PRÁCTICA Nº3

DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMETRICA DE HIERRO TOTAL EN VINOS

Fundamento

El hierro (II) forma un complejo de color rojo con 1,10-fenantrolina según la reacción:

Para asegurarnos de que todo el hierro presente en la muestra se encuentra en forma de Fe2+ añadimos, antes de la formación del
complejo, un agente reductor como es el clorhidrato de hidroxilamina, el cual reduce el Fe 3+ a Fe2+ según la reacción:

4 Fe 3+ + 2 NH2OH 4 Fe 2+ + N2 O + 4 H3O + + H 2 O

La formación del complejo hierro (II) con fenantrolina se da en un intervalo de pH comprendido entre 2 y 9, aunque éste es
suficientemente amplio, para asegurar la formación cuantitativa del complejo se adiciona al medio acetato sódico que neutraliza el
ácido formado durante la reducción del hierro (III) y ajusta el pH a un valor al que se puede efectuar la formación del complejo.
Este método puede aplicarse a vinos blancos o poco coloreados y permite determinar el contenido total de hierro (Fe 2+ + Fe3+) en el
vino.

Disoluciones necesarias
- Disolución patrón de hierro (II)
Preparar una diolución de hierro pesando 1.404 g de sulfato ferroso amónico hexahidratado. Transferir cuantitativamente la
muestra pesada a un matraz aforado de un litro y añadir suficiente agua para disolver la sal. Añadir 2.5 ml de H 2SO4 concentrado,
enrasar con agua desionizada y homogeneizar. Guardar la disolución resultante en una botella de polietileno preparada para tal fin.

- Disolución 2.10-3M de 1,10-Fenantrolina

Disolver 100 mg de monohidrato de 1,10-fenantrolina en 100 ml de agua desionizada.

- Disolución de clorhidrato de hidroxilamina al 10%

Disolver 10 g de clorohidrato de hidroxilamina en 100 ml de agua desionizada.
- Disolución 0'1M de acetato sódico
Disolver 8.20 g de acetato de sodio en 1000 ml de agua desionizada.

Material e instrumentación necesarios

- Matraces aforados de 50 mL
- Pipetas de 1, 2, 5 y 10 mL
- Espectrofotómetro

Procedimiento Operatorio

A. Obtención de la función de calibrado

Construir una recta de calibrado, adicionando en matraces de 50 ml, 0, 0.5, 1.0, 2.0 y 4.0 mL de disolución patrón de sulfato ferroso
amónico hexahidratado, 2 mL de clorhidrato de hidroxilamina (pipeta de 2 ml), 10 ml de acetato sódico (pipeta de 10 mL), 5 mL de
1,10-Fenantrolina (pipeta de 5 ml) y enrasar con agua destilada. Esperar 10 minutos y medir la absorbancia a 510 nm de longitud
de onda.

B. Preparación de la muestra a analizar

Para el análisis de la muestra, pipetear 5 ml de vino a un matraz aforado de 50 ml y añadir las mismas cantidades de los reactivos
anteriormente citados. Esperar al menos 10 minutos para que se desarrolle el color completamente y por último, medir la
absorbancia en el espectrofotómetro a 510 nm de longitud de onda.

C. Método de adición de patrón

Se prepara una serie de cuatro patrones en matraces aforados de 50 ml añadiendo a todos ellos en el orden indicado 2.5 ml de
muestra de vino y a continuación 0, 1.0, 2.0 y 3.0 ml respectivamente de la disolución patrón de Fe (II) de 20 ppm, 2 ml de
clorohidrato de hidroxilamina al 10 %, 10 ml de acetato sódico 0.1 M y 5 ml de 1, 10 fenantrolina, enrasando finalmente con a gua
destilada. Se mide la absorbancia a 510 nm de las disoluciones preparadas frente al blanco correspondiente, transcurridos diez
minutos de su preparación.

Resultados
1. Obtención de la Recta de calibrado

Matraz nº mL de Fe(II) g/mL de Fe(II) A (510 nm)

2. Medida de la Muestra

Réplicas A (510 nm)

3. Método de adición de patrón

Matraz nº mL de muestra mL de Fe (II) g/mL de Fe (II) A (510 nm)

(añadidos)

1 2.5 0

2 2.5 1.0

3 2.5 2.0

4 2.5 3.0
PRÁCTICA Nº2

DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMETRICA DE HIERRO TOTAL EN VINOS

Fundamento

La espectroscopia de absorción molecular es uno de los métodos mas usados en el análisis cuantitativo. Una gran variedad de
especies inorgánicas y orgánicas absorben radiación en las longitudes de onda del ultravioleta y visible y por tanto, es posible su
cuantificación mediante medida de la radiación absorbida, utilizando un espectrofotómetro. La absorción se cuantificar por unidades
arbitrarias llamadas "unidades de absorbancia", las cuales están relacionadas linealmente con la concentración de analito
existente.

En esta práctica, se aplica esta técnica para determinar el contenido total de hierro (Fe(II) y Fe(III)) en vinos blancos y poco
coloreados, mediante medida de la absorción del complejo rojo formado entre el ion Fe(II) y la 1,10-Fenantrolina.

Disoluciones necesarias
- Disolución 2.10-4M de sulfato ferroso amónico hexahidratado
- Disolución 2.10-3M de 1,10-Fenantrolina
- Disolución de clorhidrato de hidroxilamina al 10%
- Disolución 0'1M de acetato sódico

Material e instrumentación necesarios

- Matraces aforados de 50 mL
- Pipetas de 2, 5 y 10 mL
Procedimiento Operatorio
Construir una recta de calibrado, adicionando en matraces de 50 ml, 2,4,6,8 y 10 mL de disolución patrón de sulfato ferroso
amónico hexahidratado (pipeta de 10 ml), 2 mL de clorhidrato de hidroxilamina (pipeta de 2 ml), 10 ml de acetato sódico (pipeta de
10 mL), 5 mL de 1,10-Fenantrolina (pipeta de 5 ml) y enrasar con agua destilada. Esperar 10 minutos y medir la absorbancia a 510
nm de longitud de onda.

Para el análisis de la muestra, pipetear 10 ml de vino a un matraz aforado de 50 ml y añadir las mismas cantidades de los reactivos
anteriormente citados. Esperar al menos 10 minutos para que se desarrolle el color completamente y por último, medir la
absorbancia en el espectrofotómetro a 510 nm de longitud de onda.

Resultados
4. Obtención de la Recta de calibrado

Matraz nº mL de Fe(II) ppm de A (510 nm)

Fe(II) Muestra nº A (510 nm)

1 2 1

2 4 2

3 6 3

4 8

5 10

5. Medida de las Muestras