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La mutagénesis dirigida permite introducir mutaciones en sitios específicos del ADN. Existen varias técnicas como el método de Hutchison y Smith de 1978 que utiliza cebadores con la mutación deseada durante la amplificación del ADN. Otro método usa el fago M13 para introducir fácilmente mutaciones en genes clonados. El protocolo implica generar el fragmento de ADN como cadena sencilla en un vector M13, diseñar un cebador con la mutación e introducirla mediante reacción de polimerización para obt
La mutagénesis dirigida permite introducir mutaciones en sitios específicos del ADN. Existen varias técnicas como el método de Hutchison y Smith de 1978 que utiliza cebadores con la mutación deseada durante la amplificación del ADN. Otro método usa el fago M13 para introducir fácilmente mutaciones en genes clonados. El protocolo implica generar el fragmento de ADN como cadena sencilla en un vector M13, diseñar un cebador con la mutación e introducirla mediante reacción de polimerización para obt
La mutagénesis dirigida permite introducir mutaciones en sitios específicos del ADN. Existen varias técnicas como el método de Hutchison y Smith de 1978 que utiliza cebadores con la mutación deseada durante la amplificación del ADN. Otro método usa el fago M13 para introducir fácilmente mutaciones en genes clonados. El protocolo implica generar el fragmento de ADN como cadena sencilla en un vector M13, diseñar un cebador con la mutación e introducirla mediante reacción de polimerización para obt
Técnicas para llevar a cabo la mutagénesis dirigida. Mutagénesis dirigida. La mutación se crea en un sitio definido, dela secuencia de ADN Primera aproximación fue en 1973 por Charles Weissmann. Método Hutchison y Smith año 1978 Ellos realizaron un método más flexible, este se basó en la amplificación del ADN, con una polimerasa utilizando cebadores (primers), con la mutación deseada.
Otro sistema es el Fago M13, este es un sistema de clonación, para
introducir de forma fácil, mutaciones en el gen clonado. Como ejemplo tenemos a un fago filamentoso que infecta, a E. Coli
Dentro del Protocolo.
Como primer punto, tenemos que considerar que debemos general el fragmento/gen que deseamos modificar, en forma de cadena sencilla. (Vector M13). Debemos de generar y diseñar el primer con el cambio. Enseguida hacer la reacción de polimerización, para general el vector en forma de cadena doble. Enseguida se usa el fragmento de Klenow