TEKNIK STERILISASI

Revly Ana Auleina1, Nadya Dwi Rahayu2 dan Hasrul Satria Nur3
1. Program studi D3 Analisis Farmasi dan Makanan, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A.
Yani Km 36, Banjarbaru, 70713, Indonesia
2. Program Studi Biologi, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A. Yani Km 36, Banjarbaru,
70713, Indonesia
3. Laboratorium Mikrobiologi, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A. Yani Km 35,8
Banjabaru, 70713, Indonesia

E-mail: Revlyanaauleina@gmail.com

Abstrak
Teknik sterilisasi, dalam mikrobiologi, peralatan laboratorium merupakan unsur penting yang harus ada. Dalam
melakukan sterilisasi, diperlukan teknik-teknik agar sterilisasi dapat dilakukan secara sempurna, dalam arti tidak ada
mikroorganisme lain yang mengkontaminasi media. Sterilisasi dalam mikrobiologi adalah suatu proses untuk
mematikan semua organisme yang terdapat didalam suatu benda. Ada beberapa teknik sterilisasi, yaitu dengan cara fisik
dengan panas, mekanik dengan filtrasi dan kimia dengan senyawa-senyawa kimia. Sterilisasi Fisik dapat digunakan
dengan cara pemanasan atau penyinaran. Panas kering yaitu sterilisasi dengan menggunakan udara panas, karakteristik
sterilisasi kering adalah menggunakan oven suhu tinggi (160-180°C) dengan waktu yang lama (1,5-3,0 jam). Sterilisasi
panas kering cocok untuk alat yang terbuat dari kaca misalnya erlenmeyer dan tabung reaksi. Sebelum dimasukkan ke
dalam oven alat/bahan teresbut dibungkus, disumbat atau dimasukkan dalam wadah tertutup untuk mencegah
kontaminasi ketika dikeluarkan dari oven. Sterilisasi mekanik/Filtrasi dikerjakan dalam suhu ruangan dan menggunakan
saringan yang berpori sangat kecil ( 0.22 mikron atau 0.45 mikron ) sehingga mikroba tertahan pada saringan tersebut.
Sterilisasi ini ditujukan untuk bahan yang peka panas, misalnya larutan enzim dan antibiotik. Sterilisasi kimiawi
digunakan pada alat/bahan yang tidak tahan panas atau untuk kondisi aseptis (Sterilisasi meja kerja dan tangan), bahan
kimia yang dapat digunakan adalah Alkohol, asam parasetat, formaldehid.

Keywords: sterilisasi, filtrasi, panas kering, panas basah, mikroorganisme.

1. Pendahuluan autoklaf, tabung kultur, cawan petri, jarum ose, pipet,

Dalam mempelajari mikroorganisme dalam kultur
murni, para mikrobiologi memerlukan alat-alat yang
menunjang dalam usaha mendapatkan kultur murni.
Dalam mikrobiologi, peralatan laboratorium
merupakan unsur penting yang harus ada. Peralatan
yang ada dalam laboratorium pun haruslah steril agar
dapat menunjang pekerjaan yang berhubungan dengan
mikroorganisme dan hal tersebut merupakan syarat
mutlak. Artinya, pada bahan atau peralatan yang akan
digunakan harus bebeas dari mikroorganisme yang
tidak diingikan yang dapat merusak media atau koloni
suatu mikroorganisme yang diinginkan. Adapun
peralatan yang umumnya digunakan di dalam
laboratorium mikrobiologi antara lain Media yaitu
cair, semi solid, solid (agak miring (siant), agak tegak
(deep), agak cawan(plate) dan peralatan lain yaitu
oven [1].
sterilisasi dalam mikrobiologi adalah suatu proses
untuk mematikan semua organisme yang terdapat pada
atau didalam suatu benda. Ketika anda untuk pertama
kalinya melakukan pemindahan biakan bakteri secara
aseptik, sesungguhnya anda telah menggunakan salah
satu sterilisasi, yaitu pembakaran. Namun kebanyakan
peralatan dan media yang umum dipakai dalam
pekerjaan mikrobiologis akan menjadi rusak bila
dibakar. Untungnya tersedia berbagai metode lain yang
efektif.Ada tiga cara yang umum digunakan dalam
sterilisasi yaitu penggunaan panas, penggunaan bahan
kimia dan penyaringan (Filtrasi). Bila panas digunakan
bersama - sama dengan uap air maka disebut sterilisasi
panas lembut atau sterilisasi basah, bila tanpa
kelembapan maka disebut sterilisasi panas kering atau
sterilisasi kering. Sterilisasi kimiawi dapat

1
dilakukan dengan menggunakan gas atau radiasi.
Metode sterilisasi yang umum digunakan secara rutin
dilaboratorium mikrobiologi ialah yang menggunakan
panas.Mikroorganime hidup di segala tempat (tanah,
air udara makanan, pembuangan, dan pada permuikaan
tubuh). Keberadaan mereka yang ada di segala tempat
menyulitkan para mikrobiologis untuk memperoleh
suatu koloni mikroorganisme tertentu dan yang sejenis
tanpa adanya mikroorganisme lain yang mencampuri
koloni tersebut. Kultur mikroorganisme yang tersusun
dari sel-sel sejenis (tunggal) disebut juga sebagai kultur
murni.Steril merupakan syarat mutlak keberhasilan
kerja dalam lab mikrobiologi. Dalam melakukan
sterilisasi, diperlukan teknik-teknik agar sterilisasi
dapat dilakukan secara sempurna, dalam arti tidak ada
mikroorganisme lain yang mengkontaminasi media.
Sterilisasi adalah proses untuk menjadikan alat-alat
terbebas dari segala bentuk kehidupan. Seperti yang
telah disebutkan bahwa tujuan sterilisasi untuk
mematikan mikroorganisme yang tidak diinginkan agar
tidak ikut tumbuh tujuan dilakukannya percobaan ini
adalah untuk mengetahui dan memahami cara
sterilisasi alat-alat pada laboratorium mikrobiologi [2].
Ada beberapa teknik sterilisasi, yaitu dengan cara fisik
dengan panas, mekanik dengan filtrasi dan kimia
dengan senyawa-senyawa kimia. Pemilihan teknik
sterilisasi didasarkan pada sifat alat dan bahan yang
akan disterilisasi. ketiga teknik tersebut adalah
Sterilisasi mekanik/Filtrasi dikerjakan dalam suhu
ruangan dan menggunakan suatu saringan yang berpori
sangat kecil ( 0.22 mikron atau 0.45 mikron ) sehingga
mikroba tertahan pada saringan tersebut. Sterilisasi ini
ditujukan untuk bahan yang peka panas, misalnya
larutan enzim dan antibiotik.Sterilisasi Fisik dapat
digunakan dengan cara pemanasan atau penyinaran.
Terdapat empat macam sterilisasi dengan
pemanasan.Pemijaran Api membakar alat pada api
secara langsung, contoh alat jarum inokulum, pinset,
batang L,dll.Panas kering yaitu sterilisasi dengan
menggunakan udara panas. Karakteristik sterilisasi
kering adalah menggunakan oven suhu tinggi (160-
180°C) dengan waktu yang lama (1,5-3,0 jam).
Sterilisasi panas kering cocok untuk alat yang terbuat
dari kaca misalnya erlenmeyer, tabung reaksi dll.
Sebelum dimasukkan ke dalam oven alat/bahan
teresbut dibungkus, disumbat atau dimasukkan dalam
wadah tertutup untuk mencegah kontaminasi ketika
dikeluarkan dari oven.Uap panas Konsep ini hampir
sama dengan mengukus. Bahan yang mengandung air
lebih tepat menggunakan metode ini supaya tidak
terjadi dehidrasi.Uap panas bertekanan (Autoclaving)
Cara kerja alat ini adalah menggunakan uap panas
dengan suhu 121°C selama 12-15 menit pada tekanan 1
atm. Sterilisasi uap tergantung pada alat/bahan harus
dapat ditembus uap panas secara merata tanpa
mengalami kerusakan. Kondisi steril harus bebas udara
(vacum).Sterilisasi kimiawi digunakan pada alat/bahan
yang tidak tahan panas atau untuk kondisi aseptis
(Sterilisasi meja kerja dan tangan). Bahan kimia yang
dapat digunakan adalah Alkohol, asam parasetat,
formaldehid dll [3].
2. Metode praktikum
Waktu dan tempat praktikum ini dilaksanakan pada
hari Senin 12 Maret 2018, pukul 09.00-11.50
bertempat di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas
Matematika dan Ilmu pengetahuan Alam Universitas
Lambung Mangkurat Banjarbaru.
Alat dan bahan yang digunakan saat praktikum,alat
yang digunakan saat praktikum adalah oven, autoklaf,
tabung reaksi, cawan petri, pipet volumetirik, lampu
spiritus. Sedangkan bahan yang digunakan adalah
kapas, kertas hvs, membran filter.
Cara kerja.
1. Sterilisasi alat.
a. Sterilisasi cawan petri.
Siapkan kertas dan cawan petri,
letakan cawan petri diatas kertas
dengan posisi cawan berada
ditengah, lipat kertas hingga kedua
ujung kertas bertemu, rapatkan
semua sisi kertas agar udara tidak
masuk lipat bagian atas kertas
dengan cara bolak-balik sebanyak
tiga kali sebagai tempat penulisan
label, sisi kiri dan kanan dilipat
berbentuk segitiga lalu dilipat kearah
bawah agar bagian atas terkunci.
b. Sterilisasi pipet volumetrik.
Siapkan pipet volumetrik dan kertas,
potong kertas disesuaikan untuk
ukuran pipet, gulung kertas dari atas
ke bawah pada pipet sisakan sedikit
ujung kertas untuk mengunci pipet
agar udara tidak masuk.
c. Sterilisasi tabung reaksi.
Siapkan tabung reaksi dan kapas,lipat
atau gulung kapas diseusaikan
dengan ukuran mulut
tabung,masukkan kapas setengah dari
mulut tabung pastikan tabung
tertutup rapat dengan kapas, setelah
itu tabung dibungkus kertas dengan
posisi berdiri dan ikat bagian atas
dengan menggunakan pengikat.
2. Prinsip kerja Autoklaf.
2

Cara penggunaan :
a. Sebelum melakukan sterilisasi
periksa dahulu air dalam
autoklaf. Apabila air kurang,
dapat ditambah air sampai batas
yang telah ditentukan. Gunakan
air bersih.
b. Masukkan peralatan dan bahan.
Pastikan semua bagian alat yang
akan disterilisasi terkrna air.
berubah volumenya seperti pipet
ukur dan labu ukur sebaiknya suhu
tidak melebihi 100°C.
d. Bila waktu yang diatur telah selesai,
pengatur waktu secara otomatis akan
kembali ke nol.
e. Setelah selesai biarkan terlebih
dahulu peralatan laboratorium dingin
didalam oven, setelah itu keluarkan
peralatan laboratorium dengan hati-
hati.

c. Tutup Autoclave dengan rapat f. Lepaskan kabel oven dari sumber

dan kencang agar uap tidak listrik.
keluar. Klep pengaman
Autoclave jangan dikencangkan 3. Hasil dan pembahasan.
terlebih dahulu.
d. Nyalakan Autoclave dan atur 1. sterilisasi menggunakan auroklaf Uap Panas
timer minimal 12-15 menit Basah
dengan suhu 121°C.
2. sterilisasi Menbggunakan Oven Uap
e. Tunggu air mendidih untuk Panas Basah
menciptakan uap yang
memenuhi kompartemen
Autoclave dan terdesak keluar
dari klep pengaman sampai
selesai. Waktu 12-15menit
dihitung mulai dari tekanan
1atm.

f. Jika klep berbunyi tanda sudah

selesai, tunggu tekanan dalam
kompartemen turun sehingga
tekanannya sama dengan udara
dilingkungan (angka 0) Gambar 1.1 Autoklaf Untuk mensterilisasi suatu
benda menggunakan uap bersuhi dan
g. Angkat isi Autoclave dengan bertekanan tinggi.
hati-hati.

3. Prinsip kerja Oven.

Cara penggunaan :

a. Hubungkan oven dengan sumber

listrik.

b. Masukkan peralatan laboratorium

yang ingin disterilisasi kemudian atur
dengan rapi dan tutup pintu oven
dengan rapat. Gambar 1.2 OvenUntuk
memanaskan dan
mengeringkan alat-alat,
c. Tekan tombol “ON” pada oven.
media dan objek lainnya
Lampu pada drying oven akan
berkedip. Atur suhu dan waktu sesuai
kebutuhan. Jika peralatan terbuat dari
plastic, dan bahan yang mudah

3
 4. Kesimpulan.
Hasil pengamatan pada praktikum Teknik
sterilisasi, dapat disimpulkan sebagai berikut :

1. Cara sterilisasi yang digunakan

Gambar 1.3 Tabung reaksi. Untuk uji-uji biokimiawi dan
menumbuhkan mikroba
disesuaikan dengan sifat bahan yang akan
disterilkan (ketahanan terhadap panas)
bentuk yang disterilkan (padat,cair dan
gas). Sterilisasi perlu dilakukan untuk
mematikan mikroorganisme yang tidak
diinginkan agar tidak ikut tumbuh.

2. Penggunaan alat/bahan di Laboratorium

mikrobiologi harus sesuai dengan prinsip
kerja alat dan prosedur kerja praktikum.

Daftar Acuan
[1] Hadioetomo. Ratna Siri. Mikrobiologi Dasar Dalam
Praktek. P.T. Gramedia Pustaka Utama 2,
Jakarta, 1993, Hal. 26-30.

Gambar 1.4 Cawan petri Untuk membiakkan (kultivasi [2] Suriawira. Pengantar Mikrobiologi Umum .
mikroorganisme). Angkasa, Bandung, 2005 , Hal. 104 -106.

[3] Ferdiaz, S. Mikrobiologi Pangan, Gramedia Pustaka

Utama, Jakarta, 1992, Hal. 44-51.

Gambar 1.5 Pipet volumetrik.

Gambar 1.6 Lampu spiritus.