Pruebas Bioquímicas

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES

PLANTEL ZARAGOZA

QUÍMICA FARMACÉUTICO BIOLÓGICA.

Q.F.B

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA GENERAL I

Examen Práctico
Número de Cepa 7

Grupo: 1602

Fecha de entrega: 19-noviembre-2017

Equipo: 8

Autor:

Jiménez Martínez Williams de Jesús

Tinción de Gram

Imagen 1. Tinción de Gram con objetivo 100X

En la imagen anterior se puede observar la coloración característica de las bacterias Gram

Negativa, que es la coloración dada por la Safranina, y por las formas observadas se detectó que se
trataba de un bacilo.

Por lo anteriormente observado se realizaron las pruebas bioquímicas siguientes en base a lo

obtenido en la tinción anterior.

Pruebas Bioquímicas
Prueba Bioquímica Resultado
Caldo Nitrato El resultado fue negativo, ya que para la 1ra
fase no hubo coloración y de igual modo para
la 2da fase tampoco.

RMVP Para la prueba de rojo fenol, el resultado fue

positivo al cambiar de color el medio; y la
prueba de VP fue negativa al no tener cambio
de coloración.

MIO Negativo en la prueba de Indol, formación de

poca coloración amarilla en el fondo del
medio, positiva a la prueba de ornitina
descarboxilasa.
Fenilalanina No hubo cambio de coloración en el medio,
por lo que el resultado fue negativo.

LIA Poco ennegrecimiento del medio, y formación

de una coloración roja en la parte del pico de
flauta, resultado positivo.

Caldos Rojo fenol+ Carbohidratos En los tres tubos con los diferentes
carbohidratos (Dextrosa, Sacarosa y Manitol)
no hubo cambio de color, por lo que el
resultado fue negativo.
De izq. a der. Manitol, Sacarosa y dextrosa

Citrato Cambio de color en el medio, por lo que el

resultado fue positivo.

Urea Poco cambio de coloración en el medio, faltó

tiempo de incubación. Aun así, el resultado fue
positivo.

Agar S-S Crecimiento de colonias transparentes,

algunas presentan un centro de color negro
(producción de H2S), redondeadas y de textura
pastosa.
Agar McConkey Crecimiento de colonias transparentes con
efecto Swarming y pequeños halos
transparentes alrededor, por lo consiguiente
no se realizó un buen aislamiento, su
consistencia fue viscosa.

Agar Sangre Crecimiento masivo de colonias color blancas,

con efecto de Swarming, no se logró un gran
aislamiento, no presentó algún tipo de
hemólisis.

Agar CLED No presentó crecimiento alguno del

microorganismo.
 No presentó crecimiento alguno del
microorganismo.
Agar Sal y Manitol

Prueba de Catalasa El resultado fue positivo al observarse la

descomposición del agua oxigenada con la
efervescencia.

Análisis de Resultados:

Para el caldo nitrato se puede observar que el microorganismo en ninguna fase de

la reacción, logró reducir el nitrato, entonces se concluye que para esta prueba el
microorganismo inoculado no presentó las enzimas de nitrato-nitrito reductasa, con
ello se detecta que el organismo en el medio en él puede realizar respiración
aerobia; para el medio de RMVP en las dos pruebas que conciernen a esta, se
denota que con la prueba de rojo de metilo, el microorganismo usó la glucosa como
vía metabólica, y el producto final fue neutro, y esto se comprobó por que la prueba
de VP dio negativo para la formación de ácidos, esto nos da a entender que el
microorganismo no es fermentador de la glucosa; para el medio MIO no presentó
ennegrecimiento del medio por lo que no hubo movilidad, tampoco de formó un haz
de color rojo por encima del medio, por lo que negativa la prueba del Indol, y para
la prueba de ornitina descarboxilasa, el medio viró su color a amarillo muy poco,
esta prueba fue considerada positiva, estas son características de los
microorganismo del Género Proteus sp; Para el medio Fenilalanina el medio no
cambió de color por lo que el microorganismo usó la desaminación para la
fenilalanina, entonces la prueba para este medio dio positiva; para el medio LIA la
prueba fue negativa en cuanto al cambio de color ya que no se formó la coloración
amarilla en la base del tubo, sin embargo, el medio presentó ennegrecimiento del
medio, por lo que para esta característica el resultado se mostró positivo; para los
caldo rojo de fenol + glucosa, ninguno de los tubos mostró un cambio de color a
amarillo, lo que indica que el microorganismo no es fermentador de glucosa y el
medio no se tornó ácido; para el medio de citrato, hubo cambio de coloración a azul
lo que nos indicó que el microorganismo usó el carbono como fuente de energía
para su metabolismo, esto es característica de las enterobacterias, por lo que con
este medio se pudo diferenciar esta especie; Para el medio de Urea hubo cambio
pequeño en la coloración, esto debido a que faltó tiempo de incubación del medio,
debido a que anteriormente en la prueba de citrato se vio que el microorganismo es
enterobacteria, se nota que además de ser Gram negativa y bacilo en la tinción, con
esta prueba el único género capaz de realizar esta prueba en el medio de citrato es
el género de Proteus sp.
Para los medio en placa los agares CLED y Sal y manitol no hubo crecimiento, con
ello se comprueba nuevamente que el microorganismo no es capaz de acidificar los
medio por que no realiza fermentación y da como producto ácidos; sin embargo, en
el agar McConkey nos permitió diferencia enterobacterias por la formación de la
colonias transparentes formadas, y el medio no cambió de color, esto de igual forma
se observó que la enterobacteria que se tuvo como muestra no es capaz de producir
ácido láctico, y no acidificó el medio; para el agar salmonella shigella presentó las
colonias transparentes y sobre todo la característica que nos permitió diferenciae el
género y poder deducir que posiblemente se trata del Proteus sp, fue la presencia
de puntos color negro en el centro de algunas colonias en el medio; En el agar
sangre no presentó algún tipo de hemólisis y además presentó el efecto del
swarmming, no hubo aisalmiento de las colonias, las características de estas fueron
las ya mencionadas en el cuadro anterior.
Por el análisis anteriormente mencionado, el microorganismo blanco es Proteus
sp, para ello se realizó el índice de Kappa para comprobar el resultado obtenido
con las pruebas bioquímicas.
 Observador A
Teórico

Positivo Negativo Total

Observador B Positivo 13 0 13
Real

Negativo 2 0 2

Total 15 0 15

Pruebas que dieron VP = Caldo nitrato, RMVP, fenilalanina, Caldo rojo fenol + sacarosa,
Caldo rojo fenol + dextrosa, Caldo rojo fenol + maltosa, Citrato, Urea, Agar S-S, Agar Mc
Conkey, Agar Sangre, Agar CLED, Agar Sal y Manitol.
Pruebas que dieron FN = Ninguno
Pruebas que dieron FP = MIO, LIA
Pruebas que dieron VN = Ninguno

u = 15(13) = 195
t = 2(2) = 4
R =195 + 4 = 199

K = (15(13+2)-199)/((15^2)-195) = 26/30 = 0.86

El índice de Kappa resultó 0.86, es decir se encuentra dentro del rango EXCELENTE para
la identificación de la bacteria.

Conclusiones:

Con el índice de Kappa calculado de 0.86, que dio un resultado excelente y

además con las pruebas bioquímicas realizadas se logró identificar el género
desconocido que resultó ser Proteus sp, sin embargopara obtener la Especiees
necesario realizar más pruebas bioquímicas.
Referencias:

1. Broocks G.F., Butel J.S. and Morse S.A., Microbiología Médica de Jawets,
Melnick y Adelberg, 19a edición, México, Editorial El Manual Moderno,
2008.
2. Mc Faddin J.F., Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de
importancia clínica, 3a edición, México, Editorial Médica Panamericana,
2003.
3. FES ZARAGOZA, UNAM, Laboratorio de microbiología [Internet]
Recuperado: 19 de noviembre de 2017. Disponible en:
http://132.248.60.115/cv/course/view.php?id=12