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I PARCIAL DE BACTERIOLOGIA
PRACTICO VALIDO PARA LA
EVALUACIÓN TRIMESTRAL

COLABORACION DE LA CATEDRA
DE BACTERIOLOGIA PRACTICA
PARA LOS ESTUDIANTES
SIN COSTO ALGUNO.

ESTE DOCUMENTO PUEDE SER

REPRODUCIDO SIN NINGUN
PROBLEMA LEGAL
“DIGALE NO A LA CORRUPCIÓN Y
NO A LA COMPRA DE FOLLETOS A
CAMBIO DE PUNTOS.”

Nota: Cada Presidente de grupo

acercarse a la secretaria con un diskette
de 3 ½ copiar y distribuir entre sus
compañeros.

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INDICE
 INTRODUCCION.
 BIOSEGURIDAD EN MICROBIOLOGIA.
 INSTRUMNETOS UTILIZADOS EN BACTERIOLOGIA PRACTICA.
 TOMA DE MUESTRAS.
 ESTUDIO MICROBIOLOGICO DE COLECCIONES SUPURATIVAS.
 MUESTRAS ESPECIALES PARA EL DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO.
 TECNICAS EN PREPARACION DE FROTIS Y SU FIJACION.
 METODOS FISIOLOGICOS DE IDENTIFICACION BACTERIANA.
 TECNICAS DE COLORACION DE LAS BACTERIAS.
 MEDIOS DE CULTIVOS DE USOS FRECUENTES EN BACTERIOLOGIA.
 FAMILIA MICROCOCACEAE.
 AUTOVACUNAS.
 FAMILIA ESTREPTOCOCACEAE.
 FAMILIA NEISERIACEAE.
 ENFERMEDADES DE TRANSMISION SEXUAL (E.T.S.) CHLAMYDIAS.
 BACTERIAS BACILARES.
 COPROCULTIVO.
 FAMILIA VIBRIOCEAE.
 UROCULTIVO.
 HEMOCULTIVO.
 ANTIBIOGRAMA.
 REACCIONES INMUNOLOGICAS BACTERIANAS
 REACCIONES BIOQUIMICAS DE LA ENTEROBACTERIAS.
 DIAGNOSTICO DE BACTERIAS ANAEROBIAS.
 CONTROL DE CALIDAD EN MICROBIOLOGIA.
 ESPIROQUETAS (TREPONEMAS,LEPTOPIRAS Y BORRELIAS)

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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIAS MEDICAS

“GUIA PRACTICA DE BACTERIOLOGIA”

AUTORES:

DR. MIGUEL VARGAS DRA. JOSEFINA RAMIREZ

DR. JUAN MORENO
DR. ERNESTO RONQUILLO
DR. EDMUNDO BUÑAY
DR. CARLOS MOSQUERA
DR. EDUARDO FLORENCIA
DR. ROBERTO VILLACIS.
DRA. HILDA ROSADO
DRA. MARTHA GUEVARA( +)
DRA. JANETT RECALDE
DR. JULIO ROMERO
DR. JULIO GUZMAN
DR. GONZALO ZAVALA

DR: EDUARDO CHANCAY LOPEZ

"COORDINADOR DE LA CATEDRA"

GUAYAQUIL NOVIEMBRE 1995

REVISADO Y ACTUALIZADO EN JULIO 2002

POR EL DR : EDUARDO CHANCAY L .
PROFESOR PRINCIPAL DE LA CATEDRA.

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INTRODUCCION

Esta guía de trabajos prácticos de la Cátedra de Bacteriología de la Facultad de

Ciencias Médicas de la Universidad Estatal de Guayaquil, nace como una
alternativa didáctica científica, a la propuesta del Rectorado de la referida
Universidad de realizar un trabajo monográfico para el ascenso de Profesores
Auxiliares a Profesores Agregados, y la misma se propone los siguientes objetivos:

OBJETIVOS GENERALES:

1. - Aplicar los conocimientos teóricos-prácticos de la Asignatura.

2. - Ampliar los conocimientos actuales acerca de las Bacterias, y los variados
métodos para su diagnóstico.
3. - Profundizar en las técnicas de Diagnóstico Bacteriológico.
4. - Describir algunos procedimientos fundamentales de la microscopía
Bacteriana.
5. - Utilizar adecuadamente los métodos de aislamiento de los Cultivos
Bacterianos.
6. - Demostrar técnicas específicas de tinción General y especial de las
Bacterias.
7. - Usar los instrumentos adecuados en Bacteriología.
8. - Estudiar la estructura y función de las células bacterianas.
9. - Dar instrucciones específicas sobre Bioseguridad.
10. - Seleccionar Material adecuado como: Audiovisuales, Gráficos y variadas
preguntas de evaluación.
11. - Describir técnicas actuales sobre Inmunología Bacteriana.
12. - Conocer e identificar los Diferentes Medios de Cultivos
Utilizados en Bacteriología.

La referida guía contiene varios procedimientos y técnicas comunes. Además se ha

incluido gráficos, dibujos y varias preguntas para evaluación formativa. Así mismo,
al final de cada capítulo se ha incluido una pequeña bibliografía para el estudiante
que desee obtener una información adicional sobre los principios y fenómenos
descritos.
Pretendemos al mismo tiempo la ambición de aplicarlo a nuestra Facultad, aún en
las crisis económica que incide en la adquisición de los recursos materiales que se
necesitan para desarrollar nuestro trabajo.

Intentamos por lo tanto clarificar y difundir un nuevo enfoque paradigmático en los

procesos de Enseñanza-Aprendizaje en forma sencilla, pero apoyados en el avance
de la ciencia y la tecnología Educativa Superior.

Dr. Eduardo Chancay López

COORDINADOR DE LA CATEDRA DE
BACTERIOLOGIA

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AUTOR:DR EDUARDO CHANCAY L

BIOSEGURIDAD EN MICROBIOLOGIA
La Facultad de CC.MM. No tiene ningún estudio acerca de las
enfermedades ocasionadas por las prácticas que nuestros estudiantes y
docentes realizan a diario en las diferentes cátedras en las que
utilizamos materiales de alto riesgo, sea éste: Químico, Físico,
Biológico, Humano e infeccioso.
Es por esta razón que nuestra Cátedra incorporará desde la presente
guía, éste capítulo de Bioseguridad en Microbiología, con el objetivo de:
1. - Conocer y Aplicar el concepto y los principios de BIOSEGURIDAD
EN MICROBIOLOGIA.
2. - Dar una serie de normas para la manipulación correcta de agentes
infecciosos, que los Profesores Auxiliares y estudiantes realizaremos
durante todo el año lectivo.
DEFINICION.-
La Bioseguridad es la disciplina que se ocupa de la Prevención de
Riesgo Biológico en personas, directa o indirectamente expuestos al
mismo, producto de un trabajo de manipulación de agentes infecciosos.
Las medidas de Bioseguridad recomendada para los que trabajan con
gérmenes patógenos están encomendadas a la Seguridad General y a la
Particular de nuestros estudiantes y docentes.
PRINCIPIOS DE LA BIOSEGURIDAD.-
La Bioseguridad consta de tres principios básicos, para garantizar el
aislamiento o contención adecuada de los agentes infecciosos (Bacterias
en nuestro caso). Las mismas son:
a.- Técnicas y Prácticas correctas en el laboratorio.
b.- Equipos de Seguridad.
C.- Diseño adecuado de las instalaciones del Laboratorio.
a.- TECNICAS Y PRACTICAS.-
Es el elemento más importante para la Bioseguridad y tiene el mayor
peso en la Prevención Eficiente del Riesgo Biológico y recoge los
procedimientos básicos del trabajo prácticas de Higiene Personal y la
conducta que deben observar los docentes y dicentes

b.- EQUIPOS DE BIOSEGURIDAD.-

A los equipos de seguridad se los denomina también “Barreras
primarias”, ya que constituyen la barrera directa entre el personal y
el material infeccioso. Por ej. :

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- Instrumento de pipeteo,
- Copas de seguridad para centrífugas,
- Guantes
- Mandil
- Máscara respiratorias o faciales
- etc.
c.- DISEÑO ADECUADO DE LAS INSTALACIONES.-
A las instalaciones se las denomina “Barreras Secundarias”, ya
que garantiza la protección del personal que trabaja en el edificio y
fuera del laboratorio así como de la comunidad, del posible escape
accidental de agentes infecciosos del laboratorio de Microbiología.
NORMAS PARA LA BIOSEGURIDAD.
1. - Usar mandil largo adecuado durante las prácticas y quitárselo antes
de abandonar el laboratorio.
2. - No sacar jamás equipos, medios de cultivos con Bacterias fuera del
laboratorio.
3. - No pipetear con la boca.
4. - No comer, beber, fumar, guardar alimentos ni aplicar cosméticos en
el laboratorio.
5. - Lavarse las manos después de manipular el material infeccioso así
como antes de abandonar el laboratorio.
6. - Mantener el laboratorio limpio, aseado y desinfectado.
7. - Todos los procedimientos y técnicas se practicarán de manera que se
evite en lo posible la formación de aerosoles.
8. - Todos los derramamientos, accidentes y exposiciones reales,
potencialmente de material infeccioso se notificarán de inmediato al
instructor - jefe.
9. - Cada práctica los materiales del vidrio contaminados deben ser
colocados en recipientes adecuados.
10. - Al comenzar las prácticas el instructor dará las pautas en forma
oral de la bioseguridad.

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AUTOR :DR GONZALO ZABALA VILLACIS

INSTRUMENTOS UTILIZADOS EN BACTERIOLOGIA

PRACTICA
OBJETIVOS ESPECIFICOS DE LA CLASE.
1. - Que el alumno al final de la clase sea capaz de seleccionar los
instrumentos de acuerdo al examen bacteriológico a realizar.
2. - Que el alumno al final de la clase sea capaz de utilizar correctamente
cada instrumento con la técnica apropiada.
3. - Que el alumno al final de la clase sea capaz de demostrar todos los
materiales de vidrio que se utilizan en los diferentes exámenes.
4. - Diferenciar cada instrumento en las diferentes técnicas bacteriológicas.
MATERIALES Y METODOS:
Entre los principales instrumentos usados en Bacteriología lo podemos
clasificar en: Materiales de vidrio, Instrumentos y Aparatos
Entre los APARATOS tenemos:
Autoclave, Horno, Estufa, Centrífuga, Microscopio Fluorescente,
Microscopio Electrónico, Baño María, Contador de Colonias, Balanza,
Peachímetro, Destilador de Agua.
Entre los INSTRUMENTOS tenemos:
Pinza portaláminas, Aguja de inoculación, Asa de inoculación, Bajalengua,
Aplicadores de madera, Espátula, Pinzas, Gradillas, Canastillas, Cinta
indicadora de esterilización.
MATERIALES DE VIDRIO. :
Pipetas, Tubos de ensayo, Caja de petri, Láminas porta objeto y Cubre objeto,
Matraz Erlenmeyer de cuello estrecho y cuello ancho, Matraz fondo plano,
Matraz aforado, Densímetro, Probeta, Termómetro, Cubeta para tinción, Vaso
de Coplín, Vaso de precipitación, Agitador, Frascos goteros, Mecheros.
PIPETAS.-
Es un utensilio de vidrio cilíndrico de gran utilidad que ofrecen un máximo
nivel de exactitud y sirven para transferir de un recipiente a otro, cantidades
específicas de líquido. Las pipetas son calibradas en 0.1, 0.2, 1, 2, 5, 10, 20
cc. etc.

Las pipetas graduadas a partir de 5ml. tienen una boca de aspiración

conformada, que es adecuada para alojar un tapón de algodón. Los tapones

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de algodón pueden prolongar el tiempo de vertido y por lo tanto influir en la

exactitud de la medición.
¡El pipeteado a boca está prohibido! Debido al alto riesgo de infección.
Resulta por lo tanto imprescindible utilizar un auxiliar de pipeteado, que son
excelentes en forma y función. Él más sencillo y frecuente son las Peras de
Goma que son de caucho natural y se adaptan bien a la mano.
PIPETAS AUTOMATICAS.-
Con el advenimiento de la precisión, exactitud y además con el objeto de
romper la comunicación con la boca del operador se crearon estas pipetas
que ya las tenemos en el mercado y que van de pequeñas cantidades hasta
cantidades mayores, las tenemos de: 1, 5, 20, 25, 50, 100, 200, 250, 500,
1.000 ul.
TUBOS DE ENSAYOS.-
Los tubos de ensayo para cultivo son de vidrio. Hay con bordes rectos y con
roscas resistentes a la esterilización por vapor (121 °C). Existen en diversas
longitudes y diámetros. Los tubos con bordes rectos deben ser protegidos por
un tapón estéril de algodón revestidos de gasa, cuando contienen en su
interior sustancias que se desean mantener estériles tales como solución
salina, agua destilada, etc. o en su defecto medios de cultivo (sólidos,
semisólidos, líquidos). El tapón que los protege permite el paso del aire
necesario para el crecimiento de las Bacterias, pero impide el paso de las
impurezas del medio ambiente, de tal forma que ejercen una función filtrante.
CAJAS DE PETRI.-
Las hay de vidrio y de polietileno. Las cajas de petri de vidrio borosilicato ó
vidrio de soda. Elevada calidad de vidrio y de acabado. Fondo y tapa planos
tanto en el interior como el exterior. Las cajas de petri sirven para envasar
los medios de cultivo sólidos, sobre los cuales se efectúan siembras en estrías
para permitir una mejor individualización de las colonias.
LAMINAS PORTA OBJETO.-
Son de vidrio óptico y sirven para realizar el frotis a observarse
microscópicamente, ya sean estas preparaciones fijados y teñidos o en
frescos, deben ser con bordes pulidos y antes de su uso deben estar
completamente limpios, excepto de polvo y grasa. También hay porta objeto
con cavidades, llamadas láminas excavadas.
LAMINILLAS CUBRE OBJETO.-
Se emplean para cubrir las preparaciones en fresco a ser observadas
microscópicamente. Las laminillas tienen por finalidad evitar cualquier
contaminación del manipulador, evitar que la preparación se mueva con la
corriente de aire exterior y nos da también una mayor superficie de
observación al microscopio.

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MATRACES.-
Los hay de cuello ancho y cuello estrecho de fondo plano y matraces
aforados.
MATRACES AFORADOS.-
Los matraces aforados son recipientes de vidrio, ofrecen un máximo nivel de
exactitud. Los matraces aforados se suministran con tapón de PP. , Parte
superior cuadrado, con punta de goteo. Este tapón reduce notablemente el
peligro de rotura en caso de vuelco y evita que el matraz aforado se caiga al
rodar por la mesa del Laboratorio.
MATRAZ ERLENMEYER cuello estrecho.-
Son recipientes de vidrio con reborde y graduación
MATRAZ ERLENMEYER cuello ancho.-
Al igual que el anterior sino con la particularidad como su nombre lo indica
es de cuello ancho. Ambos sirven para lectura del volumen aproximado y
depositar medios de cultivo, fundir medios de cultivo en el autoclave.
DENSIMETROS.-
Los densímetros son instrumentos de precisión imprescindible para
determinar la densidad de líquidos o la concentración de sustancias disueltas.
PROBETA.Son recipientes de vidrio graduados y rotulados con pico y pie
hexagonal que ofrecen un máximo nivel de exactitud.
TERMOMETRO.-
Es un instrumento de vidrio imprescindible para la medición de la
temperatura en el laboratorio.
La alta duración de éstos instrumentos de calidad se obtienen de su
característica de construcción “de una sola pieza”.
CUBETA PARA TINCION, VASO DE COPLIN.-
Recipientes de vidrio sirven para mantener en posición vertical u horizontal
las láminas porta objetos, ya sea para someterlos a la acción tintorial de los
colorantes ó también para eliminar el aceite de inmersión del frotis teñidos
después de haber sido observados.
VASO DE PRECIPITACION.-
Son recipientes de vidrio de forma baja y de forma alta con graduaciones,
reborde y pico sirven para mezclar y preparar soluciones.

AGITADOR DE VIDRIO.-
Los agitadores de vidrio son varillas que vienen con bordes redondeados que
sirven para agitar y mezclar las soluciones usadas en el laboratorio y en las
preparaciones de los medios de cultivos.
FRASCOS GOTEROS.-
Sirven para almacenar diversas sustancias colorantes a ser utilizadas en los
distintos métodos de tinción, como su nombre lo indica permiten vaciar su
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contenido gota a gota para lo cual debe hacerse coincidir la ranura que
existe tanto en la tapa del frasco como la que existe en el cuello del mismo.
MECHEROS.-
Existen de alcohol y de gas; éstos últimos producen una llama mas firme y
potente. Los mecheros en general alrededor de la llama dan una área dentro
de la cual el material con el que se trabaja está libre de toda contaminación
con las Bacterias del medio ambiente. La llama del mechero sirve también
para fijar el frotis a ser teñidos y esterilizar el asa de alambre como la aguja
del alambre antes y después de ser usadas, representando éstos una
aplicación directa del calor seco (incineración). Debe recordarse que el
máximo poder de la llama se encuentra en la punta de la misma.

INSTRUMENTOS

PINZAS.-
Las hay con extremos en puntas, redondeados y con extremos cuadrangulares
de extraordinaria resistencia química y térmica, muy manejables.
En Bacteriología las utilizamos para los antibiogramas con los discos de
sensibilidad y en las tinciones de frotis; Que hay unas pinzas llamadas
portaláminas que sirven para sujetar las láminas porta objeto en el
momento que efectuamos la tinción de frotis
ASA DE INOCULACION.-
El asa de inoculación consiste de un alambre cuyo extremo distal termina en
un aro de diámetro variable, dicho alambre está unido por su extremo
proximal a un mango metálico. Tienen innumerables usos pero en general
sirven para tomar el material con el que vamos a trabajar, ya sea éste una
colonia a ser estudiada, gotas de diferentes sustancias líquidas o especímenes
tales como heces, sedimento urinario, etc.
AGUJA DE INOCULACION.
Instrumento igual al anterior con la salvedad, de que el alambre en vez de
terminar el aro termina en punta. Sirve para efectuar inoculaciones en la
profundidad de los medios de cultivo o también cuando queremos
individualizar colonia rodeada estrechamente de otras no deseables.
Actualmente existen asas y agujas descartables de material de polietileno, la
elevada flexibilidad del material permite una siembra suave sin dañar la
superficie del medio de cultivo, además no es necesario flamear y enfriar tras
cada proceso de trabajo. Por lo tanto ya no existe formación de aerosoles.
BAJALENGUAS.-

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Sirven para deprimir la lengua y facilitar la toma de una muestra de exudado

faríngeo. Los hay de madera y metálicos, rectos y ligeramente curvos con
extremos redondeados.
APLICADORES DE MADERA ESTERILES.-
Sirven para efectuar hisopados faríngeos, vaginales, rectales, ópticos y desde
cualquier lesión productiva o supurativa
ESPATULAS.-
Sirven para coger sustancias y pesarlas, terminan en extremo redondeado o
en un extremo en forma de cuchara.
CINTA INDICADORA DE ESTERILIZACION.-
Papel crepado, con colorantes sensibles al calor para esterilización al vapor.

APARATOS
AUTOCLAVE.-
Es un aparato que consiste de un caldero cilíndrico de paredes resistentes,
cerrado superiormente por una tapa que cierra herméticamente gracias a la
interposición de un empaque apropiado y a la presión ejercida por una serie
de tornillos que la apretan.

En el interior del cilindro existe un soporte sobre el cual se coloca una cesta
metálica conteniendo el material a esterilizar; entre el fondo de la cesta y el
caldero queda un espacio que se llena de agua.
De modo general se puede considerar que el vapor saturado bajo presión de
15 libras por pulgada cuadrada con una temperatura de 120 °C, es suficiente
para esterilizar cualquier medio o instrumento de 15 a 30 minutos.
HORNO O ESTERILIZADOR.-
Es un aparato que está constituido por un recipiente que puede ser
rectangular o cuadrado de paredes dobles, revestido exteriormente de
amianto y calentado por quemadores que pueden ser eléctricos, gas,
gasolina, Kérex, etc.
En el interior del horno existen repisas móviles y en la parte superior orificios
o chimeneas de ventilación y un orificio donde se coloca el termómetro
graduado hasta 200 °C.
Generalmente se requiere para lograr la esterilización someter los
materiales a una temperatura de 180 °C por una o dos horas.
En los laboratorios se utiliza el horno para esterilizar el material de vidrio
tales como pipetas, fiolas, cajas de petri, etc.
CONTADOR DE COLONIAS.-

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Es un aparato eléctrico que registra la cantidad de colonias que se encuentra

en una muestra de cultivo de orina.
MICROPLATOS.-
Son planos de polivinil, que se las utiliza especialmente en pruebas
serológicas: se usan en Pruebas de Fijación del Complemento, Inhibición de
Hemoglutinacón, etc. estas placas están constituidas por 96 hoyos divididos
en filas 8 x12.

BALANZAS

BALANZA ABIERTA DE DOS PLATILLOS.-

Esta balanza cuenta con dos platillos que reposan en sendas columnas. Puede
estar constituida para usarse con pesos separados, o tener un astil graduado
en que se coloca una pesa corrediza.
Se emplea para pesar cantidades grandes. Su sensibilidad es 0.5gr. (500mg).
BALANZA ANALITICA.-
Esta balanza consta de dos platillos suspendidos de una astil dentro de un
estuche de vidrio.
Se emplea para pesar cantidades pequeñas, cuando se requiere gran
precisión. Su sensibilidad es de 0.5mg - 0.1mg.
PEACHIMETRO.-
Es un aparato eléctrico que sirve para medir el pH de las soluciones, medios
de cultivo, etc.
ESTUFA O INCUBADORA.-
Es un aparato metálico y eléctrico suministra la temperatura ideal para el
desarrollo de las Bacterias (generalmente de 35 a 37 grados) sembrados en
los medios de cultivo.
CENTRIFUGA.-
Es un aparato metálico que sirve para separar en sedimento de la porción
líquida de una sustancia.
Se utiliza en los Urocultivos para centrifugar a una velocidad de 2500 r.p.m.
durante 5 minutos.

MICROSCOPIO ELECTRONICO.-
Es aquel que proporciona resoluciones (aumentos) de 700 mil diámetros (700
mm) o más en el cual un campo magnético permite enfocar los rayos
característicos (electrones) y obtener una imagen en la pantalla fluorescente.
Existen dos tipos de microscopio electrónico: el de Barrido (Scanning) y el de
Transmisión.

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El de Barrido permite observar pedazos de tejido de mayor tamaño y nos da

una imagen tridimensional.
El de Transmisión permite observar cortes ultrafinos o tinciones negativas.
MICROSCOPIO FLUORESCENTE.-
Es aquel que esté provisto de filtros que permiten observar con luz
ultravioleta, sustancias teñidas con colorantes fluorescentes. Con éste
aparato se puede realizar dos tipos de pruebas: Fluorescencia Directa e
Indirecta.
BAÑO MARIA.-
Es un aparato eléctrico que se usa con frecuencia en los laboratorios, el
mismo que contiene agua y un termómetro para regular la temperatura.
Sirve para incubar (inactivar) diferentes muestras: suero, autovacunas, una
temperatura constante de 37 - 56 °C.
RESTRICCIONES DE LA TECNICA.-
No se puede emplear los instrumentos modernos ejemplo: pipetas
automáticas, densímetros por falta de materiales en la facultad que
esperamos que se vayan obviando paulatinamente.

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DR ERNESTO RONQUILLO

CLASIFICACION DE LAS MUESTRAS CLINICAS.-

Según la posibilidad de que las muestras clínicas para el cultivo

bacteriológico, estén contaminadas con la FLORA NORMAL se pueden dividir en
tres áreas. Hay distintos procedimiento en cada caso para ACCEDER al
PATOGENO.

A.- MUESTRAS DE AREAS PROFUNDAS Y CERRADAS DEL CUERPO

(DIRECTAS).
La muestra recogida contendrá solo el germen patógeno. Debe atravesarse la piel
para llegar al patógeno utilizando medios quirúrgicos o POR ASPIRACION CON
AGUJA. Asepsia previa. Ej. Sangre.

B.- MUESTRAS DE AREAS PROFUNDAS QUE COMUNICAN CON EL

EXTERIOR (INDIRECTAS).
La muestra seguramente contendrá AMBOS TIPOS DE GERMENES: Patógenos y de
la Flora normal, pues estos últimos están en "el paso" para acceder al patógeno.
Ej. Orina por micción.

C.- MUESTRAS DE AREAS SUPERFICIALES DEL CUERPO.

La flora patógena y la no-patógena están ASOCIADAS en el lugar de la infección;
ambos tipos son recogidos en la muestra. Los gérmenes no patógenos no deben
tomarse en cuenta al interpretar los resultados del cultivo. El instrumento mas útil en
la recolección de estos especímenes es la TORUNDA, un aplicador con la punta
envuelta en algodón, fibra de poliester, alginato de calcio, o dacrón.
Ej. : Piel y membranas mucosas.

OBTENCION DE LAS MUESTRAS.

ORINA.

MATERIAL.
- Frasco de vidrio o de plastico estéril
PROCEDIMIENTO.
1. - En la MUJER puede hacérselo en posición sentada o en cuclillas.

a.- Apartar los labios uretrales con los dedos índice y anular, desde arriba.
b.- Lavar cuidadosamente la vulva con una esponja mojada con una solución
jabonosa no bactericida. Un buen agente de limpieza es el jabón de lavar común.
Repetir 3 veces. Se eliminan los restos del lavado con una gasa estéril.
c.- La micción se efectúa manteniendo los labios separados, recogiendo una muestra
del chorro medio, en un recipiente estéril.

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2. - En el HOMBRE.
a.- Retraer el prepucio y lavar el glande de igual forma.

3. - En el INFANTE.
a.- Lavar los genitales de la misma manera.
b.- Utilizar el Reflejo de Pérez.
c.- Si fracasa esta maniobra, colocar una bolsita esterilizada sobre los genitales,
para recoger espontáneamente la orina.
En estos casos deberá recogerse la primera muestra de la mañana. En los dos
primeros casos recoger la parte intermedia de la micción.

HECES
Las heces deberán ser frescas, y si tienen sangre o pus, éstas deberán seleccionarse
para cultivo, pues es allí donde abundan los microorganismos patógenos.
PROCEDIMIENTO.-
- Se debe utilizar para la toma de muestra un bajalenguas, cuchillo o cucharilla
estériles para transferir al recipiente adecuado estéril, una porción del excremento.
- El material fecal deberá ser recién emitido.
- De heces formadas se transfiere un pedazo del tamaño de una nuez, de heces
pastosas o líquidos: 1 - 2 ml (una cucharilla cafetera).

FARINGE Y NASOFARINGE.

PROCEDIMIENTO.-
- Se deberá tomar solo con una visión clara de la faringe, buena luz y utilizando un
bajalengua. Se evitará rozar otras estructuras. Prevenir al paciente concurrir en
ayunas sin lavarse los dientes con pasta dental.
- Se dispondrá de dos hisopos, preferentemente humedecidos en tripticasa de soja.
- Con los hisopos se tocará el fondo de la garganta, amígdalas, fosas tonsilares y
cualquier otro lugar donde exista inflamación, exudado o ulceración. El frote debe
ser enérgico, de lo contrario será un espécimen deficiente para el cultivo.
- Uno de los hisopos se usará para hacer tinciones, y el otro para hacer cultivo.
El estreptococo del grupo A es la única causa bacteriana común de faringitis, por
ello la estrategia diagnóstica en cultivos de garganta tiene por finalidad identificar
en forma selectiva este agente.

ESPUTO.
PROCEDIMIENTO.
- El material se recogerá en un frasco estéril de boca ancha.
- Que la expectoración se efectúe, si el paciente está en condiciones de hacerlo
después de cepillarse los dientes y enjuagarse concienzudamente.
- Se recogerá una expectoración de la primera hora de la mañana, que está mas
limpia, inmediatamente después de una tos profunda en que se expectoren
secreciones de los pulmones.
- La muestra se procesará enseguida.
En LACTANTES, el esputo se obtiene haciendo un frotis de la garganta o mejor
aún por lavado gástrico ya que los niños generalmente degluten su expectoración.
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HEMOCULTIVOS.

El hemocultivo consiste en cultivar una cierta cantidad de sangre de un paciente.

Como la sangre es líquida orgánico estéril, el hallazgo de microorganismos en ella
indicará infección, generalmente de carácter grave. Es esencial un cumplimiento
escrupuloso de las normas para la recogida aséptica de las muestras.

PROCEDIMIENTO.
- La toma de la muestra se realiza en la vena superficial de la parte interna de la
flexura del codo. Se limpia previamente la zona desinfectándola con yodo y alcohol.
Se repite el mismo procedimiento en el tapón de goma del frasco del hemocultivo,
manteniendo su contacto por un minuto.
- No palpar el sitio de punción luego de desinfectada la zona. La punción puede
efectuarse con aguja y jeringa, o con los instrumentos de doble aguja que existen
especialmente para este fin.
- Inocular la sangre directamente en medio de cultivo a la cabecera de la cama.
- Ante una bacteremia de origen desconocido es conveniente tomar dos muestras e
incubarlas aeróbica y anaerobicamente.
- Después de la extracción de sangre se taponará la herida con algodón y alcohol 70.
La cantidad de muestra y el número a tomar dependerá de la edad y circunstancias
del paciente.

EXUDADO OTICO

Las infecciones externas del oído frecuentemente son secundarias a heridas al

rascarse las partes externas, con algún objeto punzante, infecciones por virus que se
infectan secundariamente, alergias, prácticas de natación.
- La toma se realiza después de haber limpiado y desinfectado concienzudamente el
pabellón auricular.
- Si hay supuración la toma se realiza con hisopo. Si existe forúnculo, se efectúa con
aguja y jeringa.
Se realizan las preparaciones microscópicas y se siembra en los medios adecuados.

EXUDADOS VAGINAL Y URETRAL.

Las enfermedades de transmisión sexual (ETS) pueden causar con Exudado Vaginal
o con Ulceras y/o tumoraciones.

PROCEDIMIENTO.
- Cuando hay sospecha de infección vaginal o uterina, se introducirá él especuló con
el mínimo de lubricante que permita la comodidad de la paciente (a veces basta el
agua tibia), ya que la mayor parte de los lubricantes son bacteriostáticos.
- Es útil el empleo y envío de dos hisopos con muestra del exudado vaginal, uno seco
y otro introducido en un medio de transporte (Stuart, A o Cary-Blair). El primero se
utilizará para el examen en fresco y tinciones, y el segundo para los cultivos.

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- Para investigar la presencia de Gonococo, nunca se tomarán muestras de vulva ni

de vagina, pues difícilmente son positivas. La muestra se tomará con ayuda de un
especuló, después de haber extraído el tapón mucoso que recubre el cérvix, de
endocérvix, introduciendo la punta en un hisopo a través de un catéter de luz
estrecha colocado en la abertura cervical. De este modo se evita tocar la mucosa
cervical reduciendo la posibilidad de contaminación.
En el caso de las niñas en la pubertad que presentan epitelio vaginal apto para el
desarrollo del gonococo, se tomará la muestra de dicho sitio.
- Casi la mitad de las mujeres afectadas de gonorrea alojan gonococos en el
conducto anal; por lo tanto se hará un cultivo rectal.

En el caso de las infecciones genitales en el hombre: Una suave presión del pene
permite obtener una muestra útil para el cultivo y el frotis coloreado con el Gram.

TECNICAS DE SIEMBRA BACTERIANA.

CONTENIDO

Siembra o inoculación es extender una pequeña cantidad de muestra sobre la

superficie de la placa con agar, con un sistema de actuación preestablecido y con la
ayuda de una asa de alambre fino o de plástico desechable. Este sistema de
separación recibe el nombre de SIEMBRA POR AGOTAMIENTO EN SUPERFICIE.
Las bacterias bien aisladas unas de otras crecerán como pequeñas masas de
microorganismos, alcanzando unos 2 a 3 mm de diámetro al cabo de una incubación
de 18 a 24 horas, denominadas COLONIAS, que a simple vista pueden verse en la
superficie del agar. Cada colonia está formada por billones de gérmenes y
constituyen todos los descendientes de un solo microorganismo que fue a parar a
dicho lugar.

MATERIAL A UTILIZAR:
- Mechero de alcohol.
- Tubo de ensayo con él inoculó o muestra.
- Caja de petri con el medio de cultivo estéril.
- Asa de inoculación

INOCULACION DE MEDIOS DE CULTIVO EN TUBOS.

Los medios se pueden distribuir en tubos ya sea como caldos o en forma de agar. El
agar puede ser semisólido o sólido, generalmente formando un plano inclinado. Para
la inoculación de especímenes se emplea generalmente el asa; para la transferencia
de cultivos puros de placas a tubos, la aguja es, habitualmente el instrumento
elegido.

PROCEDIMIENTO.
- Flamee el asa como se ha descrito anteriormente y déjela enfriar.
- Quite el tapón de rosca (o el algodón) del tubo y tome con el asa una porción del
espécimen.
- Vuelva a poner el tapón de rosca (o el algodón) en el tubo que contiene el
espécimen.
17
 18

- Quite el tapón del tubo que se va a inocular

RESIEMBRA BACTERIANA.

Es la TRANSFERENCIA de colonias bacterianas de la caja de petri a tubos u otra

caja que contienen medios de cultivo esterilizados. Con éste método las cepas que
interesan se aíslan en CULTIVO PURO. Para ello tocamos la colonia seleccionada
con el extremo de una aguja esterilizada y transferimos los microorganismos
adheridos a la aguja, al medio de cultivo deseado para su mejor proliferación.

MATERIAL.
- Asa y aguja de inoculación
- Caja de Petri con colonias a transferir.
- Mechero de alcohol
- Caja de Petri o tubo (según el caso) con medio de cultivo estéril.

CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS DE LAS COLONIAS EN LOS MEDIOS

DE CULTIVO

Los microbiólogos utilizan diversas características de las colonias bacterianas que

se desarrollan en la superficie de los medios de cultivo de agar con dos finalidades:
- Efectuar la IDENTIFICACION PRESUNTIVA BACTERIANA PRELIMINAR.
- COMO GUIA EN LA SELECCION DE PRUEBAS a fin de determinar las
características diferenciales para la identificación final.
CRITERIOS UTLIZADOS.

1. - Tamaño (diámetro en mm.) 4. - Elevación. 7. - Superficie.

2. - Forma. 5. - Borde (margen). 8. - Densidad.
3. - Consistencia. 6. - Color. 9. - Olor.

FORMA: Puntiforme, circular, filamentosa, irregular, rizoide, fusiforme.

BORDE de las colonias: Plano, elevado, convexa, acojinada, umbiliforme,

umbilicada.
COLOR: Blanco, amarillo, negro, naranja, .
SUPERFICIE: Brillante, mate, etc.
DENSIDAD: Opaca, translúcidas, transparentes, etc.
CONSISTENCIA: Butirosa, viscosa, membranosa, quebradiza, mucoide.

MATERIAL.
- Medios de cultivo con las distintas siembras bacterianas.
- Fuente de luz.
- Lupa.

RESTRICCIONES.

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 19

La interpretación de cultivos primarios es una habilidad especial que se debe

adquirir trabajando con un microbiólogo bien capacitado y generalmente se logra
dominar sólo luego de muchos meses o años de experiencia.
Como ejemplo podemos cita las características de las colonias en placas de agar de
3 bacilos Gram negativos distintos. Cada una de ellas es típica de su especie aunque
son frecuentes las variaciones:
- Las colonias E. Coli son planas con un borde recortado.
- Las colonias de Klebsiella pneumoniae tienen un borde completamente liso y una
superficie elevada y mucoide.
- Las colonias de P. Aeruginosa presentan una superficie irregular que recuerda una
superficie metálica golpeada repetidamente con un martillo.
Colonias en agar sangre que muestran zonas evidentes de hemólisis. El gran tamaño
de las colonias comparado con las zonas de hemólisis sugiere una especie
hemolítica de Staphylococcus.
Colonias puntiformes B - hemolíticas: sugieren especies de Streptococcus. El
reducido tamaño de las colonias bacterianas comparado con el gran tamaño de la
zona de hemólisis B, es altamente sugestivo de esta especie.
Colonias lisas diseminadas con pigmentación verde definida, sugieren la presencia
de pseudomonas aeruginosa.
El desarrollo colonial profuso y en ondas de dispersión, es característico de Proteus
vulgaris o Proteus mirabilis.

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 20

MUESTRAS IMPORTANTES DE VARIAS ZONAS Y TIPOS DE INFECCIÓN

Zona/tipo de infección tipo de muestra
Líquido Tejido Torunda otros
Tracto urinario
Vejiga Orina
Riñón orina Biopsia renal
Tracto gastrointestinal
Intestino Torunda rectal heces
Boca Lavados
Hígado Biopsia hepática
Tracto biliar Bilis
Abdomen Pus
Aspirado peritoneal
Líquido ascítico
Tracto respiratorio
Nariz Torunda nasal
Nasofaringe Torunda pernasal “placa de tos”: el
Faringe Lavados (V) Torunda faríngea paciente tose
Pulmón Esputo Biopsia pulmonar directamente en
Lavado alveolar una placa de
Espacio pleural Líquido pleural agar
Oído Torunda auricular
Ojo Torunda ocular inoculación
directa de placas
de cultivo a la
cabecera de la
cama
Sistema nervioso
central Líquido
Meninges Biopsia cerebral
Encefalitis (herpes) cefalorra
Absceso cerebral quídeo(L
CR)
Pus, LCR

20
 21

Tracto genital
Uretra Torunda uretral Microscopia
Vagina Torunda vaginal alta directa y cultivo
Cerviz Torunda cervical en la clínica
endometrio Biopsia endometrial
Piel y tejidos blandos
Piel Líquido vesicular Biopsia cutánea(M) Torunda cutánea Placas de
(V) Raspados(H) (portador) impresión
Herida Pus torunda de herida
Hueso y articulación
Osteomielitis Pus Hueso*
articulación aspirado
Septicemia Sangre

Fiebre de origen Sangre Extensión de

desconocido sangre para
parásitos
Endocarditis Sangre Válvula cardíaca* palúdicos
*recogido en la operación (V) muestras para virología (H)muestras para hongos (M)muestras para
microbacterias

CLASIFICACIÓN DE MUESTRAS CLÍNICAS

A.

A.- MUESTRAS TÉCNICAS PARA VENTAJAS Y

OBTENIDAS ADECUADA RESTRICCIONES
DIRECTAMENTE RECOLECCIÓN DE LA TÉCNICA:
Sitios profundos DE MUESTRAS:
sin comunicación:

Tejidos u órganos Asepsia de la piel Normalmente estériles

Líquidos orgánicos:
Sangre, linfa, pleural
Peritoneal, articular
Pericárdico, etc.
Absceso profundo
Aspiración con aguja
Biopsia quirúrgica
Los resultados (+):
Son diagnósticos
Los resultados (-)
Excluyen la infección.

Pueden entrañar
cierto riesgo para el
paciente.

B.

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 22

B. MUESTRAS TÉCNICAS PARA VENTAJAS Y

OBTENIDAS RECOLECCIÓN RESTRICCIONES
INDIRECTAMENTE: ADECUADA DE DE LA TÉCNICA:
SITIOS MUESTRAS:
PROFUNDOS CON
COMUNICACIÓN -Eludir las áreas -Pueden estar
Contaminantes contaminadas con F.N
-Exudados inflamatorios -Pruebas cuantitativas -Más cómodas de
-Esputo, orina. -Aspiración: obtener.
-Endocervix, vesícula Suprapúbica, -Correlación de
-Fístulas. transtraqueal. hallazgos clínicos y
microbiológicos.

C.

C. MUESTRAS DE TÉCNICAS PARA VENTAJAS Y

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 23

ZONAS DE PIEL RECOLECCIÓN RESTRICCIONES

Y MUCOSAS: ADECUADA DE DE LA TEORÍA
MUESTRAS:

-Piel: Lesiones, heridas, -Utilizar medios de -Zonas usualmente

absesos.
-Membranas mucosas:
Orificios del cuerpo
(faringe, intestino),
uretas, oído, etc.
-Material de colostomia
cultivos selectivos contaminadas.
-Investigar agentes -Restringir la búsqueda a
etiológicos específicos. gérmenes patógenos que
Ej: estreptococo B.H no se hallan en el sitio
GA.(Faringe) Tifoidea infectado.
(heces) conocido -No apropiado para
(exud.uretal) cultivos anoeróbicos.
-Ignorar la F.N.

1. Flamear el asa y tomar con ella 2. Luego de flamear el asa,

una porción delgada de la muestra.
Colocarla en el agar y distribuirla
en el 1/4 superior.
se repite el procedimiento
previo, giro de 90° a la izq
en el 1/4 siguiente, partiendo
de la zona última anteriormente
sembrada.

3. El proceso se repite por tercera

vez como en 2 hasta cubrir la superficie
de la placa.

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 24

TRANSFERENCIAS DE UN CULTIVO PURO

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 25

INOCULACIÓN DE MEDIOS EN TUBO

MEDIOS LÍQUIDOS Caldo de Tioglocolato

MEDIOS INCLINADOS Agar de Soya, Trypticase

O en agar nutritivo base inclinada

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 26

MEDIOS
ESPECIALES INCLINADOS Agar TSI

MEDIOS SEMISÓLIDOS Medio CTA

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27

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 28

AUTOR:DRA JOSEFINA RAMIREZ

ESTUDIO MICROBIOLOGICO DE COLECCIONES

SUPURATIVAS
OBJETIVO:
Al finalizar la clase práctica el alumno será capaz de:
1. - Seleccionar que medio de cultivo se necesita para el estudio de las
colecciones supurativas.
2. - Escoger el medio de cultivo para realizar el estudio de las
colecciones supurativas.
3. - Interpretar los resultados.
MATERIALES.
- Muestra del material supurativo a estudiarse.
- Medio de transporte, el cual se escogerá dependiendo de la cepa que
se va a estudiar.
- Lámina porta objeto.
- Asa de inoculación
- Mechero.
- Solución salina o agua destilada.
- Colorantes.
- Microscopio.
- Medios de Cultivo, uno sólido (agar Sangre) y otro líquido (caldo de
Thioglicolato).
CONTENIDOS:
OBTENCION DE LA MUESTRA:
Este párrafo está indicado en el capitulo de toma de muestra
MEDIO DE TRANSPORTE.-
Si la muestra no puede ser sembrada inmediatamente, o hay que
mandarla a un laboratorio distante , esta debe colocársela en un medio
de transporte como el de Staurt o el de Amies, así como también si se
sospecha de la presencia de anaerobios sería mejor utilizar el medio de
Cary Blair.
METODOLOGIA
OBSERVACION MACROSCOPICA:.-
Al llegar la muestra al laboratorio, se observa macroscópicamente, pues
esto nos sirve para orientarnos en el diagnóstico. Así un pus común
compuesto por gránulos blancos-grisáceos es sugestivo de actinomyces;

28
 29

una coloración verde azulada recuerda a pseudomonas, y un olor fétido

se relacionaría con anaerobios o coliformes.
OBSERVACION MICROSCOPICA:.-
Es indispensable para realizar una extensión fina y homogénea del pus y
teñirla con el método de Gram o de Ziehl-Neelsen, pues su observación
microscópica nos dirá los pasos a seguir y los medios de cultivo a
utilizar.
SIEMBRA DE LAS MUESTRAS: .-
Los principales productores de pus son los microorganismos que crecen
bien en casi todos los medios ordinarios; por lo tanto , el plan
sintetizador bastará con sembrar el producto patológico en dos medios
de cultivo, uno sólido (que puede ser agar sangre, el mismo que permite
aislar la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias o el medio de
Lowenstein- Jensen si se sospecha una Etiología tuberculosa), y uno
líquido como es el caldo de tioglicolato que tiene funciones de
enriquecer el crecimiento de anaerobios estrictos y facultativos. A las 24
horas de incubación a 35 °C se efectuaran las oportunas resiembras en
medios sólidos.
VENTAJAS
Este examen es el que nos permite en poco tiempo y con una simple
observación obtener una orientación diagnóstica
DESVENTAJAS
La de contar con todo el material requerido. como por ejemplo: un
medio de transporte.
INTERPRETACION DE RESULTADOS:

OBSERVACION DE LAS COLONIAS:.-

Colonias gamma hemolíticas de 4,5 mm. Blancas, opacas de bordes
rizados en agar sangre (Bacillus antracis).
Colonias gamma hemolíticas de 1 a 2 mm. En agar sangre
(streptococos no hemolíticos))
Colonias gamma hemolíticas pequeñas transparentes, relucientes de
margen ondulado en agar sangre (yersinia pestis)
Colonias puntiformes (24 horas) En el medio de Francis (Francisella
talurensis)
Colonias rugosas pálidas (Aspecto cerebroide) en agar de Lowestein-
Jensen (Mycobacterium tuberculosis)

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 30

AUTOR:DR CARLOS MOSQUERA

MUESTRAS ESPECIALES PARA EL

DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO
INTRODUCCION:
El establecimiento del diagnóstico en las enfermedades infecciosas
dependen en gran parte de la selección de la muestra, del tiempo en
que se colecta y del cuidado que en ello se pone. Estos factores son con
frecuencia de importancia para el éxito en el diagnóstico etiológico de
las enfermedades infecciosas.
OBJETIVOS:
Al finalizar la clase el alumno estará en capacidad de:
1.- Demostrar como se toman correctamente las muestras para su
estudio bacteriológico.
2.- Identificar las características morfológicas de las Bacterias.
Predecir cómo y cuándo solicitar un examen para su estudio bacteriano.
3.- Demostrar la acción patógena de las Bacterias sobre el organismo.
4.- Explicar las condiciones de como preservar y enviar las muestras
para su estudio bacteriológico.
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO (LCR).
Los principales agentes etiológicos que podemos encontrar en un LCR
son los siguientes:
Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, Estreptococos
neumoniae, Estafilococos áureas, Enterobacterias, Mycobacterium
tuberculosis.
MATERIALES:
Se requiere el siguiente material:
- Tubos de ensayo estériles.
- Equipo para punción lumbar.
- Asa de inoculación.
PROCEDIMIENTO:
La muestra se obtiene por punción lumbar previa desinfección del área
y debe ser enviada inmediatamente al laboratorio , la muestra no debe
ser refrigerada , si ni se la procesa en el momento debe ser incubada o
dejada a temperatura ambiente .
El LCR para su estudio bacteriológico se centrifuga a 2500 r.p.m. x 10!
con el sedimento obtenido se hace un frotis para teñir con Gram que
sirve para orientar hacia el tipo de tratamiento a establecer e indica los

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 31

medios de cultivo a utilizar si se busca bacilo tuberculoso se realiza

tinción Ziehl Neelsen y se siembra en medio de Lowenstein Jensen .
En el caso de Neisseria meningitidis, se siembra en agar Chocolate o
Tayer Martin a 35 °C en atmósfera de 5 a 10% de CO2, para luego
realizar la reacción bioquímica en agar CTA (Cisteína trípticasa)
adicionado de los respectivos carbohidratos.
LIQUIDO SINOVIAL
El estafilococo aureus es el agente etiológico más común de la artritis
séptica, sin embargo pueden aislarse otros agentes como el Haemophilus
influenzae, Estreptococos viridans, etc.
MATERIALES:
- Jeringa estéril.
- Tubo de ensayo estéril.
PROCEDIMIENTO:
La muestra se obtiene por aspiración con una jeringa estéril, la muestra
debe ser colocada en frascos para transporte en anaerobios para
preservar la viabilidad de los anaerobios.
Puede ser útil inocular un frasco para hemocultivo con parte de la
muestra , sobre todo si el especimen no puede ser llevado
inmediatamente al laboratorio.
Las muestra muy purulentas se inoculan directamente en diversas placas
de agar, incluyendo alguno que permita el desarrollo de
microorganismos exigentes como: A. Chocolate, A. Sangre, y en un
medio enriquecido como el caldo de thioglicolato.
Si se sospecha de tuberculosis se inoculará en el medio de Lowenstein
Jensen.
LIQUIDO ASCITICO
La E. coli es la bacteria que se encuentra con mayor frecuencia seguida
por el Estreptococo neumoniae y otros Estreptococos del grupo A.
Aunque también pueden aislarse Enterobacterias, Estafilococos, etc.
MATERIALES
- Equipo para paracentesis.
- Tubos de ensayo estériles.
- Asa de Inoculación.
PROCEDIMIENTO
La muestra se obtiene por aspiración percutánea (paracentesis) o en el
momento de una cirugía y se envía al laboratorio para examen directo y
cultivo.
El transporte debe realizarse en un frasco para anaerobiosis, por lo
general de 1 - 5 ml de líquido son suficientes para el diagnóstico de una

31
 32

peritonitis. Como en todo material que se presume que contiene

anaerobios, éstas muestras deben ser inoculadas lo más rápido posible.
LIQUIDO PLEURAL
Las Bacterias que pueden ser aisladas del líquido pleural incluyen
aquellas relacionadas con neumonías, como Estreptococos neumoniae,
Estafilococos aureus. H. influenzae, Enterobacterias, bacilo tuberculosos
y anaerobios.
MATERIALES
- Tubos de ensayo estériles.
- Jeringuilla estéril.
- Equipo para toraconcentesis.
- Asa de inoculación.
PROCEDIMIENTO
La muestra se recoge por aspiración (toraconcentesis) y transportada al
laboratorio lo mas pronto posible.
Para el aislamiento de la mayoría de las Bacterias es suficiente una
muestra de 1 - 5 ml, pero cuanto sea mayor el volumen habrá mejores
probabilidades de aislamiento de algunos patógenos como el
Mycobacterium tuberculosis.
Las muestras que se reciben en frascos para transportes de anaerobios o
jeringas deben ser inoculadas tan pronto como sea posible en los
medios de cultivo para aerobios y anaerobios de rutina.
Además deben examinarse frotis teñidos con Gram y Ziehl Neelsen
LAVADO GASTRICO (HELICOBACTER PYLORI)
MATERIALES
- Tubos de ensayo estériles.
- Asa de inoculación.
- Colorantes para tinción de Gram.
PROCEDIMIENTO
La muestra se obtendrá a través de endoscopía digestiva para obtener
la secreción gástrica , una vez obtenida la muestra debe ser enviada al
laboratorio inmediatamente para poder neutralizar la acidez.
De la secreción se hará frotis directo para ser teñidos con Gram a fin
de identificar bacilos Gram negativos curvos, para posteriormente
realizar la prueba de la ureasa.
LAVADO BRONQUIAL
Las bacterias que con mayor frecuencia podemos encontrar en el
lavado bronquial tenemos: Mycobacterium tuberculoso, H. influenzae,
Estreptococo neumoniae.

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 33

MATERIALES
Tubos de ensayo estériles.
Asa calibrada.
Cepillo bronquial
PROCEDIMIENTO
La muestra se obtiene a través de un cepillo bronquial protegido por un
catéter.
Se coloca dentro de una cánula doble un cepillo pequeño que recoge
0.01 a 0.001mg de secreciones. El extremo de la cánula exterior se
obtura con un tapón de polietilenglicol, una vez que la cánula se ha
insertado en el área apropiada, se empuja la cánula interior que
desaloja al tapón a medida que es extraída, luego se extiende el cepillo
hacia el exterior de la cánula interna.
La muestra obtenida se suspende en 1 ml de caldo agitando en un vortex
y luego se inocula en los medios de cultivo usando una asa calibrada de
0.01 ml.
TEJIDOS
Entre las Bacterias que podemos aislar de material de biopsia o de
tejido tenemos: Mycobacterium tuberculoso, Brucella, Listeria
monocytogenes.
MATERIALES
- Frasco plástico con boca ancha y tapa de rosca.
- Solución salina estéril.
PROCEDIMIENTO
Las muestras del tejido deben ser obtenidas luego de una cuidadosa
preparación de la piel, ya que es importante que las biopsias se
extraigan en condiciones asépticas.
Se recomienda un envase plástico de boca ancha y tapa de rosca. Los
microorganismos anaerobios sobrevivirán en los tejidos el tiempo
suficiente para ser recuperados luego en el cultivo. Para mantener la
humedad de la muestra conviene agregar un pequeño volumen de
solución salina, no usar formol en las muestras para estudio
bacteriológico.

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 34

AUTOR: DR JUAN MORENO PINCAY

TECNICAS DE PREPARACION DEL FROTIS Y

SU FIJACION
OBJETIVOS:
- Elaborar el frotis.
- Reconocer los pasos ordenados para la realización de un frotis.
- Utilizar adecuadamente el asa de inoculación.
- Aprender a flamear el asa de inoculación y la lamina portaobjeto.
- Usar adecuadamente los dedos de la mano para coger el asa y par a
taponar el tubo de ensayo.
- Sostener adecuadamente el tubo de ensayo en el momento de tomar la
muestra bacteriana.
CONTENIDO.-
Antes de realizar cualquier tipo de tinción bacteriana
previamente debemos realizar un frotis . Pero -Qué es un frotis?, No
es otra cosa que el extendido de una suspensión bacteriana en una
lámina portaobjeto limpia de tal forma que se forme una película
uniforme y fina en el tercio medio de la placa.
Los frotis preferentemente deben realizarse tomando muestras de
cultivos frescos o directamente de los focos infecciosos. El frotis se lo
puede realizar con el asa de inoculación o con un hisopo, para realizar
un frotis es necesario que el estudiante tenga conocimientos previos de
los materiales utilizados en bacteriología, este frotis dejaría de ser
importante sino se continúa con el procedimiento de tinción.
Es importante recordar que para efectuar un buen frotis este debe
quedar del mas fino espesor posible para poder individualizar
microscópicamente una célula bacteriana de otra.
MATERIALES A UTILIZAR.
-Cultivos, caldos y agares
- Asa de inoculación
- Hisopos
- Mechero
- Solución salina o fisiológica
- Una tubera o gradilla
- Papel filtro
-Pinza porta lámina- Lámina portaobjeto

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 35

TECNICA
1.- Limpiar un portaobjeto aplicando la llama a una de las superficies,
colocarlo sobre la mesa con el lado tratado hacia arriba.
2.- Tomar el asa de transferencia o de inoculación como si fuera un lápiz
con el pulgar y el índice.
3.- Insertar el asa de inoculación en un ángulo de 60° en la punta de
llama del mechero de Bunsen o del alcohol, calentar al rojo toda el asa.
4.- Tomar el tubo de ensayo que contiene solución salina con la mano
libre, quitar el tapón de algodón ó tapa con los dedos de la mano que
sujeta el asa de inocular y que está libre.
5.- Calentar el borde del tubo haciéndolo pasar por el cono superior de
la llama.
6.- Insertar el asa esterilizada dentro de la solución salina y extraer 2 o
3 asadas y llevarlas al centro de la lámina porta objeto.
7.- Esterilizar el asa nuevamente y tomar una muestra de colonias
bacteriana siguiendo el procedimiento anterior tratando en lo posible
coger el tubo de ensayo del fondo.
8.- Llevar las muestras de colonias bacterianas al centro de la lámina
donde previamente estaba la solución salina ,sin olvidar de tapar los
tubos de ensayo.
9.- Hacer un extendido con el asa de inoculación realizando
movimientos circulares que abarquen el tercio medio de la placa, dejar
que el frotis seque al aire.
10.- Pasar varias veces el frotis por el mechero para fijarlo.
11.- Esterilizar el asa de inoculación antes y después de utilizarla.
12.- El frotis también se puede fijar con fijador de Schaudinn de 5
minutos a 50°C o una hora a temperatura ambiente sin sufrir daños el
frotis.
El estudiante durante la ejecución de la técnica utilizará correctamente
los cinco dedos de la mano; el meñique y el anular para el tapón, el
índice y pulgar para el asa y el dedo medio de apoyo.
VENTAJAS Y DESVENTAJAS
La realización de un frotis tiene la ventaja de favorecer a las técnicas de
tinción para ellos es importante que el espesor sea lo mas fino posible.
Una de las desventajas es que al fijar la placa ciertas proteínas
plasmáticas se coagula y se adhiere al porta objeto.
Cuando la fijación se hace con alcohol metílico; en 2o3 minutos está
lista la placa.
Cuando se fija con el alcohol es cuando el extendido es generalmente
rico en materiales hísticos.
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 36

La realización de un frotis tiene importancia si se realiza la tinción;

cuando se observa al microscopio las Bacterias están muertas ya sea
por la fijación o por los mismos colorantes que se vayan a utilizar.
Si el medio de cultivo donde se toma la muestra es líquido la extensión
que se consigue es fina y homogénea, si la muestra es tomada de un
medio de cultivo sólido la calidad del frotis dependerá mucho de la
habilidad del estudiante al realizar la suspensión y posteriormente el
frotis.
RESTRICCIONES DEL METODO
En realidad la única restricción que tiene el método en la clase de
práctica de Bacteriología es cuando se quiere utilizar fijadores como el
de Schaudinn o alcohol metílico que no hay en stock de nuestro
laboratorio, pero la fijación la hacemos a fuego lento con el mechero

METODOS FISIOLOGICOS DE IDENTIFICACIONDE LA

MOTILIDAD BACTERIANA BACTERIANA

OBJETIVOS:
1.- Discriminar el movimiento bacteriano del Browmiano mediante la
observación microscópica .
2.- Reconocer la motilidad bacteriana producido en un medio de cultivo.
3.- Realizar una suspensión bacteriana .
4.- Ejecutar la técnica de lámina y laminilla, gota pendiente y en tubo
capilar cerrado.
CONTENIDO:
La motilidad o movilidad bacteriana es una de las propiedades o
características de muchas especies bacterianas de avanzar mediante
propulsión por flagelos (filamento, gancho y complejo basal de la
compleja estructura de un flagelo).
El filamento helicoidal lo tenemos como una hélice, el gancho como una
unión , y el cuerpo basal como un cilindro o anillo de un motor.
Las Bacterias mótiles se mueven en pequeñas carreras interrumpidas
sobre periodos de rotación sobre sí mismo. A diferencia del movimiento
Browmiano que son movimientos de partículas de polvo suspendida en
agua que tiene un movimiento irregular en zig-zag y refleja los impactos
recibidos constantemente al chocar las partículas de polvo con las
moléculas de agua y aire que se mueve constantemente, este movimiento
se lo puede comparar como el de migas de pan en una pecera producida
por el mordisco de los peces.

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 37

La motilidad bacteriana es una prueba presuncial de que las Bacterias

poseen flagelos aunque no indica número ni disposición de los mismos.
Estos movimientos flagelares son en látigos, circular y en rotación a un
promedio de 40 revoluciones por segundo.
El examen directo de los organismos vivos (Bacterias) pueden tener gran
utilidad para determinar relaciones de tamaño, forma, movilidad y
reacciones.
TIPOS DE MOTILIDAD BACTERIANA
Tenemos la que se realiza en fresco para una observación microscópica y
la que se observa en medios de cultivos macroscópicamente.
En fresco tenemos tres métodos:
a) El de lamina y laminilla.
b) El de gota pendiente.
c) En tubo capilar cerrado.
En medios de cultivos tenemos:
a) En agar Motilidad.
b) En agar Mac Conkey. y agar sangre
c) En agar Edwars-Ewing.
MATERIALES:
- 4 Láminas porta objeto excavada.
- 4 Láminas porta objeto.
- 4 Laminillas cubre objeto.
- 1 Recipiente con vaselina .
- 1 Recipiente con xilol.
- Plastilina .
- 1 Tubo de ensayo con solución salina.
- Aplicadores de madera.
- Asa y aguja de inoculación.
- 2 Tubos capilares.
- Mechero.
- Medios de cultivo sembrado y estériles.
- Microscopio.
-
TECNICA:
OBSERVACION MICROSCOPICA:

ENTRE LAMINA Y LAMINILLA.- (entre porta y cubre objeto)

Depositar una gota de cultivo líquido, o la suspensión de una colonia en
solución salina o en suero fisiológico sobre el centro de la lámina porta
objeto, colocar una laminilla cubriendo la suspensión, a continuación
observar en el microscopio utilizando objetivos secos de gran aumento
37
 38

como (10X) o (40X). Esta técnica puede ser utilizada para observación
microscópica de anaerobios siempre y cuando se observe con rapidez la
parte central del montaje.
GOTA PENDIENTE.-
Untar una capa débil de vaselina en los bordes de la concavidad de la
lámina excavada, colocar una gota de suspensión bacteriana en el
centro de la laminilla cubre objeto, luego invertir cuidadosamente la
lámina porta objeto excavada sobre la laminilla de tal modo que en el
centro de la concavidad corresponda a l de la gota .
Luego observar con objetivo seco el borde de la gota y a continuación
todo el campo.
EN TUBO CAPILAR CERRADO.-
Con ésta técnica podemos observar Bacterias mótiles anaerobias
principalmente.
Se llena un tubo capilar con una suspensión bacteriana, cerrando
inmediatamente los dos extremos con plastilina, luego se observa al
microscopio con el objetivo de 40X

OBSERVACION MACROSCOPICA

MOTILIDAD EN MEDIOS DE CULTIVO:

EN AGAR MOTILIDAD.-
Técnica.- Se siembra con la aguja de inoculación en medio de cultivo
semisólido tanto en picadura como en profundidad, tratando en lo
posible que la aguja no penetre mas de 1 cm del fondo del tubo. Incubar
por 24 horas a una temperatura de 35 - 37 °C, luego se realiza la
interpretación de los resultados.
La motilidad es positiva cuando hay crecimiento de Bacterias mótiles lo
que permite que el sitio de picadura se ensanche y se deforme y el medio
de cultivo se torna turbio.
La motilidad es negativa cuando el medio de cultivo está claro y el sitio
de la picadura no ha sufrido transformación.
EN AGAR MAC CONKEY, O AGAR SANGRE(FENOMENO DE
SWARMING)
Técnica.- Sembramos punteando la parte central del agar Mac Conkey,
incubamos por 24 horas a una temperatura de 35 - 37 °C.
Hacemos la lectura y observamos si ha habido o no crecimiento de
Bacterias (Proteus)con gran motilidad en la superficie del medio. Si hay
crecimiento bacteriano con estas características las colonias en la
superficie del medio no permanecen compactas y separadas por el
38
 39

contrario el desarrollo bacteriano se difunde rápidamente sobre toda la

superficie formando anillos concéntricos de dispersión con ondulaciones
características en el medio(fenómeno conocido como el de Swarming).

VENTAJAS Y DESVENTAJAS

VENTAJAS DE LA OBSERVACION EN FRESCO.-

Se observa la bacteria viva y en movimiento, la forma y posibles
alteraciones morfológicas ocurridas al moverse la bacteria; no se
expone a observar deformaciones causadas por la fijación y los
colorantes.

DESVENTAJAS DE LA OBSERVACION EN FRESCOS.-

La rápida desecación nos impide una observación prolongada, también
nos impide ver ciertas estructuras como cápsulas, flagelos esporas que
solo es posible observarlos con métodos de tinción especial. En cuanto
a la observación en medios de cultivo si bien es cierto que podemos
observar las distintas reacciones que se producen en el medio lo que nos
hace sospechar de acuerdo a las características que hay motilidad
bacteriana tiene la desventaja que no podemos observar directamente la
bacteria.

RESTRICCIONES DEL METODO

En un tubo capilar aunque es un método sencillo de realizar no
disponemos de stock en el laboratorio lo mismo que sucede con el medio
de Edwars-Ewing probablemente en un futuro no muy lejano estaremos
en condiciones de realizar éstos métodos y técnicas para un mejor
conocimiento.

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AUTOR JUAN MORENO

TECNICAS DE COLORACION DE BACTERIAS

OBJETIVOS:
Elaborar diferentes tinciones correctamente.
Reconocer los pasos ordenados para la realización de cualquier método de tinción
enseñado.
Seleccionar una técnica específica para la tinción de esporas cápsulas.
Identificar Bacterias ácido resistentes y no ácido resistentes.
CONTENIDO:
Las Bacterias poseen la propiedad de fijar ciertas sustancias colorantes, de ahí
que cuando éstas se tiñen podemos observar algunas de las estructuras
bacterianas que no se observaban en fresco, como por ejemplo cápsulas, esporas,
flagelos, membranas, etc.
Hay algunos tipos de colorantes químicos como: los ácidos, básicos y neutros.
Los colorantes ácidos tienen carga iónica negativa no tiñen a la célula bacteriana
y son usados para impartir el fondo de contraste al frotis, por ejemplo: la eosina.
Los colorantes básicos tienen ión de carga positiva y tiñen las células bacterianas
uniformemente, por ejemplo: violeta de genciana, azul de metileno.

Los colorantes neutros son sales complejas que poseen ambas cargas
iónicas como el eosinato de azul de metileno.
Todo procedimiento de tinción parte de un frotis las sustancias químicas que se
usan para teñir Bacterias se la conoce como colorante.
Se cree que la bacteria se tiñe debido a un intercambio iónico entre
colorantes y elementos activos de la superficie o del interior de la célula
bacteriana.
Hay algunas hipótesis que sugieren que las Bacterias Gram positivas contienen un
complejo proteínico ribonucleasa-Mg en su pared y que el mismo forma un
complejo insoluble con el cristal violeta yodo que no es decolorado con el alcohol.
Otros autores refiriéndose a la tinción de Gram que es universalmente conocida,
sugiere que los organismos Gram positivos tienen un punto isoeléctrico (pH) más
bajo y por lo tanto se combina más firmemente con los colorantes básicos y,
finalmente, otra explicación más reciente y quizás la más acertada se fundamenta
en que las paredes de las Bacterias Gram negativas son muy ricas en contenido
graso, el mismo que es extraído al ser tratada con alcohol aumentando de ésta
forma la porosidad de la pared celular y por lo tanto la salida fácil del complejo
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cristal violeta-yodo. En cambio las Bacterias Gram positivas por la composición

química propia de su pared al ser tratada con el alcohol se deshidrata reduciendo
por lo tanto la permeabilidad y por ende el complejo cristal violeta-yodo no es
extraído.
Todas las bacterias Gram negativas son constantes en su reacción: las Gram
positivas son variables, dependiendo de algunos factores (Cultivos jóvenes,
Cultivos viejos, y técnicas).
CLASIFICACION DE LOS METODOS DE TINCION.
Se clasifican en simples, compuestos y especiales .
Los métodos de tinción simples son aquellos en los que se utiliza un solo colorante.
Métodos de tinción compuestos son aquellos en los que se utilizan más de un
colorante.
Los métodos de tinción especiales son aquellos donde se utilizan colorantes o
reactivos para estudiar ciertas estructuras específicas de las Bacterias como por
ejemplo gránulos metacromáticos, flagelos, cápsulas, esporas, membranas.
METODOS DE TINCION SIMPLE:
Tenemos el método de Violeta de Genciana, el de Azul de Metileno, el de Fucsina
fenicada básica, y el Azul de Metileno alcalino de Loeffler.
METODOS DE TINCION COMPUESTA:
Tenemos el método de Gram, el método de Preston-Morrel, el método de Ziehl-
Neelsen, el método de Kinyoun, método Albert.
METODOS DE TINCIONES ESPECIALES:
Método de Wirtz-Conklin, método de Tinta China, método de Hiss, método de
tinción de Fontana tribondeau, método de Fleming-modificado, método de
Leifson ;rojo congo para leptopiras.
MATERIALES
- Colorantes.
- Láminas porta objetos.
- Laminillas cubre objetos.
- Medios de cultivos con colonias bacterianas.
- Papel filtro.
- Vaso de Coplín.
- Pinza porta lámina.
- Asa de inoculación.
- Tubo de ensayo con solución salina.
- Tinta china.
- Mechero
- Reactivos.
- Microscopio.
- Tubera.

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METODO DE VIOLETA DE GENCIANA:

TECNICA:
1.- Realizar un frotis y cubrir la preparación con violeta de genciana por un
minuto, lavar con agua destilada, luego de secar al medio ambiente o con papel
filtro y queda lista para ser observada con objetivo de inmersión.
Las Bacterias con este método se van a observar en el microscopio de color violeta
o morada.
METODO DE AZUL DE METILENO:
TECNICA:
1.- Realizar un frotis y cubrir la preparación con azul de metileno durante un
minuto, lavar con agua destilada, luego secar al medio ambiente o con papel filtro
y queda lista para ser observada con el lente de inmersión.
Las Bacterias con éste método se van a observar de color azul.
METODO DE FUCSINA FENICADA BASICA:
TECNICA:
1.- Realizar un frotis y cubrir la preparación con fucsina fenicada basica durante
un minuto lavar con agua destilada, luego secar al medio ambiente o con papel
filtro y queda lista para ser observada con el lente de inmersión.
Las Bacterias con éste método se van a observar de color rosado

METODO DE AZUL DE METILENO ALCALINO DE LOEFLER:

TECNICA:
1.- Realizar un frotis y cubrir la preparación con azul de metileno alcalino de
Loffler durante un minuto, lavar con agua destilada, luego secar al medio
ambiente o con papel filtro y queda lista para ser observada con el lente de
inmersión.
Las Bacterias con éste método se van a teñir de color azul, es importante señalar
que con éste método se tiñe bien el bacilo DIFTERICO, las granulaciomnes
metacromáticas del bacilo se observan en el microscopio de una coloración azul
oscuro y el cuerpo del bacilo en un azul pálido.
METODO DE GRAM.
1.- Realizar un frotis y cubrir la preparación con violeta de genciana durante un
minuto luego lavar con agua.
2.- Cubrir la preparación con Licor de Gram que actúa como mordiente, durante
un minuto, luego lavar con agua.
3.- Decolorar la preparación con alcohol 70° ó alcohol cetona hasta eliminar el
exceso de violeta genciana, luego lavar.
4.- Cubrir el frotis con fuscina fenicada o safranina; si se usa fuscina fenicada
diez segundos es suficiente, si se utiliza safranina de 30 a 60 segundos. Luego
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lavamos con agua secamos con papel filtro y queda lista para ser observada con el
lente de inmersión .
Las Bacterias que aparecen teñidas de un color MORADO se denominan GRAM
POSITIVAS, es decir han captado el colorante de violeta de genciana y no han
sido decoloradas por el alcohol. Las Bacterias que aparecen teñidas de color
ROSADO se denominan GRAM NEGATIVAS, es decir que no han fijado el violeta
de genciana, siendo decoloradas por el alcohol y en cambio han captado la
safranina o la fucsina fenicada dependiendo del colorante que se haya utilizado.

METODO DE ZIEHL-NEELSEN:
TECNICA:
1.- Realizar un frotis, cubrirlo con papel filtro y luego colocar fucsina. Calentar
en el mechero la lámina portaobjeto durante 5 minutos, separándola cada vez que
emita vapores, luego lavar con agua.
2.- Decolorar el frotis hasta eliminar el exceso de fuscina fenicada con alcohol
ácido unos segundos lavar con agua luego.
Cubrir elfrotis con azul de metileno un minuto. Lavar con agua, secar con papel
filtro y queda listo para observar con el lente de inmersión.
Los bacilos tuberculosos y leprosos denominados alcohol-ácidoresistente (por
resistir la decoloración con el alcohol y el ácido), se tiñen de color rojo , es decir
han captado la fuscina fenicada. Estos bacilos resaltan su coloración roja sobre el
fondo azul oscuro el azul metileno; ambos bacilos aparecen como bastones finos
rectos y ligeramente curvos.
En conclusión, las Bacterias que se observan de color rojo se denominarán alcohol
ácidos resistentes y las que se observan de color azul no ácido resistentes.
METODO DE ALBERT.
TECNICA:
1.- Realizar un frotis, cubrir la preparación con colorante de Albert durante cuatro
minutos luego lavar con agua.
2.- Cubrir el frotis con lugol durante dos minutos, luego lavar con agua, secar con
papel filtro y queda lista para la observación con el objetivo de inmersión.
Si bien es cierto este método es compuesto por haberse utilizado mas de un
colorante no es menos cierto que también podrían encasillarse dentro de los
métodos de tinciones especiales ya que con este método podemos observar las
granulaciones metacromáticas del bacilo diftérico las mismas que se observa de
una coloración verde oscura y su cuerpo de una coloración verde pálida. Cuando
la bacteria teñida no es el diftérico no se observará estas granulaciones y
únicamente nos limitaremos a ver las Bacterias teñidas de color verde.

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METODO DE PRESTON-MORREL.

TECNICA:
1.- Cubrir la preparación con oxalato de cristal violeta 30 segundos lavar con
yodo lugol durante 30 segundos.
2.- Lavar yodo acetona durante 30 segundos.
3.- Lavar con agua unos segundos.
4.- Cubrir la preparación con carbolfucsina diluida 30 segundos se lava con agua
y se seca queda lista para la observación con objetivo de inmersión.
Este método es una variante de la tinción de Gram, nos da un mejor contraste para
la placa de control.
TINCION DE KINYOUN.
TECNICA:
1.- Extraer y secar la preparación
2.- Fijar con alcohol metílico de 99° hasta la evaporación del mismo.
3.- Cubrir la preparación con la solución de fucsina y dejar actuar 2 minutos. No
es necesario calentar.
4.- Lavar con agua.
5.- Decolorar con la mezcla ácido-alcohol hasta que no se desprenda mas
colorante.
6.- Lavar con agua.
7.- Cubrir la preparación con azul de metileno y dejar actuar de 20a 30 segundos.
8.- Lavar con agua.
9.- Secar y observar con el objetivo de inmersión.
Los microorganismos ácido-alcohol resistentes se colorean de rosa los que no, se
observan de color azul.
METODOS DE TINCIONES ESPECIALES
METODO DE WIRTZ CONKLIN: (ESPORAS).
TECNICA:
1.- Haga una suspensión de los organismos en 0,25 ml. de agua destilada.
2.- Haga un frotis delgado con esta suspensión y fíjelo a la llama.
3.- Cubra el frotis con una solución acuosa con el 5% de verde malaquita y
calientelo hasta emitir vapores de 3 a 6 minutos.
4.- Lave con agua destilada.
5.- Tiña con una solución acuosa al 5% de safranina por 1 minuto
6.- Lave con agua destilada.
7.- Seque y examine.

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Las esporas se tiñe de verde, el cuerpo de la bacteria es rosado.

METODO DE TINTA CHINA (CAPSULAS).

TECNICA:
1.- Realizar un frotis y fijarlo.
2.-Depositar sobre el frotis seco y fijado una gota de tinta china y extenderlo con
laminilla.
3.- Dejar secar.
4.- Colocar safranina durante 1 minuto.
5.- Lavar con agua y observar con el lente inmersión. La cápsula aparece como
espacio claro alrededor del cuerpo bacteriano que se tiñe de rojo pálido sobre un
fondo negro dado por la tinta china.
METODO DE HISS (CAPSULAS):
TECNICA:
1.- Mezcle el material a ser teñido con igual cantidad de suero. Haga un frotis
delgado.
2.- Déjelo secar al aire.
3.- Fíjelo ya sea a la llama o en formalina comercial diluida al 10% (1:10).
4.- Cubra el frotis con el colorante de Hiss o con solución acuosa al 1% de cristal
violeta hasta emitir vapores por unos pocos segundos.
5.- Lave el colorante con una solución acuosa al 20% de sulfato de cobre.
6.- Seque al aire y examine.
El cuerpo bacteriano,células y fondo de la preparación se tiñen de púrpura.
Las cápsulas son incoloras o lavanda pálida.
TINCION DE PARED CELULAR.
1.- Se utiliza cultivos jóvenes de 18 a 20 horas de B. subtilis.
2.- Realizar un frotis grueso, con el frotis húmedo se coloca el ácido
fosfomolíbdico 1% por 4 minutos.
3.- Escurrir el ácido fosfomolíbdico y agregar verde de metilo 1% por 5 minutos.
4.- Lavar.
Este método se fundamenta en que el ácido fosfomolíbdico hidroliza el citoplasma,
pero respeta la pared que aparece de color verde.

METODO DE FLEMING MODIFICADO. (ESPORAS):

1.- Carbol fucsina de Ziehl - 5 minutos calentando.

2.- Lavar.
3.- Decolorar con etanol 30 segundos.
4.- Lavar.
5.- Extendido de una gota de tinta china y dejar secar.

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Es importante reconocer que cuando no se usa métodos especiales de tinción de

esporas y se utiliza el método de Gram las esporas aparecen como un espacio
claro no teñido y el cuerpo de la bacteria de color violeta.

TINCION DE FONTANA TRIBAONDEAU. (FLAGELOS):

Es una coloración de impregnación argéntica que permite la observación de

ciertos microorganismos (espiroquetas) o de estructuras muy finas (flagelos).
TECNICA:
1.- Extraer y secar a temperatura ambiente.
2.- - Cubrir la preparación con el fijador y dejar actuar 90 segundos.
3.- Lavar con alcohol etílico de 95°.
4.- Cubrir la preparación con el mordiente, calentando hasta el desprendimiento
de vapores y dejar actuar durante 30 segundos.
5.-- Lavar con agua.
6.- Cubrir la preparación con solución de nitrato de plata, calentando hasta el
desprendimiento de vapores . Mantenerlo de 15 a 20 segundos.
7.-- Lavar con agua.
8.-- Secar a temperatura ambiente y observar con objetivo de inmersión.
Las espiroquetas se observan de color castaño.

TINCION DE LEIFSON: (FLAGELOS):

Para realizar la tinción de flagelos se debe partir de un cultivo líquido adecuado
de 18 a 24 horas, incubado a temperatura ambiente.
REACTIVOS:
Preparar tres soluciones por separado.
a.- Cloruro sódico: 1,5g.
Agua destilada 10ml.
b.- Acido tánico 10g.
Agua destilada 100ml.
c.- Acetato de p-rosanilina 0,9g.
p-rosanilina ClH: 0,3 g.
Alcohol etílico de 95 °: 100ml.
Dejar en reposo 12 horas a temperatura ambiente. Tomar volúmenes iguales de A,
B, C, agitar y dejar 2 horas en reposo.

TECNICA:
1.- Sobre 4 ml de cultivo añadir 0,25 ml de formol al 5%.
2.- Dejar reposar 15 minutos.
3.- Añadir agua destilada mezcla y centrifugar retirando el sobrenadante. Repetir
2 veces..
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4.- Resuspender en 1-2 ml. de agua destilada debe quedar suspensión bacteriana
ligeramente turbia.
5.- Flamear un portaobjeto limpio y dejar enfriar.

6.- Depositar unas gotas de la suspensión , con asa o pipeta, en un extremo del
portaobjetos inclinado, de forma que las gotas se extiendan a lo largo del cristal.
7.- Dejar secar a temperatura ambiente y no fijar por el calor.
8.- Cubrir la preparación con 1 ml. de colorante.
9.- Dejar de 5 a 15 minutos hasta que el alcohol se evapore.
10- Una vez formado el precipitado lavar con agua.
11.- Secar a temperatura ambiente y observar con objetivo de inmersión.
Los flagelos se tiñen de color rojo oscuro o azul negro.

Además de este método, tenemos el método de Gray que también sirve para teñir
flagelos.
VENTAJAS Y DESVENTAJAS.
Las ventajas de los métodos de tinción escriba en que podemos observar algunas
estructuras de las Bacterias que no podían ser observadas en la observación en
fresco, es así como un método universal de Gram podemos determinar
rápidamente si una bacteria es Gram positiva o Gram negativa. Con el método de
Zielh-Neelsen podíamos determinar si una bacteria era ácido resistente o no y si
queremos ir más adelante nos hemos dado cuenta que con los métodos de tinciones
especiales podemos observar en el microscopio estructuras como cápsulas,
esporas, pared, flagelos gránulos .
Las desventajas serían que no observamos a la bacteria viva y que con los
colorantes las Bacterias podrían sufrir una discreta deformación de sus
estructuras.
RESTRICCIONES
La mayoría de los métodos de tinción aquí estudiados, año a año se han venido
realizando en la práctica de bacteriología. Lo ideal sería que todos los métodos
sean estudiados, pero ésto no ha sido posible debido a la carencia de colorantes y
reactivos en el departamento de bacteriología. En otros casos, como en el de la
tinción de flagelos que se necesita de un mayor tiempo para la preparación de la
tinción. Pero ésto no sería inconveniente si nosotros con antelación a la práctica
llevamos preparado parte del material.

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AUTOR:DR GONZALO ZABALA VILLACIS

MEDIOS DE CULTIVO DE USO FRECUENTE EN

BACTERIOLOGIA
OBJETIVO ESPECIFICO DE LA CLASE
1.- Al final de la clase el alumno estará en la capacidad de DISTINGUIR
los diferentes medios de cultivos por sus nombres.
2.- Estará en capacidad de EXPLICAR los usos de los medios de cultivo.
3.- Estará en capacidad de SELECCIONAR el medio de cultivo de
acuerdo a la especie bacteriana a cultivarse.
4.- Estará en capacidad de VALORAR la importancia de los medios de
cultivo y su utilidad en la industria o fabricación de antibióticos,
vacunas, etc.
CONCEPTO DE MEDIOS DE CULTIVOS.-
Se denomina medios de cultivos a las sustancias o mezcla de
sustancias que proporcionan en forma asimilable todo los elementos
necesarios para que las Bacterias puedan crecer y multiplicarse dando
lugar a la formación de colonias.
CONDICIONES O FACTORES QUE DEBEN REUNIR UN MEDIO
DE CULTIVO.-
El desarrollo de una bacteria en un medio de cultivo depende de
una serie de factores o condiciones, las principales son:
a.-CONTENIDO NUTRITIVO ADECUADO (Composición).-
Es decir los elementos indispensables para que las Bacterias
puedan desarrollar y multiplicarse. Al respecto las necesidades de las
Bacterias son extremadamente variables. Como principales nutrientes se
pueden mencionar los siguientes:
- FUENTES DE CARBONO.-
Como los azúcares, ácido acético,de echo el Carbono es necesario para
todas las Bacterias ( ninguna puede multiplicarse desprovista de CO2).
- FUENTES DE NITROGENO.-
Como los nitratos y sales de amonio.
- FUENTES DE AZUFRE.-
Prácticamente todos los microorganismos, utilizan el azufre de los
sulfatos, sulfuros y tiosulfatos

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- FUENTES DE FOSFORO.-
Todas la Bacterias utilizan el fósforo de los fosfatos.
- FUENTES DE OXIGENO E HIDROGENO.-
Procedentes del agua.- Minerales como Potasio, Magnesio, Calcio,
Hierro, Zinc, Cobalto, Cobre,etc.
Otras sustancias importantes son las denominadas factores de
crecimiento que están constituida por las vitaminas (A, B, C, D,) y
principalmente los aminoácidos y las bases púricas y pirimidínicas. Son
sustancias, que las Bacterias, por sí solas son incapaces de sintetizar.
b.- pH.-
Las Bacterias se desarrollan habitualmente a pH próximo a la
neutralidad (6.8 a 7.6) salvo excepciones, porque algunas Bacterias
pueden crecer a pH muy ácidos o muy alcalinos. Para ajustar el pH de
los medios se utiliza sobretodo sustancias indicadoras o bien en
comparación con una serie de soluciones patrón de un indicador
coloreado
c.- PRESION OSMOTICA.-
Debido a la composición de la pared celular bacteriana los gérmenes se
adaptan bien a las variaciones de la presión osmótica, sin embargo “in
vitro”, los medios de cultivo se preparan en condiciones de isotonía.
d.- EL POTENCIAL REDOX.-
Está en relación con el tipo respiratorio de cada bacteria, que puede ser
anaerobia estricta, aerobia y anaerobia facultativa, aerobia estricta y
microaerófila.
e.- LA HIDRATACION.-
La presencia del agua es indispensable para el crecimiento bacteriano
por lo que deberá estar presente en los medios de cultivo en cantidades
suficientes.
f.- LA TEMPERATURA.-
En caso de las Bacterias los medios de los cultivos se incuba de 35 -37
°C.
g.- LA ATMOSFERA.-
Algunas Bacterias, especialmente aerobias y facultativas, necesitan para
su óptimo desarrollo la presencia de ciertos ambientes gaseosos. El mas
utilizado es el CO2 que varían del 3 - 10%
h.- DEBEN SER DISTRIBUIDOS EN RECIPIENTES.-
Adecuados en los cuales son esterilizados y mantenidos al abrigo
de contaminaciones externas tanto antes de sembrados como en lo
posterior.

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PRINCIPALES OBJETIVOS DE UN MEDIO DE CULTIVO

a.- Obtener cultivos puros para estudiar las Bacterias y mantenerla viva
indefinidamente. Excepto algunas raras excepciones, todo examen
bacteriológico debe terminar con el cultivo del producto a examinar.
Efectivamente, este cultivo es a
menudo necesario para la evidencia de Bacterias (siempre que su
número sea demasiado pequeño para que podamos descubrirla por el
simple examen microscópico).
b.- Facilitar el hallazgo, aislamiento y separación de las distintas
especies bacterianas presentes en un producto patológico.
c.- Observar el aspecto de las colonias a simple vista o con pequeños
aumentos (lupa) con diagnósticos.
d.- Obtener cantidades apreciables de Bacterias para fines industriales,
como en la elaboración de vacunas y autovacunas.
e.- Estudiar la fisiología de la bacteria.
f.- Estudiar la toxigénesis y las cualidades de las toxinas.
g.- Es necesario para los estudios complementarios, como los de
sensibilidad de las Bacterias a los distintos antibióticos (antibiogramas).

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Debido a la aparición de nuevos medios de cultivo, cada día se torna
mas difícil encasillarlos dentro de las clasificaciones tradicionales, por
lo tanto nos limitaremos a mencionar muy someramente las definiciones
que se han dado a ciertos grupos de medios de cultivos.

1.- DE ACUERDO A SU PROCEDENCIA O PREPARACION.-

a.- MEDIOS NATURALES O EMPIRICOS.-

Son aquellos que están constituidos por sustancias o productos
naturales ya sea de origen animal o vegetal, es decir que no han sido
creados artificialmente por el hombre. Ejemplo: gelatina, huevo, leche,
papa, levadura, sueros, líquido ascítico, pleural, sinovial, peritoneal.
b.- MEDIOS ARTIFICALES.-
Son aquellos elaborados por el hombre, que contiene químicas de
la naturaleza y proporciones conocidas, junto a productos de origen
natural. Actualmente son los mas utilizados. En el comercio existen
infinidad de medios de cultivo deshidratados que facilitan en gran
manera la labor de los laboratorios de Microbiología y que garantizan
una buena calidad de funcionamiento.
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2.-DE ACUERDO A CONSISTENCIA O ESTADO FISICO.-

a.- MEDIOS LIQUIDOS,como los caldos:Nutritivo,tioglicolato etc.

b.- MEDIOS SEMISOLIDOS.-
Son aquellos que cumplen poca cantidad de agar 5% y que
generalmente se utilizan para estudiar la movilidad de los
microorganismos o para estudios zimográficos, o para su conservación ,
Ejemplo: agar motilidad, Medio de Flecher, etc.
c.- MEDIOS SOLIDOS.-
Son agares, ejemplo: agar citrato, agar urea, agar bismuto, etc.
3.- DE ACUERDO A SU CALIDAD O SU UTILIZACION.-
a.- MEDIOS SELECTIVOS O INHIBITORIOS.-
Son aquellos en los que se desarrolla una especie bacteriana o un grupo
de ellas, porque contienen sustancias que inhiben el desarrollo de las
demás y que están presentes en la muestra. La selectividad del medio se
consigue por la adición de sustancias como las sales biliares, que
inhiben a las formas cocáceas Gram+, o la Azida sódica, que solo
permite el crecimiento de los cocos Gram+. Los antibióticos son otras
sustancias que transforman los medios de cultivo en selectivos.
b.-MEDIOS DIFERENCIALES O DE DIFERENCIACION.-
Son aquellos que se utilizan para poner de manifiesto a las Bacterias que
dan positiva alguna propiedad bioquímica y que están presentes en la
mezcla. Pueden tener indicadores del ph, entre las cuales tenemos el
rojo fenol y azul de bromo timol, los cuales confieren al medio de cultivo
distintos colores según la reacción sea ácida o sea alcalina. La mayoría
de los medios destinados a las reacciones bioquímicas de las
Enterobacterias son medios diferenciales. Ejemplo.: agar urea de
Christiansen, agar citrato de Simmons, etc.
c.- MEDIOS ENRIQUECIDOS.-
Son aquellos que favorecen el crecimiento de algún tipo de Bacterias que
se encuentran en forma minoritaria en una mezcla de varios grupos
bacterianos. Son medios básales a los que se les ha agregado ciertos
nutrientes como vitaminas, proteínas, sangre desfibrinada. Ejemplo.:
agar sangre, agar chocolate, agar Thayer Martín, agar Muller Hinton,
etc

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d.- MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO.-

Son aquellos medios de cultivo a los cuales se les ha añadido sustancias
inhibitorias, lo que da como resultado medios de cultivo que permiten el
desarrollo de Bacterias, pero dentro de un estrecho margen. Ejemplo.:
Caldo de Tetrationato, Caldo Selenito, Thayer Martin modificado,etc.
e.-MEDIOS DE IDENTIFICACION.-
Son aquellos que se utilizan para estudiar la acción de un solo tipo de
Bacterias frente a un determinado sustrato. Se diferencia de los Medios
Diferenciales, en que se siembran con Bacterias pertenecientes a un solo
clon. Se utiliza para los estudios de identificación de las Bacterias.
f.- MEDIOS DE CULTIVO BASICOS.-
Son aquellos medios cuya fórmula contiene los nutrientes necesarios
para el desarrollo de la mayoría de los microorganismos no fastidiosos,
entre estos nutrientes tenemos: Infusión de carne, peptona, agua, sal,etc.
Ejemplo: Caldo nutritivo, Caldo de peptona, Caldo de triptona de soya,
agar nutritivo inclinado, agar nutritivo en base profunda.
g.- MEDIOS DE MULTIPLICACION.-
Son aquellos que poseen una composición determinada y óptima para
el grupo de Bacterias a las que va destinado, y que permitirá un máximo
de aumento celular bacteriano en un mínimo tiempo. Son medios
utilizados en la industria, en la preparación de vacunas, de antibióticos,
etc.
h.- MEDIOS DE CONSERVACION.-
Son aquellos cuya composición favorecen el mantenimiento de los
microorganismos que en él se siembran y que posteriormente se incuban
a +2, +4 °C. Algunos medios de conservación incluyen glicerol y se
guardan en congelador a -20 °C. Estos medios de conservación han sido
prácticamente desplazados por la liofilización.

Existe una variación de medios de conservación que son los MEDIOS

DE TRANSPORTE, cuya finalidad es mantener en estado viable, aunque
sin producción ( o mínimamente), microorganismos presentes en una
muestra, permitiendo con posterioridad recuperar incluso a los que
están minoritariamente presentes. Actualmente los medios de transporte
utilizados son: el medio de Stuart, el de Amies y el medio de Cary-Blair.

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PRINCIPALES MEDIOS DE CULTIVO UTILIZADOS EN

BACTERIOLOGIA.

CALDO NUTRITIVO.-
Son medios de cultivo líquidos constituidos por agua, peptona y extracto
de carne. Sirve para el cultivo de microorganismos de escasos
requerimientos nutricionales; tales como la E.coli, estafilococos.
AGARES NUTRITIVOS.-
Son caldos nutritivos a los que se les ha agregado agar para su
solidificación. Contiene cloruro de sodio. Pueden ser utilizados para el
cultivo de microorganismos de escasos requerimientos nutritivos, para
pruebas de hemólisis cuando se emplea adicionado de sangre, puede
servir para el cultivo y recuento de microorganismos en las aguas, heces
u orina y cualquier otro producto. Ejemplo.:Tenemos el agar nutritivo
inclinado y el agar nutritivo profundo.
AGAR SANGRE.-
El agar sangre es un medio enriquecido sólido que nos permite ver las
propiedades hemolíticas de ciertas Bacterias tales como Estreptococos,
Estafilococos, de diversos materiales. El agar sangre se puede preparar
con sangre desfibrinada de conejo o de borrego adicionada a un agar
que contenga infusión de carne. Este agar contiene de 5 al 10% de
sangre estéril.
AGAR T.S.I..- (KLIGER MODIFICADO).-
Es un medio sólido diferencial que se recomienda para la identificación
de los bacilos entéricos Gram negativos en base a la fermentación de
dextrosa, lactosa y sucrosa, y por la producción de Sulfuro de Hidrógeno
que los utiliza en los coprocultivos.
AGAR S. S. .-
El agar S. S. es un medio diferencial y selectivo utilizado para el
aislamiento de Salmonella y Shigellas a partir de heces y otros
materiales en que se sospeche su presencia, además inhibe el desarrollo
de todas las Bacterias Gram(+) y algunas Gram (-) no deseables, las
mismas que están inhibidas por el verde brillante de las sales biliares y
las elevadas concentraciones de tiosulfato y citrato.
AGAR CITRATO de SIMMONS.-
Es un medio diferencial empleado para la investigación de la utilización
del citrato como única fuente de Carbono, produciendo alcalinidad. Este
medio es una modificación del de Koser, al cual se le ha agregado agar y
un indicador del pH azul de bromo timol. Se lo emplea en los test
bioquímicos.

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AGAR UREA DE CHRISTIANSEN.-

Es un medio sólido diferencial empleado para la investigación de la
Bacterias que utilizan urea como única fuente de Nitrógeno y
particularmente para diferenciar algunos miembros de la familia
Enterobacteriaceae. Se lo emplea en los test bioquímicos.
AGAR MAC CONKEY.-
Es un medio selectivo y diferencial utilizado para el cultivo de
enterobacterias Gram (-) e impide el crecimiento de las bacterias Gram
(+) que es inhibida por las sales biliares y por el cristal violeta que
contiene. Se lo utiliza preferentemente en los urocultivos y coprocultivos
donde abunda la flora Gram (-).
AGAR BISMUTO SULFITO.-
Es un medio de cultivo sólido selectivo que sigue especialmente para el
aislamiento de Salmonella tifosa a partir de heces, en agua servidas,
alimentos, etc. Se recomienda, en particular después de un
enriquecimiento preliminar del espécimen en caldo de tetrationato u otro
caldo de enriquecimiento. El efecto selectivo de este medio de basa en su
contenido de verde brillante e inhibe ante todo el enriquecimiento de la
flora Gram (+) acompañante.
CALDO DE THIOGLICOLATO.-
Es un medio de cultivo líquido que se emplea para la multiplicación y el
aislamiento de Bacterias anaerobias estrictas, facultativas y de gérmenes
microaerófilos. También se los emplean para los test de esterilidad de
ciertos productos biológicos.
CALDO DE TETRATIONATO.-
Es un medio enriquecido por la adición de bilis de buey, también es
selectivo porque se utiliza para el crecimiento de Salmonellas. El verde
brillante que entre en su composición inhibe la flora Gram (+). Se utiliza
cuando la muestra es pobre en gérmenes tal como sucede en pacientes
crónicos, convalecientes o portadores sanos.
AGAR MOTILIDAD.-
Es un medio semisólido y se emplea para averiguar la motilidad de las
Bacterias. Es un medio diferencial, se lo emplea en los test bioquímicos.
AGAR CHOCOLATE.-
Es un medio sólido especial, utilizado para el crecimiento de
microorganismos exigentes como las neisserias patógenas (gonococo y
meningococo). En este medio pueden efectuarse las siembras del líquido
cefalorraquídeo y pus.

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AGAR TELURITO.-
Es un medio de cultivo sólido selectivo utilizado para la diferenciación
colonial de los tres tipos de bacilos diftérico: Mitis, Gravis e
intermedius, a partir de exudados nasales y faringeos. Su contenido en
telurito de potasio permite, en primera instancia inhibir el desarrollo de
la flora contaminante.
MEDIO DE HUEVO o de PAI.-
Es un medio de cultivo sólido selectivo empleado para el crecimiento del
bacilo diftérico en general.
AGAR CHAPMAN o MANITOL SALADO.-
Es un medio de cultivo sólido selectivo empleado en el aislamiento de
estafilococos basado en la tolerancia que poseen a una alta
concentración de cloruro de sodio que al mismo tiempo inhibe el
desarrollo de otros microorganismos.
MEDIO DE LOWENSTEIN - JENSEN.-
Es un medio de cultivo sólido selectivo empleado universalmente para el
cultivo y el aislamiento de micobacterias, en especial M. tuberculosis.
Este medio debe conservarse en tubos herméticamente cerrados y en
refrigeración
MEDIO DE THAYER MARTIN.-
Es un medio enriquecido que permite el crecimiento de cepas exigentes
de Neisserias.
AGUA O CALDO DE PEPTONA.-
Es un medio líquido diferencial; que se utiliza para el cultivo de
enterobacterias para observar la producción de indol. se lo emplea en
las reacciones bioquímicas .
CALDO DE SELENITO F.-
Es un medio de cultivo selectivo recomendado para la detección e
identificación de Salmonellas en heces (Coprocultivos), alimentos,
productos lácteos y otros materiales de importancia sanitaria.
AGAR MULLER - HINTON.-
Es un medio enriquecido recomendado para el aislamiento y cultivo, en
especial de la familia Neisseriaceae. Constituye un excelente medio para
el diagnóstico precoz de los portadores de microorganismos
rinofaríngeos. También se lo utiliza para la interpretación del Test de
sensibilidad de las Bacterias o los antibióticos.

MEDIO DE LOEFLER.-
Es un medio altamente nutritivo recomendado universalmente para el
cultivo y aislamiento de Corynebacterium diphterieae en exudado
rinofaríngeos.
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MEDIO DE BORDET - GENGOU.-

Es un medio enriquecido con sangre que se utiliza para el diagnóstico
bacteriológico de la Tosferina, es decir para el aislamiento de la
Bordella pertusis.
EUGON AGAR o EXUBERANTE AGAR.-
Es un medio enriquecido muy adecuado para obtener el desarrollo
exuberante de distintas bacterias de difícil crecimiento, como
Hemophilus, Neisseria, Pasteurella, Brucella y lactobacilos. Es muy
utilizado en bacteriología alimenticia para el control de las carnes y
alimentos. También para la preparación de antígeno y vacunas.
AGAR SENSIBILIDAD.-
Es un medio de enriquecimiento especial, sólido que se envasa en las
cajas de Petri y se lo utiliza en las pruebas de sensibilidad in vitro, de
las Bacterias a los antibióticos (Antibiogramas).
MEDIO DE STONBRINK.-
Medio recomendado para el aislamiento de especies de Mycobacterium
bovis, que no se desarrollan normalmente en Lowenstein - Jensen.
MEDIO DE TRANSPORTE DE STUART.-
El medio de transporte de Stuart, originalmente usado para facilitar el
transporte de muestras tomadas con hisopos para cultivar gonococos,
puede ser también usado para llevar muestra con otros microorganismos
de distintos materiales (vías respiratorias, entéricos, etc.). Es un medio
semisólido no nutritivo que contiene glicolato de sodio para suprimir
cambios oxidativos y enzimáticos de las células. Este medio tiene la
ventaja de mantener la vitalidad de todos los gérmenes aerobios o
microaerófilos delicados.
AGAR TCBS.- (Agar de Tiosulfato-citrato- bilis y sacarosa).-
El Agar TCBS es un medio selectivo que se utiliza para el cultivo y
aislamiento del Vibrio cholereae y otro vibrio enteropatógeno. Las
concentraciones de tiosulfato, citrato y alcalinidad del medio inhiben el
crecimiento de otras enterobacterias presentes en las heces. La bilis y el
citrato disminuye el desarrollo de Proteus y enterococos favoreciendo el
de vibrio.
MEDIO DE CLED.- (cisteina- lactosa- electrolito deficiente).-
El Agar CLED es un medio no inhibidor, que ha sido adoptado
universalmente para efectuar recuento de colonias y aislamiento en
bacteriología urinaria ya que permite el desarrollo de todos los
patógenos urinarios y previene el desarrollo invasor (swarming) de
Proteus sp.
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CONTROL DE CALIDAD DE LOS MEDIOS

Con los medios de cultivo se deben establecer tres tipos de control antes
de considerarlos aptos para utilizar:
CONTROL DE ESTERILIDAD.-
Se efectúa incubando algunas placas, escogidas del lote al azar durante
2 días a 35 °C y 5 días a temperatura ambiente. El resto de las placas se
guarda en refrigerador a 4 °C, y solo se utiliza del grupo control
muestra ausencia de cualquier tipo de crecimiento después de los 7 días.

CONTROL DE CALIDAD.-
Se realiza para comprobar que el medio contiene aquellos componentes
que le caracterizan. Para las comprobaciones se utilizan por lo menos
dos gérmenes distintos, uno que crece sobre el medio, o da positiva una
determinada prueba, y otro que no crece, o da negativa.

CONTROL DE CADUCIDAD.-
Para ponerlo en práctica es necesario que en el momento del empaque
se rotule en algún lugar visible de la placa, la fecha de preparación,
además el nombre del medio. De esta manera se podrá saber en todo
momento el tiempo que falta para llegar al límite de su utilización.

Hasta aquí el primer parcial.

REVISADO Y ACTUALIZADO

DR EDUARDO CHANCAY L
PROFESOR PRINCIPAL
JULIO/2002

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