LABORATORIO N° 11, 14 y 15

EXTRACCION, CUANTIFICACION Y SEPARCION DEL ADN POR

ELECTROFORESIS
1Vanegas Parada Wanderley - 1611282; 2 Lizarazo Omaña Sneyder - 1611273; 3Toloza
Mondragón Daniel – 1611267
Universidad Francisco Paula Santander, Ingeniería Biotecnológica. Cúcuta, Colombia

Facultad de Ciencias Agrarias y del Medio Ambiente

25 de Mayo de 2018

1. Resumen
La extracción del ADN se basa en el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las
cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula.
Para esto tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder
acceder al núcleo de la célula. El ADN está formado por dos cadenas de poli nucleótidos
complementarios y dispuestos en doble hélices sus bases nitrogenadas son adenia, timina,
citosina, guanina; carecen de uracilo. La complementación de bases se debe a la formación
de enlaces tipo puente de hidrogeno. El ADN es la información genética que se encuentran
en todas las células y está relacionada con la FABRICACION DE PROTEINAS, además
contiene las instrucciones genéticas que determinan el funcionamiento y desarrollo de todo
ser vivo. En este laboratorio utilizamos hojas jóvenes de un cítrico, en este caso el árbol
limón single (Swinglea glutinosa) el cual lo se cortaron en pequeños trozos que se llevaron a
al mortero con el pistilo, los cuales se maceraron y se sometieron a un tratamiento químico
y físico donde se efectuara lisis de la membrana celular y utilización de enzimas con
compuestos que ayuden a separar los ácidos nucleicos de proteínas y lípidos por
precipitación para obtener una muestra pura de ADN.
Palabras clave: Extracción, Pared celular, Membrana plasmática, Proteínas.

2. Introducción está presente en todas las células de los

El ADN es una de las partes
fundamentales de los cromosomas, son
estructuras constituidas por dos pequeños
filamentos o brazos, que pueden ser
iguales o desiguales, están unidos por un
punto llamado centrómero, varían en
forma o tamaño pueden verse fácilmente
al momento de la división celular. La
mayoría de los organismos, están
formados por millones de células, el ADN
seres vivos. En las células procariotas el
ADN se encuentra disperso en el
citoplasma. Y por el contrario en las
células eucariotas está ubicado dentro del
núcleo, donde está asociado con proteínas
y el ARN. Por otro lado, el ADN al ser
una molécula larga y tiende agruparse.
Puede en conjunto ser visualizada y
además al estar en todas las células de
todos los organismos, puede ser extraído
con facilidad de cualquier tejido, para ello
se requiere un procedimiento que implica
la ruptura de las células, la separación del
ADN de otros compuestos celulares y por
último la precipitación de esta molécula
de vida.
3. Teoría
La extracción de ADN tiene como
objetivo principal obtener la mayor
cantidad posible del ADN de alto peso
molecular, libre de proteínas,
carbohidratos y otros inhibidores de
enzimas.
Diferentes métodos de extracción han
sido descritos para el aislamiento de
ácidos nucleicos, aquí se trabajara
específicamente con la extracción de
AND vegetal, la presencia de algunos
metabolitos secundarios y como
interfieren estos en el aislamiento del
ADN.
En plantas y hongos la pared celular es la
primera barreras para la extracción,
es necesario degradarla empleando
métodos físicos o químicos. Los métodos
físicos son los más empleados,
especialmente la congelación y la
maceración. Para bacterias y células
desprovistas de pared, se emplean
soluciones ricas
en detergentes o enzimas, para destruir las
membranas celulares.
Una vez se ha destruido la membrana
celular debe emplearse detergentes y
soluciones de alta (o baja) fuerza iónica
para permitir que el ADN se libere en
el buffer
El ADN (ácido Desoxirribonucleico)
conocido también como la molécula de la
vida o la molécula de la herencia, es la
molécula que contiene toda la
información (genes) necesaria para que se
desarrolle un ser vivo y para que funcione
como tal. Pero el ADN no es un mero
almacén de información sino que también
y gracias al proceso de replicación es
capaz de transmitirla de una generación a
la siguiente en el proceso de la división
celular. Fue aislado por primera vez en el
invierno de 1869 por Johann Friedrich
Miescher, médico suizo que estudiaba la
composición química de los glóbulos
blancos que obtenía del pus de vendajes
quirúrgicos.
En uno de sus experimentos, al utilizar
los núcleos aislados de los leucocitos,
aisló un precipitado con propiedades que
no correspondían a sustancias lipídicas y
que no era destruido por proteasas
(enzimas que degradan enzimas). Esto le
indujo a pensar que se trataba de otro tipo
de sustancia, de composición desconocida
a la fecha, y la llamo nucleína.
Posteriormente demostró que la nucleina
tenía carácter ácido y aisló la misma
sustancia en otras células y un esperma
Salmon. Esta nucleina aislada
corresponde al ADN y a las proteínas
histonas sobre las que se enrolla. Fueron
necesarios 70 años más para que se
dilucidara la composición química exacta
y la estructura del ADN.
4. Materiales y Reactivos
MATERIALES REACTIVOS
Microcentrifuga Buffer de extracción
Vortex Buffer TE (Tris Hcl)
EDTA
Micropipetas
Microtubos
Puntas
 5. Procedimiento

ROMPIMIENTO EN PARTE Descartar sobre

MECANICA (SE UTILIZA nadante
MORTERO) Por inmersión.

RECOLECTAR AGREGAR 1ml DE

MUESTRAS ETANOL AL 70%

PASAR EL RESIDUO DE 50mg A

MICROCENTRIFUGAR A
MICROTUBOS
13000rpm POR 5MIN

Agregar 300µl Descartar sobre-

buffer de extracción. Nadante.

MACERAR CON ROTOR

DEJAR SECAR A T.
Agregar 100µl de
AMBIENTE
Acetato de potasio 5M

AGREGAR 50µL TE
VORTEX POR 5
SEGUNDOS
Mezclar en otro microtubo 10 µl
GUARDAR A 0°C POR 5-10 MIN de sln de ADN con 2 µl de buffer
de carga y colocarlos en el pozo
Microcentrifugar para comenzar la electroforesis.
por 10 min a 13000rpm

TRANSFERIR 200 µl DE SOBRENADANTE A

OTRO MICROTUBO

Adicionar 200 de isopropanol

dejar precipitar el ADN en hielo 5 min.

Microcentrifugar por
10 min a 13000rpm
 6. Discusiones
La arveja usada al ser de una consistencia
pequeña color verde pálido, y ser muy
débil la maceración fue un poco extensa
para poder triturar muy bien el material
vegetal y obtener una muestra óptima. Al
momento de adicionar el buffer de
extracción a la muestra macerada en los
viales y usar el rotor, la mezcla presento
FIGURA 2. Se procedió a triturar las
una consistencia viscosa.
arvejas con el mortero y el pistilo, hasta
Después del primer procedimiento de conseguir una masa, la cual se introduce
centrifugación de los viales se retira los el residuo en los microtubos por debajo
sobrenadantes con la micro pipeta, no se de la medida de 0,5µl.
presentó levantamiento del precipitado.
La prueba no presento dificultades, la
mayor parte de tiempo de la prueba se
basó en el tiempo de espera de las
centrifugación y de guardar la muestra en
la nevera a 0°C.

7. Resultados

FIGURA 3. Se agrega 300µl de Buffer

de extracción, se macera con el rotor y se
procede a centrifugar.

FIGURA 1. Se uso arveja para realizar la

extracción de ADN vegetal.

FIGURA 4. Se descarta el sobrenadante

por inmersión.
 grupos fosfatos. El etanol formará una capa
en la superficie por ser menos denso que la
solución acuosa.

2. ¿Que utilidad tiene cada unos de los

reactivos usados en el protocolo?

R/
 Extracción de ADN

- Buffer de extracción: Tris-

HCl (tris (hidroximetil)
aminometano), mantiene un
FIGURA 5. Se le agrega 1ml de etanol al pH constante entre 7.5 y 8.2
70%, se lleva a centrifugar a 13000rpm el NaCl (cloruro de sodio)
por 5min, se vuelve a descartar el forma una capa protectora
sobrenadante. alrededor del ADN que lo
protege de la degradación, y
el SDS (dodecisulfato
sódico), solubiliza los
fragmentos de membrana.
- Buffer TE: Tris base es un
tampón biológico, cuya
función es mantener el pH de
la solución constante (pH 1.0
a pH 8) y EDTA (Acido
etileno amino tetra acético).
Es un agente quelante de
iones metálico Ca++ y Mg++.

FIGURA 6. Se deja secar a temperatura  Electroforesis

ambiente.
- Buffer de carga: Se debe
8. Cuestionario mezclar con el ADN y esta
compuesto de 3 componentes
1. ¿Cuál es la reacción química de glicerol 30% quien se encarga
desnaturalización que se realiza al de dar densidad al ADN para
iniciar el aislamiento? poderlo depositar, azul de
R/ Precipitación con etanol frio. El ADN bormofenol (morado) y el
es soluble en albohol, pero se toma xilencianol (azul) se encarga
insoluble en presencia de sal (NaCl) porque de que el ADN sea visible.
el sodio neutraliza la carga negativa de los
- Buffer de corrida: Compuesto de 3
componentes Tris quien establece el pH.
Acido básico quien aporta los iones
necesarios para que la corriente se
distribuya y EDTA que funciona como
agente quelante inactivando las
DNAasas.
- Agarosa: Su función es servirnos como
un gel solido, en el que podemos
depositar el ADN, todo esto gracias a su
particularidad de disolverse en un buffer
a 100° C y una vez disuelta, con la T°
baja a 40°C se forma un gel solido.
- Bromuro de etidio: Es un reactivo cuya
función es clorar el ADN, este gracias a
que el se adhiere a la doble cadena y al
ser fluorescente a la luz UV logramos
observarlo.
3. Consulte otros métodos para aislar
ADN vegetal. Relacione el nombre del
autor, bibliografía y procedimiento. Si
se consulta de internet, especifique los
datos de la página y el procedimiento.
 Extracción orgánica
En este método convencional,
ampliamente utilizado, las células son
lisadas y los restos celulares se eliminan
generalmente por centrifugación. Las
proteínas son desnaturalizadas/digeridas
utilizando una proteasa y precipitadas con
disolventes orgánicos tales como fenol, o
una mezcla 1:1 de fenol y cloroformo, y
el precipitado de proteínas es eliminado
por centrifugación. El ADN purificado
suele ser recuperado por precipitación con
etanol o isopropanol. En presencia de
cationes monovalentes como el Na+, y a
temperatura de -20°C, el etanol absoluto
precipita eficientemente los ácidos
nucleicos poliméricos dejando atrás
ácidos nucleicos monoméricos y de
cadena corta, incluyendo los
ribonucleótidos del tratamiento con
RNAsa en solución. Este método utiliza
disolventes orgánicos tóxicos,
relativamente laborioso, y el fenol o
cloroformo residual pueden afectar las
aplicaciones subsiguientes tales como la
PCR. El kit Easy-DNA® Kit (Invitrogen)
es un ejemplo.
 Tecnología basada en sílica
Este es un método ampliamente utilizado
en los kits actuales. El ADN se adsorbe
específicamente a
membranas/esferas/partículas de sílica en
presencia de ciertas sales y a un pH
particular. Los contaminantes celulares
son eliminados mediante diferentes pasos
de lavado. El ADN es eluído en un búfer
de baja salinidad o búfer de elución. Se
utilizan sales caotrópicas para promover
la desnaturalización de proteínas y la
extracción del ADN. Este método puede
ser incorporado en columnas de
centrifugado y microchips, es rentable,
tiene un procedimiento más simple y
rápido que la extracción orgánica, y es
compatible con la automatización. Los
kits basados en este método incluyen el
Purelink Genomic DNA extraction kit
(Invitrogen) y el DNeasy Blood and
Tissue Kit (Qiagen).
 Separación magnética
Este método está basado en la unión
reversible del ADN a una
superficie/esferas/partículas sólidas
magnéticas, las cuales han sido
recubiertas con un anticuerpo que une
ADN o un grupo funcional que interactúa
específicamente con el ADN. Tras la
unión del ADN, las esferas son separadas
de otros componentes celulares
contaminantes, lavadas y finalmente el
ADN purificado es eluído utilizando
extracción con etanol. Este método es
rápido y puede ser automatizado. Sin
embargo, puede ser más costoso que otras
metodologías. Ejemplos son el kit
Agencourt DNAdvance (Beckman
Coulter) y el Magnetic Beads Genomic
DNA Extraction Kit (Geneaid).
 Tecnología de intercambio
amónico
Este método se basa en la interacción
específica entre los fosfatos cargados
negativamente presentes en los ácidos
nucleicos y moléculas de superficie
cargadas positivamente en el substrato.
Esta tecnología es utilizada más
comúnmente en kits para el aislamiento
de plásmidos, tales como el PureLink®
HiPure Plasmid DNA Purification Kits
(Invitrogen), Qiagen plasmid mini/midi
kits y Genomic-tip, y NucleoBond® PC
kits (Macherey Nagel).
 Otros
Otros métodos incluyen la precipitación
por sales (“salting out”), gradientes de
densidad de cloruro de cesio y resina
chelex 100. Los métodos de aislamiento
de ADN suelen ser modificados y
optimizados para diferentes tipos
celulares. El bromuro de
cetiltrimetilamonio (BCTA) y el
tiocianato de guanidinio (TCGI) suelen
utilizarse en los protocolos de extracción
de ADN de materias vegetales, y se
analizan con más detalle en la sección
“extracción de ADN de tejidos y células
vegetales".
4. En que se diferencian los protocolos
consultados con el que usted realizó en
el laboratorio y porque es necesario
realizar inversión durante le
procedimiento.
En el laboratorio realizado según el
protocolo descrito en la guía de
laboratorio, para la extracción del ADN a
partir de células vegetales se agregaron
50mg de muestra vegetal en un microtubo
y se maceraron 300de buffer de
extracción ,adicionar 100 de acetato de
potasio 5M, luego llevar a vortex 5
segundos y guardar a 0!C/5-10 min, llevar
a centrifuga durante 10 min a 13000rpm,
después trasferir 200 de sobrenadante a
otro microtubo ya adicionar 200 de
isopropanol frio, luego mezclar por
inversión , eliminar el sobrenadante y
adicionar 1ml de etanol, descartar el
sobrenadante y esperara que se seque
temperatura ambiente.
El protocolo se diferencia en:
 El de los demás porque no se
agrega RNAasa para eliminar el
Rna y no sea observable n la
electroforesis.
 Para facilitar en el método 1,2, y 3
se moli0o la muestra vegetal
después de congelarla con
nitrógeno liquido.
 La muestra de tejido vegeta
difiere, en le protocolo usado en
clase fueron 50mg, en el método 1
son 0.03mg en el método 2 1 mg
y en el 3 0.5mg.
 En el protocolo realizado se uso
300 de buffer de extracción, pero
en los demás métodos se le agrega
primeramente la muestra en el
método 1 300 de la solución de
lisis.
 9. Conclusiones
 Para lograr extraer el material
genético y observarlo fueron necesarios
todos los procedimientos anteriores, ya
que el ADN se encuentra protegido por
varias membranas en las células vegetales
de la arveja, en el interior de su núcleo, y
enrollado en proteínas (histonas) que lo
mantienen condensado.
 La extracción de ADN requiere de
un proceso secuencial, en el cual se trata
de aislar a esta molécula de los demás
componentes de la célula.
 El proceso realizado provoca el
desenrollamiento del ADN que tiene la
apariencia de material fibroso.
 La microcentrifugación Cumple
una parte muy importante en los procesos
de extracción y separación y purificación
de ADN ya que este mecanismo que el
que más tiempo requirió de la práctica,
donde se centrifugo 3 veces dando un
aproximado de 20 minutos en total.
 El acetato de acetato de potasio es
una sal que precipita proteínas y lípidos y
ayuda a separar los de los ácidos
nucleicos con ayuda de bajas
temperaturas, este procedimiento químico
es fundamental a la hora de purificar la
muestra de ADN.
 Los reactivos juegan un papel muy
importante, cada uno tiene ciertas
funciones que en conjunto hacen posible
la extracción del ADN.
10. Bibliografías
 Genetic Sciencie Learning center
(2011). Como extraer ADN de
cualquier cosa viviente. U.S
.Learn.Genetics. Recuperado de
https://www.calameo.com/books/
001644667dee77767eeb7
 ROGERS, S.O.; BENDICH, A.J.
1988. Extraction of DNA from
plant tissues. Plant Molecular
Biology Manual. A6: 1- 10.
Kluwer Academic Publishers,
Belgium.
 BENNET, M.D.; LEITCH, IJ.
2001. Angiosperm DNA C-values
database (release 3.1, Sept. 2001).
http://
www.rbgkew.org.uk/cval/homepa
ge.html
 TAYLOR, B.H.; MANHAR I,
J.R.; AMAS1NO, R.M. 1993.
Isolation and characterisation of
plant DNAs. In: B.R. Glick; J.E.
Thompson. (Eds.). Methods in
Plant Molecular Biology and
Biotechnology. CRC Press.
Florida, p.37-47.
 LEWIN, B. 1995. Genes V.
Oxford University Press, New
York.
 DELLAPORTA, S.L; WOOD, J.;
HICKS, J.B. 1983. A plant DNA
minipreparation: Version II. Plant
Molecular Biology Reporter
(Estados Unidos) v.l no.14, p.19-
21.
 PARTE ll
CUANTIFICACIÓN DE ADN Y ARN POR ESPECTROFOTOMETRIA

1. Resumen

Uno de los aportes más importantes ha sido el reconocimiento del ADN como la “molécula de la
vida”. Para su estudio y aplicación de técnicas moleculares es necesaria la extracción de ADN
íntegro y puro, consiste en el aislamiento y purificación de moléculas de ADN y se basa en las
características fisicoquímicas de la molécula. Una vez obtenido el material genético, es importante
determinar el rendimiento mediante espectrofotometría, ya que una característica del ADN es que
absorbe la luz ultravioleta (UV) a 260nm, lo que permite estimar su concentración. Además de
conocer la cantidad y la calidad del ADN por espectrofotometría, es importante conocer si el ADN
obtenido esta integro. En el laboratorio se realizó la extracción de la muestra la cual se llevó al
espectrofotómetro nanodrop one para ser analizada y mirar el grado de pureza que se obtuvo.

Palabras Clave: Material Genético, Extracción, Aislamiento, Molécula.

2. Introducción puede llevar a cabo por la intensidad de

fluorescencia emitida por compuestos
Existen diversos métodos para estimar la
como el bromuro de etidio.
concentración de ácidos nucleicos en una
En esta práctica se cuantificará la
preparación. Si la muestra es pura (no
cantidad de ADN mediante
contiene cantidades significativas de
espectrofotometría, donde se tomarán
contaminantes como proteínas, fenol,
lecturas de la Densidad Óptica (D.O.) a
agarosa o incluso otros ácidos nucleicos),
longitudes de onda de 260 nm y 280 nm.
su medición mediante espectrofotometría
La lectura a 260nm permite calcular la
de la luz UV absorbida por las bases
concentración del ADN en la muestra.
nitrogenadas es la más adecuada. Por el
Una D.O.260 de 1.0, corresponde
contrario, si la cantidad de ADN o ARN
aproximadamente a 50 µg.mL-1 de ADN
es muy pequeña, o si la muestra contiene
doble cadena, a 33 µg.mL-1 de ADN
grandes cantidades de impurezas, la
cadena sencilla, a 20-30 µg.mL-1 de
estimación de los ácidos nucleicos se
oligonucleótidos entre 20 a 40 bases y a 3. Objetivos
40 µg.mL-1 de RNA. La relación entre  Cuantificar la cantidad de ADN y
las medidas a 260 y 280 ARN mediante espectrofotometría
(D.O.260:D.O.280) proporciona un  Determinar la concentración y
estimado de la pureza de la muestra. Las pureza del ADN y ARN obtenidos
preparaciones puras de ADN deben tener en las extracciones realizadas
un valor D.O.260:D.O.280 de 1,8 a 2. anteriormente
Valores por debajo de este rango son un  Adquirir conocimiento básico para
indicativo de contaminación con el manejo y funcionamiento del
proteínas o fenol. Debido a su rapidez, espectrofotómetro para realizar la
simplicidad y ausencia de daño, la medición del acido nucleico en
cuantificación de ADN por estudio
espectrofotometría ha sido ampliamente
utilizada. Sin embargo, esta técnica es
poco sensible, y para la mayoría de los 4. Materiales.
espectrofotómetros se requiere una
 Cubetas de cuarzo
concentración de ADN de al menos 1
 Tubos de vidrio
µg.mL-1 en la muestra para poder realizar
 Puntas
estimaciones válidas.
El ARN es un material susceptible a la  Espectrofotómetro a 260 nm

degradación debido a la acción de las  Micropipetas de 100 y 100µ

ribonucleasas (ARNsas). Por esta razón,

requiere de una adecuada toma de
muestra, condiciones de frío durante la
manipulación, conservación y trabajo de
meseta con el objetivo de inhibir la
degradación enzimática.4,5 En general, se
obtiene muy poca cantidad de este
material por lo que cuantificarlo implica
perder una parte apreciable.
UFPS, Genética molecular, 2018

5. Procedimiento

6. Resultados
Tabla de resultados
Nuestra ADN D.O = (50)*(5) = 250 µg/µl
7. Cuestionario
Dilución 5
1). Investigue que otros métodos se
Lectura 25,069 utilizan en la realidad para actualizar la
260 nm
cuantificación de ácidos nucleicos y
Lectura 22,174
280 nm cuáles son sus ventajas ¿Porque se toman
elación 1,13 medidas en el espectrofotómetro a 260
260 / 280 nm nm y 280nm?
ADN 250 µg/µl
µg/µl R// El ADN tiene su absorbancia máxima
ADN 2553.5 en 260 nm (al igual que el ARN)
Ng/µl
 UFPS, Genética molecular, 2018
Normalmente para ver si el ADN está
bien purificado, podemos hacer una
estimación recurriendo al cociente de
absorción A260/A280 y menos
frecuentemente al de A260/A230. Con el
primer cociente vemos el posible
contenido en proteínas de la muestra, ya
que la absorbancia máxima de éstas es a
280 nm. Cuanto mayor sea este cociente
menor cantidad de proteínas tiene la
muestra. Se consideran puros cuando
tienen un cociente sobre 1,8-2,0.
También puede usarse la longitud de 325
nm, en la que se verá posible suciedad
de la cubeta
2). Que es y para qué sirve el nanodrop el
flourímetro y el flourómetro.
R//
 NANODROP: Espectrofotómetro
Ultravioleta Visible compacto, para
medida rápida de pureza de DNA, RNA y
proteínas con micromuestra. Su muestra
siempre queda dentro de rango de
concentración porque Nanodrop mide su
muestra siempre a dos pasos ópticos, y se
queda con el resultado de la medida más
fiable.
 FLUORÍMETRO: es un dispositivo de
laboratorio utilizado para medir los
parámetros de la fluorescencia:
su intensidad y la distribución
de longitudes de onda del espectro de
emisión después de la excitación por un
cierto espectro de luz.1 Estos parámetros
se utilizan para identificar la presencia y
la cantidad de
ciertas moléculas específicas en un
medio. Los Fluorímetro modernos son
capaces de detectar concentraciones de
moléculas fluorescentes tan bajas como
1 parte por billón.
El análisis mediante la fluorescencia
puede ser varios órdenes de
magnitud más sensible que otras técnicas.
Sus campos de aplicación
incluyen química, bioquímica, medicina y
vigilancia del medio ambiente. Por
ejemplo, se utiliza para medir la
fluorescencia de la clorofila y así
investigar la fisiología vegetal
 FLUORÓMETRO: es un tipo
particular de óptica que generalmente se
usa en el dispositivo de laboratorio, el
cual es capaz de medir la fluorescencia de
la calidad de las muestras biológicas o
minerales. La fluorescencia ocurre
cuando una sustancia emite luz visible y
aparece a brillar después de que haya
estado expuesto a algún tipo de riation, si
la luz visible o riation de alta energía
como por radiografías. Esta estructura es
similar a la fosforescencia, que es una
emisión de luz baja temperatura de una
UFPS, Genética molecular, 2018
acumulación de energía o riation de una
sustancia. El fluorómetro puede ser un
dispositivo portátil o una unidad de
escritorio, y su sensibilidad puede ser
sintonizada para longitudes de onda
específicas de luz utilizando filtros y,
dependiendo de lo que está siendo
estudiado.
El diseño de cualquier fluorómetro típico
tiene varios componentes clave. Tiene
una fuente de entrada para la luz visible
normal, y esta luz pasa a través de un
filtro de excitación que permite que sólo
las longitudes de onda específicas de
impacto en una muestra de células del
material en estudio.
8. Conclusiones
 Se pudo concluir que en la
muestra que se realizó, no se obtuvo los
resultados adecuados, ya que tal vez en el
momento de la extracción con
micropipeta, se tomó de la muestra sólida
y esto pudo llegar a ocasionar que no se
pudiera observar el ADN correctamente.
 Fue posible determinar tanto la
concentración como la pureza de la
muestra problema a partir
espectrofotometría y electroforesis. Para
el primer caso se partió de
absorbancias a diferentes longitudes de
onda de muestra de ADN vegetal.
 Realiza la electroforesis resulta
esencial para comprobar si el DNA
aislado es de alto peso molecular y
valorar la posible degradación de la
muestra. También confirma las
estimaciones de la concentración de DNA
realizadas con el espectrofotómetro.
9. Referencias
1. Griffiths, A.J.F, J.H. Miller, D.T.
Suzuki, R.C. Lewontin y W.M. Gelbart.
(2002). Genética. 7ª Edición. McGraw-
Hill. Interamericana.
2. Leland H. Hartwell, Leroy Hood,
Michael L. Goldberg, Ann E. Reynolds,
Lee M. Silver y Ruth C. Veres (2004)
Genetics from genes to genomes.
Segunda edición. Editorial MsGraw-Hill
3. Lodish, H y Darnell, J. (2004).
Biología celular y molecular. 4 ta edición.
Editorial Médica Panamericana.
4. Maniatis T, Sambrook J, Fritsch
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Spring Harbor Press.
5. van Dongen JJ, Macintyre EA,
Gabert JA, Delabesse E, Rossi V, Saglio
G et al. (1999) Standardized RT-PCR
analysis of fusion gene transcripts from
chromosome aberrations in acute
de
leukemia for detection of minimal
residual disease. Report of the BIOMED-
las 1 Concerted Action: investigation of
minimal residual disease in acute
leukemia. Leukemia. Dec;13(12):1901-28
UFPS, Genética molecular, 2018