KELOMPOK 4. Equine Arteritis Virus Elicits A Mucosal - En.id

Lihat diskusi, statistik, dan profil penulis untuk publikasi ini di: https://www.researchgate.
net/publication/319158348
Equine Arteritis Virus memunculkan mukosa Antibodi Respon

di Saluran Reproduksi dari Terus-menerus Terinfeksi Stal ....
Artikel di Klinis dan Vaksin Imunologi · Agustus 2017

DOI: 10,1128 / CVI.00215-17
CITATIONS Dibaca
0 26
11 penulis . termasuk:
Carossino Frank Masak
University of Kentucky University of Kentucky
18 PUBLIKASI 33 CITATIONS 95 PUBLIKASI 1.829 CITATIONS
MELIHAT PROFIL MELIHAT PROFIL
Igor Canisso Lakshman Chelvarajan
University of Illinois, Urbana-Champaign University of Kentucky
89 PUBLIKASI 191 CITATIONS 37 PUBLIKASI 637 CITATIONS
MELIHAT PROFIL MELIHAT PROFIL
Beberapa penulis publikasi ini juga bekerja pada proyek-proyek terkait:
EAV cELISA Lihat proyek
Toksikologi reproduksi Lihat proyek Mariano
Semua konten berikut halaman ini diunggah oleh Frank Masak pada 22 Januari 2018.
Pengguna telah meminta peningkatan file yang didownload.

IMUNOLOGI KLINIK
crossm
Equine Arteritis Virus memunculkan mukosa Antibodi

Respon di Saluran Reproduksi dari Stallions
Terus-menerus Terinfeksi
Mariano Carossino, Sebuah Bettina Wagner, b Alan T. Loynachan, c R. Frank Cook, Sebuah
Igor F. Canisso, d Lakshman Chelvarajan, Sebuah Casey L. Edwards, Sebuah Bora Nam, Sebuah
John F. Timoney, Sebuah Peter J. Timoney, Sebuah Udeni BR Balasuriya Sebuah
Maxwell H. Gluck Equine Research Center, Departemen Kedokteran Hewan, Universitas Kentucky, Lexington, Kentucky, Amerika Serikat Sebuah; Departemen
Kedokteran Kependudukan dan Ilmu Diagnostik, College of Kedokteran Hewan, Universitas Cornell, Ithaca, New York, Amerika Serikat b; University of
Kentucky Kedokteran Hewan Diagnostik Laboratorium, Departemen Kedokteran Hewan, Universitas Kentucky, Lexington, Kentucky, Amerika Serikat c; Departemen
Kedokteran Hewan Klinis Kedokteran dan Departemen Biosciences Perbandingan, College of Veterinary Medicine, University of Illinois
Urbana-Champaign, Urbana, Illinois, USA d
ABSTRAK virus kuda arteritis (EAV) memiliki kemampuan untuk membangun infeksi persisten pada saluran
reproduksi kuda jantan (carrier) dan terus menumpahkan dalam air mani nya. Kami baru-baru ini diterima 13 Juli 2017 Kembali untuk modi fi kasi 31
Juli 2017 diterima 12 Agustus 2017
menunjukkan bahwa EAV tetap dalam sel stroma dan subset limfosit pada kelenjar seks kuda aksesori di
hadapan fi signifikan tidak bisa lokal respons peradangan. Dalam penelitian ini, kami menunjukkan bahwa
Diterima naskah diposting online 16 Agustus
EAV memunculkan respon antibodi mukosa dalam saluran reproduksi selama infeksi persisten dengan 2017
homing sel plasma ke kelenjar seks aksesori. The isotipe fi c immunoglobulin EAV-spesifik dalam plasma Kutipan Carossino M, Wagner B, Loynachan AT, Masak RF,
Canisso IF, Chelvarajan L, Edwards
mani termasuk IgA, IgG1, IgG3 / 5, dan IgG4 / 7. Menariknya, mani plasma IgG1 dan IgG4 / 7 memiliki
CL, Nam B, Timoney JF, Timoney PJ, Balasuriya UBR.
aktivitas virus-netralisasi, sementara mani plasma IgA dan IgG3 / 5 tidak. Namun, virus-menetralkan IgG1 2017. virus arteritis Equine memunculkan respon antibodi
dan IgG4 / 7 dalam plasma mani tidak efektif dalam mencegah infektivitas virus. Selain itu, respon serologis mukosa di saluran reproduksi kuda jantan terus-menerus
terinfeksi. Clin Vaksin Immunol 24: e00215-17.
terutama dimediasi oleh virus-spesifik IgM dan IgG1, sementara virus-spesifik serum IgA, IgG3 / 5, IgG4 / 7,
dan IgG6 tanggapan isotype tidak terdeteksi. Ini adalah laporan pertama yang mencirikan isotipe https://doi.org/10.1128/CVI.00215-17 .
imunoglobulin dalam serum kuda dan plasma seminal dalam menanggapi EAV infeksi. Temuan-temuan yang Editor David W. Pascual, University of Florida
disajikan di sini menunjukkan bahwa sementara yang lebih luas keragaman imunoglobulin isotipe yang hak cipta © 2017 American Society for
ditimbulkan dalam plasma mani, EAV memiliki kemampuan untuk bertahan dalam saluran reproduksi, Microbiology. Seluruh hak cipta . Alamat
korespondensi untuk Udeni BR Balasuriya,
meskipun antibodi mukosa lokal dan respon inflamasi. Studi ini memberikan bukti lebih lanjut bahwa EAV
ubalasuriya@uky.edu.
mempekerjakan mekanisme penghindaran kekebalan kompleks selama ketekunan dalam saluran reproduksi
yang menjamin penyelidikan lebih lanjut.
KATA KUNCI virus arteritis kuda, arteritis virus kuda, EAV, EVA, imunoglobulin isotipe, respon humoral,
plasma seminal, imunitas mukosa, netralisasi, penghindaran kekebalan tubuh, infeksi persisten, saluran
reproduksi
E virus arteritis
terdampar RNAQuine
genom(EAV) adalah
( ssRNA; kecil,
genom diselimuti
adalah virus
12.704 bp dandengan positif-rasa,
mengandung single
setidaknya
10 frame baca terbuka [ORFs]) (1-4) dan milik keluarga Arteriviridae ( marga
Equartevirus), memesan Nidovirales, kelompok yang mencakup reproduksi babi dan pernapasan syndrome
virus (PRRSV), simian demam berdarah virus (SHFV), laktat virus dehidrogenase-mengangkat tikus (LDV),
dan baru-baru ini diakui goyah possum penyakit virus (WPDV) dari Brushtail Australia bebas mulai possum
( Trichosurus Vulpecula) di Selandia Baru (1, 4-8). EAV adalah agen penyebab virus arteritis kuda (EVA),
sebuah pernafasan dan penyakit reproduksi equids (1, 5, 9-11).
Sementara sebagian besar infeksi alami yang tanpa gejala, wabah sesekali EVA terjadi dan secara klinis
ditandai dengan tanda-tanda klinis influenza seperti pada kuda dewasa,
Oktober 2017 Volume 24 Issue 10 e00215-17 Klinis dan Vaksin Imunologi cvi.asm.org 1
Carossino et al. Klinis dan Vaksin Imunologi
aborsi di kuda hamil, dan pneumonia bronchointerstitial fatal atau sindrom pneumoenteric di anak kuda (12). Yang
paling penting, EAV dapat membangun infeksi persisten pada saluran reproduksi 10 sampai 70% dari kuda yang
terinfeksi (carrier) (13-18). kuda jantan terus-menerus terinfeksi terus menumpahkan EAV semata-mata dalam air
mani mereka tanpa menunjukkan tanda-tanda klinis atau hilangnya kesuburan (1, 5, 11-14, 16, 19, 20). The carrier
adalah testosteron bergantung dan dapat berlangsung dari beberapa minggu atau bulan (pelepasan virus untuk
postinfection 1 tahun; operator jangka pendek) untuk beberapa tahun atau bahkan seumur hidup (pelepasan virus
untuk 1 tahun postinfection; operator jangka panjang), meskipun perkembangan respon penetral antibodi yang kuat
dalam serum (1, 5, 11-15, 20, 21). Baru-baru ini, telah ditunjukkan bahwa genetika tuan rumah yang terlibat dalam
hasil infeksi (yaitu, pendek atau carrier jangka panjang) di kuda yang (22, 23). kuda pembawa merupakan reservoir
alami untuk EAV dan, dengan demikian, memainkan peran kunci epidemiologi, karena mereka menjamin
pemeliharaan dan pelestarian virus pada populasi kuda antara musim berkembang biak (1, 11, 12). Selain itu,
mereka merupakan sumber variabilitas genetik dan antigenik virus yang dapat menyebabkan munculnya varian
baru dari virus (19, 24-27; B. Nam, Z. Mekuria, M. Carossino, G. Li, Y. Zheng , J. Zhang, RF Cook, JR Campos, KM
Shuck, E. Bailey, PJ Timoney, dan UBR Balasuriya, data tidak dipublikasikan).
The EAV partikel terdiri dari nukleokapsid inti dan tujuh protein amplop. GP5 ( 20-44 kDa) dan M ( 17
kDa) adalah protein amplop besar dari virus, dan mereka membentuk heterodimer fi de-linked disul
dalam partikel. Viral glikoprotein GP5 berisi empat situs netralisasi utama (yaitu, situs A, B, C, dan D)
yang telah secara ekstensif ditandai baik secara genetik dan antigenik dengan menggunakan antibodi
monoklonal (MAbs) (28-31). GP5 dan M heterodimerisasi protein sangat penting untuk posttranslational
modi fi kasi (glikosilasi) dan pematangan konformasi dari faktor-faktor penentu netralisasi di GP5 dan
untuk induksi respon antibodi (28-
34). Meskipun variasi dalam urutan asam amino dari glikoprotein GP5 diamati, hanya ada satu serotipe
diketahui dari EAV, dan sebagian fi strain virus lapangan secara luas dinetralkan dengan tinggi titer
poliklonal antisera kuda diajukan terhadap prototipe virulen Bucyrus regangan (VBS) dari EAV (32, 35).
Penelitian sebelumnya telah menunjukkan bahwa setelah infeksi EAV menginduksi baik spesifik complement- fi xing
(CF) dan virus-penetral (VN) antibodi (36, 37), yang menyediakan strain virus yang tahan lama kekebalan dan perlindungan
dari infeksi ulang dengan sebagian besar (jika tidak semua) . Kedua antibodi CF dan VN mengembangkan antara 7 dan 14
hari postinfection (dpi), dan tingkat mereka puncak pada baik 2 sampai 3 minggu atau 2 sampai 4 bulan postinfection,
masing-masing. antibodi fi xing Complement- menurun dengan cepat, sementara antibodi VN bertahan selama 3 tahun
atau lebih (15, 17, 32, 34, 36). Kedua protein struktural (GP5, M, dan N) dan protein nonstruktural (nsp2, nsp4, nsp5, dan
nsp12) menginduksi imunitas humoral (38, 39).
Munculnya antibodi serum menetralkan bertepatan dengan netralisasi sukses dan pembersihan EAV dari aliran darah dan seluruh
jaringan tubuh sekitar 28 dpi (35). Namun, EAV tetap dalam saluran reproduksi kuda jantan pembawa terlepas dari titer tinggi antibodi
hadir dalam serum hewan-hewan ini (15, 40). Patogenesis infeksi EAV persisten, termasuk faktor-faktor host yang terkait dengan
pembentukan dan pemeliharaan infeksi persisten, tidak sepenuhnya dipahami dan berada di bawah penyelidikan ekstensif di laboratorium
UBR Balasuriya ini. Dengan demikian, untuk lebih memahami interaksi EAV-tuan di saluran reproduksi dan mekanisme virus
penghindaran kekebalan tubuh di tempat infeksi persisten, karakterisasi host respon antibodi mukosa untuk EAV selama ketekunan
adalah sangat penting. Kami berhipotesis bahwa EAV lolos netralisasi antibodi-mediated dalam saluran reproduksi dan, akibatnya, terus
ditumpahkan di dalam air mani kuda jantan yang terinfeksi. Dalam studi ini, kami ditandai mukosa respon isotype antibodi untuk EAV
selama infeksi persisten dan identifikasi ed kehadiran EAV-spesifik menetralkan imunoglobulin dalam plasma mani. Temuan-temuan dari
studi ini lebih lanjut menunjukkan bahwa EAV mempekerjakan mekanisme kompleks penghindaran kekebalan tubuh selama infeksi
persisten pada saluran reproduksi, dengan melarikan diri virus sukses dari humoral sistemik dan respon antibodi mukosa, serta lokal
dalam respon inflamasi. akibatnya, terus ditumpahkan di dalam air mani kuda jantan yang terinfeksi. Dalam studi ini, kami ditandai
mukosa respon isotype antibodi untuk EAV selama infeksi persisten dan identifikasi ed kehadiran EAV-spesifik menetralkan imunoglobulin
dalam plasma mani. Temuan-temuan dari studi ini lebih lanjut menunjukkan bahwa EAV mempekerjakan mekanisme kompleks
penghindaran kekebalan tubuh selama infeksi persisten pada saluran reproduksi, dengan melarikan diri virus sukses dari humoral
sistemik dan respon antibodi mukosa, serta lokal dalam respon inflamasi. akibatnya, terus ditumpahkan di dalam air mani kuda jantan
yang terinfeksi. Dalam studi ini, kami ditandai mukosa respon isotype antibodi untuk EAV selama infeksi persisten dan identifikasi ed
kehadiran EAV-spesifik menetralkan imunoglobulin dalam plasma mani. Temuan-temuan dari studi ini lebih lanjut menunjukkan bahwa EAV mempekerjakan mekanisme kompleks penghindaran kekebalan tubuh selama infeksi persis
Oktober 2017 Volume 24 Issue 10 e00215-17 cvi.asm.org 2

Klinis dan Vaksin Imunologi
tidak ada perbedaan dalam menetralisir titer antibodi antara jangka pendek ( n 6) dan jangka panjang ( n 2) kuda terus-menerus terinfeksi yang terdeteksi (B). EAV-Speci fi c Responses mukosa Antibodi
Gambar 1 Menetralkan titer antibodi dan viremia setelah infeksi EAV eksperimental kuda jantan ( n 8). Sebuah korelasi negatif antara kenaikan menetralkan titer antibodi dan titer viremia diamati (A), tetapi
HASIL
hasil klinis dan pembentukan infeksi persisten di kuda eksperimental terinfeksi EAV. Hasil klinis
setelah tantangan intranasal dengan strain EAV KY84 dalam kelompok kuda jantan dievaluasi dalam
penelitian ini telah dijelaskan dalam penelitian lain (40, 41). Secara singkat, semua kuda eksperimental
terinfeksi ( n 8) dikembangkan
sedang sampai tanda-tanda klinis yang parah dari EVA setelah infeksi eksperimental, yang berlangsung rata-rata 20
hari (kisaran interkuartil [IQR] 11.25 hari), dan tidak ada tanda-tanda penyakit
atau disfungsi reproduksi yang diamati setelah pemulihan klinis. pelepasan virus dalam air mani dimulai pada antara
3 dan 5 dpi, dan 5/8 kuda eksperimental terinfeksi (kuda jantan L137, L138, L139, L141, dan L142) menumpahkan
EAV dalam air mani selama rata-rata 165 hari (IQR
263,5 hari) dan diklasifikasikan sebagai kuda pembawa jangka pendek (perkiraan
durasi shedding, 1 tahun), sedangkan 2/8 kuda (kuda L136 dan L140) terus
untuk menumpahkan EAV dalam air mani mereka untuk 726 dpi (yaitu, shedding durasi jangka panjang pembawa kuda jantan,
1 tahun). Untuk alasan perilaku, air mani koleksi dari salah satu kuda (kuda L143) tidak
layak, dan status operator tidak dapat ditentukan sampai akhir penelitian. Tidak adanya infeksi virus,
antigen virus, dan RNA dari jaringan yang berasal dari saluran reproduksi setelah euthanasia dan
minimal peradangan diamati pada kelenjar seks aksesori adalah indikasi bahwa hewan ini berhenti
shedding sebelumnya dalam program studi dan dianggap menjadi pembawa kuda jangka pendek (40).
Karakterisasi serum menetralkan respon antibodi selama infeksi persisten EAV di kuda jantan. Menetralisir
antibodi dalam serum awalnya terdeteksi oleh 8 dpi dalam semua kuda eksperimental terinfeksi ( n 8), dengan
titer antibodi rata-rata 1:16 (kisaran, 1: 8 sampai 1:32). Secara signifikan titer antibodi penetral lebih tinggi
diamati oleh 10 dpi, dengan titer rata-rata 1: 128 (kisaran, 01:32 ke 1: 256; P 0.001) (Gambar. 1A). Serum
menetralisir titer antibodi terus meningkat dan tetap tinggi sampai akhir studi (726 dpi) secara independen dari
status infeksi pada kuda (yaitu, jangka panjang atau jangka pendek carrier). Median menetralisir antibodi titer
oleh 726 dpi adalah 1: 256 (kisaran, 1: 128 sampai 1: 512). Kenaikan titer antibodi serum netralisasi
menunjukkan fi kan korelasi negatif moderat dan signifikan dengan titer viremia (
0,54), menunjukkan bahwa

pengembangan antibodi mungkin terkait dengan izin dari EAV dari aliran darah dan jaringan tubuh
lainnya, dengan pengecualian dari saluran reproduksi (Gambar. 1A). Perbedaan titer antibodi antara
jangka panjang ( n 2) dan jangka pendek ( n 6) kuda pembawa tidak diamati pada setiap titik waktu ( P 0,05)
(Gambar. 1B).

ELISA, dengan pengecualian dari plasma seminalis IgM ELISA, yang cutoff PNR adalah 3). Carossino et al.
kesalahan standar sarana (bar) yang diwakili. Nilai cutoff PNR untuk semua isotipe diwakili oleh garis putus-putus (cutoff PNR adalah 2 untuk semua
plasma dimediasi oleh beberapa isotipe antibodi, termasuk virus-spesifik IgA, IgM, IgG1, IgG3 / 5, dan IgG4 / 7. Mean / rasio positif negatif (PNRs) dan
respon antibodi serologis yang dimediasi oleh fi virus-spesifik awal c respon IgM dan onset kemudian virus-spesifik IgG1. (B) respon antibodi Seminal
Gambar 2 Serologi (A) dan mani plasma (B) isotype antibodi respon setelah infeksi EAV eksperimental kuda jantan ( n 8 dan n 7, masing-masing). (A)
Karakterisasi serologi imunoglobulin isotipe pro fi le selama infeksi persisten EAV di kuda
jantan. imunoglobulin pro fi le yang disebabkan oleh EAV dalam serum kuda jantan eksperimental terinfeksi
ditandai dengan menggunakan panel dari EAVspeci fi c capture isotyping enzim-linked tes immunosorbent
(ELISA) (IgM, IgA, IgG1, IgG3 / 5, IgG4 / 7, dan IgG6). Respon humoral untuk EAV ditandai dengan onset
awal virus-spesifik IgM (6 sampai 8 dpi) (Gambar. 2A), yang bertepatan dengan serokonversi, sebagaimana
ditentukan oleh tes netralisasi virus (VNT). Hanya dua dari delapan kuda jantan menunjukkan respon IgM
positif sedini 6 dpi (kuda L136 dan L143). Lima puluh persen dari hewan memiliki terdeteksi fi EAV-spesifik c
IgM oleh 8 dpi (kuda jantan L136, L139, L142, dan L143), dan 100% (8/8) memiliki respon yang kuat dengan
10 dpi. Tanggapan IgM-dimediasi memuncak di antara 10 dan 14 dpi (berarti / rasio negatif positif [PNR]
2,95, P 0,05) dan cepat membusuk oleh 28 dpi (berarti PNR 1,5) (Gambar. 2A)
di kedua pendek dan kuda pembawa jangka panjang. Saklar isotype untuk EAV-spesifik IgG1 mengikuti respon IgM
awal, dengan onset pada 10 dpi (berarti PNR 5.16) di 5/8 kuda jantan, bertepatan dengan fi kenaikan signifikan dalam
menetralisir titer antibodi. fi c tanggapan IgG1 EAV-spesifik yang secara signifikan meningkat 14 dpi ( P 0,01) (Gambar.
2A). Menariknya, salah satu kuda (kuda L137) menunjukkan respon IgG1 sangat awal (6 dpi, PNR 5.3). The fi c respon
IgG1 EAV-spesifik memuncak dengan 21 dpi (berarti PNR 24,3) dan tetap tinggi dalam serum (mean PNR
20, dengan variasi individu dalam respon) (Gambar. 2A) dari

eksperimental terinfeksi kuda jantan. Tanggapan fi c IgG1-spesifik sangat berkorelasi dengan titer antibodi
penetral ( 0,62), dan tidak ada statistik signifikan fi perbedaan tidak bisa di
besarnya baik IgM atau respon IgG1 antara jangka pendek ( n 2) dan jangka panjang ( n
6) kuda pembawa yang diamati (Gambar. 3A). Akhirnya, virus-spesifik IgA,
IgG3 / 5, IgG4 / 7, atau IgG6 tanggapan isotype tidak terdeteksi dalam serum kuda jantan
eksperimental terinfeksi selama penelitian (PNRs 2) (Gbr. 2A dan 3A).
Karakterisasi respon antibodi mani selama infeksi persisten EAV di kuda jantan. Deteksi
EAV-spesifik antibodi mani di berurutan sampel plasma seminal yang dikumpulkan dari sekelompok kuda
eksperimental terinfeksi ( n 7) dilakukan oleh capture isotyping ELISA, seperti yang dijelaskan dalam Bahan
dan Metode. Mani imunoglobulin pro fi le ditandai oleh beberapa isotipe fi c immunoglobulin EAV-spesifik,
termasuk IgM, IgA, dan IgG, dengan beberapa subtipe yang terlibat (IgG1, IgG3 / 5, dan IgG4 / 7)
(Gambar. 2B). EAV-spesifik IgM mani plasma mengikuti pola yang sama dengan yang untuk serum IgM,
dengan puncak shedding terjadi pada 11 dpi (berarti PNR
13,86, P 0,0001) (Gambar. 2B). Meskipun 4/7 kuda disajikan tingkat IgM di atas tingkat dasar oleh 30 dpi (berarti
PNR 3,5), tingkat membusuk sesudahnya (Gambar. 3B). Tidak

Antibodi
(cutoff PNR adalah 2 untuk semua ELISA, dengan pengecualian dari plasma seminalis IgM ELISA, yang cutoff PNR adalah 3). EAV-Speci fi c Responses mukosa
eksperimental. Mean / rasio positif negatif (PNRs) dan kesalahan standar sarana (bar) yang diwakili. Nilai cutoff PNR untuk semua isotipe diwakili oleh garis putus-putus
Gambar 3 Serologi (A) dan mani plasma (B) respon isotype antibodi selama jangka pendek ( n 6) dan jangka panjang ( n 2) infeksi persisten di kuda setelah infeksi EAV

statistik perbedaan yang signifikan antara kuda pembawa jangka pendek dan jangka panjang yang diamati (Gambar.
3B). Selanjutnya, EAV-spesifik IgA sekresi awalnya terdeteksi dalam plasma mani oleh 30 dpi (berarti PNR 3.6)
(Gambar. 2B) di 5/7 kuda jantan dan memuncak dengan 107 dpi (berarti PNR 15,13) ( P 0,0001). tingkat IgA tetap tinggi
sampai kesimpulan dari studi (726 dpi) (Gambar. 2B), dan tidak ada perbedaan yang signifikan antara pendek dan kuda
pembawa jangka panjang yang diamati pada setiap titik waktu (Gambar. 3B).
The EAV-spesifik mani immunoglobulin pro fi le termasuk IgG1, IgG3 / 5, dan IgG4 / 7 subtipe. Mani
plasma IgG1 pro fi le mengikuti pola yang sama dengan yang diamati untuk IgG1 serum, dan IgG1 menjadi
terdeteksi dalam plasma mani oleh 11 dpi (berarti PNR 3,9), mencapai puncaknya dengan 107 dpi (berarti
PNR 10,23) ( P 0,001). Tingkat IgG1 plasma seminal tetap tinggi sampai akhir penelitian, dan perbedaan yang
signifikan dalam besarnya respon tidak diamati antara kuda pembawa jangka pendek dan jangka panjang
(Gambar. 3B). The EAV-spesifik mukosa IgG3 / 5 dan IgG4 / 7 tanggapan dipicu kemudian dalam perjalanan
infeksi. Dalam kasus seminal plasma IgG3 / 5, itu terdeteksi oleh 107 dpi dan memuncak dengan 548 dpi
(berarti PNR 9.21, P
0,05) (Gambar. 2B). Menariknya, kuda pembawa jangka panjang disajikan nilai PNR secara signifikan lebih tinggi
untuk mani IgG3 / 5 respon dari kuda pembawa jangka pendek, secara khusus, di 107, 548, dan 726 dpi ( P
0,01) (Gambar. 3B). Mani plasma IgG3 / 5 tetap
terdeteksi sampai akhir studi (726 dpi), kecuali dalam satu kuda (kuda L139, pembawa jangka pendek). Dua
dari lima kuda pembawa jangka pendek tidak memiliki terdeteksi IgG3 / 5 dalam plasma mani pada setiap titik
waktu (kuda L137 dan L138). Mani plasma IgG4 / 7 terdeteksi oleh 107 dpi (7/7 kuda jantan, P 0,01), dan
puncak konsentrasi yang diamati oleh 548 dpi (berarti PNR 7,5) dan tetap terdeteksi sampai 726 dpi (Gambar.
2B), dengan secara signifikan nilai PNR lebih tinggi terlihat di kuda pembawa jangka panjang dari kuda
pembawa jangka pendek dari 107 dpi sampai kesimpulan penelitian ( P 0,05) (Gambar. 3B). fi c tanggapan IgG6
subtipe EAV-spesifik tidak terdeteksi dalam plasma mani baik kuda jantan panjang atau operator jangka pendek
selama penelitian.
spesifisitas dari isotipe imunoglobulin mani untuk EAV amplop besar (GP5 dan M) dan
protein nukleokapsid. Serum dan mani plasma (mukosa) imunoglobulin spesifik kota fi dievaluasi
dengan Western imunoblotting setelah natrium dodesil sulfat-SDS-PAGE (SDS-PAGE) pemisahan
protein virus dari gradien-puri fi ed EAV. Serum dan mani plasma anti-EAV IgG1, serta plasma seminal
anti-EAV IgA dan IgG4 / 7, disajikan kuat mengikat protein virus 20-44 kDa, 17 kDa, dan 14 kDa, sesuai
dengan EAV protein struktural utama GP5 dan M dan nukleokapsid (N) protein, masing-masing
(Gambar. 4). Mani plasma anti-EAV IgG3 / 5 ditunjukkan untuk menjadi spesifik untuk glikoprotein GP5
virus dan protein N, sedangkan spesifisitas untuk protein M tidak dapat ditentukan (Gbr. 4).
Menetralkan kapasitas fi c isotipe antibodi mukosa virus-spesifik yang berasal dari kuda jantan
eksperimental terinfeksi EAV. Serum IgG1 dan seminal plasma IgA, IgG1, IgG3 / 5, dan IgG4 / 7 yang dimurnikan
dari serum dikumpulkan dan sampel plasma mani dikumpulkan pada 726 dpi untuk mengevaluasi kemampuan mereka
untuk menetralisir EAV. Sebuah dimodifikasi microneutralization assay menunjukkan bahwa anti-EAV IgG1 dan IgG4 /
7 dalam plasma mani menimbulkan virus netralisasi di bawah in vitro kondisi. The IgG1 dan IgG4 / 7 dimurnikan dari
plasma mani kuda jantan operator jangka pendek dan jangka panjang disajikan titik akhir netralisasi yang sama (yaitu,
perbedaan itu 4 kali lipat). The IgG1 netralisasi endpoint dalam plasma mani diperkirakan berada di rata-rata 6 g / ml
dan 3 g / ml dimurnikan IgG1 untuk kuda pembawa jangka pendek dan jangka panjang, masing-masing, sementara
endpoint IgG4 / 7 netralisasi dalam plasma mani diperkirakan 2 g / ml dimurnikan IgG4 / 7 untuk kedua kelompok.
endpoints netralisasi ini sama dengan yang ditentukan untuk dimurnikan serum IgG1 (3 g / ml). Sebaliknya, IgG3 / 5
dan IgA dimurnikan dari kuda jantan operator jangka pendek dan jangka panjang tidak menetralisir EAV bawah in vitro kondisi
bahkan pada konsentrasi 25 g / ml.
produksi antibodi mukosa pada kelenjar seks aksesori selama infeksi persisten EAV di kuda
jantan. Infeksi EAV diinduksi sebuah respons peradangan di

dalam jalur 1 sampai 6, 7 dan 8, dan 9 dan 10 diperoleh dalam percobaan independen. EAV-Speci fi c Responses mukosa Antibodi
dpi. Lanes A dan B adalah kontrol perwakilan (penanda massa molekul dan dimurnikan EAV, masing-masing). Hasil yang disajikan
IgG4 / 7; 8, mani IgG4 plasma / 7 diperoleh pada 726 dpi; 9, prechallenge mani plasma IgA; 10, mani plasma IgA diperoleh pada 726
pada 726 dpi; 5, prechallenge mani plasma IgG3 / 5; 6, mani IgG3 plasma / 5 diperoleh pada 726 dpi; 7, prechallenge mani plasma
prechallenge serum IgG1; 2, IgG1 serum diperoleh pada 726 dpi; 3, prechallenge mani IgG1 plasma; 4, mani IgG1 plasma diperoleh
penanda massa molekul; B, mengendalikan virus arteritis kuda GP5-, M, dan N-spesifik monoklonal / antibodi poliklonal; 1,
reaktivitas kuat dengan GP5 virus, M, dan N, sedangkan IgG3 / 5 disajikan reaktivitas lemah dengan GP5 virus dan N. Lanes: A,
nukleokapsid (N) protein selama infeksi persisten di kuda jantan. Serum IgG1 dan mani IgG1 plasma, IgG4 / 7, dan IgA menunjukkan
Gambar 4 spesifisitas dari serum dan mani immunoglobulin plasma isotipe untuk EAV utama struktural (GP5 dan M) dan
saluran reproduksi kuda jantan eksperimental terinfeksi, dan karakterisasi yang luas dari inflamasi
infiltrasi telah dijelaskan sebelumnya (40). lesi histologis pada kelenjar seks aksesori kuda jantan
eksperimental terinfeksi yang aktif shedding EAV pada saat euthanasia ( n
2 jangka panjang kuda jantan carrier)
termasuk bilateral, moderat, multifokal ampullitis lymphoplasmacytic (Gambar. 5A dan B), sementara kuda
eksperimental terinfeksi yang mengalami pemberantasan virus dan terganggu pelepasan virus pada saat
euthanasia disajikan dengan minimal, fokus, ampullitis lymphoplasmacytic ( n
6; Jangka pendek kuda carrier). Meskipun peradangan
lesi yang jarang terjadi di kelenjar vesikuler dan prostat, sebuah adenitis lymphoplasmacytic ringan dari
Kelenjar Cowper dengan fokus sel mononuklear sesekali diamati (Gambar. 5C dan D). Dalam lesi
inflamasi pada kelenjar aksesori seks kontrol (naif) kuda jantan ( n
4) sering berkisar dari yang hadir untuk hadir sebagai
minimal dan fokus lymphoplasmacytic di ltrates fi, dengan lesi ini menunjukkan tingkat keparahan secara signifikan
lebih rendah dan distribusi dan secara signifikan skor kumulatif lebih rendah daripada kuda pembawa jangka panjang ( P
0,01), sementara tidak ada statistik signifikan
perbedaan antara kuda pembawa jangka pendek naif dan diamati, seperti yang ditunjukkan sebelumnya (40).
Selain itu, nilai spesifik immunostaining untuk beragam di sel inflamasi di infiltratif disembut ampullae yang
didemonstrasikan untuk secara signifikan lebih tinggi di kuda pembawa jangka panjang dari jangka pendek
operator dan kontrol kuda jantan ( P
0,0001) (data tidak ditampilkan) (40). Menariknya, Kelenjar Cowper yang berlimpah di fi ltrated dengan sel
plasma, seperti yang diamati oleh hematoxylin dan eosin (H & E) pewarnaan dan con fi rmed oleh spesifik
immunostaining, seperti dijelaskan di bawah (Gbr. 5 sampai 7), termasuk di kuda naif.
Spesifik immunoglobulin yang memproduksi populasi sel plasma dalam kelenjar seks aksesori
eksperimental terinfeksi ( n 8) dan naif ( n 4) kuda jantan dianalisis oleh imunohistokimia (IHC). fi c sel plasma
imunoglobulin-spesifik telah diidentifikasi di seluruh kelenjar seks aksesori laki-laki dan termasuk IgA-positif
(IgA ), IgG1positive (IgG1 ), IgG3 / 5-positif (IgG3 / 5 ), Dan IgG4 / 7-positif (IgG4 / 7 ) Sel plasma (Gbr. 6 dan
7). IgA Sel plasma jenis sel plasma yang paling banyak didistribusikan sepanjang kelenjar seks aksesori pria
yang berbeda, terutama di Kelenjar Cowper (dengan skor 4 di semua kuda jantan dievaluasi, P 0,01) dan
disembut ampullae (skor median, 3,5

Gambar 5 Inflamasi infiltrasi dalam kelenjar seks aksesori kuda jantan terus-menerus terinfeksi EAV. (A) lymphoplasmacytic ampullitis. H & E noda. Magni fi kasi,
200. Bar, 100 m. (B) Tinggi Magni fi kasi dari peradangan fokus ditampilkan di panel A. Pada sel inflamasi termasuk limfosit dan plasma
sel (inset) di agregat multifokal dan limfosit dan sel plasma tersebar di lamina propria. H & E noda. Magni fi kasi, 400. Bar, 50 m. (C)
adenitis lymphoplasmacytic, Kelenjar Cowper. H & E noda. Magni fi kasi, 200. Bar, 100 m. (D) yang lebih tinggi Magni fi kasi dari dalam sel inflamasi ditampilkan di
panel C. Pada sel inflamasi termasuk limfosit dan sel plasma (inset) di fokus sesekali dan limfosit dan sel plasma, terutama sel plasma, tersebar dalam lamina propria ,. H & E noda. Magni fi kasi,
400. Bar, 50 m.
dan 2 di panjang dan operator jangka pendek kuda jantan, masing-masing) (Gambar. 6 dan 7A dan B). The IgA distribusi
sel plasma jarang absen dalam disembut ampullae kuda jantan naif (skor median, 0,5), sedangkan IgA Sel plasma
adalah sebagai berlimpah di kelenjar lain dari kuda naif seperti pada orang-orang dari kuda jantan yang terinfeksi.
Selain itu, tersebar IgA sel epitel kelenjar yang sering diamati di semua kelenjar aksesori seks (disembut ampullae,
kelenjar vesikuler, prostat, dan Kelenjar Cowper) (Gambar. 8A dan B) dan disajikan sitoplasma intens, apikal, dan
/ atau pewarnaan basolateral. pewarnaan epitel menunjukkan adanya mukosa, transportasi IgA transepitelial ke
lumen kelenjar. Selain itu, homing dari IgG1 sel plasma terutama melibatkan disembut ampullae kuda jantan
operator jangka panjang (skor median, 3) dan kuda pembawa jangka pendek (skor median, 1) dan Kelenjar
Cowper kuda jantan pembawa jangka pendek (skor median, 2) (Gbr. 6 dan 7C dan D), sementara kehadiran
mereka jarang di sebagian kelenjar seks aksesori kuda jantan naif (skor median, 0,5); pengecualian adalah
Kelenjar Cowper (skor median, 2). IgG3 / 5 sel plasma yang luas didistribusikan di kelenjar seks aksesori kuda
jantan operator jangka panjang, sementara angka rendah terdeteksi di jaringan dari kuda pembawa jangka
pendek (Gambar. 6 dan 7E dan F) dan jarang di disembut ampullae, kelenjar vesikuler , dan prostat dari kuda naif
(skor median, 0-0,5). Akhirnya, IgG4 / 7 Sel-sel plasma yang diamati pada

dominan ke disembut ampullae dan Kelenjar Cowper di kuda pembawa jangka panjang. EAV-Speci fi c Responses mukosa Antibodi
Gambar 6 Distribusi sel fi c plasma imunoglobulin-spesifik dalam kelenjar seks aksesori (gl.) Selama infeksi persisten EAV di kuda jantan. sel plasma disajikan homing
jumlah besar di disembut ampullae dan Kelenjar Cowper kuda jantan operator jangka panjang, sementara mereka
yang diamati pada semua kelenjar seks aksesori kuda jantan pembawa jangka pendek (Gambar. 6 dan 7G dan
H). kuda naif disajikan dengan sesekali IgG4 / 7 sel plasma di kelenjar vesikuler dan prostat (skor median, 1),
tetapi, yang menarik, jumlah yang lebih dari ini dan IgG3 / 5 Sel-sel plasma yang diamati pada Kelenjar Cowper.
Tidak ada perbedaan statistik signifikan dalam kelimpahan sel plasma (sebagaimana ditentukan oleh nilai IHC) di
jaringan kelenjar seks aksesori, dengan pengecualian disembut ampullae (lihat di bawah), dari operator jangka
panjang, pembawa jangka pendek, atau kuda naif yang diamati ( P 0,05). Menariknya, IgG1 sesekali dan IgG4 / 7 sel
epitel yang diamati pada epitel reproduksi (Gambar. 8C dan D), menunjukkan IgG subtipe transportasi di seluruh
lapisan epitel.
Dalam kasus kuda jantan yang aktif shedding EAV dalam air mani pada akhir penelitian ( n
2), Ig-mensekresi (IgA , IgG1 , IgG3 / 5 , Dan IgG4 / 7 )
Sel-sel plasma dikaitkan dengan lymphoplasmacytic infiltrasi diamati di disembut ampullae dan bulbourethral
kelenjar (Gambar. 7). Sebuah jumlah yang lebih tinggi dari sel plasma Ig-mensekresi diamati di disembut ampullae
kuda jantan operator jangka panjang dibandingkan pada mereka dari kuda pembawa jangka pendek dan naif
(kontrol) kuda jantan ( P 0,05), yang menunjukkan tingkat tertentu spesifisitas sel efektor ini untuk rumah dalam
situs utama dari EAV ketekunan dalam saluran reproduksi. sel plasma di disembut ampullae dan Kelenjar Cowper
juga identifikasi ed dengan mikroskop elektron transmisi (TEM) (data tidak ditampilkan).

Gambar 7 Imunohistokimia identifikasi sel plasma yang terletak di kelenjar seks aksesori kuda jantan terus-menerus terinfeksi EAV.
Spesifik immunoglobulin pewarnaan diindikasikan ke kiri, dan jenis jaringan ditunjukkan di atas setiap kolom. IgA Sel plasma (A dan B),
IgG1 Sel plasma (C dan D), IgG3 / 5 sel plasma (E dan F), dan IgG4 / 7 Sel plasma (G dan H) di disembut ampullae (A, C, E, G) dan
Kelenjar Cowper (B, D,
F, H) akan ditampilkan. IHC dengan 3,3 = -diaminobenzidine. Magni fi kasi, 400. Bar, 50 m.
DISKUSI
Berbeda dengan banyak virus, EAV telah berkembang mekanisme kompleks yang memungkinkan nya
ketekunan jangka panjang (carrier) dalam saluran reproduksi kuda tanpa kerusakan yang terkait jaringan,
kelainan sperma, atau efek buruk pada kinerja reproduksi (13-15). Baru-baru ini, telah ditunjukkan bahwa
kegigihan EAV dalam saluran reproduksi kuda terjadi meskipun induksi respon host sistemik kekebalan
tubuh (misalnya, respon penetral antibodi yang kuat) dan induksi lokal dalam respon inflamasi di lokasi
ketekunan (40). Strategi yang digunakan oleh EAV untuk berhasil menghindari tuan rumah surveilans
kekebalan tubuh telah belum ditentukan. Karena kuda pembawa

EAV-Speci fi c Responses mukosa Antibodi Klinis dan Vaksin Imunologi
Gambar 8 Imunohistokimia identifikasi sel epitel imunoglobulin-positif pada kelenjar seks aksesori kuda jantan terus-menerus terinfeksi EAV. (A dan B) IgA-spesifik epitel imunostaining di ampula (A) dan
kelenjar vesicular (B); (C) IgG1-spesifik epitel imunostaining di kelenjar vesikuler; (D) IgG4 / 7-spesifik epitel imunostaining di kelenjar vesikuler. IHC dengan 3,3 = -diaminobenzidine. Magni fi kasi,
400. Bar, 50 m.
memainkan peran penting dalam epidemiologi EAV dan merupakan tantangan utama untuk kontrol dan potensi
pemberantasan (1, 5, 11, 12, 20), penting untuk memahami mekanisme yang mendasari yang terlibat dalam
pembentukan dan pemeliharaan infeksi persisten dalam saluran reproduksi kuda. Di sini, kita menyelidiki respon
antibodi dalam jangka pendek dan jangka panjang kuda terus menerus terinfeksi setelah infeksi EAV
eksperimental dengan spesifik penekanan pada respon antibodi mukosa untuk membantu dalam pemahaman
tentang faktor-faktor imun inang yang terlibat dalam EAV ketekunan.
Ada 11 isotipe imunoglobulin dijelaskan dalam serum kuda (IgA, IgD, IgE, IgG1 untuk IgG7, dan IgM),
dan peran imunoglobulin tersebut selama berbagai infeksi virus telah menjadi subjek penyelidikan ekstensif
(42-47). Penelitian ini menunjukkan bahwa tak lama setelah infeksi EAV menginduksi respon antibodi serum
netralisasi yang kuat terdiri dari respon IgM berumur pendek dan respon IgG1 tahan lama. Tanggapan ini
berkorelasi dengan dan kemungkinan menyebabkan penurunan tingkat viremia dan pembersihan infeksi
virus dari seluruh jaringan tubuh, dengan pengecualian dari kelenjar seks aksesori kuda jantan pembawa
(40). Mirip dengan respon yang diamati setelah infeksi virus West Nile (47), respon antibodi EAV-penetral
terutama dimediasi oleh IgG1 menargetkan protein utama virus struktural (GP5 dan M) dan protein
nukleokapsid, seperti yang dijelaskan sebelumnya (38). Meskipun IgG4 / 7 adalah dominan serum IgG
subtipe pada kuda (43) dan terlibat dalam respon antivirus lainnya, seperti yang melawan

kuda herpesvirus 1 (48) atau kuda virus influenza (49), kami tidak dapat mendeteksi fi c tanggapan sistemik
EAV-spesifik dimediasi oleh ini atau isotipe antibodi lain selain IgM dan IgG1. Ini merupakan indikasi bahwa
isotipe imunoglobulin lainnya juga tidak memberikan kontribusi atau memainkan peran kecil dalam
EAV-spesifik tanggapan fi c sistemik. Namun, kurangnya deteksi tanggapan ini juga dapat terkait dengan
keragaman isotipe ini dan keterbatasan teknis dalam mengidentifikasi fi c tanggapan EAV-spesifik, seperti yang
dijelaskan di tempat lain (47). Yang paling penting, antibodi serum tidak efektif dalam membersihkan infeksi
EAV gigih dalam saluran reproduksi. Meskipun faktor-faktor penentu tidak diketahui, jenis sel mempertahankan
replikasi EAV terus-menerus di saluran reproduksi (40), sebuah lingkungan mikro jaringan imunosupresi (40), T
disfungsi limfosit di lokasi ketekunan, atau bahkan aksesibilitas terbatas antibodi serum untuk jaringan
reproduksi semua hipotesis yang valid yang dapat menjelaskan kegagalan untuk membersihkan infeksi
persisten. Studi-studi ini sedang berlangsung di laboratorium UBR Balasuriya ini.
Sebuah fi kan fi signifikan nding dari penelitian ini adalah bahwa infeksi EAV menginduksi spesifisitas c dan
isotype antibodi beragam pro fi le dalam plasma mani dan homing sel plasma pada saluran reproduksi kuda jantan
yang terinfeksi dan yang paling penting, bahwa virus memiliki kemampuan untuk melarikan diri respon antibodi
mukosa, terlepas dari berbagai isotipe immunoglobulin yang terlibat dalam respon tersebut. Penelitian ini telah
menunjukkan bahwa, meskipun kehadiran mani IgG1 plasma dan IgG4 / 7 dengan kapasitas netralisasi yang sama
dengan yang ditentukan untuk IgG1 serum dan konsentrasi yang lebih tinggi dari IgG4 / 7 di fluida mani berasal dari
jangka panjang kuda terus-menerus terinfeksi, EAV terus untuk ditumpahkan di dalam air mani kuda jantan tersebut.
beberapa faktor mungkin berhubungan dengan kegagalan untuk menetralisir EAV pada jaringan saluran reproduksi
dan plasma seminal, termasuk namun tidak terbatas pada munculnya varian fenotipik novel virus selama infeksi
persisten (melarikan diri mutan) (19, 26;. Nam et al, tidak dipublikasikan), titer virus lebih tinggi dari tingkat spesifik
imunoglobulin dalam plasma mani yang tersedia untuk menetralkan virus, komponen plasma seminal lain yang dapat
mengganggu atau mengurangi imunoglobulin aviditas dan / atau aktivasi kaskade komplemen (50-53), atau
ekstraseluler vesikel (microvesicle) dimediasi penumpahan partikel virus yang memungkinkan melarikan diri dari
pengawasan antibodi, meningkatkan propagasi virus, seperti yang diusulkan untuk virus lain (54). Meskipun
konsentrasi yang lebih tinggi dari EAV-spesifik mani IgG3 plasma / 5 diamati pada kuda pembawa jangka panjang,
IgG3 / 5 tampaknya mengikat glikoprotein EAV GP5 lemah dan gagal untuk menetralkan EAV bawah in vitro kondisi.
Temuan tersebut dapat mencerminkan aviditas rendah dari EAV-spesifik IgG3 / 5 untuk protein EAV, kurangnya
signifikan afinitas pematangan dalam menanggapi Eav, atau kemampuan untuk mengaktifkan komplemen cascade
(44). Demikian pula, IgA sekretorik dalam plasma mani menunjukkan kurangnya menetralkan aktivitas, yang dapat
berhubungan dengan ketidakmampuan isotipe ini untuk memicu aktivasi komplemen melalui jalur klasik; bukan,
isotype ini membutuhkan lectin jalur aktivasi mannose-mengikat bukan (55).
Dalam upaya untuk mengidentifikasi sumber antibodi mukosa di saluran reproduksi, kami mengevaluasi homing sel fi c plasma
spesifik pada kelenjar seks aksesori kuda jantan yang terinfeksi. Keragaman dalam populasi sel plasma diamati dalam jaringan-jaringan
ini menunjukkan homing sel efektor ini dan bahwa produksi lokal imunoglobulin kemungkinan sumber antibodi yang disekresikan dalam
plasma mani, yang berkontribusi pada sistem kekebalan mukosa di saluran reproduksi. Menariknya, sel plasma telah terbukti merupakan
komponen lain signifikan sel dari respons peradangan dijelaskan sebelumnya di jangka panjang kuda terus-menerus terinfeksi (40), dan
kegigihan sel-sel ini setelah terputus dari pelepasan virus mendukung fakta bahwa kuda pembawa jangka pendek mempertahankan
EAV-spesifik imunoglobulin dalam plasma mani setelah pemberantasan virus. Akhirnya, studi imunohistokimia juga telah menunjukkan
transcytosis IgA serta imunoglobulin lain dari kelas IgG, secara khusus, IgG1 dan IgG4 / 7, melalui epitel reproduksi. Sementara IgA
sekresi melalui permukaan mukosa dikaitkan dengan mekanisme transcytosis dimediasi oleh polimer imunoglobulin reseptor (poly-IGR) di
sel epitel terpolarisasi (56), IgG sekresi melalui permukaan epitel telah dikaitkan dengan spesifisitas c reseptor Fc pada manusia, yaitu,
FcRn (57, 58). Sangat mungkin bahwa reseptor ini terlibat dalam proses ini, meskipun Studi imunohistokimia juga telah menunjukkan
sekresi melalui permukaan mukosa dikaitkan dengan mekanisme transcytosis dimediasi oleh polimer imunoglobulin reseptor (poly-IGR) di
sel epitel terpolarisasi (56), IgG sekresi melalui permukaan epitel telah dikaitkan dengan spesifisitas c reseptor Fc pada manusia, yaitu,
FcRn (57, 58). Sangat mungkin bahwa reseptor ini terlibat dalam proses ini, meskipun Studi imunohistokimia juga telah menunjukkan
sekresi melalui permukaan mukosa dikaitkan dengan mekanisme transcytosis dimediasi oleh polimer imunoglobulin reseptor (poly-IGR) di sel epitel terpolarisasi (56), IgG sekresi melalui permukaan epitel telah dikaitkan dengan spes

belum dicirikan kuda sejauh ini. Meskipun sumber IgM dalam plasma mani dari kelenjar seks aksesori
tidak dapat ditentukan karena koleksi jaringan dilakukan setelah respon IgM telah memudar, pola
respon yang mirip dengan respon IgM serologis dan IgM bisa berpotensi memperoleh akses ke seminal
plasma melalui sekresi jalur poli-Ig (56).
Kesimpulannya, studi yang disajikan di sini menunjukkan bahwa meskipun EAV menginduksi baik
respon antibodi serologis dan respon antibodi mukosa di kuda eksperimental terinfeksi, baik tanggapan
tidak dapat membersihkan kegigihan virus dari jaringan saluran reproduksi jangka panjang kuda
terus-menerus terinfeksi. Sementara kegigihan EAV dalam limfosit saluran reproduksi dapat menjamin
histologis standar. EAV-Speci fi c Responses mukosa Antibodi
virus melarikan diri dari serum antibodi, respon antibodi mani plasma secara keseluruhan telah
dibuktikan untuk menetralkan hanya sebagian (yaitu, beberapa subtipe IgG). Kami juga telah
menunjukkan bahwa dinamika isotype antibodi selama infeksi EAV tidak memprediksi terjadinya EAV
ketekunan jangka panjang dalam saluran reproduksi kuda. Ini,
BAHAN DAN METODE

Sel dan virus. -Bagian tinggi kelinci ginjal 13 (RK-13 [KY]) sel (awalnya berasal dari ATCC CCL-37 sel; American Type Culture
dikumpulkan. Jaringan yang fi xed di 10% netral formalin buffer selama 24 jam dan parafin fi n tertanam mengikuti prosedur
Collection) dari tingkat bagian 399-409 dan kuda arteri pulmonalis sel endotel (EECS; University of California, Davis , Davis, CA) (59)
yang dipertahankan seperti yang dijelaskan sebelumnya (40). Tissue fl budaya uid (TCF) yang berisi virulen Bucyrus regangan (VBS)
dari EAV (9) digunakan untuk menghasilkan antigen untuk EAV-capture enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) dan Western
imunoblotting. TCF yang berisi KY84 strain EAV (dari bagian 1 di EECS; University of Kentucky, Lexington, KY) (37) digunakan untuk
infeksi eksperimental kuda jantan. TCF yang mengandung strain vaksin hidup-dilemahkan komersial EAV (strain MLV; vaksin
ARVAC; Zoetis, Kalamazoo,
Stallions. Sebanyak delapan kuda jantan dewasa secara seksual dilibatkan dalam penelitian ini. Tersebut dipertahankan di Maine
kesempatan Pertanian, Universitas Kentucky, Lexington, KY, dan sebelum inisiasi penelitian ini adalah con fi rmed menjadi seronegatif (titer
1: 4) antibodi terhadap Eav menurut Dunia
Organisasi untuk Kesehatan Hewan (OIE) standar VNT protokol (60) dijelaskan di bawah. Kuda jantan yang bertempat di warung
individu dalam fasilitas isolasi selama studi di University of Kentucky di Lexington, KY. Setelah infeksi eksperimental dan
pemantauan untuk 726 dpi (lihat di bawah), 2/8 kuda yang diklasifikasikan sebagai pembawa jangka panjang (durasi pelepasan virus
postinfection. Untuk studi ini, kelenjar aksesori seks (disembut ampullae, kelenjar vesikuler, prostat, dan Kelenjar Cowper)
dalam air mani, 1 tahun), sedangkan 5/8
kuda jantan yang diklasifikasikan sebagai pembawa jangka pendek (durasi pelepasan virus dalam air mani, sekitar 1 tahun). Untuk
alasan tersebut, status pembawa kuda jantan tunggal (kuda L143) tidak dapat ditentukan sampai pemeriksaan postmortem, dan kuda
itu diklasifikasikan sebagai pembawa jangka pendek atas dasar tidak adanya virus menular, antigen virus, dan virus RNA dari jaringan
saluran reproduksi berasal dari pemeriksaan postmortem dan minimal peradangan. Sebuah kelompok kontrol kuda jantan naif ( n
4) tetap tidak terpapar dan tidak divaksinasi terhadap EAV.

perawatan hewan dan etika. Penelitian ini dilakukan sesuai ketat dengan rekomendasi di Panduan untuk Perawatan dan
Penggunaan Laboratorium Hewan Dewan Riset Nasional (61). Komite Kelembagaan Perawatan Hewan dan Penggunaan (IACUC) di
University of Kentucky, Lexington, KY, disetujui protokol ini (protokol nomor 2011-0888). Kuda jantan yang manusiawi eutanasia oleh
overdosis pentobarbital mengikuti panduan American Veterinary Medical Association (AVMA) untuk euthanasia hewan, dan semua
upaya dilakukan untuk meminimalkan penderitaan.
infeksipanduan
mengikuti eksperimental
AVMA dan pengumpulan
untuk sampelPemeriksaan
euthanasia hewan. klinis. Delapan kuda (kuda
nekropsi L136 untuk L143)
dan pengumpulan yangdilakukan
jaringan intranasalpada
diinokulasi
2 tahunpada
bulan Oktober 2011 dengan strain KY84 dari EAV (3,75 10 5 PFU per ml TCF
disampaikan dalam medium minimal 5 ml Eagle penting [EMEM]) menggunakan kateter fenestrated dan dipantau seperti yang dijelaskan
sebelumnya (40, 41, 62). Sampel serum berurutan dikumpulkan dalam tabung serum Vacutainer (BD, Franklin Lakes, NJ) di 30
(prechallenge), 6, 8, 10, 14, 21, 28, 42, dan 726 (preeuthanasia) dpi. Sampel serum panas dilemahkan pada 56 ° C selama 30 menit,
aliquoted, dan disimpan pada 20 ° C sampai diuji. sampel air mani dikumpulkan menggunakan Pejabat vaginanya arti selama fase akut dan
setelah pemulihan klinis, secara khusus, di 30 (prechallenge), 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 23, 30, 44, 65, 86, 107, 128, 149, 170,
198, 226, 254, 282, 317, 345, 380, 407, 448, 462, 476, 497, 548, 701, dan 726 (preeuthanasia) dpi, dengan tujuan untuk memantau
kegigihan virus. sampel air mani yang diproses seperti yang dijelaskan sebelumnya (17, 40). sampel plasma mani menjadi sasaran
isolasi virus dan real-time terbalik transkripsi-PCR kuantitatif untuk memperkirakan viral load dan con fi rm identitas virus, seperti yang
dijelaskan sebelumnya (40). Untuk imunoglobulin pro fi ling, sampel plasma mani dikumpulkan di 30 (prechallenge), 5, 11, 30, 107,
345, 548, dan 726 dpi diuji.
Pemeriksaan postmortem dan koleksi jaringan. Kuda jantan yang manusiawi eutanasia oleh overdosis pentobarbital

et al. Klinis dan Vaksin Imunologi
TABEL 1 MAbs spesifik untuk isotipe immunoglobulin kuda yang digunakan dalam penelitian ini
Spesifik kota fi Clone Aplikasi Sebuah Sumber (referensi)

IgM 1-22 ELISA Cornell University (42)
IgM 2B-63 IHC Cornell University (42)
IgA BVS2 ELISA, WB, isotype pemurnian, IHC Cornell University dan University of
Kentucky (63)
IgG1 CVS45 ELISA, WB, isotype pemurnian, IHC Cornell University (64)
IgG3 / 5 586 ELISA, WB, isotype puri fi kasi Cornell University (65)
IgG3 / 5 CVS38 IHC b University of Kentucky (64)
IgG4 / 7 CVS39 ELISA, WB, isotype pemurnian, IHC b Cornell University dan University of
Kentucky (64)
IgG6 267 ELISA Cornell University (65)
Sebuah ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay; WB, Western imunoblotting; IHC, imunohistokimia.
b Tissue fl budaya cairan dimanfaatkan untuk IHC. Carossino
Selain itu, jaringan yang fi xed di paraformaldehyde 4% dan 3,5% glutaraldehid dalam buffer 0,1 M Sorensen selama 1,5 jam dan
diproses untuk mikroskop elektron transmisi (TEM) pemeriksaan.
Antibodi. Sebuah panel antibodi monoklonal untuk isotipe imunoglobulin kuda digunakan untuk EAV-capture ELISA,
imunohistokimia (IHC), isotype pemurnian, dan Western imunoblotting, seperti yang dijelaskan di bawah ini (Tabel 1) (42, 63-65).
Selain itu, MAb spesifik untuk EAV GP5 (MAb 6D10) (28) adalah dimurnikan dari asites cairan (setelah tahap pengkondisian dengan
pendingin ascites reagen [Thermo Fisher Ilmiah fi c, Waltham, MA]) menggunakan kit Melon gel IgG pemurnian (Thermo Fisher
ilmiah) sesuai dengan instruksi pabrik dan biotin menggunakan EZ-link sulfo-NHS biotinylation kit (Thermo Fisher ilmiah) mengikuti
rekomendasi pabrikan. penggabungan biotin dievaluasi dengan alat tes asam = -hydroxyazobenzene-2-karboksilat 4 seperti yang
direkomendasikan oleh produsen, dan spesifisitas dari biotin MAb 6D10 selanjutnya dievaluasi oleh imunoblotting Barat dan ELISA.
pewarnaan imunohistokimia dilakukan dengan menggunakan Obligasi Polimer Re fi ne Deteksi kit (Leica Biosystems, Buffalo Grove,
IL) seperti yang dijelaskan di bawah ini. Selain itu, kambing poliklonal antibodi spesifik untuk kuda IgM (SeraCare Life Sciences,
Milford, MA) digunakan untuk uji dot blot. antibodi sekunder terkonjugasi untuk horseradish peroksidase (HRP; kambing anti-tikus
IgG [H L] -HRP dan kambing anti-rabbit IgG [HL] -HRP [SouthernBiotech, Birmingham, AL]) digunakan untuk immunoblotting Barat.
produksi antigen untuk ELISA. Prototipe VBS strain EAV disebarkan sekali dalam EECS untuk mempersiapkan stok bekerja
tinggi titer seperti yang dijelaskan sebelumnya (28, 66). Secara singkat, EECS berlapis di tripledecker fl meminta dan terinfeksi TCF
menular yang berisi VBS strain EAV. Setelah cytopathic efek 90 sampai 100% (CPE) tercapai, fl terinfeksi meminta yang beku-dicairkan
sekali ( 80 ° C), dan sel lysates yang klari fi ed dengan sentrifugasi (3500 g) pada 4 ° C selama 15 menit dan disaring melalui unit 0.45-
m-pori-ukuran fi lter (Nalgene; Thermo Fisher Ilmiah fi c). Diklarifikasi TCF kemudian ultracentrifuged (Beckman Coulter, Miami, FL) di
121.600 g melalui bantal sukrosa 20% di NET penyangga (150 mM NaCl, 5 mM EDTA, 50 mM Tris-HCl, pH 7,5) pada suhu 4 ° C selama
4 jam untuk pelet virus. Sebagian persiapan ed puri fi yang disuspensi dalam volume minimal 1 fosfat-buffered saline (PBS; pH 7,4;
Gibco) dan dititrasi dengan alat tes plak pada EECS, dan jumlah protein itu quanti fi ed menggunakan spektrofotometer (absorbansi pada
280 nm) (Biotek Synergy H1 multimode lempeng pembaca; Biotek Instruments, Inc., Winooski, VT) dan dibekukan di 80 ° C sampai
digunakan. Saham Viral berisi titer virus dari 1 10 9 PFU / ml.
Dikumpulkan serum negatif dan sampel plasma mani. Sebuah sampel serum negatif dikumpulkan disiapkan dengan
mencampur jumlah setara dengan sampel serum individu dari EAV-seronegatif kuda jantan ( n 12; kuda L136 untuk L143
[prechallenge], N105, N121, O103, dan O113). Demikian pula, negatif sampel mani plasma dikumpulkan dibuat dari kuda jantan
EAV-seronegatif ( n 11; kuda L136 untuk L142
[Prechallenge], S-6432, S-6435, S-6465, dan S-6519). Ini sampel dikumpulkan digunakan sebagai kontrol uji di isotyping ELISA.
uji netralisasi virus. Menetralisir antibodi dalam serum dievaluasi oleh VNT menggunakan protokol standar yang dijelaskan
dalam OIE Manual Diagnostik dan Vaksin untuk Terrestrial Hewan ( 60) dan suspensi bekerja virus mengandung 100 50% kultur
jaringan dosis infektif (TCID 50) dari strain komersial hidup-dilemahkan vaksin dari EAV (strain MLV) per 25 l dalam 1 EMEM
mengandung 10% guinea pig pelengkap (Rockland Immunochemicals, Gilbertsville, PA). Penggunaan MLV strain EAV didasarkan
pada keberadaan serotipe virus tunggal luas dinetralkan oleh antiserum kuda poliklonal dan penggunaan standar untuk pengujian
EAV serologis, seperti yang ditunjukkan dalam OIE Manual Tes Diagnostik dan Vaksin untuk Terrestrial Hewan ( 60). Titer antibodi
penetralisir tercatat sebagai timbal balik dari pengenceran serum tertinggi yang disediakan minimal 75% netralisasi virus referensi.
EAV-spesifik ELISA isotyping. Untuk menentukan EAV-spesifik immunoglobulin isotype pro fi les dalam serum dan plasma seminal,
panel EAV-capture ELISA dikembangkan dengan menggunakan MAbs tercantum dalam Tabel 1 dan seperti dilaporkan sebelumnya (47).
Secara singkat, 96-baik enzim immunoassay / radioimmunoassay polystyrene tinggi-mengikat pelat (Corning) yang dilapisi dengan 100 l / baik
mengandung 4 g / ml yang sesuai MAb (imunoglobulin anti-kuda; Tabel 1) di lapisan penyangga (0,2 M natrium carbonatebicarbonate
penyangga, pH 9,4 [BupH carbonatebicarbonate penyangga kemasan; Thermo Fisher Ilmiah fi c]) dan diinkubasi semalam pada 4 ° C. Piring
dilapisi dicuci 5 kali dengan ELISA mencuci penyangga (1 PBS yang mengandung 0,05% Tween 20 [Bio-Rad, Hercules, CA]) menggunakan
mesin cuci multiwell (Nunc-Immuno; Thermo Fisher Ilmiah fi c) dan diblokir dengan susu skim 5% dalam 1 PBS yang mengandung 0,05%
Tween 20 (200 l / baik) selama 1 jam pada suhu kamar. Berikut langkah cuci seperti dijelaskan di atas, masing-masing sampel serum
(diencerkan

1: 100 dalam memblokir buffer) atau mani plasma sampel (murni) ditambahkan di rangkap empat (50 l / baik), dan piring diinkubasi
pada 37 ° C selama 1 jam. Lempeng kemudian dicuci seperti dijelaskan di atas, dan baik sebagian dimurnikan EAV VBS (capture
positif) atau EECS persiapan protein fi kasi gradien-puri berasal frommock terinfeksi (capture negatif) pada konsentrasi 30 g / ml
protein ditambahkan ke masing-masing 2 sumur (50 l / baik), masing-masing. Pelat diinkubasi dengan antigen masing semalam pada
4 ° C dan dicuci seperti dijelaskan di atas, diikuti dengan inkubasi dengan terbiotinilasi EAV anti-GP5 MAb (MAb 6D10, diencerkan 1:
100 dalam memblokir buffer) selama 1 jam pada 37 ° C ( 50 l / baik). Setelah langkah cuci, lempeng kemudian diinkubasi dengan
konjugat streptavidin-HRP (50
l / baik Pierce sensitivitas tinggi
streptavidin-HRP [Thermo Fisher Ilmiah fi c] diencerkan 1: 4000 dalam memblokir buffer) selama 1 jam pada 37 ° C. 3,3 =, 5,5 =
Tetramethylbenzidine (TMB; 50 l / baik; 1 komponen; SureBlue; KPL, Gaithersburg, MD) digunakan sebagai substrat, dan reaksi dibiarkan
berkembang selama 10 sampai 15 menit untuk sampel serum atau 7 menit untuk sampel plasma seminal pada suhu kamar dalam gelap
dan berhenti dengan menambahkan 50 l / baik dari 0,18 M larutan asam sulfat. Lempeng membaca pada panjang gelombang 450 nm
menggunakan Biotek Synergy H1 multimode lempeng pembaca (Biotek Instruments, Inc.). Sebuah menggenang sampel serum negatif dan
sampel plasma mani dimasukkan sebagai kontrol negatif pada setiap piring. Rata-rata kepadatan optik (OD) nilai-nilai dihitung setelah
pengurangan dari kosong untuk positif-negatif dan-capture sumur. A / negatif rasio positif (PNR) kemudian dihitung untuk setiap sampel,
sebagai berikut: PNR
(Berarti OD untuk positif
capture dari sampel uji / berarti OD untuk menangkap positif dari sampel kontrol negatif dikumpulkan). Nilai cutoff PNR dihitung
sebagai berikut: PNR cutoff (Berarti PNR untuk sampel prechallenge) 2 SD,
di mana SD adalah standar deviasi dari PNR untuk sampel prechallenge. Sebuah PNR dari 2 dianggap respon positif untuk semua
ELISA kecuali IgM-capture ELISA dilakukan pada plasma seminal, yang bertekad untuk memiliki nilai PNR cutoff dari 3.
Isotipe pemurnian dari serum dan plasma mani. Serum IgG1 dan seminal plasma IgA, IgG1, IgG3 / 5, dan IgG4 / 7 dari serum dan
plasma seminal sampel (diperoleh sebelum tantangan dan pada 726 dpi) dikumpulkan dari kuda pembawa jangka pendek (kuda jantan
L137, L138, L139, L141, L142 , dan L143) dan kuda pembawa jangka panjang (kuda L136 dan L140) yang dimurnikan menggunakan
kolom fi nity af digabungkan satu sama MAb untuk kuda-spesifik isotipe fi c immunoglobulin (AminoLink ditambah Micro imobilisasi kit
[Thermo Fisher ilmiah fi c]). Secara singkat, 200 l dari MAb (1 mg / ml) ditambah dukungan resin semalam pada suhu 4 ° C pada
akhir-over-end pencampuran, seperti yang direkomendasikan oleh produsen. Setelah MAb kopling, sisanya situs mengikat aktif pada resin
diblokir dengan solusi pendinginan penyangga dan natrium cyanoborohydride, seperti yang diperintahkan oleh produsen. Untuk afinitas
pemurnian, 300 l sampel (serum pooled murni atau plasma seminal sebelumnya klari fi ed dengan sentrifugasi pada 3000 g selama 15
menit pada 4 ° C) ditambahkan ke resin dan memungkinkan untuk mengikat selama 2 jam pada suhu kamar dengan end-over-end
pencampuran. Kolom kemudian dicuci seperti yang diperintahkan oleh produsen, dan imunoglobulin terikat dielusi dua kali menggunakan
100 l elusi penyangga (pH 2,8). Eluat segera dinetralkan dengan menambahkan 5 l dari 1 M Tris penyangga (pH 9,0) per 100 l dari eluat,
plasma IgA, IgG1, IgG3 / 5, dan IgG4 / 7. Aktivitas netralisasi dari puri fi ed immu- EAV-spesifik Responses mukosa Antibodi
dan puri fi imunoglobulin ed berada quanti fi ed oleh penentuan OD pada 280 nm menggunakan spektrofotometer (NanoDrop 2000
spektrofotometer; Thermo Fisher Ilmiah fi c). imunoglobulin dielusi dievaluasi dengan uji dot blot. Secara singkat, 5 l masing-masing eluat
itu dihiasi ke membran nitroselulosa (Bio-Rad) dan udara kering. Membran kemudian diblokir di 5% susu skim dalam 1 garam yang
mengandung 0,05% Tween 20 (TBS-T; pH 7,6) tris-buffered dan diinkubasi dengan MAbs ke imunoglobulin kuda (1 g / ml dalam memblokir
buffer) semalam pada 4 ° C. Setelah mencuci luas dengan TBS-T, membran bertitik diinkubasi dengan antibodi sekunder (kambing
anti-tikus IgG terkonjugasi dengan HRP diencerkan 1: 5000 dalam memblokir solusi) selama 1 jam pada suhu kamar dan dikembangkan
seperti yang ditunjukkan di bawah ini (lihat “Western imunoblotting ”bawah). Untuk memverifikasi spesifisitas dari eluat, membran
diinkubasi dengan kambing anti-kuda IgM terkonjugasi dengan HRP (diencerkan 1: 1000 dalam larutan blocking) selama 1 jam pada suhu
kamar dan kemudian dikembangkan seperti yang ditunjukkan di bawah ini.
Western imunoblotting. Western imunoblotting dilakukan untuk menentukan spesifisitas dari berbagai EAV-spesifik isotipe fi c
dalam serum dan plasma seminal untuk protein struktural virus. Secara singkat, gradien-dimurnikan EAV ketegangan VBS (28, 29)
itu resuspended dalam 5 Pierce jalur penanda mengurangi buffer sampel yang mengandung 0,3 M Tris-HCl, 5% SDS, 50% gliserol,
dan 100 mM dithiothreitol (DTT) (Thermo Fisher Ilmiah fi c) dan kemudian mengalami denaturasi SDS-PAGE pada penyelesaian gel
12% dan 4% stacking gel. Selanjutnya, protein virus mengalami HALAMAN basah dipindahkan ke sebuah poliviniliden di fluorida
(PVDF) membran (Bio-Rad) selama 1 jam pada 4 ° C. membran PVDF ditransfer yang secara singkat dicuci di TBS-T dan diblokir
dengan 5% susu skim di TBS-T semalam pada 4 ° C. membran PVDF diblokir itu secara singkat dibilas di TBS-T dan dimuat ke
miniblotter (20SL; Immunetics, Cambridge, MA). Menggenang sampel plasma seminal (diperoleh sebelum tantangan dan pada 726
dpi) ditambahkan murni (350 l / lane), sedangkan sampel serum pooled (diperoleh sebelum tantangan dan pada 726 dpi) diencerkan
1:20 dalam memblokir penyangga. g / ml dalam memblokir buffer) selama 1 jam pada suhu kamar dengan lembut goyang. Setelah
mencuci berikutnya, membran diinkubasi dengan kambing anti-tikus IgG (diencerkan 1: 5000 dalam memblokir buffer) selama 1 jam
pada suhu kamar dan dikembangkan dengan menggunakan SuperSignal Barat Pico substrat chemiluminescent (Thermo Fisher
Ilmiah fi c), seperti yang ditunjukkan oleh produsen. membran yang dikembangkan yang dicitrakan menggunakan c300 sistem
imager digital Azure (Azure Biosystems, Dublin, CA). Selain itu, satu jalur membran diperiksa dengan koktail antibodi (1 g / ml
masing-masing antibodi dalam memblokir buffer) spesifik untuk EAV GP5 (MAb 6D10), M (kelinci poliklonal antibodi 7888), dan N
(MAb 3E2) protein (28-30, 67, 68). Sebuah koktail antibodi sekunder yang mengandung kambing anti-mouse dan anti-rabbit IgG
(diencerkan 1: 5000 dalam memblokir buffer) kemudian digunakan.
Modi uji fi kasi microneutralization untuk menilai aktivitas netralisasi dari dimurnikan serum IgG1 dan puri fi ed mani

MEJA 2 Sistem imunohistokimia scoring digunakan untuk menilai spesifik sel immunoglobulinproducing plasma
infiltrasi pada kelenjar seks aksesori
Skor Jumlah sel plasma immunopositive Sebuah
0 tak satupun
1 5
2 5-40
3 41-80
4 80
Sebuah jumlah kumulatif sel plasma immunopositive di lima medan mikroskopis dengan total Magni fi kasi
400.
noglobulin isotipe berasal dari serum (IgG1) dan plasma seminal (IgA, IgG1, IgG3 / 5, dan IgG4 / 7) dievaluasi dalam uji ed
microneutralization modi fi. pengenceran secara singkat, seri 2 kali lipat (1: 4 sampai 1: 512) masing-masing puri fi persiapan ed
imunoglobulin disiapkan di 10 l dari EMEM (Cellgro) ditambah dengan 10% feritin-dilengkapi serum anak sapi (HyClone Laboratories,
Inc.) dan ditambahkan ke rangkap tiga sumur di piring 384-baik (Corning). Sepuluh mikroliter suspensi kerja strain vaksin
hidup-dilemahkan komersial EAV (strain MLV; vaksin ARVAC; Zoetis) yang mengandung 50 TCID 50 / 10 l di EMEM dilengkapi dengan
10% guinea pig pelengkap (Rockland Immunochemicals) ditambahkan ke setiap duplikat sumur, dan piring diinkubasi selama 1 jam
pada 37 ° C di 5% CO 2. Replikasi ketiga digunakan sebagai kontrol sitotoksisitas. Akhirnya, 40 l dari-bagian-tingginya angka RK-13
(KY) suspensi sel ditambahkan ke setiap baik, dan piring diinkubasi pada 37 ° C di 5% CO 2 selama 72 jam. Titer antibodi penetralisir
tercatat sebagai timbal balik dari pengenceran serum tertinggi yang disediakan minimal 75% netralisasi virus referensi. Menetralisir
titer antibodi yang kemudian diubah menjadi konsentrasi minimal spesifik isotype immunoglobulin (mikrogram per mililiter) yang
diperlukan untuk virus netralisasi.
Histopatologi dan TEM. Bagian dari formalin- yang tetap parafin fi (FFPE) jaringan n-tertanam (5 m) yang
diwarnai dengan hematoxylin dan eosin (H & E) mengikuti prosedur standar sebelum evaluasi histologis. bagian jaringan yang diteliti
oleh ahli patologi hewan berpengalaman yang buta dengan status pembawa kuda jantan, dan diagnosis morfologi diberikan. Pada lesi
inflamasi dicetak seperti yang dijelaskan sebelumnya oleh Carossino et al. (40). Untuk TEM, sampel fi xed seperti ditunjukkan di atas,
pasca fi xed di 1% osmium ferri (Oso 4) selama 1,5 jam pada 4 ° C, tertanam dalam resin Eponate12 (Ted Pella, Inc., Redding, CA), dan
dipolimerisasi selama 48 jam pada 60 ° C. bagian ultrathin diperoleh menggunakan Reichert Ultracut E ultramicrotome (Leica
Biosystems, Buffalo Grove, IL), dikumpulkan pada grid tembaga, dan counterstained dengan 4% larutan uranil asetat dan sitrat
memimpin Reynold. Gambar yang diperoleh dengan menggunakan Philips Tecnai BioTwin 12 mikroskop elektron transmisi (FEI,
Hillsboro, OR).
Imunohistokimia. Bagian dari jaringan FFPE (5 m) yang dipasang pada bermuatan positif
slide Superfrost Plus (Fisher Ilmiah fi c, Pittsburgh, PA) dan dikeringkan semalam pada 37 ° C. Untuk IgA, IgM, IgG1, IgG3 / 5, dan IgG4 / 7
immunostaining, deparaf fi nization dilakukan seperti yang dijelaskan sebelumnya (40). Akibat panas epitop pengambilan (Hier) dilakukan
dengan menggunakan berbasis sitrat dimodifikasi solusi siap digunakan (pH 6.1; Dako, Carpinteria, CA) pada 96 ° C selama 30 menit.
Slide dibiarkan dingin selama 20 menit dan dicuci tiga kali dalam 1 PBS. Immunostaining dilakukan dengan menggunakan Obligasi Polimer
Re fi ne Deteksi kit (Leica Biosystems), dan bagian jaringan yang counterstained dan dipasang seperti dijelaskan sebelumnya (40). bagian
tonsil Palatine digunakan sebagai baik positif dan negatif (tanpa antibodi primer inkubasi) kontrol. Jumlah kumulatif sel plasma
imunohistokimia-positif dalam lima tinggi Magni fi kasi ( 400) medan adalah quanti fi ed, dan skor ditugaskan, seperti yang ditunjukkan pada
Tabel 2.
Analisis statistik. distribusi data, statistik deskriptif, plot, dan uji statistik yang dihasilkan menggunakan JMP10 statistik
perangkat lunak analisis (SAS, Cary, NC). Normalitas dan varians yang sama dinilai oleh Shapiro-Wilk dan uji Hartley,
masing-masing. Menetralisir Data antibodi kekurangan normalitas; akibatnya, tes nonparametrik digunakan untuk analisis statistik (uji
Kruskal-Wallis dan uji Wilcoxon signedrank). Analisis varians (ANOVA) digunakan untuk membandingkan ELISA PNRs antara
pendek dan operator jangka panjang kuda jantan dan antara titik data (hari postinfection). Untuk yang terakhir, uji Dunnett ini
digunakan untuk beberapa perbandingan menggunakan PNRs dasar (prechallenge) sebagai kontrol. Data set yang tidak sesuai
dengan asumsi varians yang sama (serum dan IgG3 mani / 5 dan IgG4 / 7 PNRs antara pendek dan operator jangka panjang kuda)
dianalisis menggunakan uji Welch. analisis korelasi antara serum menetralkan titer antibodi dan serum IgG1 PNR, serta antara
serum netralisasi antibodi dan titer viremia, dilakukan dengan metode korelasi rank Spearman. Statistik signifikansi ditetapkan pada P
Nilai dari 0,05 untuk semua tes yang dilakukan.
UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian ini didukung penuh oleh Pertanian dan Food Research Initiative hibah kompetitif tidak.
2013-68004-20360 dari USDA National Institute of Food and Agriculture.
Kami mengakui laboratorium Bettina Wagner di Cornell University untuk penyediaan reagen
imunologi, Diane Furry untuk bantuan dengan persiapan angka, dan Kathleen Shuck untuk
proofreading naskah.
Kami menyatakan tidak ada ik con fl kepentingan.

EAV-Speci fi c Responses mukosa Antibodi Klinis dan Vaksin Imunologi
REFERENSI
1. Balasuriya UB, Go YY, MacLachlan NJ. 2013. Equine virus arteritis. Vet Microbiol 167: kuda jantan. PLoS Genet 12: e1006467. https://doi.org/10.1371/journal
93-122. https://doi.org/10.1016/j.vetmic.2013.06.015 . . pgen.1006467 .
2. Snijder EJ, van Tol H, Pedersen KW, Raamsman MJ, de Vries AA. 1999. Identi fi kasi dari 23. Go YY, Bailey E, Timoney PJ, Shuck KM, Balasuriya UB. 2012. Bukti bahwa dalam
protein struktural novel arteriviruses. J Virol 73: 6335-6345. kerentanan vitro dari CD3 T limfosit untuk kuda infeksi virus arteritis re fl Ects predisposisi
genetik kuda jantan yang terinfeksi secara alami untuk menjadi pembawa virus. J Virol 86:
3. Firth AE, Zevenhoven-Dobbe JC, Wills NM, Go YY, Balasuriya UB, Atkins JF, Snijder EJ, 12.407-12.410. https: // doi
Posthuma CC. 2011. Penemuan gen arterivirus kecil yang tumpang tindih GP5 coding . org / 10,1128 / JVI.01698-12 .
urutan dan penting untuk produksi virus. J Gen Virol 92: 1097-1106. https://doi.org/10.1099/vir.0 24. Miszczak F, Legrand L, Balasuriya UB, Ferry-Abitbol B, Zhang J, Hans A, Fortier G, Pronost
S, Vabret A. 2012. Munculnya novel kuda arteritis virus (EAV) varian selama infeksi
. 029.264-0 . persisten di kuda yang: asal wabah 2007 EAV Perancis terkait dengan EAV ketegangan
4. Snijder EJ, Kikkert M, Fang Y. 2013. arterivirus biologi molekuler dan patogenesis. J Gen hadir dalam air mani pembawa kuda terus-menerus terinfeksi. Virologi 423: 165-174.
Virol 94: 2141-2163. https://doi.org/10.1099/vir.0
. 056.341-0 . https://doi.org/10.1016/j.virol.2011.11.028 .
5. Balasuriya U, MacLachlan NJ. 2013. arteritis virus Equine, p 169-181. Di 25. Zhang J, Timoney PJ, Shuck KM, Seoul G, Go YY, Lu Z, Powell DG, Meade BJ, Balasuriya
Sellon DC, Long MT (ed), penyakit menular Equine, 2nd ed. Saunders, St Louis, MO. UB. 2010. epidemiologi molekuler dan karakterisasi genetik dari virus arteritis kuda isolat
terkait dengan 2006-2007 multi-keadaan penyakit terjadinya di Amerika Serikat. J Gen Virol
6. Cavanagh D. 1997. Nidovirales: suatu tatanan baru yang terdiri Coronaviridae dan Arteriviridae. 91: 2286-2301.
Arch Virol 142: 629-633. https://doi.org/10.1099/vir.0.019737-0 .
7. Snijder EJ, Meulenberg JJ. 1998. biologi molekuler dari arteriviruses. J Gen Virol 79 (Pt 5): 26. Hedges JF, Balasuriya UB, Timoney PJ, McCollum WH, MacLachlan NJ.
961-979. https://doi.org/10.1099/0022-1317-79-5-961 . 1999. divergensi genetik dengan munculnya varian fenotipik novel virus arteritis kuda
8. Dunowska M, Biggs PJ, Zheng T, Perrott MR. 2012. Identi fi kasi dari nidovirus baru terkait selama infeksi persisten kuda jantan. J Virol 73: 3672-3681.
dengan penyakit neurologis dari possum Brushtail Australia (Trichosurus Vulpecula). Vet
Microbiol 156: 418-424. 27. Balasuriya UB, Hedges JF, Nadler SA, McCollum WH, Timoney PJ, MacLachlan NJ. 1999.
https://doi.org/10.1016/j.vetmic.2011.11.013 . Stabilitas genetik dari virus arteritis kuda selama transmisi horisontal dan vertikal di wabah
9. Bryans JT, Crowe ME, Doll ER, McCollum WH. 1957. Isolasi agen lterable fi menyebabkan arteritis virus kuda. J Gen Virol 80: 1949-1958. https://doi.org/10.1099/0022-1317
arteritis kuda dan aborsi dengan kuda; diferensiasi dari aborsi kuda (di influenza fl) virus.
Cornell Vet 47: 3-41. - 80-8-1949 .
10. Timoney PJ, McCollum WH. 1987. arteritis virus Equine. Bisa Vet J 28: 693-695. 28. Balasuriya UB, Rossitto PV, DeMaula CD, MacLachlan NJ. 1993. Sebuah 29K amplop
glikoprotein virus arteritis kuda mengekspresikan penentu netralisasi diakui oleh antibodi
monoklonal murine. J Gen Virol 74 (Pt 11): 2525-2529. https://doi.org/10.1099/0022-1317-74-11-2525
11. Balasuriya U. 2014. arteritis virus Equine. Vet Clin Utara Am Equine Pract 30: 543-560. https://doi.org/10.1016/j.cveq.2014.08.011
. .
12. Balasuriya UBR, Carossino M, Timoney PJ. 10 November 2016. arteritis virus Equine: 29. Balasuriya UB, MacLachlan NJ, De Vries AA, Rossitto PV, Rottier PJ. 1995. Identi fi kasi dari
penyakit pernapasan dan reproduksi signi fi kepentingan ekonomi tidak bisa untuk industri situs netralisasi dalam amplop besar glikoprotein (GL) dari virus arteritis kuda. Virologi 207:
kuda. Equine Vet Educ. https: // doi 518-527. https://doi.org/10
. org / 10,1111 / eve.12672 . . 1006 / viro.1995.1112 .
13. Timoney PJ, McCollumWH, Roberts AW, Murphy TW. 1986. Demonstrasi dari negara pembawa 30. Balasuriya UB, Patton JF, Rossitto PV, Timoney PJ, McCollum WH, MacLachlan NJ. 1997.
infeksi virus arteritis kuda diperoleh secara alami dalam kuda tersebut. Res Vet Sci 41: 279-280. penentu Netralisasi strain laboratorium dan lapangan isolat dari kuda virus arteritis:
identifikasi dari empat lokasi netralisasi dalam ectodomain amino-terminal dari G (L)
14. Timoney PJ, McCollumWH, Murphy TW, Roberts AW, Willard JG, Carswell GD. 1987. carrier glikoprotein amplop. Virologi 232: 114-128. https://doi.org/10.1006/viro.1997.8551 .
pada infeksi virus arteritis kuda di kuda dengan spesifik penekanan pada modus kelamin
penularan virus. J Reprod Fertil Suppl 35: 95-102. 31. Balasuriya UB, Dobbe JC, Heidner HW, Smalley VL, Navarrette A, Snijder EJ, MacLachlan
NJ. 2004. Karakterisasi penentu netralisasi virus arteritis kuda menggunakan virus chimeric
15. Timoney PJ, McCollum WH. 1993. arteritis virus Equine. Vet Clin Utara Am Equine Pract 9: rekombinan dan situs-spesifik mutagenesis dari klon cDNA menular. Virologi 321: 235-246. https://doi.org/10.1016
295-309. https://doi.org/10.1016/S0749-0739(17) 30.397-8 . .
16. Holyoak GR Little TV, McCollum WH, Timoney PJ. 1993. Hubungan antara pubertas dan 32. Balasuriya UB, MacLachlan NJ. 2004. Respon imun untuk kuda virus arteritis: pelajaran
pembentukan infeksi persisten dengan virus arteritis kuda di colt eksperimental terinfeksi. J potensi arteriviruses lainnya. Vet Immunol Immunopathol 102: 107-129. https://doi.org/10.1016/j.vetimm.2004.09
Comp Pathol 109: 29-46. https://doi.org/10.1016/S0021-9975(08)80238-1 .
. 003 .
17. Balasuriya UB, Snijder EJ, van Dinten LC, Heidner HW, WilsonWD, Hedges JF, Hullinger PJ, 33. Glaser AL, de Vries AA, Dubovi EJ. 1995. Perbandingan virus arteritis kuda isolat
MacLachlan NJ. 1999. virus arteritis Equine berasal dari klon cDNA menular adalah dilemahkan menggunakan antibodi monoklonal dan identifikasi urutan perubahan GL berhubungan
dengan resistensi netralisasi. J Gen Virol 76 (Pt 9): 2223-2233. https://doi.org/10.1099/0022-1317
dan genetik yang stabil di kuda jantan yang terinfeksi. Virologi 260: 201-208. https://doi.org/10.1006/viro.1999.9817
.
18. Glaser AL, de Vries AA, Rottier PJ, Horzinek MC, Colenbrander B. 1996. Equine virus - 76-9-2223 .
arteritis: review fitur klinis dan aspek manajemen. Vet Q 18: 95-99. https://doi.org/10.1080/01652176.1996.9694625
34. Balasuriya UB, Heidner HW, Davis NL, Wagner HM, Hullinger PJ, Hedges JF, Williams JC,
. Johnston RE, Wilson WD, Liu IK, MacLachlan NJ. 2002. Alphavirus partikel replicon
19. Balasuriya UB, Hedges JF, Smalley VL, Navarrette A, McCollum WH, Timoney PJ, Snijder mengekspresikan dua protein amplop besar dari virus arteritis kuda menginduksi
EJ, MacLachlan NJ. 2004. Karakterisasi genetik virus arteritis kuda selama infeksi persisten perlindungan tingkat tinggi terhadap tantangan dengan virus virulen pada kuda divaksinasi.
kuda jantan. J Gen Virol 85: 379-390. https://doi.org/10.1099/vir.0.19545-0 . Vaksin 20: 1609-1617.
https://doi.org/10.1016/S0264-410X(01)00485-6 .
20. Balasuriya UBR, Sarkar S, Carossino M, Go YY, Chelvarajan L, Masak RF, Loynachan AT, 35. McCollumWH. 1969. Pengembangan modi fi virus ed saring dan vaksin untuk arteritis virus
Timoney PJ, Bailey E. faktor 2016. Tuan rumah yang berkontribusi terhadap kuda virus arteritis kuda. J Am Vet Med Assoc 155: 318-322.
36. Fukunaga Y, McCollum WH. 1977. Reaksi fi xation Complement- di arteritis virus kuda. Am J
ketekunan dalam kuda yang: update. J Equine Vet Sci 43: S11-S17. https://doi.org/10.1016/j.jevs.2016.05.017
. Vet Res 38: 2043-2046.
21. Timoney PJ, McCollum WH. 2000. arteritis virus Equine: karakterisasi lebih lanjut dari negara 37. McCollum WH, Timoney PJ, Tengelsen LA. 1995. tanggapan klinis, virologi dan serologi dari
pembawa di kuda jantan. J Reprod Fertil Suppl 56: 3-11. keledai untuk intranasal inokulasi dengan KY-84 strain virus arteritis kuda. J Comp Pathol
22. Sarkar S, Bailey E, Go YY, Masak RF, Kalb fl eisch T, Eberth J, Chelvarajan RL, Shuck KM, 112: 207-211. https: // doi.org/10.1016/S0021-9975(05)80062-3 .
Artiushin S, Timoney PJ, Balasuriya UB. 2016. variasi Alelik di CXCL16 menentukan CD3 T
limfosit kerentanan terhadap infeksi virus arteritis kuda dan pembentukan carrier jangka 38. MacLachlan NJ, Balasuriya UB, Hedges JF, Schweidler TM, McCollumWH, Timoney PJ,
panjang dalam Hullinger PJ, Patton JF. 1998. serologi respon kuda

dengan protein struktural virus arteritis kuda. J Vet Diagn Invest 10: 229-236. https://doi.org/10.1177/104063879801000302
Menanggapi semen. Anim Reprod Sci 68: 273-278. https://doi.org/10
. . 1016 / S0378-4320 (01) 00.164-6 .
39. Go YY, Snijder EJ, Timoney PJ, Balasuriya UB. 2011. Karakterisasi respon antibodi humoral 54. Altan-Bonnet N. 2016. vesikel ekstraseluler adalah kuda Trojan infeksi virus. Curr Opin
kuda dengan protein nonstruktural dari virus arteritis kuda. Clin Vaksin Immunol 18: Microbiol 32: 77-81. https://doi.org/10.1016/j.mib
268-279. https://doi.org/ . 2016.05.004 .
10,1128 / CVI.00444-10 . 55. Roos A, Bouwman LH, van Gijlswijk-Janssen DJ, Faber-Krol MC, Stahl GL, Daha MR. 2001.
40. Carossino M, Loynachan AT, Canisso IF, Campos JR, Nam B, Go YY, Squires EL, Manusia IgA mengaktifkan sistem komplemen melalui lintasan mbl mannan-mengikat. J
Troedsson MHT, Masak RF, Swerczek T, Del Piero F, Bailey E, Timoney PJ, Balasuriya Immunol 167: 2861-2868. https: // doi
UBR. 2017. virus arteritis Equine memiliki spesifik tropisme untuk sel stroma dan CD8 T dan . org / 10,4049 / jimmunol.167.5.2861 .
CD21 limfosit B tetapi tidak untuk epitel kelenjar di situs utama dari infeksi persisten pada 56. Kaetzel CS. 2005. polimer immunoglobulin reseptor: menjembatani respon imun bawaan dan
saluran reproduksi kuda. J Virol 91: e00418-17. https://doi.org/10.1128/ JVI.00418-17 . adaptif pada permukaan mukosa. Immunol Rev 206: 83-99. https://doi.org/10.1111/j.0105-2896.2005.00278.x
.
57. Spiekermann GM, Finn PW, Ward ES, Dumont J, Dickinson BL, Blumberg RS, Lencer WI. 2002.
41. Campos JR, Breheny P, Araujo RR, Troedsson MH, Squires EL, Timoney PJ, Balasuriya UB. Receptor-dimediasi imunoglobulin G transportasi di seluruh hambatan mukosa dalam
kualitas 2014. Semen kuda jantan ditantang dengan Kentucky 84 strain virus arteritis kuda. kehidupan dewasa: ekspresi fungsional FcRn di paru-paru mamalia. J Exp Med 196: 303-310. https://doi.org/10.1084/j
Theriogenology 82: 1068-1079.

https://doi.org/10.1016/j.theriogenology.2014.07.004 . . 20020400 .
42. Keggan A, Freer H, Rollins A, Wagner B. 2013. Produksi tujuh imunoglobulin kuda 58. Dickinson BL, Badizadegan K, Wu Z, Ahouse JC, Zhu X, Simister NE, Blumberg RS, Lencer
WI. transportasi IgG 1999. Bidirectional FcRn-dependent dalam garis sel terpolarisasi
monoklonal isotyped dengan analisis multipleks. Vet Immunol Immunopathol 153: 187-193. https://doi.org/10.1016/j
manusia usus epitel. J Clin Invest 104: 903-911. https://doi.org/10.1172/JCI6968 .
. vetimm.2013.02.010 .
59. Hedges JF, Demaula CD, Moore BD, McLaughlin BE, Simon SI, MacLachlan NJ. 2001.
43. Wagner B. 2006. Imunoglobulin dan immunoglobulin gen dari kuda. Dev Comp Immunol 30:
Karakterisasi kuda E-selectin. Imunologi 103: 498-504.
155-164. https://doi.org/10.1016/j.dci
https://doi.org/10.1046/j.1365-2567.2001.01262.x .
. 2005.06.008 .
Organisasi 60. Dunia untuk Kesehatan Hewan (OIE). 2016. arteritis virus Equine.
44. Lewis MJ, Wagner B, Woof JM. 2008. Kemampuan fungsi efektor yang berbeda dari tujuh
Di OIE Biologi Standar Komisi (ed), Manual tes diagnostik dan vaksin untuk hewan darat, ed
subclass IgG kuda memiliki implikasi untuk strategi vaksin. Mol Immunol 45: 818-827. https://doi.org/10.1016/j
7, vol 2. Organisasi Dunia untuk Kesehatan Hewan (OIE), Paris, Perancis.
. molimm.2007.06.158 .
61. Dewan Riset Nasional. 2011. Panduan untuk perawatan dan penggunaan hewan laboratorium,
45. Goodman LB, Wimer C, Dubovi EJ, Gold C, Wagner B. 2012. berkorelasi imunologi vaksinasi
8 ed. Akademi Nasional Press, Washington, DC.
dan infeksi untuk kuda virus herpes 1. Clin Vaksin Immunol 19: 235-241. https://doi.org/10.1128/CVI.05522-11
62. Balasuriya UB, Snijder EJ, Heidner HW, Zhang J, Zevenhoven-Dobbe JC, Boone JD,
.
McCollum WH, Timoney PJ, MacLachlan NJ. 2007. Pengembangan dan karakterisasi dari
46. Wagner B, Goodman LB, Babasyan S, Freer H, Torsteinsdottir S, Svansson
klon cDNA menular dari Bucyrus galur virulen virus arteritis kuda. J Gen Virol 88: 918-924. https:
V, Bjornsdottir S, Perkins GA. 2015. Antibodi dan respon imun seluler kuda naif untuk
// doi.org/10.1099/vir.0.82415-0 .
vaksinasi diulang dengan vaksin virus herpes kuda tidak aktif. Vaksin 33: 5588-5597. https://doi.org/10
63. Wagner B, Glaser A, Hillegas JM, Erb H, Gold C, Freer H. 2008. monoklonal antibodi untuk
. 1016 / j.vaccine.2015.09.009 .
kuda IgM meningkatkan sensitivitas West Nile virusspeci fi c IgM deteksi pada kuda. Vet
47. Khatibzadeh SM, Gold CB, Keggan AE, Perkins GA, Glaser AL, Dubovi EJ, Wagner B. 2015.
Immunol Immunopathol 122: 46-56. https://doi.org/10.1016/j.vetimm.2007.10.013 .
West Nile virus-spesifik respon imunoglobulin isotipe pada kuda yang divaksinasi dan
terinfeksi. Am J Vet Res 76: 92-100.
64. Sheoran AS, Timoney JF, Holmes MA, Karzenski SS, Crisman MV. 2000. Immunoglobulin
https://doi.org/10.2460/ajvr.76.1.92 .
isotipe di sera dan sekresi mukosa hidung dan mentransfer neonatal dan distribusi di kuda.
48. Soboll Hussey G, Hussey SB, Wagner B, Horohov DW, Van de Walle GR, Osterrieder N,
Am J Vet Res 61: 1099-1105.
Goehring LS, Rao S, Lunn DP. 2011. Evaluasi respon imun setelah infeksi dari kuda
https://doi.org/10.2460/ajvr.2000.61.1099 .
dengan penghapusan mutan EHV-1 ORF1 / 2. Vet Res 42:23. https://doi.org/10.1186/1297-9716-42-23
65. Sheoran AS, Lunn DP, Holmes MA. 1998. Antibodi monoklonal subclass-spesifik determinan
. antigenik pada rantai immunoglobulin gamma kuda dan karakterisasi mereka. Vet Immunol
49. Soboll G, Horohov DW, Aldridge BM, Olsen CW, McGregor MW, Drape RJ, Macklin MD, Immunopathol 62: 153-165. https://doi.org/10.1016/S0165-2427(97)00162-1 .
Swain WF, Lunn DP. 2003. antibodi dan sel respon imun Regional untuk kuda pada infeksi
virus influenza fl, dan partikel dimediasi vaksinasi DNA. Vet Immunol Immunopathol 94: 66. Go YY, Zhang J, Timoney PJ, Masak RF, Horohov DW, Balasuriya UB. 2010. interaksi
47-62. kompleks antara protein amplop besar dan kecil dari virus arteritis kuda menentukan
https://doi.org/10.1016/S0165-2427(03)00060-6 . tropisme untuk limfosit CD3 T kuda dan CD14 monosit. J Virol 84: 4898-4911. https://doi.org/
50. Hardiyanto L, Hasegawa A, Komori S. 2012. karbohidrat bagian N-linked dari saluran
reproduksi pria CD52 (mrt-CD52) mengganggu sistem komplemen melalui pengikatan C1q. 10,1128 / JVI.02743-09 .
J Reprod Immunol 94: 142-150. 67. MacLachlan NJ, Balasuriya UB, Rossitto PV, Hullinger PA, Patton JF, Wilson WD. 1996.
https://doi.org/10.1016/j.jri.2012.01.002 . Infeksi Fatal eksperimental kuda virus arteritis dari kuda betina hamil: pewarnaan
51. Petersen BH, Lammel CJ, Stites DP, Brooks GF. 1980. Manusia penghambatan plasma mani imunohistokimia antigen virus. J Vet Diagn Invest 8: 367-374. https://doi.org/10.1177/104063879600800316
komplemen. J Lab Clin Med 96: 582-591. .
52. Brooks GF, Lammel CJ, Petersen BH, Stites DP. 1981. Manusia penghambatan plasma 68. Go YY, Wong SJ, Branscum AJ, Demarest VL, Shuck KM, Vickers ML, Zhang J, McCollum
seminal antibodi komplemen-dimediasi pembunuhan dan opsonisasi dari Neisseria WH, Timoney PJ, Balasuriya UB. 2008. Pengembangan fl uorescent-microsphere
gonorrhoeae dan organisme gram negatif lainnya. J Clin Invest 67: 1523-1531. https://doi.org/10.1172/JCI110183
immunoassay untuk mendeteksi antibodi spesifik untuk virus arteritis kuda dan
. perbandingan dengan uji netralisasi virus. Clin Vaksin Immunol 15: 76-87. https://doi.org/10.1128/CVI
53. Troedsson MH, Loset K, Alghamdi AM, DAHMS B, Crabo BG. 2001. Interaksi antara semen
kuda dan endometrium: dalam inflamasi . 00.388-07 .

KELOMPOK 4. Equine Arteritis Virus Elicits A Mucosal - En.id

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

KELOMPOK 4. Equine Arteritis Virus Elicits A Mucosal - En.id

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Lihat diskusi, statistik, dan profil penulis untuk publikasi ini di: https://www.researchgate.

Equine Arteritis Virus memunculkan mukosa Antibodi Respon

Artikel di Klinis dan Vaksin Imunologi · Agustus 2017

Carossino Frank Masak

University of Kentucky University of Kentucky

18 PUBLIKASI 33 CITATIONS 95 PUBLIKASI 1.829 CITATIONS

MELIHAT PROFIL MELIHAT PROFIL

Igor Canisso Lakshman Chelvarajan

University of Illinois, Urbana-Champaign University of Kentucky

89 PUBLIKASI 191 CITATIONS 37 PUBLIKASI 637 CITATIONS

MELIHAT PROFIL MELIHAT PROFIL

Beberapa penulis publikasi ini juga bekerja pada proyek-proyek terkait:

EAV cELISA Lihat proyek

Toksikologi reproduksi Lihat proyek Mariano

Pengguna telah meminta peningkatan file yang didownload.

Equine Arteritis Virus memunculkan mukosa Antibodi

nsp12) menginduksi imunitas humoral (38, 39).

Oktober 2017 Volume 24 Issue 10 e00215-17 cvi.asm.org 2

0,54), menunjukkan bahwa

Oktober 2017 Volume 24 Issue 10 e00215-17 cvi.asm.org 3

20, dengan variasi individu dalam respon) (Gambar. 2A) dari

Oktober 2017 Volume 24 Issue 10 e00215-17 cvi.asm.org 4

Oktober 2017 Volume 24 Issue 10 e00215-17 cvi.asm.org 5

Oktober 2017 Volume 24 Issue 10 e00215-17 cvi.asm.org 6

Oktober 2017 Volume 24 Issue 10 e00215-17 cvi.asm.org 7

Oktober 2017 Volume 24 Issue 10 e00215-17 cvi.asm.org 8

Oktober 2017 Volume 24 Issue 10 e00215-17 cvi.asm.org 9

Oktober 2017 Volume 24 Issue 10 e00215-17 cvi.asm.org 10

Oktober 2017 Volume 24 Issue 10 e00215-17 cvi.asm.org 11

Oktober 2017 Volume 24 Issue 10 e00215-17 cvi.asm.org 12

BAHAN DAN METODE

4) tetap tidak terpapar dan tidak divaksinasi terhadap EAV.

Oktober 2017 Volume 24 Issue 10 e00215-17 cvi.asm.org 13

Spesifik kota fi Clone Aplikasi Sebuah Sumber (referensi)

Oktober 2017 Volume 24 Issue 10 e00215-17 cvi.asm.org 14

Oktober 2017 Volume 24 Issue 10 e00215-17 cvi.asm.org 15

Skor Jumlah sel plasma immunopositive Sebuah

UCAPAN TERIMA KASIH

Oktober 2017 Volume 24 Issue 10 e00215-17 cvi.asm.org 16

Oktober 2017 Volume 24 Issue 10 e00215-17 cvi.asm.org 17

Theriogenology 82: 1068-1079.

Oktober 2017 Volume 24 Issue 10 e00215-17 cvi.asm.org 18

Anda mungkin juga menyukai