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UNIVERSIDAD AUTÓNOMA BENITO JUÁREZ DE OAXACA

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

CLAVE DE LA
CARRERA PLAN DE ESTUDIOS NOMBRE DE LA ASIGNATURA
ASIGNATURA
QFB 2009 INMUNOLOGÍA

PRÁCTICA FECHA Y
NOMBRE DE LA PRÁCTICA
NÚMERO DURACIÓN
5 Reacciones Febriles 1 sesión
1 INTRODUCCIÓN
Las reacciones febriles son un conjunto de pruebas que sirven como su nombre lo indica para
diagnosticar enfermedades que cursan con fiebre, como Fiebre tifoidea (Salmonella), Brucelosis (fiebre
ondulante, fiebre de Malta) y Rickettsiosis (Fiebre Q, fiebre manchada de las montañas rocallosas).

Las reacciones febriles son pruebas que han venido a caer en desuso, sin embargo en muchos países
en vías de desarrollo como México se siguen utilizando por ser pruebas baratas y rápidas, pero en
países desarrollados son cada vez menos utilizadas por su poco valor diagnóstico.

Los antígenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella,
Brucella y Rickettsias (reacción cruzada con Proteus OX-19).

Estas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes
infecciosos, responde produciendo anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de
manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo específico. El título (valor) del anticuerpo
depende del tipo y curso de la enfermedad. Para que los resultados tengan un valor diagnóstico el título
de ellos debe aumentar, por lo que se deben tomar 2 muestras separadas por un periodo de tiempo de 4
semanas para ser comparadas.

El informe del resultado de la prueba se hace tomando en consideración la dilución más alta que se
observe en la reacción positiva.

2 OBJETIVOS
Determinar y cuantificar a través de pruebas serológicas, los títulos de anticuerpos contra antígenos
bacterianos para evaluar la presencia de enfermedades como fiebre tifoidea, brucelosis, entre otras; que
se caracterizan por provocar en el paciente un síndrome febril.

3 FUNDAMENTO
1. - Reacción de Widal para diagnóstico de la fiebre tifoidea, entérica y ondulante. La reacción mide el
titulo de anticuerpos (aglutininas) en el suero contra una suspensión de antígenos conocidos de
Salmonella typhi, S. paratyphi A y S. paratyphi B.

2.- Reacción de Huddleson para la brucelosis (Brucella abortus, B. suis o B. melitensis).

3.- Reacción de Weil-Felix para el tifo. Las especies de Rickettsias que causan tifo, tienen componentes
antigénicos idénticos a Proteus (cepas OX-19, OX-2 y OX- K). En esta prueba se utilizan antígenos de
Proteus para diagnóstico de tifo.
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4 PROCEDIMIENTO
A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO
Material común de laboratorio.
REACTIVOS:

Equipo de reacciones febriles que incluye:

− Tífico “O” (Antígeno somático)


− Tífico “H” (Antígeno flagelar)
− Paratífico “A” (Antígeno flagelar)
− Paratífico “B” (Antígeno flagelar)
− Brucella abortus
− Proteus OX-19

MATERIALES:

− Placa de vidrio para serología


− Aplicadores de madera
− Parafilm
− Tubos para toma múltiple sin anticoagulante con gel
separador
− Agujas para venopunción
− Torniquete
− Torundas de algodón

MATERIAL BIOLÓGICO:

− Suero de paciente.

APARATOS E INSTRUMENTOS

− Centrífuga.
− Pipetas automáticas de volumen variable 10 a 100 uL

B DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
PREPARACIÓN DE LAS MUESTRA BIOLÓGICA.

1. Extracción de una muestra de sangre venosa.


a. Realizar la extracción de una muestra de sangre total por punción venosa en un tubo sin
anticoagulante.
b. Esperar 15 minutos para que la muestra coagule completamente.
c. Centrifugar la muestra para obtener el suero durante 5 minutos a 2500 r.p.m.
d. Concluido el proceso de centrifugación verificar que el gel separador se encuentre entre
las dos fases de la sangre total y que el suero sea transparente y no presente hemólisis.

PROCEDIMIENTO.

1. En una placa de vidrio serológica marcar 6 círculos del 1 al 6 y agregar a cada uno 80 uL del
suero problema y agregar a continuación una gota del antígeno que corresponda de acuerdo a
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la siguiente tabla:

Círculo Vol de suero (uL) Antígeno (1 gota) Título


1 80 Tífico “O” 1:20
2 80 Tífico “H” 1:20
3 80 Paratífico “A” 1:20
4 80 Paratífico “B” 1:20
5 80 Brucella abortus 1:20
6 80 Proteus OX-19 1:20

2. Mezclar inicialmente con aplicadores de madera y después con movimientos circulares durante
7 min. Verificar que prueba te da positiva; es decir cual prueba manifiesta franca glutinación.

3. Una vez que establezcas que antígenos dan positivo, solo a estos les realizaras las pruebas
con los siguientes volúmenes de suero. Por ejemplo, si te dieron positivo los antígenos “O” y
“H” :

Suero (uL) Tífico “O” Suero (uL) Tífico “H” Títulos


40 1 gota 40 1 gota 1:40
20 1 gota 20 1 gota 1:80
10 1 gota 10 1 gota 1:160
5 1 gota 5 1 gota 1:320

4. Mezclar inicialmente con aplicadores de madera y después con movimientos circulares durante
7 min. y observar la presencia de aglutinación para reportar el resultado final de cada prueba.

C EXPRESIÓN DE RESULTADOS E INFORME DE LA PRUEBA.


La siguiente tabla te ayudará a realizar la interpretación de los resultados.

Suero Antígeno Títulos


problema
(uL)
80 1 gota 1:20
40 1 gota 1:40
20 1 gota 1:80
10 1 gota 1:160
5 1 gota 1:320

5 INTERPRETACIÓN Y CONCLUSIONES
Se elaboraran de acuerdo a los resultados obtenidos y la importancia diagnóstica de las pruebas.

6 ANEXOS
CUESTIONARIO.

1. Describe brevemente las enfermedades: fiebre tifoidea, paratifoidea, brucelosis, infección por
Rickettsias.
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2. ¿Por qué se dice que las reacciones febriles son poco específicas?
3. ¿Cómo podemos determinar si la infección esta activa o es por la presencia de anticuerpos de
memoria?
4. ¿Qué resultados se espera en las pruebas si un paciente?
a. Padeció anteriormente una infección por tifoidea.
b. Recibió tratamiento con antibióticos.
c. O fue vacunado anteriormente
5. ¿Qué otras pruebas se puede realizar en el paciente para verificar estas enfermedades, y que
además sean pruebas más específicas?

7 REFERENCIAS
• Bolio Salazar, Emilia E. Manual de Prácticas de Análisis Clínicos III. Universidad de Colima, 2009.
• Bejar Lozano, Carlos. Evaluación de la utilidad de las reacciones febriles de aglutinación: estudio comparativo
de resultados entre poblaciones con y sin manifestaciones clínicas de enfermedades infecciosas febriles.
Disponible en http://www.contactoquimico.com/htm/Articulos/Inmunologia/Inmunologia6Evaluacion.htm

8 MECANISMO DE EVALUACIÓN
Puntualidad y asistencia 40%
Bitácora 20%
Reporte 20%
Conocimientos previos 20%

9 MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL


1. Se deberá utilizar antifaz de seguridad.
2. Se deberá tener el cuidado respectivo al manejo de material a altas temperaturas, materiales
corrosivos y tóxicos.
3. Al pesar o medir reactivos evite tirarlo o derramarlos en el sitio donde se encuentre, en caso de
hacerlo limpiar perfectamente el lugar.
4. Al medir las muestras biológicas evite tirarlas o derramarlas y sigue los procedimientos
generales de manipulación para evitar cualquier riesgo biológico.
5. Cubrir las medidas de seguridad básicas para el laboratorio.

En caso de accidente (por pequeño que este sea) debe comunicarse de inmediato al maestro
responsable del laboratorio.

10 DISPOSICIÓN DE DESECHOS QUÍMICOS, FÍSICOS Y BIOLÓGICOS.


1. Los recipientes que tengan residuos de naturaleza lipídica, se limpiarán con papel absorbente
antes de lavarlos en la tarja y estos papeles se tirarán en el bote de basura del laboratorio.
2. Los residuos de origen orgánico se tiraran en el bote de basura respectivo.
3. Los RPBI se desecharán en los contenedores destinados para ello.