Anda di halaman 1dari 5

Pengujian Laboratorium

Hemolisis diuji dengan mengukur konsentrasi hemoglobin bebas serum dengan


referensi cyanmethemoglobin metode pada spektrofotometer UV-1700 (Shimadzu
Italia S.l.r., Milano, Italia) (13). Penentuan hemoglobin, sel darah putih dan
jumlah trombosit dilakukan pada Sistem ADVIA 120 (Bayer Diagnostics,
Newbury, Berkshire, UK).

Albumin serum (metode kolorimetri bromocresol hijau), alkalin fosfatase (ALP)


(metode IFCC dengan aminomethyl- propanol buffer), alanine aminotransferase
(ALT) (Metode IFCC dengan aktivasi fosfat piridoksal), aspartat aminotransferase
(AST) (metode IFCC dengan pyridoxal aktivasi fosfat), total bilirubin (metode
diazo, menggunakan 2,5-dichlorophenyl diazonium tetrafluoroborate), kalsium
(metode kolorimetri, o-cresolphthalein complexone), creatine kinase (CK)
(metode IFCC N-acetylcysteine-diaktifkan), kreatinin (metode kinetik Jaffe), g-
glutamyltransferase (GGT) (metode Szasz-Persijn, menggunakan L-g-glutamyl-3-
carboxy- 4-nitroanilide), glukosa (enzimatik, metode hexokinase), zat besi
(Metode FerroZine), dehidrogenase laktat (LDH) (DGKC metode), lipase (metode
kolorimetri, menggunakan 1,2-O-dilaurylrac- glycero-3-glutaric acid-6-
methylresorufin ester), magnesium (metode chlorophosphonazo), fosfor anorganik
(Metode amonium molibdat), nitrogen urea (urease / glutamat metode kinetik
dehidrogenase), dan asam urat (uricase / metode enzimatik peroksidase) yang
diuji pada a Roche / Hitachi Sistem Modular P (Roche Diagnostics GmbH,
Mannheim, Jerman), menurut produsen spesifikasi dan menggunakan reagen
proprietary. Natrium klorida dan potasium diukur pada Modular Roche / Hitachi
Sistem dengan metode tidak langsung menggunakan ion-selektif elektroda.

Ketidaktepatan total, seperti yang diungkapkan oleh koefisien variasi (CV),


kurang dari 2,5% untuk semua analit yg diuji. Semua pengukuran dilakukan
dalam rangkap dua dalam satu sesi analitik dan hasil akhirnya dilaporkan sebagai
mean dari pengukuran berpasangan. Signifikansi perbedaan antar sampel dinilai
oleh Student yang berpasangan t-test; tingkat signifikansi statistik ditetapkan pada
p-0,05. Bland-Altman dan analisis limit-of-agreement digunakan untuk
membandingkan hasil pengukuran independen dan perbedaan akhirnya dilaporkan
sebagai persentase rata-rata (14).

Hasil

Sebagai hasil dari siklus pembekuan semalam, semua jumlah sel darah jauh di
luar sensitivitas analitis instrumen (jumlah sel darah putih -0,2 = 103 / mL, jumlah
trombosit -5 = 103 / mL dan eritrosit -0,1 = 106 / mL). Hasil penyelidikan saat ini
pada spesimen hemolisi disajikan dalam Tabel 1 dan 2.

Gangguan hemolisis, dinyatakan sebagai rata-rata absolut dan persentase relative


bias, dengan hadirnya di sekitar linear bergantung pada konsentrasi akhir sel darah
dalam spesimen. Sebagai yang di harapkan, penambahan sel darah yang
dihasilkan cenderung konsisten dan bergantung pada dosis perkiraan yang
berlebihan seperti ALT, AST, kreatinin, CK, besi, LDH, lipase, magnesium,
fosfor, kalium dan urea, sedangkan nilai rata-rata albumin, ALP, klorida, GGT,
glukosa dan natrium secara substansial menurun bila dibandingkan dengan
spesimen garis dasar (no lisat). Perbedaan signifikan dalam sampel secara statistik
mengandung 0,6 g / L serum hemoglobin yang dapat di amati untuk AST, LDH,
kalium dan sodium. Albumin, total bilirubin, kalsium, klorida dan pengukuran
asam urat tidak signifikan berbeda, bahkan dalam spesimen yang mengandung
hingga 20,6 g / L serum hemoglobin. Variasi bermakna secara klinis, sebagaimana
tercermin dari penyimpangan dari analisis saat ini yaitu spesifikasi kualitas untuk
bias yang diinginkan (15), diamati untuk AST, klorida, LDH, kalium dan natrium
dalam sampel yang ringan atau hampir tidak terdeteksi hemolisis dengan
pemeriksaan visual (0,6 g / L serum hemoglobin) (Tabel 1).

Dari analit yang dievaluasi, nilai bias dicatat untuk total bilirubin, kalsium dan
glukosa adalah satu-satunya yang tidak mencapai secara klinis variasi signifikan,
bahkan pada konsentrasi tertinggi serum hemoglobin (20,6 g / L). Meskipun
hubungan variasi yang kurang linear untuk membebaskan konsentrasi hemoglobin
dalam serum, yang tidak dapat diprediksi, respon heterogen dan sampel-spesifik
diamati untuk beberapa parameter, seperti ditunjukkan oleh amplitudo dari rata-
rata Riwayat Hidup yang dihitung dari masing-masing 12 sampel pasien
independen yang diuji (Meja 2).

Bahan dan Metode

Desain eksperimental dan pengambilan sampel darah

1. Pada pagi hari memberi informed consent pada 12 sukarelawan untuk


investigasi, kemudian setelah di evaluasi ambil 3,5 mL darah dari 12
sukarelawan sehat. Lalu dikumpulkan secara terpisah ke dalam dua tabung
vakum silikon berukuran 4,6 mL yang tidak mengandung koagulan dengan
menggunakan jarum ukuran 20 G.
2. Relawan tersebut dipilih atas dasar kisaran nilai yang homogen untuk jumlah
sel darah putih (3,25-4,98 = 103 / mL), jumlah trombosit (153-281 = 103 /
mL) dan konsentrasi hemoglobin (137–146 g / L).
3. Spesimen pertama (sampel 1) segera disimpan pada suhu –70 ⁰C, sedangkan
yang kedua (sampel 2) disentrifugasi dengan kecepatan 1500 g selama 10
menit pada suhu kamar, kemudian serum dipisahkan dan disimpan pada –70
⁰C.
4. Di waktu pagi hari kedua, darah dari masing-masing 12 relawan yang sama
dikumpulkan menjadi empat tambahan tabung 6.0-mL dari jenis yang sama
dan menggunakan jarum yang sama.
5. Sampel dikumpulkan (sampel 3) dan akhirnya dibagi menjadi ukuran sampel
menjadi 2 mL.
6. Sampel 1 dan 2 dicairkan, kemudian sembilan pengenceran serum hemoglobin
disiapkan dengan mencampur ukuran sampel 1 dan 2.
7. Kemudian 200 mL dari masing-masing pengenceran ditambahkan ke 2 mL
darah yang terkumpul pada hari ke 2 (sampel 3) untuk mencapai konsentrasi
serum hemoglobin dalam spesimen mulai dari 0 hingga 20,6 g / L, sehingga
hampir mewakili hemolisis secara acak dalam sampel yang dikirim ke
laboratorium.
8. Setelah itu darah disentrifugasi dengan kecepatan 1500 g selama 10 menit
pada suhu kamar dan serum dipisahkan lalu segera dianalisis.
Keterangan Tabel 1 yang diatas

Pengaruh hemolisis pada pengujian kimia klinis rutin. Perbedaan diberikan


sebagai nilai absolut dan persentase bias relatif (mean "SD) dari sampel baseline
(tidak ada lisis).

Nilai dibandingkan dengan spesifikasi kualitas analitis saat ini untuk bias yang
diinginkan (15). Perbedaan yang signifikan secara statistik dievaluasi oleh Student
t-test berpasangan (ap-0,05; bp-0,01).

Hasil dengan variasi yang diinduksi hemolisis yang melebihi bias yang diinginkan
diinginkan ditandai dengan huruf tebal.

Keterangan Tabel 2 yang diatas

Pengaruh hemolisis pada pengujian kimia klinis rutin: koefisien variasi rata-rata
(CV) (ns12) ditentukan dari spesimen referensi (tidak ada lisis) dan masing-
masing dari delapan sampel homolog yang mengandung pengenceran skala bebas
serum hemoglobin.

Yang dibawah tabel 2

Nilai dibandingkan dengan spesifikasi kualitas analitis saat ini untuk bias yang
diinginkan (15).