DUDAS Y PREGUNTAS DE RECOMBINACION

Iptg es un analogo del sustrato que se va a degradar con la unica diferencia

que si tengo una galactosa pero en vez de tener la glucosa tiene un grupo
isopropil ,pero el enlace entre estas 2 moleculas es un enlace TIO de
azufre ,entomces aunque engaña a la enzima , la enzima no puede cortar
el enlace azufre por que corta el enlace betaglicosidico y nada mas.
Entonces lo que sucede es que como es un sistema inducible ,elproducto
del gen regulador es activo y por lo tanto el YPTG lo saca del sitio
operador y queda en sintesis constitutiva por que nunca se va a degradar .
Entonces la diferencia es que se puede tener un inductor gratuito y este
en vez de dar el sitio inducible ( esto significa que en un momento dado se
va a cerrar cuando se acabe en catabolito pero en este caso lo sustrae
para siempre , y por lo tanto nunca se va a tener el cierre de la sintesis y
por lo tanto va a haber sintesis constitutiva en presencia o ausencia de
metabolito . Pero si se pone exceso de lactosa por supuesto que va a
competir con el YPTG(PRODUCTO DEL GEN REGULADOR) y puede que
recupere la condicion . Importante es que el sistema esta estrictamente
regulado y producto del gen regulador tiene un rol fundamental y si eso
es asi significa que en un momento determinado analogo del metabolito
que va a ser procesado tanto en la sintesis como en la degradacion para
los sistemas inducibles represibles siempre pueden tener induccion o
represion gratuita (el unico para recordar es el YPTG que se usa mucho en
ing genetica por que operon lactosa es muy eficiente.

CONTROL GENETICO ES SOBRE LA TRANSCRIPCION:

Por lo tanto es el sitio promotor,sin embargo los operones tienen varios
componentes que dentro de ellos estan sitios y genes. Sitios donde
interacciones productos genicos, genes que producen proteinas que
pueden tener roles funcionales ,por eso dentro de un operon tenemos que
diferenciar dentro del punto de vista operativo los que son los genes
estructurales responsables de una enzima que va a funcionar bajo ciertas
condiciones y genes reguladores que van a ser los que permite que se
exprese todo el operon . Ambos producen una proteina, pero esa
proteina puede ser diferente.
El operon lactosa tiene 3 genes b-galactosidasa, galactosidopermeasa 0,
galactosidotransacetilasa. En un sistema que solo puede usar lactosa como
unica fuente de carbono debe tener estos 3 genes :
Problema de prueba
Suponga que no se tiene uno el sistema sera LAC – entonces no va a
poder funcionar , pero si no posee ese gen se podra complementar
poniendolo en otro lado pero si el producto del gen regulador(gen y) y si
este falla ahí afecta la expresion de los 3 genes,pero si tengo el promotor
mutado aunque tenga los 4 genes no tengo expresion.
Los sitios son muy importantes porque cada sitio tiene un operador
especifico (a lo menos 1).
Sitio operador es el que hace operativo un operon, interaccionando de
alguna manera con el producto del gen regulador y con el metabolito
modulador por que esto depende de concentraciones del medio o internas
de metabolismo.
Si yo le pongo lactosa como unica fuente de carbono debe tener un
operon lac operativo y esto de operon lac operativo significa tener a lo
menos lo 3 genes y una regulacion adecuada que permita que el promotor
genere el mensaje polistronico.
Ahora si esta o no regulado dependera si el producto del gen regulador
esta bien y si es sitio operador esta bien. Entonces todo operon debe
tener a lo menos estos componentes,pero el comportamiento va a ser
distinto,porque los sistemas son :
Inducibles:cuando se habla de vias catabolicas
Represivos: cuando se habla de vias anabolicas
Esto significa que si tengo un sistema represible quiere decir que los genes
que estan en el operon correspondiente son responsables de la sintesis de
un anabolito por ejemplo un AA . Entonces el sistema estara cerrado si
tiene el Aa. Si falta el Aa y no lo puede tomar de ningun lado el sistema se
abre. Pero el sistema es represible porque en el momento que yo le pongo
una concentracion determinada incluso en el medio del metabolito, el
sistema se cierra. Entonces se debe transcribir lo estrictamente necesario .
Regulacion negativa de un sistema: es cuando esta cerrado la transcripcion
es 0.
Regulacion positiva: se habla de control de la transcripcion ,entonces
aunque exista un nivel basal de transcripsion,se tratara de un sistema
positivo.
Entonces que sea +o-(inducible) es de la calidad de los productos genicos
del operon . Porque si se ocupan en un esquema mayor que el necsario al
correspondiente al determinado metabolito, tiene que estar presente
aunque sea en cantidades cataliticas. Como ejemplo operon lactosa se
abrira cuando alla lactosa como unica fuente de carbono, y estara cerrado
o abierto (según lo que se quiera en el lab)por ejemplo en la naturaleza
cuando no sea la unica fuente. Los 3 genes participipan en la degradacion
de la lactosa(uno lo modifica para que entre,otro lo deja entrar y el otro le
rompe en enlace bglicosidico) generando glu+galact la glu sigue su camino
y listo.
El operon arabinosa:es un sistema indusible por que esta asociado a la
degradacion de un catabolito. El sistema sera ARA- debere usar otra
fuente de carbono. Pero si el sistema es ARA+ o ARA- INDEPENDIENTE
que el sistema no tengaa el metabolito va a tener una transcripsion
basal,porque los genes estructurales del operon arabinosa (ARABAD)
tiene un rol que participa no solo en la degradacion de la arabinosa, sino
tambien en etapas intermedias de las vias de las pentosas. Y por lo tanto
tienen que estar,pero si le pongo arabinosa como unica fuente de carbono
obligo que el sistema se indusca y esto significa que la transcripsion que
es basal pasa a ser transcripsion maxima hasta que se acabe la arabinosa.
Entonces siempre la concentracion del metabolito va a definir la
temporalidad de que el sistema este abierto o cerrado (el control es
extremadamente estricto.
Todo lo que significa regulacion es para evitar que se exceda la
transcripcion. Por ejemplo el opero lactosa es inducible -, si pero es +
sobre el promotor por que es sensible a la
glucosa(ampciclico,adenitatociclasa,proteinca crp actuando en el -80 y es
+ por que siempre va a ver transcripsion pero modular).
En el sistema inducible y operon lactosa el producto del gen regulador es
activo perseve(por si mismo)osea se sintetiza y queda activo por que se va
a sitio operador formando tetrámero.’¿ Que sucede si el sitio operador no
acepta el tetrámetro?? No hay regulación y se llama síntesis constitutiva.
¿Si falta sitio y el producto del gen regulador? No hay regulación y es
sistesis constitutiva.
¡Si hay una falla en el producto del gen regulador o en el sitio operador
que me de ausencia de síntesis?
-si tengo una secuencia génica que involucra un operon representado
por ;un gen regulador, un sitio promotor, sitio operador , tres genes
estructurales.
Entonces el sitio operador puede ser común para varios operones, pero
este sitio operador (operon lac=Z y A) se tendrá un sitio operador tal que
permite que el producto del gen regulador(en este caso Y) me genere una
estructura de esta naturaleza que se activa porque se puede ubicar aquí.
Cuando no es lactosa el sistema esta bloqueado por lo tanto la polimerasa
no va a funcionar y el sigma que esta en el -10 en una bacteria esta en la
frustración mas absoluta, por que nunca va apoder pasar.
Si le pongo la lactosa, esta tendrá la mayor afinidad por el producto del
gen regulador que lo que el gen regulador tiene por el sitio operador,por lo
tanto lo que sucede que cuando hay lactosa esta afinidad hace este
sistema se salga y tengamos transcripción ,¿hasta cuando? Hasta que esta
ultima molecula de lactosa es degradada y el producto del gen
regulador(como es activo) vuelve a bloquear. Por eso si falta Y o O yo
tengo síntesis constitutiva por que el producto de un gen regulador activo
no es capaz de bloquear el sitio operador.
¿podria existir alguna mutante en el producto del gen regulador y en el
sitio operador y/o en el sitio operador que normalmente da síntesis
constitutiva que ahora me de ausencia de síntesis?
-Falla el sitio que une la lactosa con el gen, si tengo un producto del gen
regulador que es asi(falta sitio de unión a la lactosa ) estará siempre
bloqueando y esta mutante si existe y se llama OC.
Lo normal es tener una falla en el producto del gen regulador o en el sitio
operador que da síntesis constitutiva, lo mas común es que el producto
del gen regulador que tiene una afinidad menor por el sitio operador
tendrá una afinidad mayor por el inductor, pero si estas 2 alternativas
fallan se podrá tener ausencia de síntesis.
Porque si este producto tiene una mayor afinidad por el sitio
operador(suponiendo normalidad) que por la lactosa , no lo va a sacar.
Entonces puede haber mutaciones en el gen por el sitio que en vez de dar
normalidad que es la síntesis constitutiva me dé ausencia de síntesis.
Entonces la lógica a usar es;
Polvito de chibiricoco lo pongo y me da 5 proteinas, lo mas probable es
que halla un operon con las 5 proteinas están siendo inducidas, si es un
sistema inducible el producto del gen regulador ¿Qué calidad tendrá? El
gen regulador es activo por que se necesita para bloquear el sitio
operador, porque en ausencia del polvito de chibiricoco debe estar
cerrado o bien abierto basalmente dependiendo cual sea la calidad de los
genes que se estén regulando. Entonces en presencia del inductor debería
abrirse, ahora si no se abre la regulación esta mala y si la reg. Esta mala
debe 2 elementos que están bloqueados suponiendo uno a la vez o los 2 al
mismo tiempo. Un producto de un gen regulador malo que no cumple el
propósito o un sitio operador que no reconosca adecuadamente el
producto del gen regulador. ¿Cómo diferencio una mutante en un gen
regulador de una mutante del sitio operador. Si yo tengo en otra
parte(suponiendo sistema que es Y + y el otro Y-) si tengo en otra parte un
producto Y+ este producto difusible va a ser capaz de reemplazarlo,pero si
tengo el operador malo o tengo el promotor malo no puedo hacer nada
porque son CIS dominante, entonces puedo diferenciar un sitio de un gen
porque los sitios son CIS dominante y no son complementables y los
productos génicos son complementables por que son productos
difusibles.
Complementacion ; los productos génicos son complementables porque
dan productos difusibles(andan por toda la celula), los sitios son lugares
físicamente establecidos y por lo tanto son sitios dinámicos. ¿Cómo SE
PUEDE HACER COMPLEMENTACION?
Se puede hacer por merodipliode o diploidia parcial(merodiploide
o diploide parcial a una bacteria (organismo haploide) que incorporó un fragmento
de ADN del exterior que contiene una variante de un gen propio de la bacteria, de manera
que ahora posee dos copias de ese gen ( ó dos alelos). Como esta bacteria es solo
diploide para ese gen se dice que es diploide parcial o merodiploide.).

Las bacterias son monoploides (1 cromosoma) pero pueden tener mas de 1 pero también
tienen elementos genéticos extracromosomales y eso sirve de que en 1 momento
determinado tengo 1 falla metabolica en 1 bacteria lo puedo complementar en un
plasmido, pero se púede complementar dependiendo del daño que se tenga ya que si
tiene un daño en un sitio no puedo,tampoco si tiene el promotor malo no se puede cambia
tampoco se puede cambiar por otro ya que todos estos sistemas actúan es CIS y recordar
que la mayoría de los operones están todos los genes uno al lado del otro porque están en
la misma hebra.

Ahora diferenciara lo que es una caracterica(marcador genético) asociado a un gen o

asociado a un ciclo:

Entonces en un momento determinado se puede poner una característica en un plasmido,

y si esta en el plasmido debe tener genes que exprese los productos para que esos genes
me puedan complementar alguna falla que yo tenga.

Partira diciendo que este es el operon lactosa. La expresión fenotípica en este caso será ¿
el sistema puede crecer en presencia de lactosa? Si , entonces el sistema es LAC +,
cuando hay lactosa ¿Qué sucede? ¿hay inducción? Si lo hay y ¿Quién esta inducido? Los
genes estructurales ,que son los que dan las funciones y por lo tanto vamos a tener
INDUCCION D,Z y E .

En ausencia de lactosa a pesar de ser LAC+ ¿va a ver síntesis? No porque el sistema es
inducible pero - ,asi que no hay síntesis.

En ausencia de lactosa hay síntesis constitutiva de Z y A .

Sistema LAC+ en ausencia del inductor tengo síntesis constitutiva por lo tanto falla la
regulación. En presencia de lactosa hay síntesis de genes estructurales. En ausencia de
lactosa hay síntesis constitutiva.

En normalidad es monodiploide el sistema da el lac + m,pero da sintesis consgitutiva y da

esto porque en ausencia de lactosa yo tendre la expresion cte de los 3 genes
estructurales, entonces asumo que este daño debe estar en la regulación porque la
función esta al tener sintesis constitutiva esta indicando que el lac+ es decir puede usar la
lactosa como única fuente de carbono, si eso es asi esta mala la regulación y si esta mala
la regulación puede ser que tenga una mutante en el producto del gen regulafdor o una
mutante en el sitio operador.

Entonces al hacer una prueba , lo mas probable es que tenga el producto del gen
regulador malo por lo tanto puedo poner un gen regulador bueno que pueda
complementarme el fenotipo y si lo pongo en un plasmido, va a tener que el plasmido
donde ande va a generar un producto difusible y este producto difusible sabemos que va a
tener una afinidad por el sitio operador ,por lo tanto puedo complementar esta falla y si
complemento esta falla en estas condiciones , se va a tener que el sistema es inducible
normalmente significando que cuando tenga lactosa se va a tener los 3 protogenes pero
cuando no hay lactosa el sistema va a estar cerrado. Y si falla el sitio operador no se
puede complementar, entonces tendría 2 alternativas: o+ para un sistema que sea y+b+o-
z- voy a tener que aunque ponga operador es planchar porque el sistema seguirá siendo
constitutivo. Entonces en esta condición demuestro que la constitutividad pasa a la
normalidad por complementación por que lo que falla es un gen , en lo que no puede
complementar el sitio y mantiene la síntesis constitutiva . no se puede complementar por
que funciona en la misma hebra. Los sitios actúan en CIS.

El o- da síntesis constitutiva

Para entender mejor: se tiene el sitio con Y+(significando que este es el producto del gen
regulador y este va al sitio O + y lo cierra pero temporalmente porque responde
adecuadamente a LAC , el producto del gen regulador va a al sitio operador pero si hay
lactosa lo rapta y el sistema se habre .
Ahora si Y tiene mayor afinidad por O+: esta mutante se llama Ys que es super represor ,
significa que se une muy fuertemente al sitio operador y donde exista lactosa yo no lo
podre sacar, entonces este sistema será LAC+ y en el otro sistema será LAC- por que esta
siempre bloqueado.

La otra alternativa es que sea O+ (normal) por que reconoce a Y+,pero yo puedo tener un
sitio O0 que tenga una mucho mayor afinidad por el producto Y+ y no lo suelte.

En un sistema tan simple como el operon lactosa lo podemos extrapolar a uno mas
complejo, porque van a cumplir con el mismo propósito , van a ser inducibles o represibles
va a ser + o - y yo puedo ver cual es la calidad de la regulación, y si la regulación falla es
porque, dependiendo de cunato producto de genes reguladore y sitios operadores halla es
que los productos de los genes reguladores van a ser TRANSCOMPLEMENTABLES por
que son difusibles y yo los puedo complementar poniéndolo en un plasmido, pero los
sitios NO, los sitios son CIS DOMINANTES , el sitio mas importante en un operon es el
PROMOTOR, el promotor no importa que tengamos expresión en las 2 hebras, cada
promotor controla su hebra por lo tanto es CIS DOMINANTE. Despues del promotor ¿Cuál
es el sitio mas importante? Son lo el o los SITIOS OPERADORES, porque sobre ellos se
ejecuta el control la regulación génica que es sobre la transcripsion , por eso el
PROMOTOR es el mas importante, y va a depender de la calidad del producto del gen
regulador y que relación tenga con el producto del metabolito inductor.

Entonces si asumo esto:

los sistemas inducibles (-) tienen los productos de los genes reguladores activos por que
el metabolito inductor se une a el, para poder sacarlo cuando tiene cerrado el sistema.

En ese mismo sistema pensemos como es un SISTEMA REPRESIBLE: por lógica ,

significa que cuando no hay el metabolito inductor digamos HISTIDINA y si no hay histidina
lo debe sintetizar y cuando hay histidina se tiene que cerrar. ¿Cómo debiese ser el
producto del gen regulador? será inactivo, esta presente pero hay transcripsion, pero
cuann

¿se tienen 3 marcadores geneticos asociados a un operon que son los marcadores A,B,C
DONDE uno es un gen regulador, otro es un sitio operador y otro es un gen estructural,
¿Cómo los diferencio?

Repuesta:asumir que es un sistema inducible por que un sistema represible puede tener
diferencias y estamos hablando del operon lactosa, si tengo el producto de un gen
regulador y tengo el producto de un gen estructural uno va a depender del otro y el sitio es
importante porque va a reconocer el producto de que es gen regulado, entonces si juego
con mutantes podre saber cual es cual. Uno tiene un marcador genetico que uno puede
ver cual es la relacion frente a un sistema de esta naturaleza.