6logos, cada uno de los cuales cataliza
una etapa dependiente del ATP (Figura 25.3) .
.. En la primera etapa, el bicarbonate se fosforila por el ATP dando lugar a car-
boxifosfato. y ADP.· A continuaci6n,. eLamoniaco reacciona con el crrboxifosfato .
. paraformar acido carbamico y fosfato inorganico, .

'1 '.~?4<·;-: <'~ . ;,; .


. . Blcarbonato ~ . ."J. carboxifosfato
.
~ 'cei;L'S;?. a8:.i.vq · _ · reaccion se localiza en. un dominio formado par ~l tercio
. Acido carbamko·.• -

amino terrninal deJ~pPS: Este dominio forma una estructura, denominada.p lega-
miento de. sujeci6n ·l:ze1 ATP, que rodea al ATP y lo mantiene en una orientaci6n
apippiada para el afi~ue nucleofilico al grupo fosforilo en posici6n "'/~·Las proteinas
quecontienen el ple~ento de sujeci6n del ATP.catalizan la fo:r;maci6nde ~aces
carbono-nitr6geno ~ediante intermediaries acilfos...'"ato .. Estos plegamientos: de .
. ~j eci6n del ATP· se utilizan
c~n muchafrecuencia enla biosfu.tesis de·nucle6tidos: ··.. · ·
·. EnJa s~da· etapa} catalizada por la carbamilfosfato sintetasa,· d. acido ca±ba- ·
·· ;mco s~ foSforil~~~~t~ otra molecula d~·ATP paraformar =b~osfato. ·. .

. . ·. o··. ·!UP · ADP


\ "- . )'
· . 2- O · .
' .. 11 ·. . • -: ·1 · . ·110
. . ) . ~~R.. L :·. . . .
.-~~NH2° : .. r:f' · "o/ -,NH2
_ Addo carbamlco Carbami1fosfato

. ~r9:c9.?n t.i.ep.~lugar ~ un:s~do dominio' de.~jecioi:;-delAJ!'~el.enziIDa.Los.. ;•


centres activos donde se forman el aci.do carbamico-y . el carbamilfosfato son: muy
.parecidos.Io queindica que este enzima evoluciono mediante unproceso de duplica-
ci.6.ri genica, De heclio, 'tanto Ia duplicaci.6n de un gen que cocliflca un dominio de,
.rujecion del ATP como Ia especializaci.6n subsiguiente fueron acontedri:uentos· cru-
ciales durante la ·evoluci6n"de los procesos de biosfntesis de nuCie6tid~.s {p. ·741).
. . . . . . ~~~-
.La cadena lateral de Ia.glutamina se .puede·hidrolizar para generar
':. -~
arnoniaco ~ -centro:do~d~
· . ;·~'· se fosfonfai{
La glutamina es la principalfuente de amoniaco para la carbamilfosfato sintetasa. f~/el acido carban;iico
'En este caso, un segundo componente polipeptidico, del enzirna hidroliza glutamina ·= -~'-~
para formar amoniacoy glutam:ato. El centre' activo del componente que hidroliza · · ~ ' Figura 25~ Estructura de la
la glutamina contiene una diada catalitica formada par un residue de cistefu.ay un: . car~arnilfo:tato sintetas~ Obseivese que el
id d histidin a. Esta diada catalfti ca, que recuer
resi uo e
· da al cerrtr o acnvo
.....:. de Ias. cis-
· .. · ..... reacciones,
enzirna contiene centres actiVos para tres
Esteenzirna esti formado por dos
teinproteasas (vease la Figura 9.16), se encuentra conservada en una familia de cadenas, La cadena mas pequeria (en aman1lo)
amidotransferasas, a la que pertenecen la CTP sintetasa y la G:MP sintetasa, contiene un centre donde se hidroITza la
·· · · · glutamina para generar amoniaco. La cadena
mas grande presenta dos dominios de sujeci6n
Los intermediaries se pueden desplazar entre los centres actives por de! ATP (en azul yen ro]o). En uno de los
canalizad6n dominios de sµjeci6n de! ATP (el azul), el.
. bicarbonate se fosfon1a para dar lugar a
La· carhµnilfosfato sintetasa contien.e tres centros ·actives distfu.tos (vease 1~ - carboxifosfato, que posteriormentereacdona
Figui.a. Z5.3), separados. UD.o 'de otro p~r una ·distancia de unos. 80 A Los interme- con el amoniaca para former ai:ido carbamico,
En el otro dorninio de sujed6n l:le! ATP; el addo
diarios que se generan en uno de las centros se aesplazan al siguiente sin ·abandonar.
carbarnico se fosforila dando lugar a!
el enzima. Estos intermediaries se mueven por el interior del ellzim.a gracias a la carbamifosfato. [romado de lJDB.pdb.J
738
CAPITuLO . 25 . Biosfntesls de. nucle6tidos

..

r
Acido
carbarnico

I
_:~; Figura 25.4 Canalizaci6n de!
sustrato, Los tres centros actives de la
carbamilfosfato sintetasa estan conec:tados
mediante im conducto (en amarillo) a traves :
del cual se desplazan los intermediaries, ·
i La g!utamina entra por uno de los centres.'
,[ activos, y el carbamilfosfuto, que contiene .
\
·: elatomo de nitr6geno procedente de la Carbarnfl-
cadena.lateral de la glutamina, sale por otro fosfato
· ~.·.•,e-:.sit8ado~a,so·A·de1distancia,[fomado.de
. ,.'JJDB,Pii6.] .
. ~ ..... . .· ··=···
•, .•. 0 0 :,M :,_ .....

canalizaci6n del sustrato, un proceso parecidoal de~crito para la tript6fano su;_tei;-


sa (Figura 25.4; tambien Figura 24.17). El amoniaco que se genera·er{ el centre
active que hidroliza la glutamina se desplaza 45 A a traves de un conducto intcrno
del enzizna hasta alcanzar el centro donde se ha generado el carboxifosfato. El acido
carbamico que se produce en este centre difunde otros 35 A a lo largo de una pra-
longaci6n dcl conducto hasta alcanzar el centre donde se genera el carbaroilfosfato.
Esta canalizacion cumple un doble papel: (1) I~s intermediaries que se generan en
un centro activo se utilizan sin.que haya perdidas par difusi6n y (2) .Ios intermedia-
rios inestables, como el carboxifosfato y el acido carbamico (qqe a pH 7 se descorn,-.
ponen en menos de 1 s), seprotegen de la hidrolisis, Mas adelante en este capitulo
veremos otros ejemplos de' C:analizaci6ndel sustrato ..

El orotato incorpora un .ani!lo deribosa .del PRPP para formar un ...


nucleotide de 'pirimidina, que se convierte en uridilato . .
En ~a re<i.cci6n catafuack porla aspaitaio transcarbamilasa (Seccion 10.1), el cri--
bamilfosfatoreaccio~acori.aspartatoparifon:D.ar.carbamilasparcito.Posteri~rme~te,
el carbamilaspartato se cida y se con:vierteen dihidroarotato que, a contiriuaci6n; es
oxidado par ~~+para formar orotato. . · ·

;r;/~NH' . ,,,,~H
NADH
0 0
II +
Aspa\o .. 2
W
\J
Hp NAD+

\2
H+.

-ooc coo~
.
-ooc~o
H H' . .H
Carbamilfosfato Carbarnilaspaitato· Dihidroorotato : Orotato · ·

· En las mamfferos, el enzima que origina orotato esta' ~onstituido per una. 'Unica
cadena polipeptidica denominada CAD, en referencia a sus tres actividades:carba-
milfosfato sintetasa, aspartato transcarbamilasa dihidroorotasa. · · y
· . En estepunto, el orotato se acopla a la ribosa, en forrna de 5-fosforri.bosil-l -piso-
------------..,...,.-...,.,-..,------foefato-(.l~RP-F-),.una·forma-activada-de-la·ribosq:-que-ac~pta-bases·de-nucle6tidas:-ba---
· 5-foefdosil-:[.-pirofoifa:to sj~ sintetiza el PRPP rnedianteIa adici6n.de un piro-
fosfatoprocedente del :Arp a la ribosa-?-fc:sfat(?,la cual ha sido generada median~Ia
via de las pentosas foSfato: · . ·
2-0,pa~Ra" NP
\ /)
PRPP
sintetasa
AMP ~-03POH2Cw

·
0-,0
~f
o/"-o/'-'o
p
o
~{/
,0
R:- 2
-

·HO OH HO OH
Ribosa 5-fosfato PRPP
Orotato
El orotato ieacdona con el PRPP para formar oroiidilato, un nude6tido de pirimi- +
2-03POH2C
dina. Esta reacci6n esta dirigida por la hidr61isis del pirofosfato. El enzima que. O 0,-.0 q ,0
cataliza esta .adicion, la fosforriboSJ.1transfewsa. de pirimidina.s, es hom6logo a otras 'i.:f ~1_2-
fosforribosiltransferasas que adicionan diversos grupos al PRPP para formar los 0
,. . . . -P" .0 ,........-P"'
.
;.0
demas, nude6tidos .. A contin,uaci6n, el· orotidilato· se descarboxila · dando Iugar a
HO OH
uridila.to ·(UMP), uno de los principales nude6tidos de pirimidina -precursor- del
5-Fosfo rribosil-1-pirofosfata
RNA. Estateacci6n esti cafalizada per la orotidila.to desca.rbW:ilasa.··. : :·· ::· ·

1~~
(PRPP)

-0
.... J • • • • • • ....

\l,
~'~;t.iF:"''}:(N l=JJ ''H: "··
,::~::~~~ O~ 2-oPOHC

,
- ..... : · HO : OH
qrotiduato · ·.

. . . ~ ·: .+' : :. . .
La orotidilato descarboxilasa es uno de los enzim.as mas eficientes que se cono-
· · HO ·

. '
.; Urldilato ·
OH

.: '.: . . . ,. .. ~
2-o,POH2~

H
HO
~

OH
i~o
Orotidilata
cen. En su ausencia, Ia' descarboxilacidn e8 extremadamente lenta y'se estima que
tiene Ingar tma vez cada 78 m.illones de afios; en presencia del enzima, el proceso .
ocurie aproximadamente 'una vez por segundo, uha v'elocidad que es 1017 v~ces mas
elevada.

.
Los
. .
nucle6tidos
. .. .
mono-, . di-y trifosfato. son
.
. .. ····· ~
interconver.tibles
. . . . - . - - . . .. . . . .. . :- -~ ..
lC6mo se form.a la citidina, el otro ribonucle6tido de ~irimidina mayoritario? .Se
· sintetiza a partii de la base uracilo del UMP, pero la' sintesis solo puede ocurrir una
vez que el Ul:vfP se ha convertido en UTP. Recordemos que'los difosfatos y trifos-
fatos ·SOU lasfonnas activas de las D.Udeotidos tan.to en la biosfntesis COIDO en las .
conversiones energeticas. Los nucle6sidos m.onofosfato se corrvierten en n~cle6si- .
dos trifosfato por etapas. En primer lugar, las nucle6si9!;:1§ ~onofosfato se convier-
ten en difosfato por medio de nucle6sido monofosj:t{fqaina.sas especifi.cas que .. -. . (~.,

utilizan'ATP como donad;r de grupos fosforilo. Per ejemplo, el U1v.1P es fosforil~-


do para formar UDP mediante la UMP quinasa:

UM:F +ATP ~ UDP;!- ADP .


. ;~;f
Los nucle6sidos difosfato y trifosfato son in.terconvertibles gracias a la nucleosi- ·
do difosfa.to quinasa, un enzima de escasa especificidad, a diferencia de las monofos-
fate quinasas, x e y pueden representar a cualquier ribonucleosido 0 incluso a
cnalquier desoxirribonucle6sido:

XDP +YI'P. ~-XTP+ YDP

El CTP'.se forma mediante aminacion de! UTP


Una vez formada la uridina trifosfato, esta se puede.transforrnar en citjdina. trj.fosfCI.-
to reeinplazando un grupo carbonilo por im'grui:)o amino, una reaccion que, es
catalizada por la citidina. trifosf o.to sinieiasa:
739

·········------
CAP[TULO 25~ Biosfnte5is' de nude6tidos

' C9~0 en la sfutesis del carbamilfo~fato, esta re~cci6n necesita ATP y utiliza la.glu-
tamina conio fuente de grupos amino. La reacci6n tiene lugar mediante un meca-
nismo analogo durante el cual el atomo 0:-4 se fosforila para originar un reactive
intermediario y, posteriormente, el fosfato se reemplaza por el arnoniaco que .se
liberamediante la hidr6lisis deIa glutamina. El CTP puede utilizarse despues en
muchos procesos bioquirnicos, entre.los que se incluye la sintesis de lipidos y de
RNA. . .

. , · ,. -: .-·:. J-La.:Yr~~:~·~:~~~c~p·~~~-~i2~f:~~~ci.:d~~j~~;:b.~~~~:~pi:~~~~ci~~~~,~~.- ·,~ · .;· . :·::. ~.': '.~ :_


. ·. ~ }Ja~~ pirimidinicas pueden recuperarse ~ partir de los productos de la fragmen- .
taciondel DNA y del RNA mediante el empleo de las vUiS de recuperacidn. En estas
vias, se reincorpora una base preformada al nucleotide. Consideraremos la recupe-
raci6n para la base pirimidinica tiamina. La tiamina se encuentra en ~1 DNAy, en
la doble helice de DNA, se empareja con la adenina, La tiamina que se.libera did
DNA degradado se recuperi en dos etapas, En primerIugar, la riarnina se convierte
en el nucle6sido timidina poda timidina fosforilasa.. . . .
Timina + desoxirribosa-1~fosf~to ~ timidina +Pi

Despues, la tirnidina se convierte en. un nucle6tido por la timidina quinasa.


Timidina +ATP ~ TJv.(P +·ADP.
La actividad de la tll:nldina .qillnasa fluctlia con ei ciclo celular, de5arrollando mi
pico de actividad durante lafase S, cuando tiene lugar la sintesis de DNA. La tirni-
dina quinasa de los virus difiere de la de los mamiferos, lo que proporciona una
di<fila' terapeutica, Por ejei:nplo, las infecciones por el herpes simple se · tratan
' C~z G!icina .
con aciclovir, que.la timidina quinasaviral cohviert~ en un inhibid~r suicida que
Aspartato C. { N N10-Fonniltetra- interrumpe la sintesis de DNA. Como veremos en breve, la tiroidina quinasa tam- ·
. '-->N( 6 'sc-- 7 <
hidrofo!ato 'Die~ tieneuna funci6~ en la sfu.t~is de :riovo del timidilato. ·
1.2 4l sac..----
.
N10-Formiltetra-
hidrofolato
/
h \.
c'- N3 /'C-.. N'""

Estructura
~-{_-G!utamina

. ribosa-P
,252 ..'Las bases piiricas se pueden sintetizar de nova ci se
Glutarnina de! anillo ·
de purina pueden -recidar mediante. vfas de recup~racion· ·
· tJ igual que los nucle6tidos de pirimidina,Jos.nude6tidos de puruui se pueden sin-
tetizar de 'iiovo o mediante vfas de recuperacion. Cuando se sintetizan de novo, la
IMP sintesis de purinas comienza con materiales de partida sencillos como aminoacidos
y bicarbonate (Figura' 25.5). A difsrenciade las bases pirimidfnicas, las bases de
I \ purina se construyen estando ya unidas al anillo de ribosa, Por otra parte, las bases
de purina Iilieradas durante la degradaci6n hidrolitica de acidos nuclei cos y nucleo-
tidos, pueden ser recuperadas y recicladas. Las vfas de recuperacion de purinas son
particularrnente dignas de ate~ci6n tanto poda'. energfaque ahorran como por IOs.
notables efectos que provoca por s;i ausencia (p. 752).
~4.,W~~~~q?.. al DNA_
--Fi~1gu_ra_2_s~ siste~a .de-
. .5-Vf,,.,_a.:..d.,,,_e_n_o_vo-pa-ra-=-1a-s--=fn_t_es--=is---if!er.1 anillos' de la pfrriria se ensarnbla sob re la ribosa fosfato
de nuclectidos de purlna, Se indica la proce- .· La biosfutesis de nova. de .lai purinas, al ig'ual gue)~ bi;~futesis de las pirirnidinas,
denda de cada uno de los atornos de! aru1!o · · ··
de purira, necesita PRPP pe:s-o, en el caso ·ddasp~as, el PRPP proporciona los cimientos

·-.-. -. ~···- ... --- --- . ·--:"':-·--. ·-··· ·- . -


------·--"-·-·--------· ·- -----· ·- -- .... --· ---

sabre los cuales se iran construyendo, paso a paso, las bases. En esta via, la etapa - i.._
,.; .. ; \· -.... : .· .. :'1:4-l· -
Iim.itante inicial es la sustituci6n del pirofosfatopor amoniaco, en vez de por una - 25.2 · Sfrrtesis de purinas ·
base prefabricada, para producir 5-fosforribosi1-l-amina., con el grupo amino en
configuracion 13- . . ·· ~,
La glutamina Josforribosilamidotransferasa ca-tali.za esta reaccion, Este" enzi-
ma consta,de dos dominios: el primero es homologo al de las fosforribosiltrans-
ferasas de las vfas de recuperaci6n d~ las purinas (p. 744), inientras que el
segundo produce amoniaco a partir deIa hidr6lisis de la glutamina, Sin embar-
go, este domii:tio de hidr6lisis de la glutamina es distinto del dom.inioque realiza · .
la misma funci6n en la carbamilfosfato sintetasa. En la glutaminafosforribosil-
arnidotransferasa, un residua de cisteina localizado en el extreme amino facilita ..
la hidr6lisis de la glutamii.:i.a.Para evitar ta hidr6lisis iniitil de cualquiera 'de sus .
susttatos;· la. amidotransferasa solo adopta la configuracion activa. cuando se -
uneri'tanto el PR.PP corno Ia glutarnina, Como en el caso d~ la carbamilfosfatci · ~-
sintetasa, el ~oniaco generado .en el centre active donde se hidrolizk.la gluta-: .. '
mij{a atraviesa un conducto que le.lleva al PRPP sin.t~er que ser liberado al~~ - . : .....
ril:~dioCircund~te:'. - -
''.;':\~': - ~-'

El~bi~!,~i9.e
pprin~:2e ensambla mediante etapas sucesivas en las que
Ia·:·~~CiOn~:por fosforilaci6n va seguida de una sustituci6n · .
~-.}~}.~~~itjn ;ip-s _nue~e·e~pas para ~lar :I ~o4e plli:in3: H~y qu~
· . , sena.lar que las seis pnmeras son reacciones aruilogas. La mayona de estas
etapas ~ catalizadas por enzimas que contienen dom.inios de sujeci6n d~l ATP
homologos a Ios.de la' ~bamilfosfatosintetasa. Cad.a etapa ~en Ia actiuacion. -,
porfosfon1aci&i:·de mi- atomo de oxigetio unido acasbono (general~te un atan-W·de .,. .,..
oxfgena· de un grupo ca.rbonilo), seguida·de la sustitucioii de~ gtupo fosjo1iropor a.mo- ·
niaco 0 porungrupo amino que actiia cmno un nucle_Gfi-Io(Nu). . - - ' - - .

0 2-

\
PJP
\~
ADP
f \
~. --O
;Ff(
Nu
\•/)
Pi·
\- C---Nu
"TJ,POH2\:;1.tJH2
C=O ==~===L== ':C-0 o
I i Fosfon1ad6n / - .
Sustitud6n
/
~· .- .. - ... · ··- · ... · · ·HP·· · ·CH-..··.· .. ··· . "' ....
- , La biof5rntesisde nova de purinas_tien~lugar corno se muestra en la F1gunh;).6. 5-Fosforribosil- J -amina -
EnIa Tabla 25.2 se recogen las enzimas que catalizan ca~a etapa de lareacci6n.
1. El grupo ·carbox:iiato de un residua de' glicina se acti.van:iediante foSfm:ilaci6n
y, .
posteriormente, se une al grupo amino de la fosforribosilamina. Se Torma un nuevo -
enlace amida, y el grupo amino de la glicina queda ~~ funcionar coma un
nucle6filo en. la et.ipa siguiente, -
· 2. El formato.se activa y, a continuaci6n, se une a este grupo amino para formar
el formilglicinaillida 'ribo:ri.ucle6tido.

Tabla 25.2 Los enzimas de Ia s[ntesis de nova de las purinas

Eta pa . _ . Enzim.a.

1 ·. · · Glicin=ida ribonucle6tido (GAR) sintetasa ·


2 .• ..".;: _. __ .,_., ·: .... ::.~~ori:cil~ ;·.~;.;:;_.·:., -:.:·.:· ;: , ....;.. .. ,_ : .·.·
3 Formilglicinamidasinfasa -
·:1-~;: ·:. :·_:;:· ·\'.::: , - · ~o?.nfckzoii:;ifxm~?.;otidosinteta:a:,_. '.-, .: _.. _ •. · ;,_ .: .. :--
5 Carboxiaminoimidazol ribonucle6tido sintasa
·: ~( .;::,: ... : :, ~- ·:. -~ · .· . , .Suc:'c;ini).~c;i~~ol.~bo~da rib?nucle6tidp'sintefa'.s:;.,. ,~ _ '; :: ;
7 Adenilsuccinatoliitsa . .
s · - · ~oimida;;ol carbo~d.;_ . ribonu'cle6tido
. tcinsfor:rhifasa · · ·. : ..... .:· : · ·
~: --
9 · Inosina m~nofosfato ciclohiCiroliasa · · · •
0. ®..
:.:A.TI>
~--.:
ADP
0
II
+ + ·W~~-
Gly Pi -1-i : . '1 ·
P-noosa-NH2 \/ ..
P-nbosa
/N"-._~%

11.
N,H
Fosfom'bosilamina Glidnamida · Formilglidnamida Formilglidnamidina

r
n'bonude6tido .. ribonude6tido n"bonude6tido
ATP
© ..
ADP
ATP
+
. pi.

ATP
+
Asp
@
·ADP
+
P1

H
'C~
I. \· 0
o~t
-
\
0

P-ribosa
~~ C
~C-----c!\ /
CH2
I N--o··-H
NH2 H \
C=O
/:
c5 -
5-AminoimidazoI- . 5-Amin~imidazol-
4-(N-succiniicarboxamida) 5-Formaminoimidazol-
. 4-carboxamida 4-carboxamidu
rlbonucle6tido n'bonucle6tido riborurcledtido

Figura 2S.6 Bi~11tesis de nova de Ia purina. (1) La glidn~ se. une a! grupo amino de la fos-
forribosilamlna, (2) El N10-formi!tetrahidrofofato {THF) transfiere un grupo formilo af grupo amino
def residuo de g!idna. (3) Ef grupo carbonITo intemo se fosforila y se convierte en una amidina gracias
a fa adici6n de amoniaco procedente de la g(utamina (4) Una reacci6n de acoplamiento intramolecular
origina ef aniUo irnidazol, de cinco atomos. (5) El bicarbonato se une primero al grupo amino. exoddico
y, posteriormente, a un atorno de carbono de! anillo de imidazol (6) El ca~~del irnidazol se
fosfon1a, y el fosfato es reemplazado por el grupo amino del aspartato. (7) Se libeia furnarato. ·
(8) Se produce una segunda donaci6n de un grupo formilo por parte de! N1° ..forrrnltetrahidrofolato
(THF) (9) la ciclaci6n comp(eta la sintesis de inosinato, un nucleotide de purina
lnosinato (iMP}

3 .. El grupo carbonilo inrerno se


activa por fosforilaci6n y;
a continuaci6n, se con-
vierte en una amidina mediante la adici6n de amoriiaco procedente de la glutamina.
4. El producto de esta reaccion, el formilglicinamidina ribonucleotido, se cicla
convirtiendose en el anillo imiclazol de cinco atomos . presente en las - purinas.
Aunque es probable que la formaci6n de este anillo sea favorable desde el punto de
virta termodinamico, se consume unarnolecula de ATP para asegurar que el-proce-
so sea irreversible. Se repite un patron que ya resulta farniliar; un grupo fosforilo,
procedente de una rnolecula de ATP, activa el grupo carbonilo y se sustituye por el
ato"aio denitrogeno unido a la molecula de ribosa. Po~ i:arito, la formacr6n: del anillo
es ~a reacc10n mtramoleCUlar en la que tanto el nucle6filo como el atomo de car-
bono activado par el fosfato se encuentran en la misma molecula, En los eucariotas ·
. superiores, las enziinas que catalizaii las etapas 1, 2 y 4 (vease la Tabla "25.2) son
componen~eS deuna iinica cadena polipcptfdica,
742
. - -------- -·-~-----
5. El bicarbonato se activa per fosforilaci6n y, a continuacion, une al grupo s~ 743
aiillno exociclico. El producto dela reacci6n de lactapa 5 se reorganiza transfirien- ·· · 25.2 .Sfntesis de purinas
do el grupo carboxilato alanillo de imidizoi. Resulta interesanteel hecho de queen,
mamfferos esta etapa no requiere ATP; aparentemente, el bicarbonato se U?e.
directamente al grupo amino exociclic0 y,_ a continuacion, se transfiere al de anillo
imidazol, . · ·

{)., El grupo carboxilatodel imidazol se fosforila de nuevo y el grupo fosfato se


reemplaza por el grupo amino del aspartato, En los eucariotas superiores, las enzi-
mas· que catalizan las etapas 5 y 6 (vease la Tabla 25.2) form.an parte de unafinica
cadena polipeptidica..
7. Se elimina fumarato, 1ID intermediario del ciclo del acido citrico, dejando al
atomo de nitr6geno procedente del aspartato unido al anillo de imidazol. La utiliza- ·
ci6n de aspartato como donador de un grupo amino y la concomitan.te liberaci6n de .
fumarato recuerdan la conversion de citrulina en arg:inina durante el ciclo de la urea,.,· ~- ~· . -
ye~ ambas vias estas etapas estan catalizadas par enzimashom6logos (Secci6n 23. 4 ). · ..
'~::···.):. t .

8fiYA:. este atomo de· nitrogerio se- le aiiade tin grupo forrnilo procedente ·del ....
-N~f0hn.iltetrahickofolato,
.,.R~~;-.i...·1 ' id
pm
dar lugar ~ 5-formarninoimidazol-4-Ca:rboxamida
h$'!;1:l1.f .eotJ. o,
9>Strs~£orm:arninoimidazol-4-carboiamida ribonude6tido se cicla ~on p&dida de
agi,t'a' originando inosinato. . .
. ..;-: . .

'1vfochos de los in.termediarios de la via de la biosfu.tesis de nova de las purinasse


degradan ;cipidamente en agua, Su inestabilidad en'medio acuoso sugiere que.:a lo ~· :· ,
largo de· la via, el producto de un enzima ·debe ser canalizado directamente al . · :
sigui~te enzima, Hay evidencias recientes que demnestran que; de hecho, don.de se · .
- ·. '. . . . . '
.: .
requiere sintesis de purinas los enzimas forman complejos,

E! AMP. y el GMP se forrnan a partir de IMP Figura 25..i Generad6n de AMP y GMP:
En unas pocas etapas, el inosinato se convierte en.A11P o GMP·(Figura 25.7). El. El inosinato es el precursor.del AMP y de! GMP. ·
adenilato se .sintetiza a partir del inosinato mediante la .sustitucion del ato~o de El AMP seforma por adic)6n de aspartato
oxigeno del grupo carbonilo en la posicicn _C-6 por un grupo amino. De nuevo, la seguida de Ia efrrninaci6n de fumarato. E GMP
se genera mediante la adici6n de. agua, la . .
adici6n de aspartato seguida de la eliminaci6n de fuinarato proporciona el gropo
. deshidroge[1'3r:i6n pn.r.NAD+ y. !a SI.Jstituci6n de\
. -~~· .. p~te la sfuteSis dcl ftermediaiio ~denihll'C~ato apartir de inosinato y atomo de o:6geno de! grupo carbonilo par un
aspartato, el donador'de
·. '•
grupos .fosforilo es el GTP en .vez·del . ATP.
.. Como
. conse-' -NH.2 procedente de la hidrolislsde glt.r.:.imina

,.,,
·-oo>} -r~.
. ..
::._i. -~··.·:·'"' •.

.. _ ... ··-! _.·.:,

·(y{.~:;
· - -~.:.1 ·':~ .r~
·:c:.~;! .... :;:

~
. · ~' ~oo- ~~~ ... ·

·.~-_noos/~;;;_ ·_/
Y
.P; P-ribosa/~~
o Adenilsoccinato
e t ,
Aderu1ato (AMP)

lnosinafo.

H:O NtfH
H+
P:ribos/' . N~· -~~
H 0 ~
p_;.ib~~/
.
~1 .
~"'NH2
Xanh1ato . H3!') H20 G1,ranilato(GMP)
++--+
G[u Gin

-·---· - ·--·- -:·-----·· ~


[
i

744
., · ..
cuencia de la utilizaci6n del GTP, el enzima que realiza esta conversion, la adenil-
. cAPfTULO 25. · Biosfntesis de nude6tidos .sllccinato sinta:sa,·:esta. relacionade. estni~ente c~m ia.· familia de proteinas G y
.J ~ '•• -; • ~·
carece de un dominio de sujeci6n del ATP. ·
El guanilato se · sintetiza mediante la oxidaci6n del inosina±o a xantilato (X]:v.[P),
seguida de la incorporaci6n de un grupo amino al atomo C-2. El NAD+ es el acep-
.tor-de hidr6geno durante.la oxidaci6n del inosinato. El xantilato se activa por trans-
ferencia de un grupo A1v1P (en. vez de por un grupo fosforilo) procedente del ATP
al atomo de. oxfgeno del.grupo carbonilo recien formado. Posteriormente, el amo-
niaco generado per lahidr6lisis de glutamina reemplaza al grupo AMP para formar
(A) guanilato, en una reacci6n catalizada por la GMP .sinietasa: Hay que destacar· ·el
hecho de que la sintesis de adenilato requiere G TP, mientras que la sintesis de gua-
nilato requiere ATP. Este uso reciproco de los nucleotides por parte de las vfas
genera importantes posibilidades de regulaci6n (Secci6n 25.4)~
. .
Los enzirnas
entre sf
de la via
. .
de biosfntesis
. .
de purines
.
in vivo se asocian ·
. . . . .

'.Los..bioqufmicos creen.que los·en zimas de muchas vias metab6licas, cbrno la glic6-


·:·~·~<~v-Ji~i,~:;y.. ,e4ciclo,_dfha(=ic10•.c;JJrico;J,~".-asi:i~iados~:ff~i6iniell.t6 unos-corrotrossEstas
~:·,- ..~,:;,;~9ci~0:~nes;:al:faC:iJ.itai~el.nicwiiillento,·del"pr~auct~',di-;un. :eriZiiri:~:ha.Stl~'el:·_c:entro
. . · ... .; ·,.:)achvo .del:siguiente.e=ima_d.e l.a:yia{.incrementar-fai).i)a·eficq.cia, de las vias.La evi-
(B)
. · · · · :. ; :cl~nCi~:i:'de ·w~:a.Sociaci~nes "1_:irqVino iniciiliuente ·cl~ ·eiperll:ti.entc;is·:e~ .los que un
. -; cornponente de. una via, aislado cuidadosarnente de la celula, se en~ontrab~ unido a
·., otros componentes de la via.·:Sin. embargo, estas .observaciones dieron origen .
a esta
cueSti6n: zLos enzimas se asocian entre si in vivo o se asocian artificialmente duran-
te el proceso de aislamiento? Evidencias in.vivo recientes demuerti:a.n que~ euando
se necesita sintetizar purinas, los e=imas de esta vfa de sfntesis se asocian'unos con
otros. Asi, se fosionaron varios enzim.as de esta via cori. la protefna v.erde fluorescen-
te GFP (vease la Figura 2.65), y ~e transfectar:on a las. celu1as. Cuando estas. crecfan
~n presericia de 'purina, la' GFP se encontraba esparcida di.fusam~nte por todo el
citoplasma (Figura 25.8A). Cua.Ilda a las celulas se les hizo crecer en un medio sin
JJ.urIDas, comenzo Ja sfntesis de las mismas y ~OS enzimas Se asociaron entre Sl for-
Figura 25-8 Formacion' de purinoscmas. mando unos comJ?.lejos denominados purinosomas (Figura 25 .SB). Se repitieron los
Se transfii16 y se expres6 en celulas Hela (una
lfnea de ce!u[as humanas), una construcci6n de experimentos con otros enz:imas de la vfa de la sfntesis de p~as fusionadas con
un gen que codificaba una protefna de fusion GFP, y los resultados fueron los mismos, indicando que la sfntesis de purinas tiene
.constitoida por f00l1ifgficinamida sintasa y GFP. luj:$ar cuando.los enz:.llii.asfori:o.an purinosomas. ·zQue es lo qui:: origin.a realmente la
(A) En presencia de ptirims (ausenda de sfntesis . fom:i.aci6n de los complejos? Aunqut;: las resultados todavia no son s6lidos, parece
de purinas), [a GFP era vista coma una mancha
difusa por todo el citoplasma (B) Cuando se ser que una f9sfatasa, que pre8umiblemente respond~ de aiguna. man.era a la presen-
cambiaron [as cefufas a un medio sin purinas, se cia de punnas, induce la formaci6n de los complejos, mientras que una quinasa, que
formaron purinosomas, que se vefan como responde a la presencia de purinas, provoca la disociaci6n del"purill.osoma.
granules citop[asmaticos, y se produda sfntesis de .
purinas. [De S. An, R. Kumar, E D. Sheet; y S. J. 1~~~-·
Benkovic., Sdence 320: 103-106, 2008. Figura 2, Las vias de recuperad6n disminuyen el gasto de energfa intracelular ·
CyO.] .
Coma hernos.visto, Iasintesis-cie-aoso de las.purinas necesitaun gasto sustancial de
ATP. Las vfas·decrecuperaci6ndda:s.purinas constituyenuna.manera mas econ6-
mica de generar: purinas. Las bases de purina libres, procedentes del recambio delos
nucle6tidos ode la dieta, se pueden unir al PRPP para formar nucleosidos de. purina
(~NII (NH monofosfato, en unareacci6n analoga a la de formacion de orotidilato. Las bases de
2-0
3 2yoy ==1
POH c · N '/ / purina se reutilizan m:ediante da"s enzimas de recuperacion, con especificidades

. H Hi..,::
distintas. La adenina. fosforribosiltransferasa cataliza. la formaci6n de ad~ato
(Afv1P): .

HO OH
Adenina + PRPP ~ adenihto + PPi
Jnosinato
rnientras que la hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa (HGPRT)° cataliza la
formaci6n tanto' de. guanilato (G10}') "C:omo de inosinato (~osina mon9fos(~Q, ~
----------------~.1J'7:(P). unp_re~~or deJ.:guail.ilato y del ad~ato: ..·
·. Guanina, + PRP:P~ guanilato .+ PPi
·· · ·: · Hipoxantina =t'PRPP ....:....:....+:inosill.ato + PPi
. . .
·25~3· Los desoxlrribonudectidosse sintetizan por ' 711:?'
· reducci6n de ribonudeotidos mediante- un · · · .... ~3 Sfnt~is de d~o:<lriude6tid0~
rnecanisrno ~·n· el q~e intervienen radicales '.
Vclvamosahora a la sintesis.de desaxirribonucle6tidas.'Estas.precursdres ·del
DNA se form.an mediante la r.educci.6n de·ribanucle6tidos;:concretamente, el
grupo hidroxila en posicion 2'·del componente ribasa se sustituye par un atamo
de hidrogeno. Los sustratos son los ribonucleotidos difosfato, y el reductar final
es el NAD)?H. El enzima ribonucle6tido reductasa es el responsable de la reacci6n
de. reducci6n de los cuatro ribonucle6tidos. Las ribonucle6tido reductasas .de
ADP· GDP CDP UDP-
organismos distintos constituyen un conjunto extraordinariamente diverse de
enzimas, Sin embargo.Josresultados de·minuciosos ·estudios hanpuesto de mani-· ""· .. ~ Productos fie
la ribonude0tido
fiestci que comparten .un mismo mecanismo de reacci6n, y las caracte_risticasde -..,~~~~~~~~ reduqasa
sus estructuras tridiilensionalesindican que estos enzimas son hom6logos. Nos-·
centraremos en el enzirna de! organismo aerobic E: coli, ya que es el. que rnejorse . ' ·dGDP _dCDP:dUDP

Jl l . f.1. '.para
conoce. \ .
.. :;: ·<· 1: ',;'.~f:t.~. i·1:_~-~ . . ·. ' . ' . .. E proceso continua
generar dNTP
· Me~anjS:irlO:fu~f:!iJaJ!Ical
,.~.. rt-: .... ~-·~
:,.i......
tirosilo es fundamental para la actividad .de la
;~·~'fr:'\ • • • . • •
rib1:foude6tid0Xreuactasa · · · . ·. · dATP dGTP dCTP TIP "'
~t:? .: ~; ., ~~ ": ~~. -~~-· ·. . . . .
La:D.bonucle6tidi:f re8uctasa de E. coli consta de dos subunidades: R1 (un df:mero
de '§.7 ID~) :y: Af."(~ dfmero d~ 4~ }Da}. ·La: sUbunidad Rf contierie el centro ·
activo, asi}oma.d.o~·i:2entros decontrol alosterico (Secci6n25.4).Esta subunidad
.: . s, ca~Bene tres i:esidu~s de cisteina conservados Y. un residue de glutamate, todos '<!·
. :
' . - ~-.·las cuales .participah· eb. Ia reduccion de ribosa a desoxirribosa (Fjguia 2_5:9). El . . .::
\ . papel de la subunidad R2 durantela citafuis ·co~iste en generar un radical lib~e - :. .
. ::; .'' conpropiedades extraordinarias en cada una de SUS qos ca,<:l.enas. Cada caden;i.Ri -~-· .... z ••••
. . ~ ./ . -. .
, , contiene ~'radical tirosilo . estabie con, Un electron desapare:a<;lo.qesfocalizado .:
aromatico
0

:· sobre suanillo (FiguraZfi.l.O). Este radical Iibre'tan atipico" se genera . '•


, gracias a un centro de hietro cercano que consta de dos iones fern<;os(Fe3+) conec-
tados mediante un ion'oxido (02-). , ' ; .

.
. . ...'
- ~ .· ~ . ''\

·•. ·'-

·-·.,...

Figura 25.9 RI"honude6tido rsductasa, La ribonudeotido reductasa reduce las ribonude6tidos a · · ·


desoxim1ionude6tidosen su centro activo, .que contiene tres residues de cistefna fundamerrtales y un
residua de glutamato. Cada subunidad R2 comieneun radical tirosilo, que acepta un electron pro::edente ·
de uno de las residuos de cistefna de! centre adiv.o para dar inido a la reaai6n de reducdon, Las dos
subunidadesR1 se agrupan para formar un drnero, al igual que las dos subunidedes R2
~~>~itirl!-is.io:s-u'bfini,fad
d~ Ia rib~nude6tido reductasa.
Ri·.:- ·
_J
La subunidad R2 contiene uri radical fibre
estable localzado sabre un residua de
1irosina Este radical se genera porla .
reacdon de[ oxfgeno (que no se muestra
Xosma (dondese
en la figura) en un sitio cercano que localiza el r.dc:al)
contiene dos atornos de hierro, Las dos
subunidades R2 se agrupan para formar
un dimero. [Tornado de l RIB.pdbJ

Durante la sfntesis de un desoxirribonucle6tido,.el OH unido al C-2' del anillo


de ribosa se sustituye por H, por lo que conserva la configuraci6n del atom.a de
carbono enposicionC-2' (Figuµ.25.11); · ·

1. La reacci6n cornienza cori. la transferencia de un electron procedente delresiduo


. de cistefna.de .Ri al radicaltirosilo de.R2. La perdida de un electron genera un radi-
. ~ - -. --~.;· . ~ .-;<7:~%.c:l: '.dsteinti~l~~~~~~~~o'.~ri'.·~1~~~~~~ic~~~!~~~~~'.~t.£~~:~p~~·(: · :·.:- . ": ._.' : ·
. . ·.. : . ; ~ .. ''-·.... · ... :··. :·: ·:- : . .. .· .
. 0 .
, ·:5--o 3 PO3p/.
... ~base~ 0

;s/H -~ H
·_w0 ,9-H

·~( s~H
·. v..

0
3-0 3PO 3p/ ~-base 0 .

/> H H

__f:10 H

..
+---

;( s--.s
(
® .5~H

l__·

~l®
Figura 25.11 Mecanismo de la ribonude6tid~ 'reductasa. (1) Se transfiere un electron desde un
residue de cistefna de Rl a un radical firosina de- R2, con lo que se genera un radical cistein1ioTio muy
readiyo. (2) Esteradica! sustrae un atomo de hidr6geno del C-3' de Ia.unidad de ribosa. (3) 8 radical
en posici6n 3' provoca la libeiaci6n de un oH- de! atomq.de caroono C-2'.Asociado a unproton
procedente de un segundo residua de dstefna, el OH- se elirnina en forrna de agua ( 4). Se transfiere
union hidruro 12rocedente de un tercer resiqtio <ii:;_c:i?J;~fIJ;:i;.aL1iempo_que.seJouna_un.puente.atsulfuro,~---
(5) 8 radical localizado en C-3'.recupera elatorno.de (1iqr6geno.'CJue sela habfa sustratdo anteriormente,
(6) Se transfiere un electron procedente de R2 para. reducir el radical tioilo, que tarnbien acepta un
proton, 8 desoximbonude6tido Ya puede abandoner; R l , Para comenzar otro cido de reacdon, se debe
redudr'el puente cftsU!furo que·se ha formado enel centre activo. · · ··
146
--- --·--··-------

2. Posterio~ent~, este radical surtrae un atomo de hidrogeno _del_C-3!. de la·uni- 74.7.


dad de ribosa, con 16 que se genera unradical en dicho atomo de carbono: .. ~
. . . .
253·· Sfntesis de deso::dni..tde6tidos
3. El radical en posici6n 3' provoca la -Iiberacion del OH-:- delatomo de carbono
C-2'. El OH- Iiberado se desprende en forma de una molecula de agua, ya que .·.
re~·un proton: procedente. de un segundo residue de cistefna, ·:. ' ·

4. A continuaci6n, se transfiere un ion hidruro (un proton con dos electrones) .


desde un tercerresiduo de cisteina para completar la reducci6n del C en posici6n Z', .
· formar un puente disulfuro y volver a formar un radical en el C-3' ..
. 5. Este radical en posici6n 3' recupera el mismo atomo de hidr6ge:no que le fue
. sustraido anteriormente por el primer residua de cistefna, y el desoxirribonucle6ti-
do ya: esta listo para abandonar el enzima, ,· · · · · · · · · .

. 6::, RZ
·~porta Uri·~l~6n ~aia red~ck 'cl~radical. tioilo, Aco~~ci6~ el;;uente
disulfuro generado 'en el centre activo del enzima debe reducirse para regenerar el. .
enzima activo. . · · · ·
: '~~~~. fl/:·_,;~,,~~.:~ . ~~~:~·,. . .
~-,, .~~ol'.-e:i~~ esta reduccionprcicedend:l NADPH, aunqueno -directa-
rnent . :.Un transportador de poder reductor que vincula al NADPH con la reduc-
tasa ·e::>. la;tiorredox?i0'.~· que es una proteina de 12 kDa con dos residues cistefna
expuestoscercanos.entre sL Durante la reaccion catalizada por la propia ribonu-
clto:i:ido reductasa; estos·'sul:fhidrilos se oxidan a disulfuro. Por tanto, gracias al .
flujo .. <lel el~ctr6n .procedente deL NADPH se genera tiorredoxina reducida.
·.' · La tiorredoxiua reductasa, una flavoprotefna, cataliza esta reaccion, Los electrones
fluyen del NADPH al FAD unido a la reductasa, de este al disulfuro de la tiorre-. .. ·
doxina oxidada, posteriormente a la ribonucle6tido reductasa.y, por tiltimo, a la.

y
unidad de ribosa. . .

NADPH +WY ~. y TR(SHXT~I


S
"SH

SH
\
~SHY·
S
RR.
. "SH
n(!bruosa·dad

1 · . \;.T/llj '-·ru/'1:.1 ··· ....


NADp+..! \.FADth/ \..~1
~5. '\SH ·"'-s · -~Unidaci·.: ~:
desoxirribosa
• ': !. I

Tiorredoxinareductasa Tiorredoxina Ribonude6tido


. (TR) . (T) reductasa (RR}
~~';-

Otras ribonude6tido reductasas utilizan radicales estables distintos


al Oradical tirosilo
~ En otros organismos se han caracterizado ribonucle6tido reductasas que no
:.::\ :": contienenradicales tirosilo. En su lugar, estos enzimas contienen otros radi-
cales estables, que se generan por media de otros procesos. Par ejemplo, en 'cierto
tipo de reductasas; el coenzima adenosilcobalamina · (vitamina B12) es la fuente de
radicales. A pesar de las dif erencias en el tipo de radical estable utilizado, los cen-
tros activos de estos enzirnas 'son similaresa los dela ribonucle6tido reductasa de
E. coli' y parecen furi.cionar mediante el .mismo mecanisrno, basado en 1a: extraor-
dinaria reactividad de los radicales de cistefu.a.. Portanto, estos enzimas tienen un
. ancestro cormin, pero durante 1a e.,;oluci6n han: dado lugar -~ tod~ una gama de
mecanismos para generar diversos.radicales estables eapaces de-funcionar bien .en
condiciones de crecimiento distiritas. Parece ser que los enzimas primitives se han
_ inactlvado por el
oxigeno, mientras que enzimas come 'el .de. E. ~oli ~~ el
oxigeno para generar el radical trrosilo ifilci~. Hay que destacar el h~o de que
748. la reducci6n de ribonucleotidos a desoxirribonucle6tidos es una -reaccion, dTflcil
CAPITuLO25. 'Biosfntesis .de nucleotides
d~ae·el punto. de vista quimico, porIo que necesita ~~~dor s~fisticado. La
existencia de un entramado proteico enzimatico cormin para este proceso sugiere
con fuerza que lasproteinas establecieronvfriculos cl RNA antesde qiie·d. con
proceso evolutivo conyirtiera al DNA en la forma estable de almacenamiento de
la inforlliacion genetica, · ·

El timidilato se forma por metilaci6n de! desoxiuridiiato


El uracilo, producido mediante la via de biosintesis de pirimidinas, no es Un. com- -
ponente del DNA En sulugar, el D.NA presenta timina, un analogo metilado dei
uracilo. Se necesita otro paso para generar timidilato a partir del ~ac~La timi-
dilato siniasa cataliza este toque final: el desoxiuridilato (dUMP) se metilapara
forrnar timidilato (TMP). Recordemos que la timidilato sintasa tambifo intervie-
ne en las vfas de recuperacion de la timidina, Tal y como se vera en el Capitulo 28,
la metilaci6n de este nucleotide permite sefialar los lugares que han sufrido daiios
en el DNA para su posterior reparaci6n y, por lo tanto, contribuye ji. preservar
laintegridad de la informacidn genetica almacenada en cl DNA. En esta reaccion,
· .... · ~. :.;..-eI,~.donador.,deJ grupos;metilo.;:,es·-;;~11N5~N~2:-:iri.etilentetiiiliidrofolato ::en: vez de Ia
, ,:.;.s.,adenos:ilmeti~rlina.(Secci6n=24.2). · ·· · ; · .. . ·
· ·.:~EI grupo 'metilo ~e·une·al atcir:q.o':C-'5 ·Clel ·iiiii.J.fo ;ITaID.ifi~o\:iei ·pe~9 ~ dUMP,
atomo -de carbonono es un · buen' nucleofilo Y. no :P.ued€{atacai-. por_ sl. rnismo al
grupo adecuado del donador de metilos. La timidilato sintasa promueve la meti-
laci6n aiiadiendo a este anillo un tiolato procedente de la cadena lateral de una
cisteina, con lo que se genera una especie nucleofilica que puede atacar.al grupo
metileno del N5,N1°-metilentetr:ah.idrofolato. (Figura 25.12) .. A continuaci6n, este
grupo metileno se activa mediante distorsiones impuestas por el enzima, tjue
Figura 25.12 Sfntesis de timidilato. favorecen la apertura del anillo de cinco atomos. El ataque del dU1v1P activado
La timidilato sintasa c:ataliza la adid6n de sabre el grupo metileno forrna el nuevo enlace carbono-carbono. Posteriormente,
un grupo jnetilo (procedente del N5,N1°- cl mtermediario asf formado .. se co~vierte en el producto: se transfiere union
mefilentetrahidrofolato) al dUMP para former
TMP. la adid6n de un tiolato procedente def hidruro procedente del anillo del tetrarudrofolato para convertir ei grupo metileno
enzima activa· al dUMP. La apertura de! anillo de eri. un grupo m~tilo y se sustrae un proton del atomo de ~bono al que se encuen-
dnco.atomos de! derivado THF predispone al tra unido el grupo metilo para efunmar la cistefna y regenerar el anillo aromatico.
grupo metileno para un ataque nudeofi1ico por El derivado (iel tetrarudrofolato pierde su grupo metileiio y union hidruro, ·con lo
parte de! dUMP activado. La reacci6n se
completa mediante la transferenda de un ion que se oxida a dilidrofolato. Para sintetizar mas timidil~to setiene g.ue regenerar
hidruro para forrnar dihldrofolato, ·el tetiahidrofolato. · .. · · · ·· · ·· · · · ·

H ~QCNI I H~.
2

H .,,H H"' ~~~-- .


Dihidrofolato

~H . H'0 /-
\ ''·) ~ H.

0 H2C-N""--R . H2~~N N'j . H2Y('YN);H


N'.N''-Mohlo.Wrahldrofofam .• ) . I.
Co- ~2Hl · ·..
"lJl&,
~H

ix
H . ~R ~ ""-R

I . .H . HS--"enzima
Enzima-SH

___.---. .....
~.
0
I s--enzi!Da
O~N

desoxirribosa-P : · desoxirribosa-P
- j · ... Tnnidilato
(IMP) ..·. ,__c, ___.,

-----..,.-~:-:--~-..,--,-..,..--~. desoxirribosa-P • •• r • ...- - _: .:•. '. ·:_-•• - l

DesoXiuridina
· .. ·.. :... :· ..
m;,nofosfuto · ·
(dUMP} • •

....... -.··--··- .. ·- - ·--··-···. ·········--··------- ·----··-···-·-·-. ·-- ----.:·----:-::::-:- .. ,, ··-· .--~· "'::::-::-=---=-===
la-dihidrofolato·reductasa cataliza la.-regeneracicS~·-deI tetrahidrofol~to, . . ,--,.~-- ·.:'.' :. ; : '. :];4-~ -
---~.:;.,,.;..--"--'--'.,..:..;...:..,._;~~,_,,_
m transportador defragmentos monocarbonados ·-. · ' · '253 S"mfesis.de desoxinud~6tidos

Fl irlr.ahidrofolato se regeri.era a partir del dihidrofolato que'se produce durante la


sfuksis deltimicElato. Esta regeneracion se Ileva'a cabo par medio de'la dihidrofola.- -
to seductasa, que utiliza NADPH como reductor. .

Hz~c;c~. H . l
);H
#
.
+ NADP+
N

• 0 . H

!
! . ~·· • ·.~
e- :· .
;!,: ~: .Jf'. • . • . DUudrofolato Tetrabidrofolato
..;,. .
Ei;,-'.L1'i~Q.;;.s;~ se trasfiere union hidruro directamente desde el anillo de nic~tin-
·WiJdi\tf1NA.DPffaI
. :.:~.:a.:......
..t ";!. •
anillo de pteridina del dihidrofolatO. Para
.
facilitar

la transfe-
·ieI_J.£ia, del hidruro, el dihidrofolato unido y el NADPH se rnantienen muy cerca el
ui{(}°dei"citr6;
.. :.. \

Varies-farrnacos ·anticancer~sos eficaces bloquean la. sintesis. de· <:> :- •

tirnidilato · · · · · · · · ·. . . : •. . . .
-....i:f:·::-·. Ls~~~- ~~ s:.~ dividi:nd~ rapid~e~te necesitan m: ab~d~~e
sun;umstro de timidilatc- para sintetizar DNA: Para .tratarel can<:eF, se ha
.sacado provecho de la yulnerabilidad de estas celulas ante la inhibicion de la sfntesis ·
de TM:P. La timidilato sintasay la dihiCh-ofol~to reductasa son dianas de elecciori en
quimioterapia (Figura 25.13). · . · ·
El fluorour~, un farmac; anticanceroso, se con~erte il vivo-di jluo;odesoxi-
uii.di.Iato (F-d.Ulv.[p). Este analogo del d.UMP mhlbe de forma irreversible la timi-
dilate .sintasa despues de, baber ·e.'>l:ado, funcionando.corno -.» siistrato un .no~ _ . ·, .. _ . _ ·. -·-.- ·. . .. . .. : ·. :·. -~ .· .......

Fluorouracilo

Fluorodesoxiuridilato
(inhibidor suicida)'

.. N5, N1.o-Metilentetra- Dihldrofolato


hldrofolato Figura-25.13 Dianas para los fiirmacos
arrticancerosos, la timidilato sintasa y la
Glidna • NAOPH+W dihidrofolato reduciasa son dianas de elecci6n
en quirnioterapla contra el cancer porque · · ·
+-- Aminopterina las celulas. cancerosas que se estan divldiendo
~- - y mpidamente necesitan generar grandes
Serina" .,,. metotrexato cantidades de precursores para la sfntesis
Tetrahidrofolato (ametopterina) de DNA.
_.

H2y~N ..
1H
750 H

cAPfTLJLO -~ Bios(D~esis~de. nude6tidos


H[ l
:Y "I I
Figura 25.14 lnhibici6n
suicida El tluorodesoxiuridilato
Enzima-\.__,-SH'~CH, H""'
l
(generado a partir de!
fluorouraalo) hace que la s--enzima
timidilato sintasa adopte un
estado en el que no puede · 'desoxirribosa-P
continuar con el resto de las F!uorodesoxiuridi(ato . N5,N10-Metilentetra- Conjugado estable
reacdones de la vra: hidrofolato

durante una parte del ciclo catalitico. Recordemos que la formaci6n de TMP nece-
sita la extraccion de un proton (H+) del C-5 del nucle6tido unido (vease Ia ·
· . Figura 25.12).: Sin embargo;.ehnzimano puede.extraer r+
del F-dV]v.(P_ y, par
• v ; • ', ' ••• :.::·· b'-. ~,;;r."iillto$da;p:i.talisis-'"s~·bloquea:~n-:l~-etap'ieii.que·si{f~-;;;;;_i\;f~binplejo 'i::ov:il.ente entre
· _:. : :·:"el ,;·F.--dUlv1P,<cel:.inetilentetr"a.l;U.drofolato_ y·_;el _·grupo_ sulfhidrilo,: .del .. enzima
·· .- : (Figlli.:a:·2s!Pf)~-:Yemos\aqm·uri:°i::jempl~- d~'inhibicio~Su.ida.a., 'en q~-~ -~ 1a: crmma
convierte un sustrato en mi" iiiliibidor reactive que interrumpe Ia actividad catal.iDca
del enziina (Secci6n 8.5). . , ·
La sintesis d~ TMJ> tambifo se puede bloquear rahibiendo la regeneracion dd.
tetrabidrofolato. Ana.Iogos del dihidrofolato, coma la aminopterina y el metotrexafu
(ametopterina), son potentes inhibidores competitivos de la dihidrofolato redtidasa
(Ki< 1 nM). .

. .
P.n:i~optefu-rc:. (R = H} v metiltrex<rtu (R ~ CI~)

El metotrexato es un farmaco· de gran·valor para ~I tratamiento de rnuchos tumores


cfe crecimiento rapido, como es el caso de la leucernia aguda o el ~oriocarcin~ma, un
cancer derivado' de celulas de la placenta. Sin embargo, el rnetotrexato mata a las
celulas que se e--stfu r_eplicando rapidamente, sean malignas o no. Las celulas rnadre
de la rnedula ~f~s celulas epiteliales del tracto intestinal y los foliculos pilosos
son sensibles a la acci6n de este antagonista del folato y· clan cuenta de sus efectos
seciindarios perniciosos, • entre los que.se pueden incluir el debilitamiento del siste-
ma inmunitario, n&.useas y perdida.del cabello.. · .
Los· analogos del folato coino la trimetopiima presentan una intensa actividad
antibacteriana y aiitiprofozoaria, La trimetoprima se une a lei. dihidrofolato reducta-
sa de mamiferos con una a:firiidad 105 veces menorque a las reductasas de los micro-
organismos sensibles. P equeiias diferencias en las.hendiduras donde se localizan los
centres activos de esos enzimas explican esta actividad antimicro biana tan selectiva..
Para tratar infecciones se utiliza frecuentemente· una mezcla de trimetoprima y
Trimetoprima
sulfametoxazol (un inhibidor de la ~:fntesis de folato) .·

. .
25.4 Las etapas. clave. de.Ia biosfntesis de nude_6tidos se ·
--~------------:---_-.•rc;=;e;::rg"'ulanmeefiante retroinfii5icion
La biosfutesis de nucl~6i:idos se regula rnediante retroinhibicicn, de manera pareci-
da ala regu}acion de la b"'1nte.IB de mninoacido, (Seccion 24 .3). Estes me~o• _J
.. ··-~
-- ··.· ... -. . ._:......_ .. : .. - - ·--------'-----·---------·-····------~·

de regulacion garantizan. qtie los diversos nude6tidos.seproduzcan en las canti.da-


des precisas. . 25.4 Regulad6n de la sfntesis
· de nucleotides
La biosfntesis de Ia pirimidina se regula m.ediante la aspartato
transcarbamilasa
La aspartato transcarbamilasa, uno de los enzimas clave en.la regulaci6n de la bio-
sintesis de pirimidinas en bacterias, se .analiz6 en detalle en el Capftulo 10-, Recor-
demos que la ATCasa. se . inhibe por CTP, el pioducto final de la. bi.osfntesis de
pirimidinas, y se ad:iva por el ATP.

e
Aspartato
+ . ~ carbarnilaspartato "-7-+-+ UMP -----7 UDP-r UTP -r CTP
carbamilfosfato • EB t
·.,;,ATP .

.} h ca:J;obarimfosfu;4l~~tetasa es otrc pun to don.de se produce regulaci6n por retroin-: • · .


,_. hibiCi.6n.;.6.uto:en,.J?,l~cariotas coma eneucariotas. , · · · · · . . ·· ·
~ '. ~;.~~t!t:ti.;:: ; . ·l~ . . ~ .. . .
·ik.%~~fr1,t~i~'.'.,de I~i,;nude6tidos··de·purina se controla por retrcinhibicion
·. en.;)Y~f.icis·puntos'.:.:
··.t:,,4.~.- ~..\·. . ...
·:. ·
El. esquema de la regulaci6n de los nucle6tidos de purina es mas complejo que' el de .
lo~ nucleotides de pirimidina (Figura 25.15). . · , · · · . · .. . ,

1. ·En:, la bfosfutesis 'd~ lbs rrude6iidcis de~pcina:, 1~-etapa li.niikite es la'conversion: ·' ,:
de PRPP enfosforribosilamina mediante la gluta.mina fosforribo;,1-amidotransfera.~· .~. '· ·~
sa: Este importante enzima se retroinhibe por muchos ribonucle6ti<los de purina, v- • • •
Destacar el hecho de que el AMP y el G11P, los productos finales de la vfa, actUan
de manera sinergica a Ia'hora de inhibir laamidotransferasa. · ·
. 2. El inosinato es el ·p~o do~de la sfu.~esk se bifurCZ: hacia el A]Y.[P o hacia el GMP.
Las reacciones que tienen. lugar a: pa.rtfr: del ino~nato son puntos de retrainhibicWn. EI
A1v.1P inhibe la conversion del inosinato en adenilsuccinato, su.precursor inmedia-
to. Analogamente, el G11P inhibe la conversion de inosinatoen xantilato, su pre-
'cursor inmediato, · · . ·- - · · · ,_, . ....... ·· :- ··- ... ·~· · ...... ·:.. .. ~.. · · ... ··· ."\· ·

3 -. Como ya se haindicado, el GTP_ ~ un sustrato para la sintesis delAM:P mientras:


que cl ATP 'es un slisb:ato p~la sintesis del G:MP. Es~ rela.ciones reciprocas entre
los sustratas tienden.a mantener el equilibria entre la sfu.tes~ de las ribonncleotidos
de adenina y de guanina. · . . · ,
······ . ~~ ..
. · Conviene hacer notar que la sfntesis de PRPB-por la PRPB sintetasa esti muy ..f_~:;.·~. s'.
regulada a pesar de que no es la etapa limitante de la sfntesis de purinas. Se han · . HJ. • •!;~~2,:; ;1~
identificado mutaciones de la PRPB sintetasa que clan como resultad6 Una. perdida
Figura 25.15 Control de la biosfn~!?fi.~
dela respuesta alosterica a los nucle6tidos, pero sin efectos sobre la ad:ividad cata- purines, La retroinhibici6n contro!a ral'ito la:: .
litica ·del enzima, Una consecuencia.deesta mutaci6n es una 8obreabundancia de veloddad global de fa biosfrrtesisde purines
ri.ude6tid~s de purina que puede provocar gota, qt.Ie es un estado patol6gico que s~ como el equilibrio entre la produa:i6n de· AMP
yGMP. .
tratara mas adelante en este capftulo.. . .

Nude6tidos Inhibldo ·
Histidina de pirimidina "porAMP •
\·' . Ad:mI- ~-AMIP

Ribosa
,.I Fosforribosil- .- ...~·IMP
\~
_,,,-A
sucanato
.
5-fosfato ·· ·'~~f'.RPP ~~ arnina
\_ lnhibido par ._;/ . ·-.
' .. ·("'- Xantilato ~ GMP
IMP,AMP •.
yGMP
Inhibido ·
porGMP
75.2. La sfntesis de desoxirribonucle6tidos se controla mediante la
CAPfruLO 2?. Biosfnfesis Cle nude6tidos regulacion de
la ribonucleotido reductasa
La reduccion de las ribonucle6tidos a desoxirribonucle6tidos se controla de ID2Il£iC!..
precisa mediante interacciones alostericas. Cada polipeptido de la subunidad R1 de
la ribonucle6tido reductasa de E. coli aer6bica presenta dos centros-alostericos; uno
· de ellos controla la actividad global' del enzirna, mientras que el otro regula Ia espe-.
cificida.d del sustraio (Figura 25.16). La actividad catalitica global de la ribonncleo-
tide reductasa disminuye cuando se le une dATP, una seiial que indica abundancia
de desoxirribonucleotidos. La union del ATP anula esta retroinhibici6n. La uniOn
de dATP o de ATP al centro de control de la especificidad del sustrato intensfu
la reducci6n de UDP y CDP, .Ios nucle6tidos de pirimidina. La union de timidina
trifosfato (TTP) promueve la reduccion de GDP e inhibe la reduccion ulterior de
los ribonucleotidos de pirimidina. Ehubsiguiente incremento en las niveles de
dGTP estimula la reducci6n de ATP a dATP. Este complejo patron deregulacion
· permite que los cuatro deso~onucle6tidos necesarios para la sintesis del DN.A.:
se encuentren en las proporciones adecuadas .

(A) .. · .. (B) .Reguladdn.de.la-activldad global

ADP] . '·~I[dAD;] ...* ·[· ~]


GDP R!·==~.!:?.,';'.~~.. ddGDP dGTP.
_ .. • .... [UDP·
CDP
.
..
©j-
. ATP
. UDP
.. dCDP
·
..
.
.
·.TIP
dCTP
Figirra 2~. i 6 Regulaci6n de la
ribonude6tido·reductasa.
(A) Cada subunidad de! dfrnero Rl Regulad6n de la especificidad hacia el sustrato · ,-
contiene dos centres alostericos,
adernas de! centre adivo. Uno de ADP~ ·' "Etlt ~>- dADP _.,.,,w ~ dATP (ATP)
las centres regula la actividad global . . . I
y el otro regula la especificidad hacia

tf
GDP· ,.,,..._®f~dGDP -~dGTP
el sustrato. (B) Patrones de regula-
don que exhibe laribonudeotido ·
reductasa para cada uno de los UoP -~duoP · >
dferentes nude6sidos difosfato. . . e.i:
CTP .-•'·Et) dCfP ·•'" ~lil dCTP

:is.5~-Aiteraciones en el metabolismo ·de. las nude6tidos


. pueden provocar diversas patO,Iog~~s
. .
Los nucle6tidos son vitales en muchos procesos bioquirnicos. Por tanto, no es de
extrafiar g_ue las alteraciones en el metabolismo de los nucle6tidos den.lugar a toda
una serie Je ef~.;¬ ii.siol6gis;os: Los nucleotides de una celula se estan renovando
continuamente. Los nucleotidos se degradan por hidrolisis a micle6sidos, por medio
de las nucleotidasas. La ruptura fosforoliticade los nucle6sidos·para originar bases
lib res y ribosa 1-fosfato (o desoxirribosa 1 -fosfato) esta catalizada .Por las nucleosidq
fosforilasas.Laribosa 1-fosfato se isomeriza pormedio ddafosforribamutasa aribo-
sa 5-fosfato, un sustrato para la ~futesis de PRPP. Algunas de las bases son reutili-
zadas paraformar n~cleotidos mediante las vias de recuperacion, Otras se degradan
a productos de excrecion (Figura 25.17): Una deficiencia 'en un emrni.a puede alte-
rar estas vias, originalldo una situ'.1-ci6n patologica,

La perdida deIa actividad adenosina desarninasa provcca una


. ·' inmunodeficiencia cornbinada grave . - . .
~. La via .de Ia degrad~ci6n del A11P incluye una etapa adicionai porque la
~::~..:·· adenosina np .es s:ustrato dela.nucle6sido fosforilasa. En primer lugar, se
----'-=-----'--_:..:_~---'-"---,----,e]]mina eJ:fo~to.po;r 1;Ileilloae una nucreotidasa para forrnarel nude6sido adenosi-
na (v.ease Ia Figura 25) 7). En 1a etapa adicional, la adenosina-se desamina median-·
te la adenosina ClesaminasapaJ:?. producir inosina, · ·
. ~.........

H ;

Guanina

:'\;(),iL.·.cQ.:g· . ro . \ . RibJ1:. >·.·J:Co;·.


:·..J_,,, .~ .. . !- r : .. . I . .
· NudeOsido
fosfon1asa -
'\
N #

~: : <~p
'> ribosa 5-P nbosa ·
Adeno~a . '
· ribosa
lnosina · -. Hipo:rantina Xantina

~ ·.

~~fl/'.
···Ffiuri:i.25.17 Catabolismo de las purinas.Las bases puricasse convierten prirnero
~.~
. enxantina y posteriorrnente en urato, que se excreta La xaniina oxidasa cataliza dos H H
etap~ de este proceso, · Urato
: ·... _;, : .·• ..... :-· .
• =.r \ . . ~·:·· _:
. Un~ defici~ncia en 1.a.actividad de la adenosina desaminasa esta rclacion:ada:'. con ·
. · algunas form.as 'de in;munodeficiencia combina.da. grave (SCID, par ''s~ere combined ·
· immunoiieffi.dency'D, untrastorno inmunologico. Las personas esta·alteraci6n con
padecen graves infecciori.es recurrentes, lo que a m.enudo provoca la mnerta,a una ..
edad temprana. El SCID se caracteriza por una perdida de las celulas T, 'que SOD.
fundamentales para la respuesta 'inniurie (Secci6n 34.5). Aunque-no se ha determi-
nado' claramente la base bioqufmica de la enfermedad, la ausencia de adenosina
desaminasa h~ce que los niveles de cl.A,. u
aumenten hasta.alcanzar valores entre s_o
a
y 100 veces superiores lo normal, lo que inhibe la ribonucle6tida reductasa y, en.
consecuencia, la sintesis de DNA. Ademas, la adenosID.apar si rnisrna es una pode-
rosa molecula sefial para numerosas vias reguladoras, La alteraci6n "de las niveles de
adenosina tllnbifo puede tener efectos deletereos, El- SCID se denornina con fre-
~encia . "enfermedad • del nifio . burbuja" porque su -tratamiento exige aislar al -
paciente cornpletarnente del entorno. La deficiencia clcii.E_g;rl.osi.Ila desaminasa se ha
tratado con exito gracias a laterapia genica, ·· . ~ "+": • • . · . . •· ·

La .gota esta provocada par 'nivele5 elevados de 'urato en sangre ·


~.:·'.La inosina originada por la ad~osina d~asa se metaboliza posterior- .
-;~- _i!'r niente a hipoxantlna mediante la 'nucieosido foif.orilasa.. La xantind oxidasa.;
·~ ~a.;,,.oprotefua quecoritiene molibder;_o y .hierro, oxida la hipoxantlna a xaniina: ·
y, posteriormente, aacido urico:.EI oxigeno molecular, el o:xidante enanibas reaccio- ..
nes, se reduce a H202, que se descompone en H20 y O~ por medio de la catalasa.
A pH fisiologico, el acido iirico pierde Un. proton dando lugar a urato. En los seres
humanos, el urato es el produdo fin.al de Ia. degradaCi6n de las puiinas y se excreta. par
la otina. _. ·· · ·
. . Niveles elevados de urato en sangre (hiperuricernia) provocan la gota;una dolo-
rosa enfermedad de las articUia~ones. Eri. esta ecfermedad, la.sal sodica del urato
-c:ri~-eD.. eifimdo y en el revestimiento de las articulaciones (Figura-25.18). Con Figura 25.18 Micrograffa de cristales de.
urato scdlce, La acurnuladon de estos cris1ales
frecuencia, el urato s6dico se acurnula en la pequefia ~culaci6n de la base del dedo provoca dafios en las articuladones y en'los
- gordo del pie, aunque tambien se a~ula en otrasarticulaciones, Cua:[;.do las celu- · rifiones. [Cortesfa de! Dr:. James McGuire.]

753
754 las del sistema inmune engullen los cristales de urato s6dico se produce una doloro-
Q\?iTIIL0.?5 -Biosfntesls ;Ie nude6tidos sa inflamacion. Los rifiones tambien pnedenverse daiiados por la precipitacion de
cristales de urato. La·g~ta es un problema medico frecuente que afecta al 1% de la
poblaci6n de los paises occidentales. Es nneve veces mas frecuente ~n hombres que
enmu1eres ..
. 'La administraciori de alopurinol, un analogo de la hipoxantina, constituye tzn
tratarnie:r.ito para la gota. El mecanismo de acci6n del aloptrrinol es interesantee
primero acuia. coma un sustrato y, posteriotmenie, coma un · inhibidor de la xantina
oxidasa. La oxidasa hidroxila .el alopurinol para formar aloxantina ( oxipurinoI) que.
posteriormente, perm.anece fuertemente unida al centre active. La union de .Ia
aloxantina rnantiene al atorp.o de molibden6 de la xantina oxidasa en un estado de
oxidacion +4, evitando qne vuelva al estado de oxidaci6n +6", tar y como haria. en
un ciclo'catalftico normal. Vemos aqui otro ejemplo de inhibicion suicula. .
La sfntesis de urato a partir de hipoxantina y. x;u;_tilla disminuye poco despues
i de la adrninistracion-del alopurinoL La concentraci6n de hipoxantina y xantina en
l Alopurinol la sangre aumentan, mientras que la de urato diminuye.
I
II . . y-·En Iossereshumanos.clos .niveles promedios .de urato.en-sangre
. . , . ·: ,>~ ~ ,;.,. · · ,~; (~,~;:..;f·i~pr6:i.ir:0.9_~;,,;~u)frpit~.:<;le: sp~ubilidad:".P.or;el,tori.t(ario;:Ios.prceirnios (corno los
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. estan IDL'Y
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i · ." : . ; ·, .·... · ,: t.:, <:Ji¥i~es ).pr~e.ntm· niveles' a.ie.zyeceS IIiasJ~ajos:Duranteia evolucion delos prima-
l . ·. · . · . ... -. _., ;tes.:fuy6lugar~~orpren~en~e:.aumento delos niveles de.urato .. lCual.es la ventaja,
\l · ·· · .' : : .selectiva de .un nivel.de urato tan elevado qne sitiia- a mucha gente al borde de un
ii1: , .,, . ataque de gota?.-Resulta-·que el-uraro posee.un. efecto<sum~ente:beneficioso.
~! . . . .·.· . . El urato.es muy eficaz para ~ev,tralizar y eliminar las especies reactivas del oxigeno.
,, I De hecho, el urato esun antioxidante casi: tan eficaz como el ascorbato (vitamin.a C).
I
I El elevado nivel de urato en humanos, en comparaci6n con las prosimios y otros
primates inferiores, puede contribuir de form.a significativa a la mayodongevidad
! · d~ l~s humanos ya una disminuci6n de la incidencia del cancer,

El sfndrorrie de Lesch-Nyhan es una drarnatica condecuen'cia de fas


mutaciones en un enzima de Iasvlas derecuperacion
; ~*:;, Las mutaciones en las genes que codifican enzimas de .la biosfntesis de
~~ .::f . nucle6tid~s pueden reducir los niveles de los nucle6tidos nccesarios y. pue-
den provocar la acumulaci6n: de intermediaries. Una ausencia practicamente total
- de la hipoxai:'.i.tini-guacina fosforribosiltransferasa tiene consecuencias inesperadas
y devastadoras. La manifestaci6n mas . sorprendente de· este fallo congenito del
rnetabolismo, denominado sindrome de Lesch-Nyhan, es un compottamiento autodes-
tructiva compulsiuo, A la edad de 2 6 3 aiios, los nifios que presentan esta enferme-
dad empiezan a morderse.Ios dedos y los labios y, si nadie se. loimpide, pueden
llegar ~mastic~krs. Estos niiios tambifo ~e comportan de form.a agresiva con los
demas. Otras caracteristi:ca'.~ deI sfndrome deLesch-Nyhan son el retrasa 'mentaI y
la espa.sticidad. Niveles elevados de urato en sangre provocan la formaci6n de pie-
dras en el :riii6n durante la infancia, y c;onel paso.de los aiios ap~ecen los sfn.tomas
de la gota.. La enfermedad se hereda como un.trastomo recesivo ligado al sexo.
Las consecuencias bioqufrnicas de la pradica ausencia de hipoxa:b.tina-guanina
fosforribosiltransferas?-.son una eleva.da. conc_entra.ci6n de PRPP, un notable aumenta
en Ia. velocidad de biosintesis de· purina.s mediante. las vias de nova y una. producci6n
excesiva. de urata. ·La relaci6n entre· la ausencia de 1a transferasa y Jos extraiios
sfutomas neurol6gicos es un i:nisterio' aunqµe' hay evidencias recientes que s~gieren
que la ausencia de hipoxantina-guallina.fosforribosiltransferasa provoCa, de alguna
manera iri.determirnida, un clesequilibrio entre neurotransrillsores Clave: .E1 ·sfndro-
:..;

me de Lesch- Nyhan,demuestra queias vias derecuperaci6n para la sfn.tesis de Th1P


y G1vfP· no son un capricho. Ademas, el sindr9i;n_e de .Lescli-Nyhan pone de m.ani-
fi.esto_que:.la.:.a.useiicia,-~urz,. unico-enzima.-pUede"origi1Ulnmnparta.mient~nirwfm:ales-
----..,----_:_~-,.--:---:----:----co;w ia. autoniutflapian j la dgresivuu;_d extrema.: No h~y d?-4?-.
c!-e qt.ie Ia psiquiatrf~
se- berreficiara cuai.ido las-baies' niolecclareS de estos tra.Sto.nios men.tales seaJ:i. des-
veladas. · · ·· ··
l~ car'end~ d~ a~id 0° t6ii~o.~r~~oca>d~f~ctos c6ngen~~~ co~o ia -~ ...
0 .
·,~··:···:
... .-
espina bffida · ." · · · · · Resumen ·
~.La espina bifida. es un tipo de ck.fecto" congfuito qUe se'caracteriza par iliia
:~:::~t: formaci6p. incornpleta o defectuosa del tubo jieural durante las. primeras
. etapas del desarrollo. En' los Estados .Uni dos, la incidencia de los defectos ·deI tuba
neurai -es. aproximadamentede uno por cada 1:0PO naciillientos. Ulla.-seriede estu-
dios ha demostrado que la incidencia de los defectos del tube'neural se reduce hasta
en urr70% cuando las mujeres ingieren acido f6lico Como un suplemento de ;,u dieta
. antes del embarazo y durante el primer trimestre de gestacion, Una-de las hipotesis
que explica estehecho es que al aurnentar la freeuencia de la division celular hay que
sintetizar cantidades importantes de DNA y hacen falta mas derivados dcl folato
para sintetizar los precursores del DNA.. . .
:· '

Resumen
s: 25.:J:t'.~f1~nillo1}ie{,pjifmidina se sintetiza de tiovo o se reconstruye
~:$'.milifante Vi'if~e·recuperacion . ·
.,~~-P.~~orrilar ~.p.ucle6tidode pirimidina, primero se ens~ia el anillo de
.. ~~Riillllidina y, i'.toritinuaci6n,se une a la ribosa fosfato, El s·~fosforribpsil-1-
?'.{P-irofcisfato.(PRPP) aporta la ribosa fosfato. Li.sintesis del anillo de pirimidi-
:. .? .·na· co:ffii~a con la formaci6n de carbamilaspartato a partir de carbarnilfosfa-
. ~'~L . -r- toy aspartato, una.reaccion catalizadapor la aspartato transcarbamilasa, Por
~-?" ~ ·.. deshidra.taci6n, formaci6n de un anillo y ox:idaCi.6n se obtiene orotato, que
·· ·· · reacciona c~n PRPP paci formar orotidilato, La descarboXil~ci6n de este -·
:~:. nucleotide de pirimidina da .Iugar a UMP-. Posteriormente,el CTP se forma . , . ·
por amln.aci6n de UTP. - ·
25.2 Las bases ptiricas se pueden sintetizar·de nova o.se pueden recidar ·
mediarrtevfas de recuperad6n · ·
El anillo de purina se ensambla a partir de una serie de precursores: glutamina,
glicina, aspartato, · N1°-formiltetrahidrofolato y C02; La eta.pa limitante en la
sfq.tesis·de nauo de Ios nucle6tidos de purina es la formacion de 5-fosforribosil-
. amina a partir de P.RPP v zlutamina, El anillo de purina se ensambla sobre la
·. ribosafo;fat~, a diferenci~'de la sfntesis de nova delos n~de6tid~~-d~pirircicfui~·-... ..
·· ~;'·· · · · La adici6n: de glicina, seguida de la formilaci6n, aminaci6n y cierre del, anillo.da
lugar .al 5:-aminoirnidazol ribonucle6tido. Este intermediario contiene el anillo
. .. ' 'completo de cinco atomos que constituye el esqueleto de las purinas.La adici6n
de C02, del ato~o de nitr6geno del aspartato y de un grupo formilo, seguido del
·. : cierre del anillo, origina inosinato, un ribonuclajtiflo de purina, El AMP y el
· · · GMP.se forman a partir del IMP. Los ribonu~Cl:bs de puiina tambien se
. · pueden sintetizar mediante unavfa de recuperaci6ri en.Ia que bases ya formadas . . ,. ',. ·:·· ''ii
. . reaccionan directamente con el PRPP.
. . .
25:3 Los desoxirribonucleotidos sesintetizan porreducdon de ribonude6tidos
mediante un mecanismo en el. que intervienen radicales
En E.: coli, los desoxirribonucleotidos, los precursores del DNA, se forrnan
mediante la reducci6n de ribonucle6sidos difosfato; Estas conversiones estan .
,catalizadas por la ribonucle6tido reductasa. Graciasala tiorredoxina, se trans-
fi~ren electrones desde el NADPH hacia los grupos sulfhidrilo de los centros
activos de este enzima. Un radicallibre tirosilo, generado por un centro de la
· · reductasa que contiene hierro, inicia una reacci6n radical sobre el azticar, que
da lugar a la susti~ci6n del OH del C-2' por un H. El TMP se forma·por
metilaci6n: de. dlJ.MP, En estareacci6n, el donadortanto de un grupo metileno
come de union hidruro es el N5,N10-mefilenteti;ahidrofolato, que..se con.vier~
· te en dihidrofolato. El tetrahidrofolato se reg~era mediante. la ·reducci6n del .
dihidrofolato por el NADPH. La dihidrofolato reductaSa,· q~e cataliza.esta
reacci6n, se inhibe por analogos ·del folato como la aminopterina y el meto-