PRÁCTICA 03

“Método Analítico de Determinación

De Proteínas (Método Bradford)”

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE CIENCIAS
E.A.P. BIOTECNOLOGÍA

BIOPROCESOS II

INFORME PRÁCTICO 02
“Método Analítico de Determinación de Proteínas (Método Bradford)”

DOCENTE:
Ing. Rogger Romero Usquiano

ESTUDIANTES:
Agurto Nuñuvero Miguel
Azañero Vallejo José
Iparraguirre Mendoza Angel
Jaramillo Sangay Alisson
Ruiz Velasquez Carlos
Vigo Rivera Lucero

NUEVO CHIMBOTE - 2018

 PRÁCTICA 03
“Método Analítico de Determinación
De Proteínas (Método Bradford)”

I. INTRODUCCIÓN
La cuantificación de proteínas de manera precisa es esencial para todos los
experimentos relacionados a proteínas en una multitud de temas de
investigación. Se han desarrollado diferentes métodos para cuantificar
proteínas totales, o alguna en particular en un ensayo dado. Los métodos de
cuantificación de proteínas totales incluyen métodos tradicionales tales como
la medición de la absorbancia a 280 nm, los ensayos de Bradford y ácido
bicinconínico, así como métodos alternativos como el de Lowry o ensayos
novedosos desarrollados por los proveedores comerciales. Los proveedores
comerciales típicamente proveen un kit bien diseñado y conveniente para
cada tipo de ensayo. Los métodos para cuantificar proteínas individuales
incluyen el ELISA, el Western blot y, más recientemente, la espectrometría de
masas, entre otros.
El ensayo de Bradford, originalmente descripto por la Dr. Marion Bradford en
1976, es una de los métodos más populares para la determinación de la
concentración de proteínas. Se basa en la formación de un complejo entre el
colorante azul brillante de Coomassie G-250 y las proteínas en solución. El
colorante libre existe en cuatro formas iónicas. La forma azul más aniónica se
une a proteínas y absorbe a 590 nm. La concentración de proteínas puede
ser evaluada determinando la cantidad de colorante en su forma iónica azul y
midiendo la absorbancia de la solución a 592 nm utilizando un
espectrofotómetro (Kruger N, 1994). El colorante se une principalmente a
residuos de arginina, triptófano, tirosina, histidina y fenilalanina (Olson B,
Markwell J, 2007).

II. OBJETIVOS
Determinar la cuantificación de proteínas por método de Bradford.
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De Proteínas (Método Bradford)”

III. MATERIALES Y MÉTODOS

MATERIALES Y EQUIPOS

 Agua destilada
 Albumina suero de bovino
 Reactivo Bradford
 Pipeta micrométrica
 2 vasos de precipitación
 4 tubos de ensayo
 1 fiola de 100ml
 1 varilla de vidrio
 Espectrofotómetro

PROCEDIMIENTO

Preparación de Solución Madre

Solución estándar de Suero de bovino 100ml con una concentración de

0.05g/L.

Preparación de Bradford
Disolver 0.1gr de Azul de gomaci G250 en 250ml de etanol al 98% más
100ml de ácido fosfórico al 85% y con agua destilada aforar a 1L.

Curva de calibrado

a. Preparar 100ml de solución estándar de proteína de albumina

suero de bovino.
b. Preparar 4 tubos.
c. Añadir 5ml del reactivo de Bradford.
d. Agitar en el mesclador.
e. Dejar reposar 5 min.
f. Leer la absorbancia a 595nm.
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IV. RESULTADOS

CONTRACIÓN DE ALBÚMINA
TABLA N°1
De la Absorbancia respecto a la concentración de Albumina
V. DISCUSIONES
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VI. CONCLUSIONES

Efectivamente, aplicando el método Bradford se puede determinar la concentración de

proteína en una o varias muestras. El método Bradford es uno de los más utilizados para la
cuantificación de proteínas, es un método rápido, sencillo y eficiente, y sobre todo didáctico.
Es importante conocerlo puesto que en la vida profesional puede ser útil, ya que, como una
carrera de investigación, es posible enfrentarse a trabajar con la presencia de soluciones
desconocidas y para saber cómo se deben de manejar. Una manera fácil y concisa para
conocer la concentración de la proteína es por medio de análisis como este. En el método
Bradford, con el uso de la espectrometría es posible conoce las concentraciones de la
muestra problema, esto comparando con la gráfica que se construye a partir de las
absorbancias leídas, entonces se reforzó la construcción de curvas de calibración
relacionando la absorbancia y la concentración.

VII. RECOMENDACIONES

 Recomendaciones acerca del manejo del espectrofotómetro debemos

hacerlo con cuidado y cerca de un personal autorizado y las micropipetas
regular bien las medidas y colocar y ajustar bien los tips
 Consulte la ficha de seguridad de cada reactivo
 Utilice los implementos de seguridad de acuerdo con el perfil de riesgo de
cada muestra

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Kruger N. The Bradford method for protein quantitation. Methods Mol Biol.
1994;32:9-15
Olson B, Markwell J. Assays for determination of protein concentration. Curr
Protoc Protein Sci. 2007