BIORREACTION THERMODYNAMICS: ARRHENIUS PARAMETERS

AND GIBBS FUNCTION

TERMODINAMICA DE LA BIORREACCION: PARÁMETROS DE
ARRHENIUS Y FUCIÓN DE GIBBS
Lidia Alba – Chavez1, Juan De La Rosa-Becerra1, Lili Dluís – Florez1, Yeiny Peñates-Alvarez1, Andrea
Rodríguez–Pestana1, Ana Zarza-Banda1
1 estudiantes de ingeniería agroindustrial. Facultad de ingeniería. Universidad de sucre. Sincelejo (Colombia).
Correo: yei-2196@hotmail.com

Abstract
The concept of reaction rate and equilibrium
constant has a lot of applicability since they
allow to determine what happens with the
components of a reactive system during and
after the reaction occurs. In this practice the
effect of the temperature on the reaction rate
and the equilibrium constant was evaluated,
taking into account the parameters of the
Arrhenius equation and the Gibbs function.
For this, a 10% w / w maltose solution was
prepared and the respective dilutions were
made. An equilibrium constant of 223.29,
1307.49, and 2484.79 was obtained at a
temperature of 48, 55 and 62 °C respectively;
On the other hand, a ΔH of 154.51 kJ / mol,
a ΔG at 55 ° C of - 19, 579 kJ / mol and a ΔS
of 530.51 J / mol K was obtained; An
activation energy of 7.86 KJ / mol was
obtained. The temperature is related to the
equilibrium constant of a directly
proportional form. Recognizing the
importance of this study since considering
the thermodynamics and chemical kinetics of
a biorreaction allows to understand and
predict the behavior of the same.
Keywords: Glucoamylase, equilibrium
constant, chemical kinetics, activation
energy, temperature.
Resumen
El concepto de velocidad de reacción y
constante de equilibrio tiene mucha
aplicabilidad ya que permiten determinar qué
pasa con los componentes de un sistema
reactivo durante y después de que ocurra la
reacción. En esta práctica se evaluó el efecto
de la temperatura sobre la velocidad de
reacción y la constante de equilibrio, teniendo
en cuenta los parámetros de la ecuación de
Arrhenius y la función de Gibbs. Para esto, se
preparó una solución de maltosa al 10% p/p y
se realizaron las respectivas diluciones. Se
obtuvo una constante de equilibrio de 223.29,
1307.49, y 2484.79 a una temperatura de 48,
55 y 62°C respectivamente; por otro lado se
obtuvo un ∆H de 154,51 kJ/mol, un ∆G a
55°C de - 19, 579 kJ/mol y un ∆S de 530,51
J/mol K; se obtuvo una energía de activación
de 7,86 KJ/mol. La temperatura está
relacionada con la constante de equilibrio de
una forma directamente proporcional.
Reconociendo la importancia de este estudio
ya que considerar la termodinámica y la
cinética química de una biorreacción permite
comprender y predecir el comportamiento de
la misma.
Palabras Claves: Glucoamilasa, Constante de
equilibrio, cinetica química, energía de
activación, temperatura.

1
 INTRODUCCIÓN
Las propiedades catalíticas de las enzimas son
de gran interés industrial debido
esencialmente a su elevada especificidad y
selectividad, y debido a que son pocos los
catalizadores sintéticos que logran reunir en
un solo todas las ventajas inherentes a estos
biocatalizadores. Las enzimas pueden ser
usadas en una gran diversidad de aplicaciones
industriales, tales como; desarrollo y
producción de nuevos fármacos, producción
de biocombustibles, hidrolisis de almidón, en
procesos medioambientales, industria de
papel, de los detergentes, de producción de
alimentos, entre otras (Chaparro, 2009). De
las enzimas más utilizadas son las empleadas
para la degradación de almidón. La industria
del almidón es la segunda consumidora de
enzimas, con el 33% de la demanda global,
cuyo mercado para 2005-2006 ascendió a
3,75 billones de dólares (Bettín & Quintero,
2010).
La industria del procesamiento del almidón
depende totalmente del uso de enzimas para
la producción a gran escala (Crabb & Shetty,
1999). Entre estas enzimas, las amilasas y las
glucoamilasas son las más importantes.
Catalizan la hidrólisis de varios polisacáridos
a azúcares inferiores o glucosa. Estos
hidrolizados se utilizan en la producción
fermentativa de alcoholes, aminoácidos,
biopolímeros, ácidos carboxílicos y enzimas
(Koch & Roper, 1998). Por lo tanto,
representan un valioso material de partida
para síntesis química y bioquímica.
Aplicaciones amplias de la glucoamilasa en la
industria del almidón motivar la investigación
en la mejora de las propiedades de la enzima
por métodos de selección de enzimas, la
2
biología molecular y la ingeniería de la
enzima (Norouzian, Akbarzadeh, Scharer, &
Young, 2006), por lo que es importante la
determinación de los parámetros cinéticos y
termodinámicos.
Se han realizado diversos estudios para la
determinación de los parámetros
termodinámicos de las reacciones empleando
glucoamilasa. Riaz et. al., (2013) realizo un
estudio de las propiedades fisicoquímicas y
cinética de la glucoamilasa producida a partir
de glucoamilasa obtenida a partir de
Aspergillus niger para la hidrólisis del
almidón soluble en los cuales obtuvieron una
entalpia de reacción, energía libre de Gibbs,
entropía de reacción y energía de activación
de 41.50 KJ/mol, 65,69 KJ/mol, - 72,62
KJ/mol K y 44,27 KJ/mol respectivamente.
De igual forma, Prajapati & Trivedi (2014) en
un estudio de la hidrolisis de almidón en
glucosa por glucoamilasa de
Colletotrichum sp los ∆H, ∆G, ∆S y Ea
fueron de 23.973, KJ/mol, 57.851 KJ/mol,
−113.68 J /mol y 26.45 kJ /mol
respectivamente. Por otro lado, Sierks,
Michael, & Svensson (2000), en el estudios
energéticos y mecánicos de la glucoamilasa
utilizando el reconocimiento molecular de los
grupos de maltosa OH acoplados con la
mutagénesis dirigida al sitio el cual muestra
obtuvo que para glucoamilasa (salvaje), y una
maltosa que tenga 4 grupos hidroxilos (4-OH)
se presenta un ΔG de -18,8 KJ/mol.
Debido a la importancia que tiene la enzima
la glucoamilasa para su uso industrial y en el
diseño de bioreactores, la presente
investigación busca evaluar el efecto de la
Temperatura sobre la velocidad de reacción
y la constante de equilibrio, teniendo en
cuenta los parámetros de la ecuación de
Arrhenius y la función de Gibbs.
MATERIALES Y MÉTODOS
Esta práctica de laboratorio se llevó a cabo en
las instalaciones de la planta piloto de la
universidad de sucre ubicada en la granja el
perico. Para esto se utilizó maltosa como
sustrato y glucoamilasa fúngica como
enzima. Inicialmente como medio se preparó
una solución de maltosa al 10% p/p, se
estabilizó el pH utilizando NaOH al 0,1N
dependiendo del pH inicial obtenido en las
muestras, hasta lograr un valor de 4,3, así
mismo se procedió a estabilizar la velocidad
de agitación a 400 rpm y de igual forma la
temperatura, las cuales fueron de 48°C, 55°C
y 62°C respectivamente durante tres días
continuos (una temperatura por día). Se
adicionó 1 mL de enzima en cada uno de los
biorreactores agitando continuamente. Se
tomaron muestras de 2 mL de cada
biorreactor cada 30 minutos, desde el tiempo
0 hasta los 270 minutos, se inactivó la enzima
y posteriormente se determinó la
concentración de glucosa en el equilibrio de
cada muestra haciendo uso del glucómetro,
sabiendo de antemano que la lectura arrojada
por el glucómetro debía estar en un rango
entre 20-600 en caso de que pasara de este
rango era necesario diluir la muestra para
obtener una medición más exacta.
Teniendo los datos de la concentración de
glucosa en el equilibrio se procedió a
determinar la concentración de maltosa en el
equilibrio por diferencia entre maltosa inicial
y glucosa en el equilibrio, luego se halló la
concentración de agua en el equilibrio por
balances estequiométricos teniendo en cuenta
las concentraciones de maltosa y glucosa en
3
el equilibrio. Teniendo las concentraciones de
los productos y reactivos que intervienen en
la reacción se procedió a calcular las
constantes de equilibrio de la reacción para
cada una de las temperaturas de trabajo, por
medio de la fórmula:
[𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑜]𝑒𝑞𝑢𝑖𝑙𝑖𝑏𝑟𝑖𝑜
𝐾𝑒𝑞 =
[𝑟𝑒𝑎𝑐𝑡𝑖𝑣𝑜𝑠]𝑒𝑞𝑢𝑖𝑙𝑖𝑏𝑟𝑖𝑜
Luego, se procedió a estimar los
parámetros de la función de Gibbs por
medio de la gráfica de las constantes de
equilibrio con el inverso de su respectiva
temperatura, teniendo en cuenta que:
−∆H°
𝐿𝑛 (𝐾𝑒𝑞 ) = +𝐼
𝑅𝑇
−∆H°
Donde la pendiente es igual a y el
𝑅
intercepto I es una constante de
integración. Teniendo el valor de ∆𝐻, se
halló ∆𝐺 tomando una temperatura del
rango en el cual se trabajó y utilizando la
fórmula:
∆𝐺° = −𝑅𝑇 𝐿𝑛(𝐾𝑒𝑞)
Y para el calculó de ∆𝑆 se utilizó la
fórmula:
∆𝐺° = ∆𝐻° − 𝑇∆𝑆
Teniendo los valores de los parámetros de
Gibbs, se procedió a calcular los
parámetros de la función de Arrhenius
linealizada. Primero se calculó las
velocidades para cada una de las
temperaturas de trabajo (48°C, 55°C y
62°C) requeridas para el cálculo de la
constante de velocidad (K) usando la En la cual la concentración de glucosa
siguiente formula: producida es mayor a medida que aumenta
la temperatura de trabajo de la reacción.
[𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛]𝐼𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 − [𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛]𝐹𝑖𝑛𝑎𝑙
𝑣= Teniendo en cuenta la producción de
𝑇𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜𝐵𝑖𝑜𝑟𝑒𝑎𝑐𝑐𝑖ó𝑛
glucosa en cada una de las temperaturas
evaluadas, se obtuvieron los valores de las
Luego, se graficó Ln (k) vs 1/T, partiendo
constantes de equilibrio (tabla 1).
de la fórmula:

𝐸𝑎
𝐿𝑛(𝑘) = − + 𝐿𝑛(𝐴)
𝑅𝑇 Tabla 1. Valores de las constantes de
equilibrio para cada temperatura a la cual
𝐸𝑎
Donde la pendientes es igual a − 𝑅𝑇 y el se realizó la reacción.
intercepto es igual a 𝐿𝑛(𝐴) Temperatura Ln
Keq 1/T
(K) (Keq)

RESULTADOS Y DISCUSION 320,15 223,29 0,0031 5,41

El comportamiento presentado por la 328,15 1307,49 0,0030 7,18

reacción se observa en la figura 1 a las 335,15 2484,79 0,0029 7,82
diferentes temperaturas evaluadas.

0.6

0.5
La constante de equilibrio nos indica en
0.4 qué sentido se desplaza la reacción, este
[gl] (mol/L)

valor no cambia cuando se presenta

0.3
temperatura constante, lo que indica que
0.2 debe aumentar o disminuir, en este caso se
0.1 presenta un aumento con la temperatura
(Quílez & Quílez, 2014). El
0
comportamiento obtenido por el proceso
0 100 200 300
con respecto a la constante de equilibrio en
tiempo (min)
función de la temperatura se observa en la
47 °C 55 °C 62 °C figura 2.
Figura 1: variación de la concentración de De la pendiente e intercepto de la figura 2
glucosa con respecto al tiempo a las se obtuvieron los valores de ∆H y ∆S,
diferentes temperaturas trabajadas. como se muestran en la tabla 2.

4
 9 esto se observa en el crecimiento de la
8 constante de equilibrio a medida que
7 aumenta la temperatura, cabe resaltar que
6 estos valores son grandes lo que supone
y = -18583x + 63.447
Ln (k)

5 R² = 0.9383 que la reacción transcurre por completo o

4
casi por completo y que los productos son
3
mucho más estables que los reactivos, es
2
decir no ocurre la reacción inversa (Chang
1
0 & Goldsby, 2002).
0.00298 0.003015 0.00305 0.003085 0.00312
1/T (K-1) Parámetros de Arrhenius

Teniendo en cuenta el comportamiento

Figura 2. Relación de la constante de presentado por la reacción en cuanto a la
equilibrio con la temperatura para el producción de glucosa en función del
cálculo de los parámetros de la función de tiempo, se puede decir que la cinética que
Gibbs presenta es de orden cero por tener una
relación lineal (figura 1). Por tanto la
constante de velocidad (K) será igual a la
Tabla 2. Parámetros termodinámicos para velocidad de reacción para cada
la glucoamilasa. temperatura evaluada, los cuales se
encuentran en la tabla 3. En donde se
Propiedades Valor observa que dicha velocidad va
∆H (kJ/mol) 154,51 aumentando a medida que aumenta la
∆G a 55° C (kJ/mol) - 19, 579
temperatura por tanto tienen una relación
∆S (J/mol K) 530,51 directamente proporcional.

Los valores obtenidos mostraron que la

Tabla 3. Valores de las velocidades y
reacción es endotérmica (∆H < 0),
constantes de velocidad para cada
irreversible (∆S > 0) y espontánea (∆G <
temperatura a la cual se realizó la reacción.
0).
Temperatura V
La constante de equilibrio expresa la 1/T Ln (K)
(K) (mol/s)
tendencia de los reactivos a convertirse en
productos y viceversa. Está relacionada 320,15 0,0055 0,0031 -5,2111
con la variación de la energía de la
328,15 0,0060 0,0030 -5,1086
reacción que nos indica su espontaneidad.
Debido a que se presenta una reacción 335,15 0,0062 0,0029 -5,0887
exotérmica al aumentar la temperatura, el
equilibrio se desplazará hacia la derecha lo
que genera mayor formación de productos,

5

-10.26
0.00294 0.00304
-10.28
-10.3
Ln (k) mol/L*s
-10.32
-10.34
-10.36
-10.38
y = -944.92x - 7.4487
-10.4 R² = 0.8762
-10.42
1/T (K-1)
Figura 3. Relación de la constante de
velocidad con la temperatura para el cálculo
de los parámetros de la ecuación de
Arrhenius.
De la pendiente de la figura 3 se determinó
una energía de activación de 7,86 KJ/mol y
una constante de Arrhenius de 0,0005822
mol/L*s.
Los parámetros termodinámicos difieren de
manera significativa por los reportados por
Riaz et. al., (2013) los cuales obtuvieron una
entalpia de reacción, energía libre de Gibbs,
entropía de reacción y energía de activación
de 41.50 KJ/mol, 65,69 KJ/mol, - 72,62
KJ/mol K y 44,27 KJ/mol respectivamente,
para la hidrolisis del almidón en glucosa a
partir de glucoamilasa obtenida Aspergillus
niger. De igual forma, los ∆H, ∆G, ∆S y Ea
previamente informados para la hidrolisis de
almidón en glucosa por glucoamilasa de
Colletotrichum sp por Prajapati & Trivedi
(2014) fueron de 23.973, KJ/mol, 57.851
KJ/mol, −113.68 J /mol y 26.45 kJ /mol
respectivamente. El valor de la entalpía
superior a los reportados de la glucoamilasa
mostró que la formación del estado de
transición o complejo activado entre enzima-
sustrato era menos eficiente. Además, un
valor ΔG más bajo sugiere que la conversión
0.00314
de su complejo de transición en productos es
más espontánea que la de Aspergillus niger y
Colletotrichum sp utilizando almidón como
sustrato. La viabilidad y el alcance de una
reacción química se determinan mejor
midiendo el cambio en la energía libre de
Gibbs (ΔG) para la hidrólisis del sustrato, es
decir, la conversión del complejo ES en
productos (Prajapati & Trivedi, 2014).
Cuanto menor es el cambio de energía libre,
más factible será la reacción, es decir, la
conversión del reactivo en producto será
espontánea. La entropía fue mucho mayor a
los valores reportados, lo que explicó que el
complejo de transición tenía mayor desorden.
En cuanto a la energía de activación se
encontró que es menor a las reportadas, esto
se debe a que la energía necesaria para que se
dé el complejo activado a partir del cual la
reacción ocurre de forma normal, es más baja
para la maltosa como sustrato que para el
almidón.
Teniendo los valores registrados por Sierks,
Michael, & Svensson (2000), el cual muestra
que para glucoamilasa (salvaje), y una
maltosa que tenga 4 grupos hidroxilos (4-OH)
se presenta un ΔG de -18,8 KJ/mol, este valor
es similar al calculado, pero se presentó a
55°C y 4,5 de pH.
CONCLUSION
Teniendo en cuenta el comportamiento de la
reacción, se logró establecer que la
concentración de glucosa producida es mayor
a medida que aumenta la temperatura de
trabajo de la reacción; de igual manera se
establece que la cinética que presenta la
reacción es de orden cero, todo esto debido a
6
la relación lineal existente entre la producción
de glucosa y el tiempo.
Respecto a la constante de equilibrio, se
encontró que está relacionada de una forma
directamente proporcional con la
temperatura; es decir, a medida que aumenta
la temperatura, aumenta la constante de
equilibrio. Con base a los parámetros
termodinámicos obtenidos de la reacción, se
pudo decir que la reacción fue endotérmica
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