METODOLOGIA:

1.-PREPARACION DE LAS DILUCIONES:

Pesar 10 gramos del alimento (sólido) o pipetear 10 mL (líquido), asépticamente, y realizar

diluciones decimales seriadas del mismo:

 Si el alimento es sólido, se introduce en una bolsa estéril, se añaden asépticamente 90 mL

de agua de peptona y se homogenizar en el “homogeneizador de paletas”.

 Si el alimento es líquido, se añade asépticamente al frasco que contiene los 90 mL de agua

de peptona y se mezcla homogéneamente.

Esto constituye la dilución madre o -1.

 Tomar una pipeta estéril, pipetear asépticamente 1 mL de la dilución -1 y añadirlo a un tubo

de 9 mL de agua de peptona. Esto constituye la dilución -2.

 Tomar una pipeta estéril, pipetear asépticamente 1 mL de la dilución -2 y añadirlo a un tubo

de 9 mL de agua de peptona. Esto constituye la dilución -3.

 Preparar 2 placas de Petri vacías por

cada dilución en este caso tomaremos
las diluciones - 3 y – 4.
2.- SIEMBRA POR INCORPORACION:

El objetivo es determinar el número de microorganismos aerobios (necesitan oxígeno) mesófilos

(su temperatura óptima de crecimiento está en torno a 30-37ºC) viables presentes en el alimento.
Esta es una indicación de la carga microbiana total del alimento y, por tanto, de su calidad
microbiológica.

Se realizará por siembra en placa.

 Pipetear 1 mL de la dilución -3, (empleando una pipeta por dilución) y depositar cada mL
en el fondo de las placas de Petri.

 Añadir 25 mL de agar TSA (fundido previamente y atemperado a 45ºC)

 Mezclar inmediatamente las diluciones con el agar haciendo un movimiento de rotación

de las placas, cinco veces en el sentido de las agujas del reloj y cinco veces en sentido
inverso, seguido de un movimiento de vaivén realizado cinco veces de izquierda a derecha
y cinco veces de arriba hacia abajo.

 Dejar solidificar el agar.

 Incubar las placas en la estufa en posición invertida a 37ºC durante 24-48 h.

 Contar las colonias de las placas que tienen entre 30 y 300 colonias

 Expresar el resultado en UFC (Unidades Formadoras de Colonias) / mL o g de alimento,

haciendo la media de los recuentos de las dos placas correspondientes a la misma dilución
y multiplicando por el factor dilución.

 Por ejemplo, si se cuentan 56 y 60 UFCs en las placas correspondientes a la dilución -2, el

resultado se expresará como ((56 + 60)/2) x 102 = 5,8 x 10 UFC/g.

3.- SIEMBRA POR SUPERFICIE:

 Tomar alícuota de 0.1 ml de la dilución -3 y depositar en la placa Petri que ya contiene agar.
 Homogenizar y extender sobre la superficie del medio tan pronto como sea posible
utilizando la espátula de drigalski.
 Seguido flamear y otra vez homogenizar, dejar secar las placas durante 15 min e incubar a
35 °C por 24-48 h.

REFERENCIAS:

Microorganismos de los Alimentos 1. Su significado y Método de Enumeración 2da Ed. ICSMF -

2000.

WILLEY J. SHERWOOD L, WOOLVERTON CH. Microbiología de Prescott, Harley y Klein. Séptima

edición. Editorial McGraw Hill, Madrid España. 2009.