PROSIDING

SEMINAR MAHASISWA PROGRAM STUDI

ANALISIS KIMIA DARI JURNAL – JURNAL
KIMIA INTERNASIONAL
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
2018

PROGRAM STUDI ANALISIS KIMIA

PROGRAM DIPLOMA
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2018
 KATA PENGANTAR

Salah satu tujuan penting setiap mahasiswa adalah memahami mata

kuliah yang diikutinya. Setiap mata kuliah mengajarkan materi yang
berbeda – beda. Sebagai bentuk pemahaman mahasiswa, biasanya
mahasiswa diberikan tugas tertentu, dengan tugas ini, dapat dilihat seberapa
jauh pemahaman mahasiswa terhadap materi yang diberikan. Pada
kesempatan ini, mahasiswa diberikan penugasan untuk menggali dan
memahami jurnal internasional. Kemampuan verbal juga dilihat dengan
pengadaan seminar dalam jangka waktu beberapa pertemuan ini. Semoga
dengan diadakannya penugasan ini diharapkan seluruh mahasiswa
memahami mengenai dasar – dasar kepustakaan, menggali informasi dan
memahami jenis – jenis pustaka khususnya dalam bidang kimia sehingga
ilmu yang didapatkan bermanfaat dan dapat diaplikasikan dalam pertemuan
– pertemuan berikutnya.
Penyusun mengucapkan terima kasih kepada Ibu Armi Wulanawati,
M.Si, Prof. Adi Santoso, Ika Resmeliana M.Si, yang telah mengajarkan
kepustakaan, jenis pustaka dan karya tulis ilmiah selaku dosen kepustakaan
kimia. penyusun juga mengucapkan terima kasih kepada Resty Nur
Anggraeni S.Si dan Alya Amalia A.Md yang telah membimbing kami
selama proses kuliah dan praktikum.
Penyusun berharap prosiding yang disusun ini bermanfaat bagi
pembaca dan dapat menambah wawasan ilmu pengetahuan.

Bogor, 1 May 2018

Tim Penyususn
 AKTIVITAS STITOTOKSIK DAN DUA SENYAWA YANG
DIISOLASI DARI FRAKSINASI SIRIH MERAH
(PIPER CROCATIUM RUIZ & PAV)

Muhammad Faisal, Muhammad Khilmi, Nafi’Aturrifdah, Nisa

Fauziah, Sri Rahayu

Program Studi Analisis Kimia, Program Diploma Institut Pertanian Bogor,

Bogor

ABSTRAK

Sirih Merah Indonesia adalah salah satu tanaman obat tradisional yang
memiliki peluang besar untuk menjadi sumber pengobatan berbagai
penyakit. penentuan dasar obat tradisional dapat dilakukan dalam upaya
untuk mengembangkan ketersediaan tanaman menjadi produk farmasi yang
bermanfaat dan berharga. Metode ekstraksi biasanya digunakan untuk
melarutkan senyawa pada tanaman. Pemisahan dilakukan dengan
kromatografi kolom, dan kromatografi lapis tipis kemudian diidentifikasi
dengan spektroskopi. Uji toksisitas udang air asin dapat digunakan sebagai
metode untuk mengetahui aktivitas sitotoksik Piper crocatum Ruiz dan Pav
menunjukkan nilai LC50 2,04; 1,34 dan 2,08 μg / mL dalam fraksi n-
hexane, etil asetat dan butanol, masing-masing. Dua senyawa terisolasi,
diidentifikasi sebagai β-sitosterol dan 2-(5'.6'-dimetoksi-3'.4'-
metilenadioksifenil)-6-(3".4".5"-trimetoksifenil)-3,7-dioksa-bisiklo [3 , 3,0]
oktan telah diisolasi dari tanaman ini. Hasil ini mengungkapkan bahwa
tanaman ini berpotensi sebagai agen antitumoral dan juga memiliki potensi
untuk menjadi kandidat untuk penyelidikan lebih lanjut senyawa sitotoksik.
Kata kunci: Sirih merah, Piper crocatum, uji letalitas udang air asin,
Sitotoksik

ABSTRACT

Indonesian Red betel is one of the traditional medicinal plants that have a
great opportunity to be a source of treatment of various diseases. the basic
determination of traditional medicine can be done in an effort to develop the
availability of plants into useful and valuable pharmaceutical products. The
method of extraction is commonly used to dissolve compounds in plants.
The separations were carried out by column chromatography, and thin layer
chromatography was then identified by spectroscopy. Toxicity test of brine
shrimp can be used as a method to know cytotoxic activity Piper crocatum
Ruiz and Pav showed LC50 values of 2.04; 1.34 and 2.08 μg/mL in n-
hexane, ethyl acetate and butanol fractions, respectively.. Two isolated
compounds, identified as β-sitosterol and 2-(5’,6’-dimethoxy-
3’,4’methylenedioxyphenyl)-6-(3”,4”,5”-trimethoxyphenyl)-3,7-dioxabicycl
o[3,3,0]octane have been isolated from this plant. These results reveal that
this plant is potential as antitumoral agent and also has a potential to be a
candidate for the further investigation of cytotoxic compounds.
Keywords:Sirih merah, Piper crocatum, brine shrimp lethality test,
Cytotoxic

PENDAHULUAN

Indonesia merupakan negara tropis dengan potensi tanaman yang

secara turun temurun digunakan sebagai obat tradisional. Jamu yang
merupakan obat tradisional Indonesia, telah menjadi budaya masyarakat
Indonesia sejak berabad silam sebagai bagian dari upaya menjaga kesehatan,
menambah kebugaran, dan merawat kecantikan. Industri, usaha dan sub
sektor jamu dan obat tradisional serta kosmetik di Indonesia semakin
berkembang sejak tahun 2008 melalui kegiatan ”Jamu Brand Indonesia”
yang dicanangkan oleh Presiden RI 2009-2014 Susilo Bambang Yudoyono
pada Gelar Kebangkitan Jamu Indonesia (DJPEN 2014)
Nilai ekspor obat herbal Indonesia tahun 2013 mencapai US$ 23.44
juta, sedangkan nilai ekspor pada periode Januari-Juni 2014 sebesar US$
29.13 juta, mengalami peningkatan 600% dari nilai ekspor pada periode
Januari-Juni 2013. Pertumbuhan ekspor obat herbal Indonesia selama
periode 2009-2013 mengalami kenaikan sebesar 6.49% per tahun (DJPEN
2014). Peluang obat herbal yang besar ini menjadi alasan untuk
mempertahankan dan terus menggali kekayaan intelektual obat herbal di
Indonesia.
Pemanfaatan tumbuhan sebagai bahan obat telah menjadi warisan.
Bahan-bahan obat mentah ditemukan dalam jumlah berlimpah di Indonesia
tetapi sayangnya, hanya sejumlah kecil tanaman ini yang secara ilmiah telah
dipelajari secara ilmiah. Diperkirakan hanya 5-15% dari sekitar setengah
juta spesies tanaman di dunia yang telah diselidiki dan disaring untuk
aktivitas kimia dan biologisnya. Hal ini jelas menunjukkan bahwa obat-
obatan tradisional menawarkan sumber terapeutik yang kaya dan sebagian
besar belum dijelajahi untuk sediaan farmasi (Heinrich 2007)
Sekitar, 80% populasi di dunia masih bergantung pada herbal dan
obat-obatan alami lainnya sebagai sumber untuk pengobatan berbagai
penyakit. Namun, sangat sedikit upaya yang telah dilakukan untuk
menetapkan dasar ilmiah obat tradisional dan untuk mengembangkan
ketersediaan tanaman menjadi produk farmasi yang berguna dan berharga
(Rahman et al 1999).
Tanaman ini secara tradisional digunakan sebagai obat herbal untuk
pengobatan penderita diabetes dan untuk pencegahan penyakit jantung
koroner di Indonesia. Orang-orang mengkonsumsi tanaman ini dengan
mem-maserasi sepotong cuti dalam segelas air panas dan mengkonsumsinya
dua kali sehari. Berdasarkan penelusuran, sejauh ini belum ada laporan
tentang isolasi senyawa murni dari tanaman ini.

METODE PENELITIAN

Percobaan ini mencakup beberapa tahapan. Tahapan percobaannya

adalah sebagai berikut:

1. Metode Ekstraksi dan Fraksinasi Berdasarkan Polaritas

Bubuk tanaman Piper crocatum Ruiz dan Pav yang kering,
sebanyak 0.841 kg diekstraksi pada suhu kamar dengan metanol untuk
mendapatkan ekstrak metanol mentah. Setelah pengeringan, dilakukan
fraksinasi terhadap ekstrak kasar ini yang didasarkan pada polaritas
pelarut dengan menggunakan pelarut non polar, semi polar dan polar.
Pelarut yang digunakan adalah n-heksana, etil asetat dan butanol.
Masing-masing fraksi ini terkonsentrasi di bawah tekanan yang
dikurangi dengan menggunakan rotary evaporator.
2. Uji Fitokimia
Tes Liebermann-Burchard digunakan sebagai panduan untuk
kehadiran terpenoid dan steroid. L.B. tes dianggap sebagai positif ketika
warna hijau, biru, merah, merah muda, atau ungu diproduksi. Terhadap
latar belakang putih dari ubin bercak, triterpenoid umumnya
menghasilkan warna merah, merah muda, atau ungu, yang lebih
persisten daripada warna biru sugestif steroid (Simes J.J.H et all 1959)
3. Pemurnian Menggunakan Metode Kromatografi Kolom Ganda
Fraksi memberikan pemisahan yang baik dengan kromatografi
lapis tipis (KLT) yang dimurnikan menggunakan metode kromatografi
kolom berganda dengan gel silika 60 sebagai fase diam dan n-heksana;
kombinasi n-heksana dan etil asetat; etil asetat; dan metanol sebagai
fase gerak, berdasarkan polaritasnya. Kromatografi ini menghasilkan
fraksi yang dimonitor oleh KLT untuk mengevaluasi profil pemisahan.
4. Pemurnian Fraksi n-Heksana
Pemurnian fraksi n-heksana dengan kromatografi kolom SiO2
menghasilkan 650 fraksi yang dipantau pada pelat KLT untuk
mengevaluasi profil pemisahan senyawa. Profil KLT ini memberikan
14 fraksi gabungan yang diberi label sebagai PC1 ke PC14., Ada dua
fraksi yang menunjukkan pemisahan senyawa yang baik dari fraksi ini.
Dua fraksi ini selanjutnya dimurnikan dengan rekristalisasi untuk
menghasilkan dua senyawa murni. Senyawa pertama adalah steroid dan
senyawa kedua adalah lignan. Senyawa-senyawa ini dicirikan dan
diidentifikasi berdasarkan pada sifat fisik dan analisis spektroskopi.
5. Evaluasi Aktivitas Sitotoksik
Sebuah bioassays umum yang tampaknya mampu mendeteksi senyawa
bioaktifitas yang terdapat dalam ekstrak kasar adalah brine shrimp
lethality test (BSLT). Teknik ini mudah dikuasai, biaya sedikit, dan
menggunakan sejumlah kecil bahan uji. Sampel yang akan diuji
 dilarutkan dalam DMSO (dimetilsulfoksida) (2 mg / 400 μl atau 2 mg /
1000 μl) dan diencerkan secara seri (10, 20, 30 dan 50 μl / 5 ml) dalam
air laut. Sekitar 10-20 larva udang ditambahkan ke setiap set tabung
berisi sampel. Kontrol yang mengandung 50 μl DMSO dalam air laut
dimasukkan dalam setiap percobaan. Dua puluh empat jam kemudian,
jumlah udang yang selamat dihitung, dicatat dan konsentrasi mematikan
50% (nilai LC50) dihitung dengan analisis probit.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Serangkaian percobaan telah dilakukan. Setelah proses ekstraksi

selesai didapatkan hasil ekstraksi metanol sebanyak 253.27 g atau sebanyak
30.1153% dari tanaman kering dengan cara maserasi. Setelah itu, hasil
ekstraksi ini kemudian difraksinasi berdasarkan kepolarannya menggunakan
pelarut n-heksana, etil asetat dan butanol. Senyawa yang larut dalam ketiga
pelarut tersebut dipekatkan menggunakan rotary evaporator dan didapatkan
getah hijau ekstraksi n-heksana dengan rendemen 9.56% (24.22 g), getah
hijau ekstraksi etil asetat 20.99% (53.17 g) dan getah coklat butanol 24.18%
(61.23 g). Semua ekstraksi masing – masing pelarut kemudian diuji
fitokimia dengan prinsip spot tes. Uji Liebermann-Burchard dilakukan
pada semua fraksi dan didapatkan fraksi heksana dan etil asetat
menunjukkan tes positif untuk terpenoid dan steroid, masing-masing,
sedangkan fraksi metanol dan butanol memberikan tes positif untuk fenolik,
flavonoid, senyawa terpenoid dan steroid. Pada ekstraksi n-heksana, etil
asetat, metanol dan butanol didapatkan senyawa terpenoid dan steroid. Hal
ini menjelaskan pada saat penambahan anhidrida asetat dan asam sulfat,
warna yang terbentuk warna merah, merah muda, atau ungu yang
menandakan adanya terpenoid dan biru menandakan adanya steroid. Hasil
ini dikatakan kurang akurat karena perspektif pengelihatan warna yang
berbeda dan juga kurang spesifik, sehingga dilakukan analisis lebih lanjut
menggunakan kromatografi kolom yang dipantau dengan kromatografi lapis
tipis sehingga terlihat pemisahan yang baik
Seluruh fraksi tersebut kemudian dilakukan pemisahan dengan
kromatografi kolom menghasilkan 650 fraksi yang kemudian dilihat pada
pelat KLT untuk mengevaluasi profil senyawa. Profil KLT ini memberikan
14 fraksi gabungan yang diberi label sebagai PC1 sampai PC14. Setelah
dievaluasi, terdapat dua fraksi yang menunjukkan pemisahan senyawa yang
baik dari 650 fraksi ini. Dua fraksi ini selanjutnya dimurnikan dengan
rekristalisasi untuk menghasilkan dua senyawa murni. Senyawa ini
kemudian ditelusuri lebih lanjut berdasarkan garis – garis spektro dan
interaksinya dengan medan magnet dengan instrument spektroskopi
resonansi magnetik nuklir. Senyawa pertama yang didapatkan adalah steroid
dan senyawa kedua adalah lignan. Senyawa-senyawa ini dicirikan dan
diidentifikasi berdasarkan pada sifat fisik dan analisis spektroskopi serta
membandingkannya dengan pendekatan literatur dan menunjukan terdapat
dua senyawa terisolasi murni yaitu β-sitosterol dan 2-(5'.6'-dimetoksi-3'.4'-
metilenadioksifenil)-6-(3".4".5"-trimetoksifenil)-3,7-dioksa-bisiklo [3 , 3,0]
oktan.

Gambar 1 Beta sitosterol

Gambar 2 2-(5'.6'-dimetoksi-3'.4'-metilenadioksifenil)-6-(3".4".5"-
trimetoksifenil)-3,7-dioksa-bisiklo [3 , 3,0] oktan

Investigasi aktivitas sitotoksik menggunakan uji letalitas udang air

garam untuk mendeteksi fraksi sitotoksik dari tanaman sirih merah
menunjukkan variasi aktivitas sitotoksik. Nilai konsentrasi penghambatan
dari tiga fraksi ekstraksi metanol sirih merah (sirih merah Indonesia),
menunjukkan nilai LC50 2.04, 1.34, 2.08 dan 27.40 μg / mL dalam n-
heksana, etil asetat, fraksi butanol, dan ekstrak metanol, secara berurutan ini
dapat dilihat pada tabel 1. Hasil ini menunjukkan aktivitas larvasida udang
air asin yang baik menurut literatur, yang mengklasifikasikan ekstrak kasar
dan zat murni menjadi beracun (nilai LC50 <1000 μg / ml) dan tidak beracun
(nilai LC50 > 1000 μg / ml). Nilai LC50 untuk ekstrak dan semua fraksi
terbukti menjadi tanaman larvisida yang paling aktif. Hasil ini
mengungkapkan bahwa tanaman ini memiliki potensi sebagai agen
antitumoral dan juga memiliki potensi untuk menjadi kandidat untuk
penyelidikan lebih lanjut senyawa sitotoksik.

Tabel 1 Hasil Uji Letalitas Udang Air Garam

Sampel LC50 ± SD (µg/mL)

Ekstrak Metanol 27.40 ±
2.6
Fraksi n-heksana 2.04 ±
1.1
Fraksi etil asetat 1.34 ±
3.2
Fraksi butanol 2.08 ±
0.2
Lapachol (kontrol positif) 12.30 ±
0.3

Dua senyawa yang sudah diidentifikasi sebelumnya merupakan

senyawa – senyawa yang larut dalam n-heksana (Emrizal et al 2014).
Setelah dilakukan uji letalitas terhadap larva udang, didapatkan LC50 pada n
– heksana sebesar 2.04 µg/mL. Hal ini menunjukkan dua senyawa tersebut
termasuk kedalam fraksi n-heksana yang artinya termasuk senyawa bioaktif
yang berperan dalam uji ini. Hasil – hasil tersebut dapat diteliti lebih lanjut
untuk ilmu farmasi sehingga bermanfaat bagi masyarakat, dan negara.

SESI TANYA JAWAB

Penanya : Muhammad Ayib Mutaqin(Kelompok 4)

Mengapa harus menggunakan telur udang ? Kenapa tidak udangnya

langsung ?

Penjawab : Muhammad Khilmi

Karena telur udang mudah didapatkan, harganya murah,dan mudah

dikendalikan.Udang yang telah mengalami tahap larva 2 (metanauplii) sulit
untuk ditemukan dan ditangkap. Oleh karena itu, yang diambil adalah
telurnya kemudia ditetaskan. Hasil uji letalitasnya juga tepat karena kita
tidak tahu apa kah udang itu berpenyakit atau tidak.

Penanya : RizkyRatna W(Kelompok 5)

Kenapa daun sirih merah dilarutkan dalam pelarut yang berdeba-beda? (

Penjawab: Sri Rahayu

Untuk memastikan seluruh fitokimia dalam daun terekstrak kedalam pelarut,

sirih merah ini dilarutkan dalam pelarut polar, semi polar, dan non polar.
Jika hanya satu saja pelarut yang digunakan, misalnya pelarut non polar,
senyawa yang tidak larut dalam pelarut non polar tersebut tidak ikut
terekstrak.

Penanya : Medina Prasasti(Kelompok 5)

Jelakan prinsip uji fitokimia ?

Penjawab : Nafi’aturrifdah

Prinsip uji fitokimia yaitu menggunakan uji spot test Liberman-Burchard

dengan asam sulfat pekat dan anhidrida asetat. Uji kualitatif ini dinyatakan
dengan perubahan warna, dan kemungkinan senyawa dapat diperkecil
sehingga dapat diketahui sifat umum fitokimia yang terkandung.

Penanya: NurulAmalia(Kelompok 3)

Bagaimana cara pengaplikasian sirih merah ?

Penjawab: Sri Rahayu

Orang Indonesia biasanya mengonsumsi sirih merah dengan cara

melarutkannya dalam air panas. Kemudian diminum secara langsung

Penanya : Tri Damayanti(Kelompok 4)

Jelaskan hubungan antara telur udang dan sirih merah?

Penjawab:Nafi’aturrifdah.

Telur udang digunakan sebagai uji sitotoksik pada daun sirih merah (Uji
larva udang), sedangkan daun sirih merahnya sendiri merupakan sampel
yang digunakan untuk pengobatan.

Penanya : Wahdi Muhammad Adha(Kelompok 5)

Kenapa pakai telur udang kenapa tidak telur lain ?

Penjawab: Muhammad Faisal

Karena larva udang telah digunakan pada percobaan sebelumnya oleh

McLaughin Hasil uji toksisitas dengan metode ini telah terbukti memiliki
korelasi dengan daya sitotoksis senyawa anti kanker. Selain itu, metode ini
juga mudah dikerjakan, murah, cepat dan cukup akurat. Larva udang
memiliki kulit yang tipis dan peka terhadap lingkungannya sehingga banyak
digunakan dalam uji toksisitas. Zat atau senyawa asing yang ada di
lingkungan akan terserap ke dalam tubuh secara difusi dan langsung
memengaruhi kehidupannya. Larva udang yang sensitif ini akan mati
apabila zat atau senyawa asing tersebut bersifat toksik. Percobaan larva udang
ini memang tidak sepenuhnya akurat, akan tetapi perlu dilaksanakan percobaan
selanjutnya dengan tikus ataupun monyet.

KESIMPULAN
Nilai konsentrasi penghambatan tiga fraksi ekstrak metanol kasar
sirih merah (sirih merah di Indonesia), menunjukkan nilai LC50 2,04; 1,34,
2,08 dan 27,40 μg / mL dalam n-heksana, etil asetat, fraksi butanol, dan
ekstrak metanol, masing-masing. Hasil ini menunjukkan aktivitas larvasida
udang air asin yang baik menurut literatur, nilai LC50 untuk ekstrak dan
semua fraksi terbukti menjadi tanaman larvisida yang paling aktif. Hasil ini
menunjukkan bahwa tanaman ini berpotensi sebagai agen antitumoral. Dua
senyawa telah diisolasi dari tanaman ini dan diidentifikasi berdasarkan data
literatur dan analisis spektroskopi, seperti β-sitosterol dan 2-(5'.6'-
dimetoksi-3'.4'-metilenadioksifenil)-6-(3 '.4'.5"-trimetoksifenil)-diababisiklo
[3,3,0] oktan.

DAFTAR PUSTAKA

Agoes G. 2007. Teknologi Bahan Alam. Bandung (ID) : ITB Press.

Braithwaite A dan Smith F.J. 1999. Chromatographic Methods Fifth
Edition. Dordrecht (Neth): Kluwer Academic Publishers
[DJPEN] Direktorat Jenderal Pengembangan Ekspor Nasional. 2014. Obat
Herbal Tradisional. Jakarta (ID): Warta Ekspor
Emrizal, Fernando A., Yuliandari R., Rullah K., Indrayani N.R., Susanty A.,
Yerti R., Ahmad F., Sirat H. M.,dan Arbain D. 2014. Cytotoxic
activities of fractions and two isolated compounds from sirih merah
(Indonesian red betel), piper crocatum Ruiz & Pav. Procedia Chem.
13 :79 - 84
Freshney RI. 1996. Culture of Animal Cells Second Edition. New York
(USA): Wiley
Group E. 2016. What are phytochemicals? discovering their health benefits
[Internet]. Diakses pada 2018 April 24. Tersedia pada
https://www.globalhealingcenter.com/natural-health/what-are-
phytochemicals/
Heinrich, M. 2008. Ethnopharmacy and Natural Products Research-
Multidisciplinary Opportunities for Research in the Metabolomic Age.
Phytochem Letts. 1: 1-5.
Hendrayana S. 2006. Kimia Pemisahan : Metode Kromatografi dan
Elektroforesis Modern. Bandung (ID): PT Remaja Rosdakarya
Mahfuzh. 2017. Pengertian ekstraksi dan contohnya [Internet]. Diakses pada
2018 April 24. Tersedia pada https://mystupidtheory.com/pengertian-
ekstraksi-dan-contohnya/
McLaughlin J.L, dan Rogers L. L. 1998. The use of biological assays to
evaluate botanicals. Drug information J. 32 :513 – 514
Rahman A. N. N. N. , Furuta T, Kojima S, Takane K, dan Mohd A. M.
1999. Antimalarial activity of extracts of Malaysian medicinal plants.
J Ethnopharm. 64 : 249 – 254
Redaksi. 2014. Sirih merah piper crocatum ruiz & pav [Internet]. Diakses
pada 2018 April 24. Tersedia pada
https://www.jamunusantara.com/sirih-merah-piper-crocatum-ruiz-pav/
Sarah Q.S , Anny F. C. , dan Misbahuddin M. 2017. Brine shrimp lethality
assay. Bangladesh J. Pharmacol.12: 186 – 189
Simes J. J. H , Tracey J. G , Webb L. J, dan Dunstan W.J. 1959. An
Australian Phytochemical Survey. Melbourne (AUS) : C.S.I.R.O.
Soegiharjo, C. J. 2013. Farmakognosi. Yogyakarta (ID): Citra Aji Parama.