Universidad Nacional De Cajamarca

Facultad De Ciencias Agrarias

Escuela Académico Profesional De Agronomía

MEDIO DE CULTIVO
Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el
desarrollo de microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar
un cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en
las que los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias.
Los microorganismos son los seres más abundantes de la tierra, pueden vivir en
condiciones extremas de pH, temperatura y tensión de oxígeno, colonizando una
amplia diversidad de nichos ecológicos. Entre los requerimientos más
importantes para su desarrollo están el carbono, el oxígeno, nitrógeno, dióxido
de carbono e hidrógeno.
Clasificación de los medios de cultivo
Según su origen:
a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen
animal o vegetal como ser
Extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se conoce
exactamente.
b) SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición química
definida cuali y Cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados
reproducibles.
c) SEMISINTÉTICOS son los sintéticos a los que se les añaden factores de
crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo, como por ejemplo
extracto de levadura.
INGREDIENTES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
 Agua: Peptonas, hidrolizados y digeridos
 Bases nutritivas :Extractos, infusiones y dializados
 Carbohidratos: Azúcares, Agua y derivados, Almidones y Otros
 Sales Minerales: Macroelementos (fósforo, azufre, sodio, cloro, hierro
y otros) Microelementos (zinc, cobre y otros)
CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOS
1- disponibilidad de nutrientes adecuados
Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de
contener, como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas.
En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias
inductoras del crecimiento.
 Universidad Nacional De Cajamarca
Facultad De Ciencias Agrarias
Escuela Académico Profesional De Agronomía

.2- consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo
productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en
estado semisólido o sólido.
.3- presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de
oxígeno normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados
sustratos.
4- condiciones adecuadas de humedad
Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es
imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas
en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas
en las estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua
que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar
así que se deseque el medio.
5- Luz ambiental
La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en
presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los
microorganismos fotosintéticos.
6- pH
La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de
los microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con
un pH neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se
debe olvidar que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden
el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus
procesos metabólicos normales.
7- Temperatura
Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15
y 43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los temófilos a 80ºC o incluso
a temperaturas superiores (hipertemófilos).
8- Esterilidad del medio
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la
aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos
medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave
(que utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante).
 Universidad Nacional De Cajamarca
Facultad De Ciencias Agrarias
Escuela Académico Profesional De Agronomía

METODOS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO

Sembrar un microorganismo es colocarlo en un ambiente artificial apropiado para

que lleve a cabo su metabolismo, su desarrollo y su reproducción. Las técnicas
de siembra varían según el estado físico del medio o las necesidades del
microorganismo.
Si el cultivo tiene un solo tipo de microorganismo se le denomina cultivo puro.
Cuando encontramos más de un tipo de microorganismo se llama entonces
cultivo mixto. El proceso mediante el cual se separan los microorganismos se
denomina aislamiento y la forma de sembrar puede realizarse de varias formas,
dependiendo de la prueba y del medio de cultivo empleado.
Siembra
Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo)
en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su
desarrollo y multiplicación. Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a
una temperatura adecuada para el crecimiento.
Aislamiento
Es la separación de un determinado microorganismo del resto de
microorganismos que le acompañan. El método más usual es la siembra por
estrías sobre un medio de cultivo sólido adecuado dispuesta en una placa de
Petri.

PROSEDIMIENTO
 Siembra en medio líquidos por suspensión: la siembra en estos
medios pueden hacerse utilizando pipetas, para el caso de muestras
liquidas y en las que es necesario colocar una cantidad grande de inoculo.

 Siembra en medios solido: en estos medios se pueden utilizar el asa en

anillo en punta o en ángulo, también pueden usarse hisopos o el asa
digralsky y según sea el caso.

 Siembra por estrías en superficie: esta forma de siembra se utiliza tanto

en placa como en tubo en medio solido empleando el asa en anillo se usa
cuando se requiere aislar microorganismos (buscar que las colonias
desarrollen unas separadas unas de otras
 Siembra en placa invertida o incorporación: se coloca el inoculo sobre
una placa estéril y luego se vierte el agar licuado (a 45°c aprox.)sobre el
inoculo

 Siembra en doble placa: se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri

y sobre el mismo se vierte el medio de cultivo previamente, una vez
solidificado el medio se vierte una cantidad extra de medio necesaria para
cubrir la capa anterior.
 Universidad Nacional De Cajamarca
Facultad De Ciencias Agrarias
Escuela Académico Profesional De Agronomía