imunohistokimia adalah suatu metode kombinasi dari anatomi, imunologi dan biokimia

untuk mengidentifikasi komponen jaringan yang memiliki ciri tertentu dengan menggunakan
interaksi antara antigen target dan antibodi spesifik yang diberi label. Imunohistokimia
merupakan suatu cara pemeriksaan untuk mengukur derajat imunitas atau kadar antibodi atau
antigen dalam sediaan jaringan. Nama imunohistokimia diambil dari nama immune yang
menunjukkan bahwa prinsip dasar dalam proses ini ialah penggunaan antibodi
dan histo menunjukkan jaringan secara mikroskopis. Dengan kata lain, imunohistokimia
adalah metode untuk mendeteksi keberadaan antigen spesifik di dalam sel suatu jaringan
dengan menggunakan prinsip pengikatan antara antibodi (Ab) dan antigen (Ag) pada jaringan
hidup. Pemeriksaan ini membutuhkan jaringan dengan jumlah dan ketebalan yang bervariasi
tergantung dari tujuan pemeriksaan.
Teknik imunohistokimia bermanfaat untuk identifikasi, lokalisasi, dan karakterisasi
suatu antigen tertentu, serta menentukan diagnosis, therapi, dan prognosis kanker. Teknik ini
diawali dengan pembuatan irisan jaringan (histologi) untuk diamati dibawah
mikroskop.Tempat pengikatan antara antibodi dengan protein spesifik diidentifikasi dengan
marker yang biasanya dilekatkan pada antibodi dan bisa divisualisasi secara langsung atau
dengan reaksi untuk mengidentifikasi marker. Adapun beberapa marker yang berupa senyawa
berwarna antara lain :
· Luminescence
· Zat berfluoresensi : fluorescein, umbelliferon, tetrametil rodhamin
· Logam berat : colloidal, microsphere, gold, silver, label radioaktif
· Enzim : Horse Radish Peroxidase (HRP) dan alkaline phosphatase.
Enzim (yang dipakai untuk melabel) selanjutnya direaksikan dengan substrat kromogen (yaitu
substrat yang menghasilkan produk akhir berwarna dan tidak larut) yang dapat diamati dengan
mikroskop bright field (mikroskop bidang terang). Akan tetapi seiring berkembangnya ilmu
pengetahuan khususnya dunia biologi, teknik imunohistokimia dapat langsung diamati (tanpa
direaksikan lagi dengan kromogen yang menghasilkan warna) dibawah
mikroskop fluorescense.
Langkah-langkah dalam melakukan imunohistokimia dibagi menjadi 2, yaitu preparasi
sampel dan labeling. Preparasi sampel adalah persiapan untuk membentuk preparat jaringan
dari jaringan yang masih segar. Preparasi sample terdiri dari pengambilan jaringan yang masih
segar, fiksasi jaringan biasanya menggunakan formaldehid, embedding jaringan dengan
parafin atau dibekukan pada nitrogen cair, pemotongan jaringan dengan menggunakan
mikrotom, deparafinisasi dan antigen retrieval untuk membebaskan epitop jaringan, dan
bloking dari protein tidak spesifik lain. Sampel labeling adalah pemberian bahan-bahan untuk
dapat mewarnai preparat. Sampel labeling terdiri dari imunodeteksi menggunakan antibodi
primer dan sekunder, pemberian substrat, dan counterstaining untuk mewarnai jaringan lain di
sekitarnya. Antibodi adalah suatu imunoglobulin yang dihasilkan oleh sistem imun dalam
merespon kehadiran suatu antigen tertentu. Antibodi dibentuk berdasarkan antigen yang
menginduksinya. Beberapa antibodi yang telah teridentifikasi adalah IgA, IgD, IgE, IgG, dan
IgM. Antigen adalah suatu zat atau substansi yang dapat merangsang sistem imun dan dapat
bereaksi secara spesifik dengan antibodi membentuk kompleks terkonjugasi. Ikatan antibodi-
antigen divisualisasikan menggunakan senyawa label/marker.
IHC merupakan teknik deteksi yang sangat baik dan memiliki keuntungan yang luar
biasa untuk dapat menunjukkan secara tepat di dalam jaringan mana protein tertentu yang
diperiksa. IHC juga merupakan cara yang efektif untuk memeriksa jaringan. Teknik ini telah
digunakan dalam ilmu saraf, yang memungkinkan peneliti untuk memeriksa ekspresi protein
dalam struktur otak tertentu. Kekurangan dari teknik ini adalah kurang spesifik terhadap
protein tertentu tidak seperti teknik imunoblotting yang dapat mendeteksi berat molekul protein
dan sangat spesifik terhadap protein tertentu. Teknik ini banyak digunakan dalam diagnostik
patologi bedah terhadap kanker, tumor, dan sebagainya. Adapun marker untuk diagnosa IHC
adalah sebagai berikut:
 Carcinoembryonic antigen (CEA): digunakan untuk identifikasi adenocarcinoma.
 Cytokeratins: digunakan untuk identifikasi carcinoma tetapi juga dapat terekspresi
dalam beberapa sarkoma.
 CD15 and CD30 : digunakan untuk identifikasi Hodgkin's disease
 Alpha fetoprotein: untuk tumor yolk sac dan karsinoma hepatoselluler
 CD117 (KIT): untuk gastrointestinal stromal tumors (GIST)
 CD10 (CALLA): untuk renal cell carcinoma dan acute lymphoblastic leukemia
 Prostate specific antigen (PSA): untuk prostate cancer estrogens dan progesterone
staining untuk identifikasi tumor
 Identifikasi sel B limfa menggunakan CD20
 Identifikasi sel T limfa menggunakan CD 3